用于增强工程化T细胞疗法的组合物和方法与流程

本公开整体涉及使用修饰的t细胞的细胞疗法。

背景技术：

1、从早期专注于基本淋巴因子活化和/或肿瘤浸润到最近的工程化免疫细胞以表达遗传工程化抗原受体(诸如嵌合抗原受体(car))的策略，过继细胞疗法已经历了超过三十(30)年的近乎不断迭代。尽管在此过程中已经有一些暗示和迹象表明了这些方法的治愈潜力，但仍有许多工作要做。具体而言，car-t淋巴细胞能否成功根除肿瘤取决于car-t细胞的持久性和效应功能，但其中任一者的过量都可能触发患者的移植物抗宿主(gvh)效应。此外，虽然表达car的t细胞的过继转移在治疗血液系统恶性肿瘤方面已显示出一些成功，但在其他癌症类型，特别是实体肿瘤中仅显示出有限的功效。与血液系统疾病相比，实体肿瘤面临着独特的挑战，包括但不限于高度免疫抑制和代谢挑战性的肿瘤微环境。

2、伽马德尔塔(γδ) t细胞是胸腺衍生的淋巴细胞，其在活化机制和功能以及解剖分布方面与αβ t细胞不同。具体而言，虽然αβ t细胞专门在适应性免疫中发挥作用，但γδt细胞是先天样免疫细胞，它们通过一系列活化受体以mhc非依赖性方式识别恶性细胞，类似于nk细胞(welsh等人,

immunol rev. 1997; 159: 79-93)。因此，并且与αβ t细胞相比，γδ t细胞可潜在地用于同种异体环境，而没有引起移植物抗宿主病(gvhd)的风险。此外，最近的研究已表明，工程化的γδ-t细胞可比αβ-t细胞产生更少的促炎细胞因子，从而可降低患者发生crs的风险(harrer等人,

bmc cancer 2017; 17(1): 551)。

3、尽管car-t疗法发展迅速并且强劲，但导致体内和人体功效的car-t细胞-靶标相互作用的最佳参数尚不清楚。鉴于αβ t细胞与γδ t细胞相比的作用机制和功能差异，在αβt细胞背景下展示的car功能和有效性并不能预测在γδ t细胞背景下的car功能和有效性。因此，car t治疗方法对γδ t细胞的实际转化充其量是不确定的。

4、在针对实体癌症和血液癌症、自身免疫性疾病和/或病原性疾病的背景下，使用γδ t细胞的细胞疗法仍有诸多亟待克服的紧迫挑战，包括改善疾病细胞靶向、提高功效、防止在靶/脱肿瘤(on-target/off-tumor)免疫反应性和减少副作用(例如，由分泌的细胞因子带来的毒性)，以及改善宿主γδ t细胞在施用后的活性、存活和/或扩增。

技术实现思路

1、本公开提供了修饰的t细胞(例如，γδ t细胞)，其包含抗原识别部分(例如，car)和一种或多种修饰，所述修饰可改善修饰的t细胞的活性、存活和/或扩增，和/或当修饰的t细胞作为免疫细胞疗法使用时提高功效和/或减少副作用。在实施方案中，t细胞修饰的组合在本文表现为明显增强t细胞的细胞毒性和相应的t细胞疗法的效力。

2、在一个方面，本公开提供了一种修饰的t细胞，其包含：a)在细胞的表面上表达的抗原识别部分，其中抗原识别部分包含对疾病相关抗原具有特异性的亲和结合结构域；b)至少一种用于调节疾病微环境的修饰和/或至少一种用于调节细胞因子活性的修饰；以及c)至少一种同种异体逃逸(alloevasion)修饰和/或至少一种用于调节t细胞代谢的修饰。在另一方面，本公开提供了一种修饰的t细胞，其包含：a)在细胞的表面上表达的抗原识别部分，其中抗原识别部分包含用于特异性结合疾病相关抗原的手段；b)至少一种用于调节疾病微环境的修饰和/或至少一种用于调节细胞因子活性的修饰；以及c)至少一种同种异体逃逸修饰和/或至少一种用于调节t细胞代谢的修饰。

3、在实施方案中，修饰的t细胞是γδ t细胞。在实施方案中，γδ t细胞是δ1、δ2、δ3或δ4 γδ t细胞，优选地δ2-γδ t细胞，更优选地δ1 γδ t细胞。

4、在实施方案中，至少一种用于调节疾病微环境的修饰包括cbl-b基因的破坏、regnase-1基因的破坏、roquin基因的破坏、tgf-β受体2型(tgfβr2)基因的破坏、显性负性tgf-β受体2型(dntgfβr2)的表达或它们的任何组合。在实施方案中，至少一种用于调节疾病微环境的修饰包括tgfβr2基因的破坏或dntgfβr2的表达。

5、在实施方案中，至少一种用于调节细胞因子活性的修饰包括膜结合型il-12的表达、cish基因的破坏、细胞因子转换受体的表达或它们的任何组合。在实施方案中，至少一种用于调节细胞因子活性的修饰包括膜结合型il-12的表达。

6、在实施方案中，至少一种同种异体逃逸修饰包括icam-1基因的破坏、cd58基因的破坏、fas基因的破坏、显性负性fas受体(dnfas)的表达、与cd70结合的嵌合抗原受体(car)的表达或它们的任何组合。在实施方案中，至少一种同种异体逃逸修饰包括fas基因的破坏或dnfas的表达。

7、在实施方案中，至少一种用于调节t细胞代谢的修饰包括rasa2基因的破坏、med12基因的破坏或它们的任何组合。在实施方案中，修饰的t细胞包含dntgfβr2。在实施方案中，至少一种用于调节t细胞代谢的修饰包括med12基因的破坏。

8、在实施方案中，修饰的t细胞包含cish基因的破坏、cbl-b基因的破坏、icam-1基因的破坏、cd58基因的破坏、roquin-1基因的破坏、regnase-1基因的破坏、tgfβr2基因的破坏、rasa2基因的破坏、med12基因的破坏或它们的组合。

9、在实施方案中，修饰的t细胞包含至少一种用于调节细胞因子活性的修饰，其包括膜结合型il-12的表达；以及至少一种用于调节t细胞代谢的修饰，其包括med12基因的破坏。在实施方案中，修饰的t细胞还包含fas基因的破坏或dnfas的表达。在实施方案中，修饰的t细胞还包含tgfβr2基因的破坏或dntgfβr2的表达。

10、在实施方案中，修饰的t细胞包含至少一种用于调节疾病微环境的修饰，其包括tgfβr2基因的破坏或dntgfβr2的表达；以及至少一种用于调节t细胞代谢的修饰，其包括med12基因的破坏。在实施方案中，修饰的t细胞还包含fas基因的破坏或dnfas的表达。在实施方案中，修饰的t细胞包含至少一种用于调节细胞因子活性的修饰，其包括膜结合型il-12的表达。

11、在实施方案中，修饰的t细胞包含至少一种在细胞的表面上表达的异源细胞因子受体。在实施方案中，修饰的t细胞表达外源干细胞因子(scf)。

12、在实施方案中，抗原识别部分选自由以下组成的组：tcr、αβ tcr、γδ tcr、嵌合抗原受体(car)、全抗体或其抗原结合片段、单链可变片段(scfv)、重链或轻链单结构域抗体(sdab)、fab、f(ab)2或它们的任何组合，所述抗原识别部分结合至：(i)细胞表面肿瘤抗原，(ii)源自细胞表面上表达的作为与mhc的复合物(肽-mhc复合物)的肿瘤抗原的肽，(iii)与自身免疫性疾病或病原体相关的细胞表面抗原，或(iv)源自细胞表面上表达的作为与mhc的复合物(肽-mhc复合物)的与自身免疫性疾病或病原体相关的抗原的肽。在实施方案中，抗原识别部分是car。在实施方案中，car还包含跨膜(tm)结构域、铰链结构域、共刺激结构域和细胞内信号传导结构域。在实施方案中，铰链结构域是cd8α铰链结构域。在实施方案中，tm结构域包括cd8α的tm结构域。在实施方案中，细胞内信号传导结构域是cd3ζ细胞内信号传导结构域。

13、在实施方案中，疾病相关抗原是肿瘤抗原、自身免疫性疾病相关抗原或病原体抗原。

14、在另一方面，本公开提供了一种药物组合物，其包含多个本文的修饰的t细胞。在实施方案中，多个修饰的t细胞是多个γδ t细胞，其包含为至少约60%、至少约80%，或至少约80%至约90%的δ1 γδ t细胞，以及药学上可接受的载剂的组合物。在实施方案中，多个t细胞包括至少约107个γδ t细胞，任选地约108至约1010个γδ t细胞。

15、在另一方面，本公开提供了一种用于治疗或预防受试者的疾病的方法，其包括向有需要的受试者施用本文中的药物组合物。在实施方案中，疾病是自身免疫性疾病。在实施方案中，疾病是癌症或癌前病状。

16、在另一方面，本公开提供了一种提高t细胞疗法的效力的方法，其包括破坏t细胞中的med12基因，以及在t细胞中表达膜结合型il-12。在实施方案中，该方法还包括破坏t细胞中的fas基因或在所述t细胞中表达dnfas。在实施方案中，修饰的t细胞还包含在细胞的表面上表达的抗原识别部分，其中抗原识别部分包含对疾病相关抗原具有特异性的亲和结合结构域。在实施方案中，t细胞是γδ t细胞。在实施方案中，γδ t细胞是δ1、δ2、δ3或δ4γδ t细胞，优选地δ2-γδ t细胞，更优选地δ1 γδ t细胞。在实施方案中，t细胞是αβ t细胞。

17、在另一方面，本公开提供了一种增强t细胞的细胞毒性的方法，其包括破坏t细胞中的med12基因，以及在t细胞中表达膜结合型il-12。在实施方案中，该方法还包括破坏t细胞中的fas基因或在所述t细胞中表达dnfas。在实施方案中，修饰的t细胞还包含在细胞的表面上表达的抗原识别部分，其中抗原识别部分包含对疾病相关抗原具有特异性的亲和结合结构域。在实施方案中，t细胞是γδ t细胞。在实施方案中，γδ t细胞是δ1、δ2、δ3或δ4γδ t细胞，优选地δ2-γδ t细胞，更优选地δ1 γδ t细胞。在实施方案中，t细胞是αβ t细胞。

18、在另一方面，本发明提供了一种具有增强的细胞毒性的修饰的t细胞，其包含修饰的t细胞中med12基因的破坏和修饰的t细胞中膜结合型il-12的表达。在实施方案中，修饰的t细胞还包含在细胞的表面上表达的抗原识别部分，其中抗原识别部分包含对疾病相关抗原具有特异性的亲和结合结构域。在实施方案中，修饰的t细胞还包含修饰的t细胞中fas基因的破坏或dnfas的表达。在实施方案中，修饰的t细胞是γδ t细胞。在实施方案中，γδt细胞是δ1、δ2、δ3或δ4 γδ t细胞，优选地δ2-γδ t细胞，更优选地δ1 γδ t细胞。在实施方案中，修饰的t细胞是αβ t细胞。

19、以引用的方式并入

20、本说明书所提及的所有公布、专利和专利申请以引用的方式并入本文中，其程度就如同每个单独的公布、专利或专利申请被具体地且单独地指出以引用的方式并入那样。