与TCR结合的多功能分子及其用途的制作方法

背景技术：

1、用于癌症免疫疗法的被设计成重定向t细胞以促进肿瘤细胞裂解的目前可用的分子通常靶向t细胞受体（tcr）的cd3ε（cd3e）亚基。然而，这种方法存在局限性。先前的研究已显示，例如低剂量的抗cd3e单克隆抗体（mab）可能引起t细胞功能障碍并发挥免疫阻遏效应。另外，抗cd3e mab与所有t细胞结合，并因此激活大量t细胞。通过这些抗cd3e mab对t细胞进行的此类非生理性大量激活可能引起如ifn-γ、il-1-β、il-6、il-10和tnf-α等促炎细胞因子的产生，从而引起称为细胞因子释放综合征（crs）的“细胞因子风暴”，这也与神经毒性（nt）相关。因此，需要用于癌症免疫疗法的重定向t细胞的改进的t细胞受体结合分子。

技术实现思路

1、一方面，本文尤其提供了一种多功能分子，所述多功能分子包含（a）第一结构域，所述第一结构域与第一靶分子结合，其中所述第一靶分子是t细胞受体α（tcrα）链；以及（b）第二结构域，所述第二结构域与第二靶分子结合，其中所述第二靶分子是t细胞受体β（tcrβ）链。

2、在一些实施例中，所述tcrα链是人tcrα。

3、在一些实施例中，所述tcrβ链是人tcrβ链。

4、在一些实施例中，所述第一结构域是与所述人tcrα链的可变区（tcrαv）结合的tcrαv结合结构域。

5、在一些实施例中，所述第二结构域是与所述人tcrβ链的可变区（tcrβv）结合的tcrβv结合结构域。

6、在一些实施例中，所述多功能分子包含至少两种非连续多肽，所述至少两种非连续多肽包含第一多肽链和第二多肽链；其中所述第一多肽链包含二聚化模块的第一部分；其中所述第二多肽链包含所述二聚化模块的第二部分；并且其中所述第一多肽链和所述第二多肽链通过所述二聚化模块的所述第一部分和所述二聚化模块的所述第二部分的缔合而形成二聚体。

7、在一些实施例中，所述第一结构域是抗体分子。

8、在一些实施例中，所述第二结构域是抗体分子。

9、在一些实施例中，所述抗体分子选自由以下组成的组：全长抗体、fab、fab'、f(ab')2、f(ab)2、可变片段（fv）、单结构域抗体、双抗体、骆驼抗体、纳米抗体和单链可变片段（scfv）。

10、在一些实施例中，所述第一结构域是scfv或单结构域抗体。

11、在一些实施例中，所述第一结构域是fab，所述fab包含所述第一结构域的第一部分和所述第一结构域的第二部分；其中所述第一结构域的所述第一部分和所述第一结构域的所述第二部分组装并形成所述多功能分子的所述第一结构域；其中所述多功能分子进一步包含多肽链，所述多肽链包含所述第一结构域的所述第二部分，其中所述包含所述第一结构域的所述第二部分的多肽链与所述第一多肽链和所述第二多肽链是非连续的。

12、在一些实施例中，所述第一结构域的所述第一部分包含所述fab的重链可变区（vh），并且所述第一结构域的所述第二部分包含所述fab的轻链可变区（vl），或所述第一结构域的所述第一部分包含所述fab的所述vl，并且所述第一结构域的所述第二部分包含所述fab的所述vh。

13、在一些实施例中，所述第二结构域是scfv或单结构域抗体。

14、在一些实施例中，所述第二结构域是fab，所述fab包含所述第二结构域的第一部分和所述第二结构域的第二部分；其中所述第二结构域的所述第一部分和所述第二结构域的所述第二部分组装并形成所述多功能分子的所述第二结构域；其中所述多功能分子进一步包含多肽链，所述多肽链包含所述第二结构域的所述第二部分，其中所述包含所述第二结构域的所述第二部分的多肽链与所述第一多肽链、所述第二多肽链和所述包含所述第一结构域的所述第二部分的多肽链是非连续的。

15、在一些实施例中，所述第二结构域的所述第一部分包含所述fab的重链可变区（vh），并且所述第二结构域的所述第二部分包含所述fab的轻链可变区（vl），或所述第二结构域的所述第一部分包含所述fab的所述vl，并且所述第二结构域的所述第二部分包含所述fab的所述vh。

16、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分与所述第一结构域或所述第一结构域的所述第一部分连接。

17、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分的n末端与所述第一结构域的c末端或所述第一结构域的所述第一部分的c末端连接。

18、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分的c末端与所述第一结构域的n末端或所述第一结构域的所述第一部分的n末端连接。

19、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分与所述第二结构域或所述第二结构域的所述第一部分连接。

20、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分的n末端与所述第一结构域的c末端或所述第一结构域的所述第一部分的c末端连接，并且所述二聚化模块的所述第一部分的c末端与所述第二结构域的n末端或所述第二结构域的所述第一部分的n末端连接。

21、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分的c末端与所述第一结构域的n末端或所述第一结构域的所述第一部分的n末端连接，并且所述二聚化模块的所述第一部分的n末端与所述第二结构域的c末端或所述第二结构域的所述第一部分的c末端连接。

22、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第二部分与所述第二结构域或所述第二结构域的所述第一部分连接。

23、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第二部分的n末端与所述第二结构域的c末端或所述第二结构域的所述第一部分的c末端连接。

24、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第二部分的c末端与所述第二结构域的n末端或所述第二结构域的所述第一部分的n末端连接。

25、在一些实施例中，所述二聚化模块的第一部分的n末端与所述第一结构域的c末端或所述第一结构域的所述第一部分的c末端连接，并且所述二聚化模块的所述第二部分的n末端与所述第二结构域的c末端或所述第二结构域的所述第一部分的c末端连接。

26、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分的n末端与所述第一结构域的c末端或所述第一结构域的所述第一部分的c末端连接，并且所述二聚化模块的所述第二部分的c末端与所述第二结构域的n末端或所述第二结构域的所述第一部分的n末端连接。

27、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分的c末端与所述第一结构域的n末端或所述第一结构域的所述第一部分的n末端连接，并且所述二聚化模块的所述第二部分的c末端与所述第二结构域的n末端或所述第二结构域的所述第一部分的n末端连接。

28、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分的c末端与所述第一结构域的n末端或所述第一结构域的所述第一部分的n末端连接，并且所述二聚化模块的所述第二部分的n末端与所述第二结构域的c末端或所述第二结构域的所述第一部分的c末端连接。

29、在一些实施例中，所述多功能分子包含至少三条非连续多肽链，其中：（i）所述第一多肽链，所述第一多肽链包含所述二聚化模块的与所述第一结构域的第一部分连接的所述第一部分；（ii）所述第二多肽链，所述第二多肽链包含所述二聚化模块的所述第二部分；以及（iii）多肽链，所述多肽链包含所述第一结构域的第二部分；并且其中所述第二结构域与所述二聚化模块的所述第一部分或所述二聚化模块的所述第二部分连接。

30、在一些实施例中，所述多功能分子包含至少三条非连续多肽链，其中：（i）所述第一多肽链，所述第一多肽链包含所述二聚化模块的与所述第一结构域连接的所述第一部分；（ii）所述第二多肽链，所述第二多肽链包含所述二聚化模块的所述第二部分；以及（iii）多肽链，所述多肽链包含所述第二结构域的第二部分；并且其中所述第二结构域的第一部分与所述二聚化模块的所述第一部分或所述二聚化模块的所述第二部分连接。

31、在一些实施例中，所述多功能分子包含至少四条非连续多肽链，其中：（i）所述第一多肽链，所述第一多肽链包含所述二聚化模块的与所述第一结构域的第一部分连接的所述第一部分；（ii）所述第二多肽链，所述第二多肽链包含所述二聚化模块的所述第二部分；（iii）多肽链，所述多肽链包含所述第一结构域的第二部分；以及（iv）多肽链，所述多肽链包含所述第二结构域的第二部分；并且其中所述第二结构域的第一部分与所述二聚化模块的所述第一部分或所述二聚化模块的所述第二部分连接。

32、在一些实施例中，所述多功能分子包含至少两条非连续多肽链，其中：所述第一多肽链，所述第一多肽链包含所述二聚化模块的与所述第一结构域连接的所述第一部分；以及所述第二多肽链，所述第二多肽链包含所述二聚化模块的所述第二部分；并且其中所述第二结构域与所述二聚化模块的所述第一部分或所述二聚化模块的所述第二部分连接。

33、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含至少一种细胞因子或其功能片段或变体。

34、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述二聚化模块的所述第一部分、所述二聚化模块的所述第二部分或其任何组合连接。

35、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述二聚化模块的所述第一部分的n末端、所述二聚化模块的所述第一部分的c末端、所述二聚化模块的所述第二部分的n末端、所述二聚化模块的所述第二部分的c末端或其任何组合连接。

36、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第一结构域、所述第一结构域的所述第一部分、所述第一结构域的所述第二部分、所述第二结构域、所述第二结构域的所述第一部分、所述第二结构域的所述第二部分或其任何组合连接。

37、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第一结构域的n末端、所述第一结构域的c末端、所述第一结构域的所述第一部分的n末端、所述第一结构域的所述第一部分的c末端、所述第一结构域的所述第二部分的n末端、所述第一结构域的所述第二部分的c末端、所述第二结构域的n末端、所述第二结构域的c末端、所述第二结构域的所述第一部分的n末端、所述第二结构域的所述第一部分的c末端、所述第二结构域的所述第二部分的n末端、所述第二结构域的所述第二部分的c末端或其任何组合连接。

38、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体选自由以下组成的组：白介素-2（il-2）或其功能变体、白介素-7（il-7）或其功能变体、白介素-12（il-12）或其功能变体、白介素-15（il-15）或其功能变体、白介素-18（il-18）或其功能变体、白介素-21（il-21）或其功能变体、干扰素γ或其功能变体及其任何组合。

39、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体包含白介素-2（il-2）或其功能变体。

40、在一些实施例中，所述白介素-2（il-2）或其功能变体包含与seq id no: 2270或seq id no: 2191的序列具有至少70%序列同一性的序列。

41、在一些实施例中，所述白介素-2（il-2）或其功能变体包含seq id no: 2270或seqid no: 2191的序列。

42、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体包含白介素-15（il-15）或其功能变体。

43、在一些实施例中，所述白介素-15（il-15）或其功能变体包含与seq id no: 2170的序列具有至少70%序列同一性的序列。

44、在一些实施例中，所述白介素-15（il-15）或其功能变体包含seq id no: 2170的序列。

45、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体进一步包含与所述白介素-15（il-15）或其功能变体共价连接的il15rα二聚化结构域。

46、在一些实施例中，所述il15rα二聚化结构域包含il-15受体α sushi结构域或其功能变体。

47、在一些实施例中，所述il15rα二聚化结构域包含与seq id no: 3472的序列具有至少70%序列同一性的序列。

48、根据权利要求45至47中任一项所述的多功能分子，其中所述il15rα二聚化结构域包含seq id no: 3472的序列。

49、在一些实施例中，所述白介素-15（il-15）或其功能变体通过接头与所述il15rα二聚化结构域共价连接。

50、在一些实施例中，所述白介素-15（il-15）或其功能变体通过接头与所述il15rα二聚化结构域共价连接，所述接头包含seq id no: 3473的序列。

51、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体包含与seq id no:3474的序列具有至少70%序列同一性的序列。

52、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体包含seq id no:3474的序列。

53、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含位于所述第一结构域或所述第一结构域的所述第一部分与所述二聚化模块的所述第一部分之间的接头。

54、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含位于所述第二结构域或所述第二结构域的所述第一部分与所述二聚化模块的第一部分之间的接头。

55、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含位于所述第二结构域或所述第二结构域的所述第一部分与所述二聚化模块的第二部分之间的接头。

56、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述二聚化模块的所述第一部分之间的接头。

57、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第一多肽链的所述二聚化模块的所述第一部分之间的接头。

58、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第一结构域之间的接头、位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第一结构域的所述第一部分之间的接头、位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第一结构域的所述第二部分之间的接头、位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第二结构域之间的接头、位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第二结构域的所述第一部分之间的接头、位于所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体与所述第二结构域的所述第二部分之间的接头，或其任何组合。

59、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含肿瘤靶向部分。

60、在一些实施例中，所述肿瘤靶向部分与癌症抗原结合。

61、在一些实施例中，所述肿瘤靶向部分与选自由以下组成的组的癌症抗原结合：cd19、cd123、cd22、cd30、cd171、cs-1、c型凝集素样分子-1、cd33、表皮生长因子受体变体iii（egfrviii）、神经节苷脂g2（gd2）、神经节苷脂gd3、tnf受体家族成员b细胞成熟（bcma）、tn抗原（（tn ag）或（galnacα-ser/thr））、前列腺特异性膜抗原（psma）、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（ror1）、fms样酪氨酸激酶3（flt3）、肿瘤相关糖蛋白72（tag72）、cd38、cd44v6、癌胚抗原（cea）、上皮细胞粘附分子（epcam）、b7h3（cd276）、kit（cd117）、白介素-13受体亚基α-2、间皮素、白介素11受体α（il-11ra）、前列腺干细胞抗原（psca）、蛋白酶丝氨酸21、血管内皮生长因子受体2（vegfr2）、lewis（y）抗原、cd24、血小板衍生的生长因子受体β（pdgfr-β）、阶段特异性胚胎抗原4（ssea-4）、cd20、叶酸受体α、受体酪氨酸蛋白激酶erbb2（her2/neu）、粘蛋白1、细胞表面缔合（muc1）、表皮生长因子受体（egfr）、神经细胞粘附分子（ncam）、前列腺酶、前列腺酸性磷酸酶（pap）、延伸因子2突变（elf2m）、ephrin b2、成纤维细胞激活蛋白α（fap）、胰岛素样生长因子1受体（igf-i受体）、碳酸酐酶ix（caix）、蛋白酶体（前体（prosome）、巨蛋白因子（macropain））亚基β型9（lmp2）、糖蛋白100（gp100）/pmel17、由断点簇区（bcr）和爱柏森鼠类白血病病毒癌基因同源物1（abl）组成的癌基因融合蛋白（bcr-abl）、酪氨酸酶、ephrin a型受体2（epha2）、岩藻糖基gm1、唾液酸基路易斯粘附分子（sle）、神经节苷脂gm3、转谷氨酰胺酶5（tgs5）、高分子量黑色素瘤相关抗原（hmwmaa）、邻乙酰基gd2神经节苷脂（oacgd2）、叶酸受体β、肿瘤内皮标志物1（tem1/cd248）、肿瘤内皮标志物7相关（tem7r）、紧密连接蛋白6（cldn6）、甲状腺刺激激素受体（tshr）、g蛋白偶联受体c类5组成员d（gprc5d）、x染色体开放阅读框61（cxorf61）、cd97、cd179a、间变性淋巴瘤激酶（alk）、聚唾液酸、胎盘特异性1（plac1）、globoh糖神经酰胺的六糖部分（globoh）、乳腺分化抗原（ny-br-1）、尿斑蛋白2（upk2）、甲肝病毒细胞受体1（havcr1）、肾上腺素受体β3（adrb3）、泛连接蛋白3（panx3）、g蛋白偶联受体20（gpr20）、淋巴细胞抗原6复合物基因座k9（ly6k）、嗅觉受体51e2（or51e2）、tcrγ交替阅读框蛋白（tarp）、威尔姆斯瘤蛋白（wilmstumor protein，wt1）、癌症/睾丸抗原1（ny-eso-1）/lage-1、癌症/睾丸抗原2（lage-1a）、黑色素瘤相关抗原1（mage-a1）、位于12p染色体上的ets易位变体基因6（etv6-aml）、精子蛋白17（spa17）、x抗原家族成员1a（xage1）、血管生成素结合细胞表面受体2（tie 2）、黑色素瘤癌睾丸抗原-1（mad-ct-1）、黑色素瘤癌睾丸抗原-2（mad-ct-2）、fos相关抗原1、肿瘤蛋白p53（p53）、p53突变体、prostein、存活素、端粒酶、前列腺癌肿瘤抗原-1、由t细胞1识别的黑色素瘤抗原、大鼠肉瘤（ras）突变体、人端粒酶逆转录酶（htert）、肉瘤易位断点、细胞凋亡的黑色素瘤抑制剂（ml-iap）、erg（跨膜蛋白酶丝氨酸2（tmprss2）ets融合基因）、n-乙酰基葡糖胺基转移酶v（na17）、配对盒蛋白pax-3（pax3）、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、v-myc鸟髓细胞瘤病病毒癌基因成神经细胞瘤衍生的同源物（mycn）、ras同源物家族成员c（rhoc）、酪氨酸酶相关蛋白2（trp-2）、细胞色素p450 1b1（cyp1b1）、ccctc结合因子（锌指蛋白）样、由t细胞识别的鳞状细胞癌抗原3（sart3）、配对盒蛋白pax-5（pax5）、前顶体素结合蛋白sp32（oy-tes1）、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（lck）、a激酶锚定蛋白4（akap-4）、滑膜肉瘤、x断点2（ssx2）、高级糖化最终产物受体（rage-1）、肾遍在蛋白1（renal ubiquitous 1，ru1）、肾遍在蛋白2（renal ubiquitous 2，ru2）、豆荚蛋白（legumain）、人乳头瘤病毒e6（hpv e6）、人乳头瘤病毒e7（hpv e7）、肠羧基酯酶、热休克蛋白70-2突变（mut hsp70-2）、cd79a、cd79b、cd72、白细胞相关免疫球蛋白样受体1（lair1）、iga受体的fc片段（fcar或cd89）、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族a成员2（lilra2）、cd300分子样家族成员f（cd300lf）、c型凝集素结构域家族12成员a（clec12a）、骨髓基质细胞抗原2（bst2）、含有egf样模块的粘蛋白样激素受体样2（emr2）、淋巴细胞抗原75（ly75）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（gpc3）、fc受体样5（fcrl5）、fcrh5、pdl1、cd47、前列腺特异性膜抗原（pmsa）、前列腺特异性抗原（psa）、ron激酶、c-met、未成熟层粘连蛋白受体、tag-72、bing-4、钙激活的氯化物通道2、细胞周期蛋白-b1、9d7、ep-cam、epha3、sap-1、prame、melan-a/mart-1、trp1/gp75、mc1r、β-连环蛋白、brca1/2、cdk4、cml66、纤连蛋白、ras、tgf-b受体、tgf-β受体、afp、eta、mage、ca-125、bage、gage、cdc27、α辅肌动蛋白-4、神经节苷脂、mart-2、muc2、mum1、mum2、mum3、na88-1、npm、oa1、ogt、rcc、ru11、ru12、sage、trg、tsta、l1-cam、gpa33、gm2、vegfr、整合素、碳水化合物、igf1r、trailr1、trailr2、rankl、tgf-β、透明质酸、胶原蛋白、腱生蛋白c、腱生蛋白w以及免疫球蛋白λ样多肽1（igll1）。

62、在一些实施例中，所述肿瘤靶向部分是抗体分子。

63、在一些实施例中，所述抗体分子选自由以下组成的组：全长抗体、fab、fab'、f(ab')2、f(ab)2、可变片段（fv）、单结构域抗体、双抗体、骆驼抗体、纳米抗体和单链可变片段（scfv）。

64、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含基质修饰部分。

65、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含免疫细胞接合子。

66、在一些实施例中，所述免疫细胞接合子选自由以下组成的组：t细胞接合子、nk细胞接合子、b细胞接合子、树突状细胞接合子、巨噬细胞接合子及其任何组合。

67、在一些实施例中，免疫细胞接合子是抗体分子。

68、在一些实施例中，所述抗体分子选自由以下组成的组：全长抗体、fab、fab'、f(ab')2、f(ab)2、可变片段（fv）、单结构域抗体、双抗体、骆驼抗体、纳米抗体和单链可变片段（scfv）。

69、在一些实施例中，所述第一多肽链的所述二聚化模块的所述第一部分是第一fc区或其变体。

70、在一些实施例中，所述第二多肽链的所述二聚化模块的所述第二部分是第二fc区或其变体。

71、在一些实施例中，所述二聚化模块的所述第一部分、所述二聚化模块的所述第二部分或其组合选自由以下组成的组：igg1 fc区或其功能片段、igg2 fc区或其功能片段、igg3 fc区或其功能片段、igga1 fc区或其功能片段、igga2 fc区或其功能片段、igg4 fc区或其功能片段、igj fc区或其功能片段、igm fc区或其功能片段、igd fc区或其功能片段以及ige fc区或其功能片段。

72、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含与以下中的一者或多者的工程化fc界面：配对空腔-突起、静电相互作用或链交换，其中相对于不具有所述工程化界面的fc区的二聚化，所述第一fc区和所述第二fc区的二聚化增强，如异源多聚体形式:同源多聚体形式的更大比率所指示的。

73、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含重链恒定区中根据eu编号的位置349处的cys、位置366处的ser、位置368处的ala、位置407处的val、位置354处的cys、位置366处的trp或其任何组合。

74、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含（i）重链恒定区中根据eu编号的位置349处的cys、位置366处的ser、位置368处的ala和位置407处的val；（ii）重链恒定区中根据eu编号的位置354处的cys和位置366处的trp；或（iii）其组合。

75、在一些实施例中，（i）第一fc区包含：（a）重链恒定区中根据eu编号的位置349处的cys，（b）重链恒定区中根据eu编号的位置366处的ser，（c）重链恒定区中根据eu编号的位置368处的ala；以及（d）重链恒定区中根据eu编号的位置407处的val；并且（ii）所述第二fc区包含：（a）重链恒定区中根据eu编号的位置354处的cys，以及（b）重链恒定区中根据eu编号的位置366处的trp。

76、在一些实施例中，（i）第一fc区包含：（a）重链恒定区中根据eu编号的位置354处的cys，以及（b）重链恒定区中根据eu编号的位置366处的trp；（ii）所述第二fc区包含：（a）重链恒定区中根据eu编号的位置349处的cys，（b）重链恒定区中根据eu编号的位置366处的ser，（c）重链恒定区中根据eu编号的位置368处的ala；以及（d）重链恒定区中根据eu编号的位置407处的val。

77、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含一个或多个突变，所述一个或多个突变使得相对于不具有所述一个或多个突变的fc区，对至少一个fc受体的亲和力降低或消除。

78、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含根据eu编号的asn297ala（n297a）突变或leu234ala/leu235ala（lala）突变或其组合。

79、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含与seq id no: 40、seq id no: 42、seq id no: 3901、seq id no: 3645、seq id no: 3902、seq id no:3646、seq id no: 3647、seq id no: 3903、seq id no: 206、seq id no: 207、seq id no:3904、seq id no: 3452、seq id no: 3447或seq id no: 3453的序列具有至少70%序列同一性的序列。

80、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含seq id no: 40、seqid no: 42、seq id no: 3901、seq id no: 3645、seq id no: 3902、seq id no: 3646、seqid no: 3647、seq id no: 3903、seq id no: 206、seq id no: 207、seq id no: 3904、seqid no: 3452、seq id no: 3447或seq id no: 3453的序列。

81、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含与seq id no: 206、seq id no: 3447或seq id no: 3453的序列具有至少70%序列同一性的序列。

82、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含seq id no: 206、seq id no: 3447或seq id no: 3453的序列。

83、在一些实施例中，所述多功能分子包含以下构型：

84、a-[二聚化模块的第一部分]-c，

85、b-[二聚化模块的第二部分]-d，其中：

86、（a）所述二聚化模块包含第一免疫球蛋白链恒定区和第二免疫球蛋白链恒定区；

87、（b）a和c与所述第一免疫球蛋白链恒定区连接；并且b和d与所述第二免疫球蛋白链恒定区连接；

88、（c）a、b、c和d独立地是（i）不存在的；（ii）所述第一结构域；（iii）所述第二结构域；（iv）所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体；（v）所述肿瘤靶向部分；（vi）所述基质修饰部分；或（vii）所述免疫细胞接合子；其中a或c中的至少一者是所述第一结构域，并且其中当a是所述第一结构域时，b、c或d中的至少一者是所述第二结构域，并且当c是所述第一结构域时，a、b或d中的至少一者是所述第二结构域。

89、在一些实施例中，所述多功能分子未被固定到固相。

90、在一些实施例中，所述多功能分子未被固定到固相。

91、在一些实施例中，其中所述第二结构域与选自由以下组成的组的tcrβv亚家族中的一者或多者结合：tcrβ v1亚家族、tcrβ v2亚家族、tcrβ v3亚家族、tcrβ v4亚家族、tcrβv5亚家族、tcrβ v6亚家族、tcrβ v7亚家族、tcrβ v8亚家族、tcrβ v9亚家族、tcrβ v10亚家族、tcrβ v11亚家族、tcrβ v12亚家族、tcrβ v13亚家族、tcrβ v14亚家族、tcrβ v15亚家族、tcrβ v16亚家族、tcrβ v17亚家族、tcrβ v18亚家族、tcrβ v19、tcrβ v20亚家族、tcrβv21亚家族、tcrβ v22亚家族、tcrβ v23亚家族、tcrβ v24亚家族、tcrβ v25亚家族、tcrβv26亚家族、tcrβ v27亚家族、tcrβ v28亚家族、tcrβ v29亚家族以及tcrβ v30亚家族。

92、在一些实施例中，所述第二结构域与选自由以下组成的组的tcrβv亚家族中的一者或多者结合：tcrβ v1亚家族，所述tcrβ v1亚家族包含tcrβ v1*01；tcrβ v2亚家族，所述tcrβ v2亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v2*01、tcrβ v2*02和tcrβ v2*03；tcrβ v3亚家族，所述tcrβ v3亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v3-1*01和tcrβ v3-1*02；tcrβ v4亚家族，所述tcrβ v4亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v4-1*01、tcrβ v4-1*02、tcrβ v4-2*01、tcrβ v4-2*02、tcrβ v4-3*01、tcrβ v4-3*02、tcrβ v4-3*03和tcrβ v4-3*04；tcrβ v5亚家族，所述tcrβ v5亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβv5-1*01、tcrβ v5-1*02、tcrβ v5-3*01、tcrβ v5-3*02、tcrβ v5-4*01、tcrβ v5-4*02、tcrβv5-4*03、tcrβ v5-4*04、tcrβ v5-5*01、tcrβ v5-5*02、tcrβ v5-5*03、tcrβ v5-6*01、tcrβv5-7*01、tcrβ v5-8*01和tcrβ v5-8*02；tcrβ v6亚家族，所述tcrβ v6亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v6-1*01、tcrβ v6-2*01、tcrβ v6-3*01、tcrβ v6-4*01、tcrβ v6-4*02、tcrβ v6-5*01、tcrβ v6-6*01、tcrβ v6-6*02、tcrβ v6-6*03、tcrβ v6-6*04、tcrβv6-6*05、tcrβ v6-7*01、tcrβ v6-8*01和tcrβ v6-9*01；tcrβ v7亚家族，所述tcrβ v7亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v7-1*01、tcrβ v7-2*01、tcrβ v7-2*02、tcrβ v7-2*03、tcrβ v7-2*04、tcrβ v7-3*01、tcrβ v7-3*02、tcrβ v7-3*03、tcrβ v7-3*04、tcrβv7-3*05、tcrβ v7-4*01、tcrβ v7-4*02、tcrβ v7-6*01、tcrβ v7-6*02、tcrβ v7-7*01、tcrβv7-7*02、tcrβ v7-8*01、tcrβ v7-8*02、tcrβ v7-8*03、tcrβ v7-9*01、tcrβ v7-9*02、tcrβv7-9*03、tcrβ v7-9*04、tcrβ v7-9*05、tcrβ v7-9*06和tcrβ v7-9*07；tcrβ v8亚家族，所述tcrβ v8亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v8-1*01、tcrβ v8-1*02、tcrβ v8-2*01和tcrβ v8-2*02；tcrβ v9亚家族，所述tcrβ v9亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v9-1*01、tcrβ v9-1*02和tcrβ v9-1*03；tcrβ v10亚家族，所述tcrβ v10亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v10-1*01、tcrβ v10-1*02、tcrβ v10-1*03、tcrβ v10-2*01、tcrβ v10-2*02、tcrβ v10-3*01、tcrβ v10-3*02、tcrβ v10-3*03和tcrβ v10-3*04；tcrβ v11亚家族，所述tcrβ v11亚家族包含tcrβ v11-1*01、tcrβ v11-2*01、tcrβ v11-2*02、tcrβ v11-2*03、tcrβ v11-3*01、tcrβ v11-3*02、tcrβ v11-3*03和tcrβ v11-3*04；tcrβv12亚家族，所述tcrβ v12亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v12-3*01、tcrβv12-4*01、tcrβ v12-4*02和tcrβ v12-5*01；tcrβ v13亚家族，所述tcrβ v13亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v13*01和tcrβ v13*02；tcrβ v14亚家族，所述tcrβ v14亚家族包含包括tcrβ v14*01和tcrβ v14*02的一者或多者；tcrβ v15亚家族，所述tcrβ v15亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v15*01、tcrβ v15*02和tcrβ v15*03；tcrβ v16亚家族，所述tcrβ v16亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v16*01、tcrβ v16*02和tcrβ v16*03；tcrβ v17亚家族，所述tcrβ v17亚家族包含tcrβ v17*01；tcrβ v18亚家族，所述tcrβ v18亚家族包含tcrβ v18*01；tcrβ v19亚家族，所述tcrβ v19亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v19*01、tcrβ v19*02和tcrβ v19*03；tcrβ v20亚家族，所述tcrβv20亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v20-1*01、tcrβ v20-1*02、tcrβ v20-1*03、tcrβ v20-1*04、tcrβ v20-1*05、tcrβ v20-1*06和tcrβ v20-1*07；tcrβ v21亚家族，所述tcrβ v21亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v21-1*01和tcrβ v21-1*02；tcrβv22亚家族，所述tcrβ v22亚家族包含tcrβ v22-1*01；tcrβ v23亚家族，所述tcrβ v23亚家族包含tcrβ v23-1*01；tcrβ v24亚家族，所述tcrβ v24亚家族包含tcrβ v24-1*01；tcrβv25亚家族，所述tcrβ v25亚家族包含tcrβ v25-1*01；tcrβ v26亚家族，所述tcrβ v26亚家族包含tcrβ v26-1*01；tcrβ v27亚家族，所述tcrβ v27亚家族包含tcrβ v27*01；tcrβ v28亚家族，所述tcrβ v28亚家族包含tcrβ v28*01；tcrβ v29亚家族，所述tcrβ v29亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v29-1*01、tcrβ v29-1*02和tcrβ v29-1*03；以及tcrβv30亚家族，所述tcrβ v30亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrβ v30*01、tcrβ v30*02、tcrβ v30*03、tcrβ v30*04和tcrβ v30*05。

93、在一些实施例中，所述第二结构域与以下各项结合：tcrβ v4亚家族、tcrβ v6亚家族、tcrβ v20亚家族或tcrβ v25亚家族。

94、在一些实施例中，所述第二结构域与以下各项结合：tcrb v4-1、tcrb v6-1、tcrbv6-2、tcrb v6-3、tcrb v6-4、tcrb v6-5、tcrb v6-6、tcrb v6-7、tcrb v6-8、tcrb v6-9、tcrb v20-1或tcrb v25-1。

95、在一些实施例中，所述多功能分子包含单tcrβv结合结构域。

96、在一些实施例中，所述第一结构域与选自由以下组成的组的tcrαv亚家族中的一者或多者结合：tcrαv1亚家族、tcrα v2亚家族、tcrα v3亚家族、tcrα v4亚家族、tcrα v5亚家族、tcrα v6亚家族、tcrα v7亚家族、tcrα v8亚家族、tcrα v9亚家族、tcrα v10亚家族、tcrα v12亚家族、tcrα v13亚家族、tcrα v14亚家族、tcrα v16亚家族、tcrα v17亚家族、tcrα v18亚家族、tcrα v19亚家族、tcrα v20亚家族、tcrα v21亚家族、tcrα v22亚家族、tcrα v23亚家族、tcrα v24亚家族、tcrα v25亚家族、tcrα v26亚家族、tcrα v27亚家族、tcrα v29亚家族、tcrα v30亚家族、tcrα v34亚家族、tcrα v35亚家族、tcrα v36亚家族、tcrα v38亚家族、tcrα v39亚家族、tcrα v40亚家族以及tcrα v41亚家族。

97、在一些实施例中，所述第一结构域与选自由以下组成的组的tcrαv亚家族中的一者或多者结合：tcrαv1亚家族，所述tcrαv1亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v1-1*01、tcrα v1-1*02、tcrα v1-2*01和tcrα v1-2*02；tcrα v2亚家族，所述tcrα v2亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v2*01和tcrα v2*02；tcrα v3亚家族，所述tcrα v3亚家族包含tcrα v3*01；tcrα v4亚家族，所述tcrα v4亚家族包含tcrα v4*01；tcrα v5亚家族，所述tcrα v5亚家族包含tcrα v5*01；tcrα v6亚家族，所述tcrα v6亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v6*01、tcrα v6*02、tcrα v6*03、tcrα v6*04、tcrα v6*05和tcrαv6*06；tcrα v7亚家族，所述tcrα v7亚家族包含tcrα v7*01；tcrα v8亚家族，所述tcrα v8亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v8-1*01、tcrα v8-1*02、tcrα v8-2*01、tcrαv8-2*02、tcrα v8-3*01、tcrα v8-3*02、tcrα v8-3*03、tcrα v8-4*01、tcrα v8-4*02、tcrαv8-4*03、tcrα v8-4*04、tcrα v8-4*05、tcrα v8-4*06、tcrα v8-4*07、tcrα v8-6*01、tcrαv8-6*02和tcrα v8-7*01；tcrα v9亚家族，所述tcrα v9亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v9-1*01、tcrα v9-2*01、tcrα v9-2*02、tcrα v9-2*03和tcrα v9-2*04；tcrα v10亚家族，所述tcrα v10亚家族包含tcrα v10*01；tcrα v12亚家族，所述tcrα v12亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v12-1*01、tcrα v12-1*02、tcrα v12-2*01、tcrα v12-2*02、tcrα v12-2*03、tcrα v12-3*01和tcrα v12-3*02；tcrα v13亚家族，所述tcrα v13亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v13-1*01、tcrα v13-1*02、tcrα v13-1*03、tcrαv13-2*01和tcrα v13-2*02；tcrα v14亚家族，所述tcrα v14亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v14*01、tcrα v14*02、tcrα v14*03和tcrα v14*04；tcrα v16亚家族，所述tcrα v16亚家族包含tcrα v16*01；tcrα v17亚家族，所述tcrα v17亚家族包含tcrα v17*01；tcrα v18亚家族，所述tcrα v18亚家族包含tcrα v18*01；tcrα v19亚家族，所述tcrαv19亚家族包含tcrα v19*01；tcrα v20亚家族，所述tcrα v20亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v20*01、tcrα v20*02、tcrα v20*03和tcrα v20*04；tcrα v21亚家族，所述tcrα v21亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v21*01和tcrα v20*02；tcrα v22亚家族，所述tcrα v22亚家族包含tcrα v22*01；tcrα v23亚家族，所述tcrα v23亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v23*01、tcrα v23*02、tcrα v23*03和tcrα v23*04；tcrαv24亚家族，所述tcrα v24亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v23*01和tcrα v23*02；tcrα v25亚家族，所述tcrα v25亚家族包含tcrα v25*01；tcrα v26亚家族，所述tcrαv26亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v26-1*01、tcrα v26-1*02、tcrα v26-1*03、tcrα v26-2*01和tcrα v26-2*02；tcrα v27亚家族，所述tcrα v27亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v27*01、tcrα v27*02和tcrα v27*03；tcrα v29亚家族，所述tcrαv29亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v29*01和tcrα v27*02；tcrα v30亚家族，所述tcrα v30亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v30*01、tcrα v30*02、tcrαv30*03和tcrα v30*04；tcrα v34亚家族，所述tcrα v34亚家族包含tcrα v34*01；tcrα v35亚家族，所述tcrα v35亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v35*01和tcrα v35*02；tcrα v36亚家族，所述tcrα v36亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v36*01、tcrαv36*02、tcrα v36*03和tcrα v36*04；tcrα v38亚家族，所述tcrα v38亚家族包含选自以下中的一者或多者：tcrα v38-1*01、tcrα v38-1*02、tcrα v38-1*03、tcrα v38-1*04和tcrαv38-2*01；tcrα v39亚家族，所述tcrα v39亚家族包含tcrα v39*01；tcrα v40亚家族，所述tcrα v40亚家族包含tcrα v40*01；以及tcrα v41亚家族，所述tcrα v41亚家族包含tcrαv41*01。

98、在一些实施例中，所述第二结构域与以下各项结合：tcrα v12亚家族、tcrα v13亚家族、tcrα v19亚家族、tcrα v21亚家族或tcrα v30亚家族。

99、在一些实施例中，所述第二结构域与以下各项结合：tcrα v1亚家族、tcrα v10亚家族、tcrα v17亚家族或tcrα v19亚家族。

100、在一些实施例中，所述第二结构域与以下各项结合：tcrα v1-2、tcrα v10或tcrαv17。

101、在一些实施例中，所述第一结构域和所述第二结构域与以下各项结合：分别为tcrα v1和tcrβ v6；分别为tcrα v1和tcrβ v20；分别为tcrα v10和tcrβ v25；分别为tcrα v1和tcrβ v4；分别为tcrα v17和tcrβ v4；或分别为tcrα v17和tcrβ v6。

102、在一些实施例中，所述第一结构域和所述第二结构域与以下各项结合：分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-1；分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-2；分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-3；分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-4；分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-5；分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-6；分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-7；分别为tcrα v1-2和tcrβ v6-8；分别为tcrα v1-2和tcrβv6-9；分别为tcrα v1-2和tcrβ v20-1；分别为tcrα v10和tcrβ v25-1；分别为tcrα v1-2和tcrβ v4-1；分别为tcrα v17和tcrβ v4-1；或分别为tcrα v17和tcrβ v6-2。

103、在一些实施例中，所述第一结构域包含与所述tcrαv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含表22中所列的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3的组合；（ii）vl，所述vl包含表22中所列的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3的组合；或（iii）其组合。

104、在一些实施例中，所述第一结构域包含与所述tcrαv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含表22中所列的重链可变结构域氨基酸序列中的任一者的hccdr1、hc cdr2和hc cdr3；（ii）vl，所述vl包含表22中所列的轻链可变结构域氨基酸序列中的任一者的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3；或（iii）其组合。

105、在一些实施例中，所述第一结构域包含与所述tcrαv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含与表22中所列的重链可变结构域氨基酸序列中的任一者具有至少70%序列同一性的序列；（i）vl，所述vl包含与表22中所列的轻链可变结构域氨基酸序列中的任一者具有至少70%序列同一性的序列；或（iii）其组合。

106、在一些实施例中，所述第一结构域包含与所述tcrαv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含表22中所列的重链可变结构域氨基酸序列中的任一者；（ii）vl，所述vl包含表22中所列的轻链可变结构域氨基酸序列中的任一者；或（iii）其组合。

107、在一些实施例中，所述第一结构域包含与表22中所列的tcrαv结合的抗体分子中的任一者。

108、在一些实施例中，所述第二结构域包含与所述tcrβv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3的组合；（ii）vl，所述vl包含表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3的组合；或（iii）其组合。

109、在一些实施例中，所述第二结构域包含与所述tcrβv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的重链可变结构域氨基酸序列中的任一者的hc cdr1、hc cdr2和hc cdr3；（ii）vl，所述vl包含表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的轻链可变结构域氨基酸序列中的任一者的lc cdr1、lc cdr2和lc cdr3；或（iii）其组合。

110、在一些实施例中，所述第二结构域包含与所述tcrβv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含与表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的重链可变结构域氨基酸序列中的任一者具有至少70%序列同一性的序列；（i）vl，所述vl包含与表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的轻链可变结构域氨基酸序列中的任一者具有至少70%序列同一性的序列；或（iii）其组合。

111、在一些实施例中，所述第二结构域包含与所述tcrβv结合的抗体分子，所述抗体分子包含：（i）vh，所述vh包含表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的重链可变结构域氨基酸序列中的任一者；（ii）vl，所述vl包含表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的轻链可变结构域氨基酸序列中的任一者；或（iii）其组合。

112、在一些实施例中，所述第二结构域包含与表1、2、10a、10b、10c、11、12、13、15、16、17、18、19、20、21、23、25或26中所列的tcrβv结合的抗体分子中的任一者。

113、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含表4和14中所列的根据eu编号的一个或多个突变。

114、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含与表1、2、3、10c、11、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25或26中所列的重链恒定区序列中的任一者具有至少70%序列同一性的序列。

115、在一些实施例中，所述第一fc区、所述第二fc区或其组合包含表1、2、3、10c、11、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25或26中所列的重链恒定区序列中的任一者。

116、在一些实施例中，所述多功能分子进一步包含一个或多个免疫球蛋白轻链恒定区。

117、在一些实施例中，所述一个或多个免疫球蛋白轻链恒定区与以下各项连接：所述第一结构域、所述第一结构域的所述第一部分或所述第一结构域的所述第二部分。

118、在一些实施例中，所述一个或多个免疫球蛋白轻链恒定区与以下各项连接：所述第二结构域、所述第二结构域的所述第一部分或所述第二结构域的所述第二部分。

119、在一些实施例中，所述一个或多个免疫球蛋白轻链恒定区与所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体连接。

120、在一些实施例中，所述一个或多个免疫球蛋白轻链恒定区包含κ轻链恒定区、λ轻链恒定区或其组合。

121、在一些实施例中，所述一个或多个免疫球蛋白轻链恒定区包含与表1、2、3、10c、11、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25或26中所列的轻链恒定区序列中的任一者具有至少70%序列同一性的序列。

122、在一些实施例中，所述一个或多个免疫球蛋白轻链恒定区包含表1、2、3、10c、11、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25或26中所列的轻链恒定区序列中的任一者。

123、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体包含与表10c、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25或26中所列的细胞因子序列中的任一者具有至少70%的序列同一性的序列。

124、在一些实施例中，所述至少一种细胞因子或其功能片段或变体包含表10c、15、16、17、18、19、20、21、22、23、25或26中所列的细胞因子序列中的任一者。

125、在一些实施例中，所述肿瘤靶向部分包含与表24中所列的抗体序列中的任一者具有至少70%序列同一性的序列。

126、在一些实施例中，所述肿瘤靶向部分包含表24中所列的抗体序列中的任一者。

127、在一些实施例中，所述多功能分子不包含抗cd3结合结构域。

128、在一些实施例中，所述多功能分子是多肽分子。

129、在一些实施例中，所述多功能分子是多特异性分子。

130、另一方面，本文提供了一种多核苷酸，其包含编码如本文所述的多功能分子的序列。

131、在一些实施例中，所述多核苷酸是分离的核酸分子。

132、另一方面，本文提供了一种载体，其包含如本文所述的多核苷酸。

133、另一方面，本文提供了一种细胞，其包含如本文所述的多功能分子、如本文所述的多核苷酸或如本文所述的载体。

134、另一方面，本文提供了一种制备如本文所述的多功能分子的方法，所述方法包含：在适于表达所述多功能分子的条件下培养包含如本文所述的多核苷酸或如本文所述的载体的细胞。本文还提供了一种制备如本文所述的多功能分子的方法，所述方法包含：在适于表达所述多功能分子的条件下培养如本文所述的细胞。

135、另一方面，本文提供了一种组合物，其包含如本文所述的多功能分子。

136、另一方面，本文提供了一种药物组合物，其包含如本文所述的多功能分子、如本文所述的多核苷酸、如本文所述的载体、如本文所述的细胞或如本文所述的组合物，以及药学上可接受的载剂、赋形剂或稀释剂。

137、另一方面，本文提供了一种治疗有需要的受试者的病状或疾病的方法，所述方法包含向所述受试者施用治疗有效量的如本文所述的多功能分子、如本文所述的多核苷酸、如本文所述的载体、如本文所述的细胞、如本文所述的组合物、如本文所述的药物组合物或其组合，其中所述施用可有效治疗所述受试者的所述病状或疾病。

138、在一些实施例中，所述病状或疾病是癌症。

139、在一些实施例中，所述癌症是实体瘤、血液癌、转移性癌症、软组织肿瘤或其组合。

140、在一些实施例中，其中所述癌症是实体瘤，并且其中所述实体瘤选自由以下组成的组：黑色素瘤、胰腺癌、乳腺癌、结直肠癌、肺癌、皮肤癌、卵巢癌、肝癌及其组合。

141、在一些实施例中，所述癌症是血液癌，并且其中所述血液癌选自由以下组成的组：霍奇金氏淋巴瘤（hodgkin's lymphoma）、非霍奇金氏淋巴瘤（non-hodgkin's lymphoma）、急性髓系白血病（aml）、慢性髓系白血病、骨髓增生异常综合征、多发性骨髓瘤、t细胞淋巴瘤、急性淋巴细胞性白血病及其组合。

142、在一些实施例中，所述非霍奇金氏淋巴瘤选自由以下组成的组：b细胞淋巴瘤、弥漫性大b细胞淋巴瘤（dlbcl）、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞性白血病（b-cll）、套细胞淋巴瘤、边缘区b细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤（burkitt lymphoma）、淋巴浆细胞淋巴瘤、毛细胞白血病及其组合。

143、在一些实施例中，所述t细胞淋巴瘤是外周t细胞淋巴瘤。

144、在一些实施例中，所述癌症的特征在于存在于所述癌症上的癌症抗原。

145、在一些实施例中，所述存在于所述癌症上的癌症抗原是肿瘤抗原、基质抗原或血液抗原。

146、在一些实施例中，所述癌症抗原选自由以下组成的组：cd19、cd123、cd22、cd30、cd171、cs-1、c型凝集素样分子-1、cd33、表皮生长因子受体变体iii（egfrviii）、神经节苷脂g2（gd2）、神经节苷脂gd3、tnf受体家族成员b细胞成熟（bcma）、tn抗原（（tn ag）或（galnacα-ser/thr））、前列腺特异性膜抗原（psma）、受体酪氨酸激酶样孤儿受体1（ror1）、fms样酪氨酸激酶3（flt3）、肿瘤相关糖蛋白72（tag72）、cd38、cd44v6、癌胚抗原（cea）、上皮细胞粘附分子（epcam）、b7h3（cd276）、kit（cd117）、白介素-13受体亚基α-2、间皮素、白介素11受体α（il-11ra）、前列腺干细胞抗原（psca）、蛋白酶丝氨酸21、血管内皮生长因子受体2（vegfr2）、lewis（y）抗原、cd24、血小板衍生的生长因子受体β（pdgfr-β）、阶段特异性胚胎抗原4（ssea-4）、cd20、叶酸受体α、受体酪氨酸蛋白激酶erbb2（her2/neu）、粘蛋白1、细胞表面缔合（muc1）、表皮生长因子受体（egfr）、神经细胞粘附分子（ncam）、前列腺酶、前列腺酸性磷酸酶（pap）、延伸因子2突变（elf2m）、ephrin b2、成纤维细胞激活蛋白α（fap）、胰岛素样生长因子1受体（igf-i受体）、碳酸酐酶ix（caix）、蛋白酶体（前体、巨蛋白因子）亚基β型9（lmp2）、糖蛋白100（gp100）/pmel17、由断点簇区（bcr）和爱柏森鼠类白血病病毒癌基因同源物1（abl）组成的癌基因融合蛋白（bcr-abl）、酪氨酸酶、ephrin a型受体2（epha2）、岩藻糖基gm1、唾液酸基路易斯粘附分子（sle）、神经节苷脂gm3、转谷氨酰胺酶5（tgs5）、高分子量黑色素瘤相关抗原（hmwmaa）、邻乙酰基gd2神经节苷脂（oacgd2）、叶酸受体β、肿瘤内皮标志物1（tem1/cd248）、肿瘤内皮标志物7相关（tem7r）、紧密连接蛋白6（cldn6）、甲状腺刺激激素受体（tshr）、g蛋白偶联受体c类5组成员d（gprc5d）、x染色体开放阅读框61（cxorf61）、cd97、cd179a、间变性淋巴瘤激酶（alk）、聚唾液酸、胎盘特异性1（plac1）、globoh糖神经酰胺的六糖部分（globoh）、乳腺分化抗原（ny-br-1）、尿斑蛋白2（upk2）、甲肝病毒细胞受体1（havcr1）、肾上腺素受体β3（adrb3）、泛连接蛋白3（panx3）、g蛋白偶联受体20（gpr20）、淋巴细胞抗原6复合物基因座k 9（ly6k）、嗅觉受体51e2（or51e2）、tcrγ交替阅读框蛋白（tarp）、威尔姆斯瘤蛋白（wt1）、癌症/睾丸抗原1（ny-eso-1）/lage-1、癌症/睾丸抗原2（lage-1a）、黑色素瘤相关抗原1（mage-a1）、位于12p染色体上的ets易位变体基因6（etv6-aml）、精子蛋白17（spa17）、x抗原家族成员1a（xage1）、血管生成素结合细胞表面受体2（tie 2）、黑色素瘤癌睾丸抗原-1（mad-ct-1）、黑色素瘤癌睾丸抗原-2（mad-ct-2）、fos相关抗原1、肿瘤蛋白p53（p53）、p53突变体、prostein、存活素、端粒酶、前列腺癌肿瘤抗原-1、由t细胞1识别的黑色素瘤抗原、大鼠肉瘤（ras）突变体、人端粒酶逆转录酶（htert）、肉瘤易位断点、细胞凋亡的黑色素瘤抑制剂（ml-iap）、erg（跨膜蛋白酶丝氨酸2（tmprss2）ets融合基因）、n-乙酰基葡糖胺基转移酶v（na17）、配对盒蛋白pax-3（pax3）、雄激素受体、细胞周期蛋白b1、v-myc鸟髓细胞瘤病病毒癌基因成神经细胞瘤衍生的同源物（mycn）、ras同源物家族成员c（rhoc）、酪氨酸酶相关蛋白2（trp-2）、细胞色素p450 1b1（cyp1b1）、ccctc结合因子（锌指蛋白）样、由t细胞识别的鳞状细胞癌抗原3（sart3）、配对盒蛋白pax-5（pax5）、前顶体素结合蛋白sp32（oy-tes1）、淋巴细胞特异性蛋白酪氨酸激酶（lck）、a激酶锚定蛋白4（akap-4）、滑膜肉瘤、x断点2（ssx2）、高级糖化最终产物受体（rage-1）、肾遍在蛋白1（ru1）、肾遍在蛋白2（ru2）、豆荚蛋白、人乳头瘤病毒e6（hpv e6）、人乳头瘤病毒e7（hpv e7）、肠羧基酯酶、热休克蛋白70-2突变（mut hsp70-2）、cd79a、cd79b、cd72、白细胞相关免疫球蛋白样受体1（lair1）、iga受体的fc片段（fcar或cd89）、白细胞免疫球蛋白样受体亚家族a成员2（lilra2）、cd300分子样家族成员f（cd300lf）、c型凝集素结构域家族12成员a（clec12a）、骨髓基质细胞抗原2（bst2）、含有egf样模块的粘蛋白样激素受体样2（emr2）、淋巴细胞抗原75（ly75）、磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3（gpc3）、fc受体样5（fcrl5）、fcrh5、pdl1、cd47、前列腺特异性膜抗原（pmsa）、前列腺特异性抗原（psa）、ron激酶、c-met、未成熟层粘连蛋白受体、tag-72、bing-4、钙激活的氯化物通道2、细胞周期蛋白-b1、9d7、ep-cam、epha3、sap-1、prame、melan-a/mart-1、trp1/gp75、mc1r、β-连环蛋白、brca1/2、cdk4、cml66、纤连蛋白、ras、tgf-b受体、tgf-β受体、afp、eta、mage、ca-125、bage、gage、cdc27、α辅肌动蛋白-4、神经节苷脂、mart-2、muc2、mum1、mum2、mum3、na88-1、npm、oa1、ogt、rcc、ru11、ru12、sage、trg、tsta、l1-cam、gpa33、gm2、vegfr、整合素、碳水化合物、igf1r、trailr1、trailr2、rankl、tgf-β、透明质酸、胶原蛋白、腱生蛋白c、腱生蛋白w以及免疫球蛋白λ样多肽1（igll1）。

147、在一些实施例中，如本文所述的方法进一步包含向所述受试者施用第二治疗剂或疗法。

148、在一些实施例中，所述第二治疗剂或疗法包含化学治疗剂、生物药剂、激素疗法、辐射或外科手术。

149、在一些实施例中，所述第二治疗剂或疗法与如本文所述的多功能分子、如本文所述的多核苷酸、如本文所述的载体、如本文所述的细胞、如本文所述的组合物或如本文所述的药物组合物组合依序、同时或并行施用。

150、另一方面，本文提供了一种扩增t细胞群体中的t细胞亚群的方法，所述方法包含使所述t细胞群体与如本文所述的多功能分子或如本文所述的组合物接触，由此扩增所述t细胞群体中的所述t细胞亚群。

151、在一些实施例中，所述t细胞群体是人t细胞群体。

152、在一些实施例中，所述t细胞亚群是人t细胞亚群。

153、在一些实施例中，所述t细胞亚群表达包含tcrβ链的t细胞受体（tcr），所述tcrβ链包含与所述第二结构域结合的所述tcrβv。

154、在一些实施例中，所述t细胞亚群表达包含tcrα链的tcr，所述tcrα链包含与所述第一结构域结合的所述tcrαv。

155、在一些实施例中，所述tcr是人tcr。

156、在一些实施例中，所述多特异性分子是所述tcr的激动剂。

157、在一些实施例中，所述t细胞群体是体内t细胞群体。

158、在一些实施例中，所述t细胞群体是离体t细胞群体。

159、通过引用并入

160、本说明书中所提到的所有出版物、专利和专利申请均通过以相同的程度在此并入，如同特定且单独地指示每个单独的出版物、专利或专利申请是通过引用并入的。