靶向人基底细胞粘附分子的抗体的制作方法

本公开涉及特异性结合人基底细胞粘附分子(bcam)的抗体。序列表本技术包含序列表，该序列表已经以.xml格式电子提交，并且全文据此以引用方式并入。该序列表于2024年2月13日创建，命名为“3320.w01wo_sequence listing.xml”，大小为134千字节。

背景技术：

1、高级别浆液性卵巢癌(hgsoc)是卵巢癌的最常见且致死率最高的类型。绝大多数被确诊的女性处于疾病的晚期。目前的治疗选择仅限于手术和化学疗法的组合，并且无论治疗过程如何，癌症通常都会复发。70%的患者在被诊断患有hgsoc后的5年内死亡。

2、人基底细胞粘附分子(bcam)是高度糖基化的跨膜蛋白，其充当层粘连蛋白α-5的受体。bcam在多种肿瘤中高度表达，在大多数健康组织中表达相对较低。35%-40%的原发性hgsoc肿瘤显示出bcam的高表达。然而，尚不清楚层粘连蛋白α-5是否是卵巢癌中bcam的主要配体。还不清楚的是靶向bcam的抑制作用的性质。

3、目前适用于治疗用途的有效抗bcam抗体库是有限的。因此，仍然需要鉴定靶向bcam并且可用于治疗癌症如hgsoc的抗体。

技术实现思路

1、本公开涉及特异性结合人基底细胞粘附分子(bcam)的抗体。

2、本文提供了一种特异性结合人bcam的抗体，其中该抗体包含可变区和恒定区，其中可变区包含框架区和用于结合人bcam的互补决定部件。

3、具体地，本文提供了一种特异性结合人bcam的抗体，该抗体包含：

4、a) 含有dyyvh (seq id no: 2)的氨基酸序列的重链互补决定区(hcdr) 1、含有iinpfggsatyapkfqg (seq id no: 3)的氨基酸序列的hcdr2、含有giyghfdy (seq id no:4)的氨基酸序列的hcdr3；以及

5、b) 含有kssqsvlsasnnqnyla (seq id no: 5)的氨基酸序列的轻链互补决定区(lcdr) 1、含有wastres (seq id no: 6)的氨基酸序列的lcdr2和含有qqyysspyt (seq idno: 7)的氨基酸序列的lcdr3。

6、本文还提供了一种特异性结合人bcam的抗体，该抗体包含：

7、a) 含有syafs (seq id no: 8)的氨基酸序列的hcdr1、含有giipfsgttnyaqkfqg(seq id no: 9)的氨基酸序列的hcdr2和含有dpilsfwsgyyyyygmdv (seq id no: 10)的氨基酸序列的hcdr3；以及

8、b) 含有rasqsisswla (seq id no: 11)的氨基酸序列的lcdr1、含有dasnlet(seq id no: 12)的氨基酸序列的lcdr2、含有qqsystppt (seq id no: 13)的氨基酸序列的lcdr3。

9、本文还提供了一种抗体，该抗体特异性结合人bcam并且与包含以下的抗体竞争结合人bcam：

10、a) 免疫球蛋白重链可变(vh)区，其包含氨基酸序列

11、qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftdyyvhwvrqapgqglewmgiinpfggsatyapkfqgrvtmtrdtststvymelsslrsedtavyycargiyghfdywgqgtlvtvss (seq id no: 14)，以及

12、免疫球蛋白轻链可变(vl)区，其包含氨基酸序列

13、divmtqspdslavslgeratinckssqsvlsasnnqnylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqyysspytfgqgtkleik (seq id no: 15)；或者

14、b) 免疫球蛋白重链可变(vh)区，其包含氨基酸序列

15、qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasggtfssyafswvrqapgqglewmggiipfsgttnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyycttdpilsfwsgyyyyygmdvwgqgttvtvss (seq id no: 16)，以及

16、免疫球蛋白轻链可变(vl)区，其包含氨基酸序列

17、diqmtqspsslsasvgdrvtitcrasqsisswlawyqqkpgkapklliydasnletgvpsrfsgsgsgtdftltisslqpedfatyycqqsystpptfgqgtrleik (seq id no: 17)。

18、本文还提供了一种特异性结合人bcam的抗体，该抗体包含：

19、a) 含有syymh (seq id no: 18)的氨基酸序列的hcdr1、含有wmnpnsgdsgyaqkfqg(seq id no: 19)的氨基酸序列的hcdr2、含有tyssswifdy (seq id no: 20)的氨基酸序列的hcdr3；以及

20、b) 含有kssqsvlyssnnknyla (seq id no: 21)的氨基酸序列的lcdr1、含有wastres (seq id no: 22)的氨基酸序列的lcdr2、含有qqyysipit (seq id no: 23)的氨基酸序列的lcdr3。

21、本文还提供了一种抗体，该抗体特异性结合人bcam并且与包含以下的抗体竞争结合人bcam：

22、a) 含有氨基酸序列qvqlvqsgaevkkpgasvkvsckasgytftsyymhwvrqapgqglewmgwmnpnsgdsgyaqkfqgrvtmtrdtststvymelsslrsedtavyycastyssswifdywgqgtlvtvss (seq idno: 24)的免疫球蛋白重链可变(vh)区，以及

23、b) 含有氨基酸序列divmtqspdslavslgeratinckssqsvlyssnnknylawyqqkpgqppklliywastresgvpdrfsgsgsgtdftltisslqaedvavyycqqyysipitfgqgtrleik (seq id no:25)的免疫球蛋白轻链可变(vl)区。

24、此外，本文提供了一种抗体药物缀合物(adc)，其包含用于杀死经由连接部件与特异性结合人bcam的抗体缀合的肿瘤细胞的部件，其中抗体包含可变区和恒定区，其中可变区包含框架区和用于结合人bcam的互补决定部件。adc可以包含：

25、a) 抗bcam抗体；

26、b) 抗肿瘤药物；以及

27、c) 将抗bcam抗体与抗肿瘤药物连接的接头。

28、还提供了一种双表位抗体，该双表位抗体包含至少一种如任一段落所述的抗体或adc。

29、本文还提供了一种双特异性t细胞衔接器(bite)，其包含用于结合人bcam的抗体部件、用于结合cd3的抗体部件以及将用于结合人bcam的抗体部件连接到用于结合cd3的抗体部件的连接部件。bite可以包含：

30、a) 抗bcam抗体；

31、b) 抗cd3抗体；

32、c) 将抗bcam抗体与抗cd3抗体连接的接头；以及任选地

33、d) 用于延长半衰期的部件(例如，fc区)。

34、还提供了一种药物组合物，该药物组合物包含如本文所描述的抗体、adc或bite，以及一种或多种药学上可接受的赋形剂。

35、还提供了治疗有需要的受试者的癌症的方法，该方法包括向受试者施用治疗有效量的本文所描述的抗体、adc或bite。

36、定义

37、

一个(a)或一种(an)：冠词“一个(a)”和“一种(an)”指代该冠词的一个或多于一个(即，至少一个)语法对象。举例来说，“一个要素”意指一个要素或多于一个要素。

38、

亲和力：术语“亲和力”是指结合部件(例如，抗原结合区，例如包含轻链可变区和重链可变区的可变结构域，和/或fc受体结合部件，例如fc区)与靶标(例如，抗原诸如bcam，或fc受体(fcr)诸如新生儿fcr (fcrn))之间的结合相互作用的特征，并且指示结合相互作用的强度。亲和力的量度可以表示为解离常数(kd)。结合部件可以对靶标具有高亲和力(例如，纳摩尔或皮摩尔范围内的kd)。结合部件可以在第一ph (例如，ph 7-7.4)下对靶标具有高亲和力，并且在第二ph (例如，ph 4.5-5)下对靶标具有较低亲和力(例如，为前者的1/10或1/100) (例如，高于约100 nm、高于约1 µm、高于约10 µm或高于约100 µm)。

39、

大约或约：应用于一个或多个感兴趣的值的术语“大约”或“约”是指与所述参考值相似的值。除非另有说明或从上下文中显而易见，否则术语“大约”或“约”可以指落入所述参考值的上下10%、9%、8%、7%、6%、5%、4%、3%、2%、1%内(例如，±5%或±1%)的一系列值。

40、

抗体：术语“抗体”是指包含六个互补决定区(cdr)的抗原结合多肽。术语“抗体”所包含的示例性抗原结合多肽包括但不限于iga抗体、igg抗体、ige抗体、igm抗体、双特异性或多特异性抗体(包括双特异性t细胞接合剂(bite)和双表位抗体)、fab片段、fab’片段、f(ab’)2片段、fd’片段、fd片段和单链可变片段(scfv)。抗体通常包含至少重(h)链可变区(在本文中缩写为vh)和至少轻(l)链可变区(在本文中缩写为vl)。抗体可以包含两个重(h)链可变区和两个轻(l)链可变区。术语“抗体”涵盖抗体的抗原结合片段(例如，fab、f(ab’)2、fd和fv片段)、单链抗体(例如，单链fv)以及全长抗体，例如iga、igg、ige、igd、igm类型的完整免疫球蛋白(及其亚型)。全长抗体通常包含恒定区。全长抗体可以是igg，例如igg1、igg3或igg4。免疫球蛋白的轻链可以是κ型或λ型。“抗体”可以是包含通过二硫键相互连接的两条重链(hc)和两条轻链(lc)的免疫球蛋白分子，其中每个lc和hc的氨基末端部分包含约100-120个氨基酸的可变区，其主要负责经由其中包含的cdr进行抗原识别。cdr中散布着一些区域，所述区域是熟知的并且通常在物种(例如，小鼠和人)之内和之间是保守的，它们被称为框架区(fr)。

41、

结合部件：“结合部件”是能够特异性结合靶标(例如，感兴趣的靶标(例如，抗原如bcam))的任何分子或分子的一部分(例如，抗体或抗体的抗原结合区或片段)。

42、

抗原结合片段或抗原结合区是指完整抗体的与抗原(例如，bcam)结合的一部分。抗原结合片段可以含有完整抗体的抗原决定可变区。抗体片段的实例包括但不限于fab、fab'、f(ab')2和fv片段。抗原结合片段或区还包含单链抗体，诸如单链fv (scfv)。

43、

用于结合的抗体部件：术语“

用于结合的抗体部件”描述了特异性结合感兴趣的靶标(例如，抗原如bcam)的抗体。例如，用于结合人基底细胞粘附分子(bcam)的抗体部件是特异性结合人bcam的抗体。抗bcam抗体在本文中有所描述并且包括表1中的抗体，具体地mab452、477和929。等效抗体在其氨基酸序列上不同，但通过cdr-靶标相互作用执行特异性结合bcam的相同功能，并且实现单独或作为adc或bite抑制肿瘤生长的相当结果。等效cdr还可以与所公开的抗体共享至少85%的序列同一性并且/或者竞争人bcam的结合，如通过使用荧光激活细胞分选(facs，参见例如实施例4)的基于细胞的测定所确定。

44、

用于结合的互补决定部件：术语“

用于结合的互补决定部件”描述了构成抗体的抗原(bcam)结合位点的互补决定区(cdr)。具体cdr可见于表1中。等效cdr在其氨基酸序列上不同，但通过cdr-靶标相互作用执行特异性结合bcam的相同功能，并且实现单独或作为adc或bite抑制肿瘤生长的相当结果。等效cdr还可以与本发明的抗bcam抗体共享至少85%的序列同一性并且/或者竞争人bcam的结合，如通过使用荧光激活细胞分选(facs，参见例如实施例4)的基于细胞的测定所确定。

45、

互补决定区(cdr)：“互补决定区”或“cdr”是可变区内的氨基酸残基，其在本文中根据kabat等人的定义所鉴定(参见例如kabat等人，1992, sequences of proteins ofimmunological interest，第5版，public health service, nih, washington d.c)。其他cdr边界定义可能不严格遵循kabat的方法，但仍然会与kabat cdr的至少一部分重叠。例如，根据特定残基或残基组不显著影响抗原结合的预测或实验发现，它们可以缩短或延长。

46、

恒定区：术语“恒定区”是指对应于或来源于抗体的一个或多个恒定区免疫球蛋白结构域的多肽。恒定区可以包含以下免疫球蛋白结构域：ch1结构域、铰链区、ch2结构域、ch3结构域(来源于iga、igd、igg、ige或igm)和ch4结构域(来源于ige或igm)。通常，恒定区包含ch1结构域、铰链区、ch2结构域、ch3结构域(来源于例如igg1或igg4)。

47、

表位：“表位”是本领域已知的术语，并且是指抗原的抗体可以特异性结合的局部区域。表位可以是例如多肽的连续氨基酸(线性或连续表位)，或者表位可以例如由一个或多个多肽的两个或更多个非连续区域或残基聚集在一起(构象、非线性、不连续或非连续表位)。

48、

fc区：术语“fc区”是指两个“fc多肽”的二聚体，每个“fc多肽”包含抗体的恒定区，不包括第一恒定区免疫球蛋白结构域。“fc区”可以包含通过一个或多个二硫键、化学接头或肽接头连接的两个fc多肽。“fc多肽”是指iga、igd和igg的最后两个恒定区免疫球蛋白结构域，以及ige和igm的最后三个恒定区免疫球蛋白结构域，并且还可以包含这些结构域的n末端的柔性铰链的部分或全部。对于igg，“fc多肽”包含免疫球蛋白结构域cgamma2 (cγ2)和cgamma3 (cγ3)以及cgamma1 (cγ1)与cγ2之间的铰链的下部。尽管fc多肽的边界可以变化，但人igg重链fc多肽通常被定义为包含从t223或c226或p230开始到其羧基末端的残基，其中编号是根据kabat等人(1991, nih publication 91-3242, national technicalinformation services, springfield, va)中的eu索引。对于iga，fc多肽包含免疫球蛋白结构域calpha2 (cα2)和calpha3 (cα3)以及calpha1 (cα1)与cα2之间的铰链的下部。

49、

k

a：“ka”是指特定结合部件和靶标形成结合部件/靶标复合物的缔合速率。

50、

k

d：“kd”是指特定结合部件/靶标复合物的解离速率。

51、

k

d：“kd”是指解离常数，其由kd与ka的比率(即，kd/ka)获得，并且以摩尔浓度(m)表示。kd值可以使用本领域中完善建立的方法来确定，例如通过使用表面等离子体共振，例如使用biacore®系统或基于细胞的方法(使用表达人bcam的细胞和流式细胞术，如例如实施例1中所描述)。kd值也可以使用浸入读取生物传感器诸如sartorius octet rh16或octetn1 (如例如实施例5中所描述)通过生物层干涉法来确定。

52、

杀伤部件或用于杀伤肿瘤细胞的部件：术语“

杀伤部件”或“

用于杀伤肿瘤细胞的

部件”是指可用于杀伤细胞并且尤其是肿瘤细胞的任何化合物。这包括例如细胞毒性药物以及如本文所描述的放射性核素。术语“用于杀伤肿瘤细胞的部件”可以与术语“抗肿瘤药物”或“抗癌药物”互换使用。抗肿瘤药物和抗癌药物包括众所周知的细胞毒性剂类别，诸如微管蛋白抑制剂或dna损伤剂，包括例如dna烷化剂、拓扑异构酶抑制剂和dna交联剂。

53、

用于延长半衰期的部件：术语“

用于延长半衰期的部件”是指抗体的延长在人血清中的半衰期的众所周知的结构修饰。这些包括聚乙二醇化以及与人血清白蛋白(hsa)或人血清白蛋白结合部件(例如，抗hsa抗体)的融合。在一些情况下，该术语可以指fc区，例如包含众所周知的结构修饰(诸如延长抗体的血清半衰期的氨基酸取代)的fc区。此类氨基酸取代包括例如m252y/s254t/t256e (yte突变体)、l309d/q311h/n434s (dhs突变体)、v259i/v308f/m428l (ifl突变体)、h433k/n434f (kf突变体)和m428l/n434s (ls突变体)，其相对于例如天然igg1 fc区表现出改善的血清半衰期。

54、

连接部件或接头：术语“连接部件”或“接头”是指将抗体连接到药物缀合物或双特异性t细胞衔接器(bite)中的两个结合结构域的众所周知的结构。本文描述了示例性连接部件或接头(包括可切割接头)。

55、

特异性结合：对于结合部件和靶标，“特异性结合”或“特异性地结合”是指结合部件与靶标而不是与并非靶标的实体的优先缔合。在结合部件与非靶标之间可能发生一定程度的非特异性结合。如果与结合部件和非靶标的结合相比，结合部件与靶标之间的结合大于2倍、大于5倍、大于10倍或大于100倍，则结合部件可以特异性结合靶标。与人bcam的特异性结合可以如实施例1中所描述来确定。

56、

单链可变片段(scfv)：术语“单链可变片段”或“scfv”是指免疫球蛋白(例如，小鼠或人免疫球蛋白)的重链(vh)和轻链(vl)的可变区共价连接以形成vh::vl异二聚体的融合蛋白。重链(vh)和轻链(vl)直接连接或通过基于肽的接头(例如，10、15、20、25个氨基酸)连接，该接头将vh的n末端与vl的c末端连接或将vh的c末端与vl的n末端连接。接头通常富含用于实现柔性的甘氨酸，以及用于实现溶解性的丝氨酸或苏氨酸。接头可以连接抗体或其抗原结合片段的重链可变区和轻链可变区。接头的非限制性实例公开于shen等人，anal.chem. 80(6):1910-1917 (2008)和wo 2014/087010中。示例性的基于肽的接头包括gggg(seq id no: 26)和ggggs (seq id no: 27)。

57、

受试者：术语“受试者”意指需要治疗的任何受试者。通常，受试者是人类受试者。

58、

治疗有效量：术语“治疗有效量”是指治疗分子(例如，本文所描述的抗bcam抗体)的量，其以适用于任何医学治疗的合理益处/风险比为治疗受试者赋予治疗效果。治疗效果可以是客观的(即，能够通过一些测试或标志物测量)或主观的(即，受试者给出效果的指示或感觉到效果)。具体地，“治疗有效量”是指有效治疗、改善或预防特定疾病或病症或者表现出可检测的治疗或预防效果的治疗分子或组合物的量，诸如通过改善与疾病相关的症状，预防或延迟疾病的发作，和/或还减轻疾病症状的严重程度或频率。

59、

治疗：术语“治疗(treatment)”(也称为“治疗(treat)”或“治疗(treating)”)是指治疗分子(例如，本文所描述的抗bcam抗体)的任何施用，其部分或完全减轻、改善、缓解、抑制特定疾病、病症和/或病状的一种或多种症状或特征，延迟其发作，降轻其严重程度和/或降低其发病率。这种治疗可以针对(尚未)表现出相关疾病、病症和/或病状的体征的受试者和/或仅表现出疾病、病症和/或病状的早期体征的受试者。更常见地，这种治疗可以针对表现出相关疾病、病症和/或病状(例如，癌症)的一种或多种确定体征的受试者。