一种具有协同抗氧化作用的组合物及其应用

本发明涉及医药和保健，具体涉及一种具有协同抗氧化作用的组合物及其应用。

背景技术：

1、阿尔茨海默症（alzheimer's disease，ad）是一种中枢神经系统退行性疾病，其临床表现为进行性记忆功能障碍、认知能力下降、语言障碍及行为异常等，最终导致患者完全丧失生活自理能力。ad的病理机制复杂，涉及衰老、慢性神经炎症、氧化应激损伤、β-淀粉样蛋白（aβ）沉积以及tau蛋白过度磷酸化等多个核心环节的恶性循环。

2、目前，临床治疗ad的药物以传统药物如胆碱酯酶抑制剂和nmda受体拮抗剂等为主，这些药物在一定程度上改善了ad患者的认知功能。然而，这些药物疗效持续时间短，对重度ad患者无明显效果，且长期服用存在多种不良反应，如恶心、呕吐、心率减慢、嗜睡、意识模糊和幻觉等。

3、近年来，随着生物医药的发展，旨在清除大脑中沉积的aβ的新型抗aβ单克隆抗体已用于临床治疗ad，但仍存在患者依从性差、引发脑水肿和治疗费用高昂等缺陷。

4、此外，以上药物仅能改善ad患者的症状，无法从根本上预防或阻断ad的发病进程。因此，加速对ad防治药物的开发，仍是亟需解决的公共卫生问题。

5、麦角硫因是一种天然存在的、具有强大抗氧化活性的含硫氨基酸，主要存在于食用菌中，可作为膳食补充剂使用。大量临床前研究证实麦角硫因具有抗氧化、抗炎、保护线粒体、保护神经系统和抗衰老等功能，具有开发为防治ad药物的潜在价值。然而，麦角硫因在体内代谢缓慢且代谢产物硫化氢具有潜在毒性导致其难以大量和长期服用，尤其是对代谢能力减弱的老年人（petrovic d,

et al. ergothioneine improves healthspan ofaged animals by enhancing cgpdh activity through cse-dependentpersulfidation.

cell metab, 2025, 37(2): 542-556.）。因此，如何在保持或增强其抗ad功效的同时，通过合理配伍来降低麦角硫因的用量、减轻其潜在风险，成为推动其临床转化的关键突破口。

6、灵芝作为传统药食同源的大型真菌，不仅自身富含麦角硫因，还含有灵芝多糖、灵芝三萜等已被证实具有抗炎、抗氧化、改善记忆和神经保护作用的活性成分（赵艳敏等. 高效液相色谱法测定多种真菌中麦角硫因含量. 食品研究与开发, 2016, 37(2): 117-119.; liu x,

et al. polysaccharides from ganoderma lucidum attenuate cognitiveimpairment in 5xfad mice by inhibiting oxidative stress and modulatingmitochondrial dynamics via the nrf2/antioxidative axis activation.

metab brain

dis, 2025, 40(4): 180.）。

7、三叶青的根、茎和叶均可作为药用部位，是传统药用植物，富含黄酮类、多酚类和原花青素等核心成分，具有抗氧化、抗神经炎症、抗衰老和神经保护功效（ji w,

et al.tetrastigma hemsleyanum suppresses neuroinflammation in febrile seizures ratsvia regulating pkc-δ/caspase-1 signaling pathway.

j ethnopharmacol. 2024, 318:116912.; chu q,

et al. tetrastigma hemsleyanum vine flavone amelioratesglutamic acid-induced neurotoxicity via mapk pathways.

oxid med cell longev.2020: 7509612.）。

8、虽然现有研究显示麦角硫因、灵芝、三叶青具有神经保护功效，但缺乏直接、系统的研究证据支持其用于防治ad，且目前尚未见将麦角硫因、灵芝及三叶青进行配伍用于防治ad的研究报道。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种能够改善阿尔茨海默症或衰老引起的记忆能力减退的活性物质组合物，将其应用于开发预防或治疗阿尔茨海默症或改善记忆的相关产品。

2、为实现上述目的，本发明采用如下技术方案：

3、本发明提供了一种具有协同抗氧化作用的组合物，所述组合物由灵芝提取物、三叶青提取物和麦角硫因组成，其中灵芝提取物与三叶青提取物的质量比为0.1~9：1，麦角硫因在组合物中的质量占比为0.9~10%；

4、所述灵芝提取物的制备方法包括：将灵芝粉末与体积百分比85~95%的乙醇溶液混合，压力为300~400 mpa条件下提取5~10 min，提取液浓缩后干燥制得；

5、所述三叶青提取物的制备方法包括：将三叶青粉末与体积百分比50~70%的乙醇溶液混合，回流提取1-4 h，提取液进行聚酰胺树脂层析，目标馏分浓缩后干燥制得。

6、本发明研究发现，上述组合物能够通过“抗氧化-抗衰老-抗炎”多维度作用显著加强学习和记忆能力，改善阿尔茨海默症的症状。

7、本发明中，以灵芝子实体为原料，体积分数为85~95%的乙醇水溶液作为提取溶剂，在超高压条件下提取活性物质。具体的，将灵芝粉碎后，与乙醇溶液按照1 g：20~30 ml的比例混合，在300~400 mpa的超高压条件下提取5~10 min，然后过滤，收集滤液减压浓缩后冷冻干燥，制得灵芝提取物。

8、本发明通过优化提取条件，进一步提升提取产物的抗氧化、抗神经炎症活性。作为优选，所述灵芝提取物的制备方法包括：将灵芝粉末与体积百分比90%的乙醇溶液按照1g：25~30 ml的比例混合，压力为300~360 mpa条件下提取5~10 min，提取液浓缩后干燥制得。

9、更为优选，所述灵芝提取物的制备方法包括：将灵芝粉末与体积百分比90%的乙醇溶液按照1g：25 ml的比例混合，压力为300 mpa条件下提取8 min，收集提取液，减压浓缩后冷冻干燥，制得灵芝提取物。

10、本发明研究表明，在双氧水诱导的氧化应激细胞模型中，所述灵芝提取物干预后可显著降低细胞中的活性氧水平；在脂多糖诱导的炎症细胞模型中，所述灵芝提取物干预后可显著降低细胞中

tnf-α mrna的表达水平。

11、本发明中，以三叶青全草为原料，体积分数为50~70%的乙醇水溶液为提取溶剂，回流提取其中的活性物质。具体的，将三叶青全草粉碎后，与乙醇水溶液按照1 g：5~15 ml的比例混合，回流提取1~4 h，然后过滤，收集滤液进行聚酰胺树脂层析，通过氢键吸附原理分离黄酮类成分；收集洗脱馏分，减压浓缩后冷冻干燥，制得三叶青提取物。

12、本发明通过优化提取条件，进一步提升提取产物的抗氧化、抗神经炎症活性。作为优选，将三叶青粉末与体积百分比60%的乙醇溶液按照1 g：10~15 ml的比例混合，回流提取时间为2-4 h。

13、更为优选，三叶青粉末与体积百分比60%的乙醇溶液按照1 g：10 ml的比例混合，回流提取2 h。

14、作为优选，所述聚酰胺树脂层析的条件包括：水洗杂后采用体积百分比80%的甲醇溶液洗脱。

15、进一步优选：所述层析的条件包括：水以每小时2倍柱体积的流速洗脱杂质0.5~1h；甲醇溶液以每小时2倍柱体积的流速洗脱1~2 h。

16、更为优选，所述层析的条件为：水以每小时2倍柱体积的流速洗杂1 h；甲醇溶液以每小时2倍柱体积的流速洗脱1.5 h。

17、本发明研究表明，在双氧水诱导的氧化应激细胞模型中，上述三叶青提取物干预后可显著降低细胞中的活性氧水平；在脂多糖诱导的炎症细胞模型中，上述三叶青提取物干预后可显著降低细胞中

tnf-α mrna的表达水平。

18、本发明研究表明，在d-半乳糖诱导的衰老模型中，利用上述灵芝提取物与三叶青提取物按照质量份数比10：90~90：10进行混合的组合物干预后，可显著降低细胞的衰老水平。

19、本发明将上述灵芝提取物、三叶青提取物与麦角硫因复配，其中灵芝自身富含麦角硫因，本发明将同源的灵芝提取物与麦角硫因配伍，实现“一源多效”的初步增效；本发明通过比例优化，降低麦角硫因用量减轻其潜在风险的基础上，协同增效抗氧化活性。

20、作为优选，所述组合物中灵芝提取物与三叶青提取物的质量比为0.5~1.5：1。麦角硫因与两种提取物总和的质量比为1~10：100。

21、进一步优选，所述组合物中灵芝提取物、三叶青提取物和麦角硫因的质量比为40：60：1~10。

22、本发明研究表明，上述三种活性成分组成的组合物的抗氧化活性优于灵芝提取物与三叶青提取物组成的组合物。

23、更为优选，所述组合物中灵芝提取物、三叶青提取物和麦角硫因的质量比为40：60：6。研究表明，该配比条件下的组合物的抗氧化作用存在协同增效。

24、本发明在东莨菪碱诱导的记忆障碍模型、衰老引起的记忆能力减退模型中验证了所述组合物改善记忆能力、显著减轻脑中aβ1和p-tau蛋白积累的功效，因此，本发明提供的组合物可作为制备改善记忆相关产品的功能性原料，所述产品可以为但不限于药品、食品。

25、本发明的另一个目的是提供所述的组合物在制备治疗记忆障碍的药物或辅助改善记忆的保健食品中的应用。所述记忆障碍的表现包括：生理性或病理性引起的记忆能力减退。

26、本发明还提供了所述的组合物在预防或治疗阿尔茨海默症的药物中的应用。所述阿尔茨海默症的表现包括：记忆能力减退、脑组织中aβ1和p-tau蛋白积累。

27、本发明研究表明，在阿尔茨海默症模型中，给予所述组合物处理后可以显著改善记忆能力减退，显著减轻脑中aβ1和p-tau蛋白积累，发挥治疗阿尔茨海默症的作用。在健康小鼠模型中，所述组合物干预后可以延缓衰老引起的记忆能力减退，起到预防发生阿尔茨海默症的作用。所述组合物能够通过减轻氧化损伤、延缓衰老和减轻神经炎症发挥对阿尔茨海默症的防治作用。

28、本发明还提供了所述的组合物在制备有助于抗氧化的保健食品中的应用。本发明提供的组合物的抗氧化作用存在协同增效，且原料易得、生物安全性好。

29、本发明中，所述药物的组成包括有效剂量的所述的组合物和药学上可接受的载体。所述药学上可接受的载体为能够递送本发明有效剂量活性物质，不干扰活性物质的生物活性并且对宿主或受试者无毒副作用的任何制剂或载体介质。具体的，所述药学上可接受的载体包括：填充剂、润湿剂、崩解剂、粘合剂或润滑剂中的一种或多种。

30、本发明中，所述药物的制剂形式可以为口服制剂。具体制剂形式可以为但不局限于贴剂、粉剂、丸剂、颗粒剂、片剂、胶囊剂、口服液。

31、本发明中，所述保健食品的组成包括作为活性成分的所述的组合物和食品学上可接受的辅料。所述食品学上可接受的辅料为能够递送本发明有效剂量活性物质，不干扰活性物质的生物活性的食品级辅料。

32、本发明中，所述保健食品的剂型可以为但不限于片剂、胶囊、口服液、颗粒剂、饮料、粉剂。

33、本发明具备的有益效果：

34、（1）本发明提供了一种由麦角硫因、灵芝提取物与三叶青提取物复配的组合物，通过细胞实验证明了该组合物具有抗氧化、抗神经炎症、抗衰老的作用；通过动物实验证明了该组合物能够显著改善记忆能力减退、显著减轻脑中aβ1和p-tau蛋白积累，从而改善记忆能力，可作为制备改善记忆尤其是治疗和预防阿尔茨海默症产品的功能性原料，具有很好的开发与应用价值。

35、（2）本发明提供的组合物的核心优势在于构建了一个多成分、多靶点、多通路的协同治疗网络，通过“抗氧化-抗衰老-抗炎”多维度作用干预阿尔茨海默病的多个核心病理环节，符合中医药“治未病”、“整体观”和“标本兼治”的用药特色。采用的原料麦角硫因、灵芝和三叶青具有原料易得、成本低、安全性高等优点，适用于工业化生产。