一种预防和缓解脂肪性肝纤维化的组合物及其制备与应用的制作方法

本发明属于医药，具体涉及一种预防和缓解脂肪性肝纤维化的组合物及其制备与应用。

背景技术：

1、肝纤维化是由一种或多种因素引起的慢性肝损伤适应性反应，以肝星状细胞活化和细胞外基质过度沉积导致纤维瘢痕形成为主要特征。目前，关于肝纤维化的发病机制尚未研究透彻，因为肝纤维化是多种慢性肝病共同的病理基础，伴随慢性肝炎、肝硬化甚至肝癌的全过程。此外，临床上仍缺乏有效延缓肝纤维化进展的获批药物，现有治疗策略主要集中于病因控制（如生活方式干预、代谢综合征管理）及肝移植两大方面。其中，病因控制对已形成的纤维化组织疗效有限，而肝移植则因为器官缺乏以及免疫排斥等原因，实际应用也受到很大的限制。因此，加强对肝纤维化发病机制和防治措施的研究刻不容缓，亟须开发作用机制新颖、疗效确切且安全性可控的肝纤维化缓解药物。

2、肝纤维化的发生受到众多危险因素的影响，目前普遍认为肝星状细胞（hscs）的活化是肝纤维化形成过程的中心环节。在正常肝脏中，肝星状细胞以静止状态存在，增殖活性低；而当肝脏受到损伤时，与肝星状细胞邻近的细胞（如kupffer细胞）会释放多种细胞因子，使肝星状细胞被激活并分化为肌成纤维细胞；被激活的肝星状细胞还会通过自分泌或旁分泌机制释放更多炎症因子，进一步加剧炎症反应，并分泌大量的细胞外基质沉积在肝脏中，最终导致肝纤维化。近些年，有研究在运用天然植物化学物干预肝纤维化的实践中发现，植物化学物具有多种生物学活性，可以多维度、多靶点减弱甚至消除致纤维化因子，从而逆转肝纤维化进程；且相较于目前临床应用的肝移植治疗手段，膳食来源的植物活性物质具有安全高、多靶点干预的优势。

3、化橘红（药材拉丁名：citri grandis exocarpium）为芸香科柑橘属植物化州柚（citrus maxima 'tomentosa'）或柚（citrus maxima (burm.) merr.）未成熟、近成熟果实的干燥外层果皮，既是岭南特色道地传统中药材，亦是常用药食同源原料。作为一种传统中药材，其主要活性成分为黄酮类化合物，包含柚皮苷、野漆树苷、芹菜素等，具有显著的抗炎、抗氧化、调节脂质代谢等药理作用。水飞蓟（学名：silybum marianum）为菊科水飞蓟属植物的干燥种子，其活性成分为水飞蓟素，这是一种黄酮木脂素类混合物，包括水飞蓟宾、异水飞蓟宾、水飞蓟亭等，具有抗氧化、抗肝纤维化的作用。朝鲜蓟（学名：cynaracardunculus var. scolymus，别名洋蓟、菜蓟）为菊科菜蓟属植物，药用部位为花蕾与叶片；富含洋蓟素、绿原酸等多酚类物质及木犀草苷等黄酮类成分，具备促进胆汁分泌、抗氧化、调节血脂的作用。在天然植物化学物相关研究中，化橘红、水飞蓟与朝鲜蓟虽来源科属各异、作用机制存在一定差异，但均表现出可观的肝脏保护潜力，可通过调控氧化应激、炎症反应及肝星状细胞活性等多条途径发挥保肝作用。

4、然而，现有研究尚未充分阐明化橘红、水飞蓟和朝鲜蓟三者联用直接抑制肝星状细胞（hscs）活化、减少细胞外基质（ecm）沉积，进而针对性干预、改善肝纤维化进程的药效，同时相关药效物质基础与分子作用机制仍缺乏系统性研究。因此，开发源于这三种天然植物的有效部位或提取物，并明确其在抗肝纤维化中的新用途，具有重要的临床价值和市场前景。通过对三者防治肝纤维化的机制进行深入研究，不仅能够揭示其作用的物质基础与分子机制，还能为其他慢性纤维化性疾病的治疗提供参考。此外，化橘红、朝鲜蓟、水飞蓟均为天然药食原料，安全性与机体耐受性良好，可为天然植物化学提取物用于肝纤维化防治的临床转化提供支撑，助力天然药物现代化研发。

技术实现思路

1、为了克服上述现有技术的不足，本发明提供了一种含有化橘红、朝鲜蓟、水飞蓟三种天然植物化学物的组合物，该组合物可用于预防或缓解肝纤维化，由此解决现有抗肝纤维化药物疗效不确切、副作用大、成本高、缺乏多靶点调控能力的缺陷。

2、为了实现上述目的，本发明所采用的技术方案是：

3、本发明提供了一种天然植物化学物组合物在制备预防或缓解脂肪性肝纤维化的药物中的应用，所述天然植物化学物组合物包括化橘红、朝鲜蓟和水飞蓟。

4、优选地，所述天然植物化学物组合物包括化橘红提取物、朝鲜蓟提取物和水飞蓟提取物。

5、本发明的天然植物化学物组合物中，水飞蓟素主要抑制肝星状细胞活化；化橘红黄酮（柚皮苷等）可高效清除自由基，调控基质金属蛋白酶平衡；朝鲜蓟多酚（洋蓟酸、绿原酸）侧重促进胆汁排泄，改善肝脏脂质代谢微环境。相较于单靶点化学药物或单一植物提取物，本发明搭建了可同时作用于肝纤维化多条病理通路的调控网络。该组合物能够同步干预氧化应激、炎症反应、肝星状细胞活化、细胞外基质异常沉积与降解等多个核心病理节点。依托此种多靶点协同作用机制，可从根源规避单一通路抑制易诱发的代偿性逃逸现象，有效实现肝纤维化高效逆转，适用于多种病因诱发的肝脏病变。

6、更优选地，按质量百分比计，所述天然植物化学物组合物包括70%-90%化橘红提取物、2%-8%朝鲜蓟提取物和8%-22%水飞蓟提取物。

7、优选地，所述化橘红提取物的制备方法为：将化州柚未成熟外层果皮粉碎制成粗粉后，加入50-70vol%乙醇，在加热至微微沸腾条件下进行回流提取，之后过滤收集滤液获得化橘红提取液，所得提取液经浓缩和大孔树脂柱纯化后，再浓缩至膏体，最后经干燥，得到化橘红提取物。

8、更优选地，按体积比计，乙醇的加入量为化州柚果皮粗粉的7-10倍。

9、更优选地，所述回流提取的时间为1-3h；所述回流提取的次数为1-5次。

10、更优选地，所述大孔树脂柱纯化的操作方法为：将浓缩液以1-2 bv/h流速上样至径高比1:7-9的大孔树脂层析柱，上样体积1-2 bv；上样完成后先用2-4 bv纯化水进行淋洗，随后调节流速至1-2 bv/h，采用4-6 bv 40-60%vol%乙醇溶液洗脱，最后收集黄色洗脱液。

11、优选地，所述朝鲜蓟提取物的制备方法为：将朝鲜蓟干燥叶粉碎成粗粉后，加入30-50vol%乙醇进行加热保温搅拌提取，之后过滤收集滤液获得朝鲜蓟提取液，所得提取液经浓缩、静置后，收集上清液用于大孔树脂柱纯化，纯化后再浓缩至膏体，最后经干燥，得到朝鲜蓟提取物。

12、更优选地，按体积比计，乙醇的加入量为朝鲜蓟干燥叶粗粉的9-13倍。

13、更优选地，所述加热保温搅拌提取的温度为70-90℃，时间为1-3h。

14、更优选地，所述静置的温度为2-8℃，时间为10-15h。

15、更优选地，所述加热保温搅拌提取的次数为1-5次。

16、更优选地，所述大孔树脂柱纯化的操作方法为：将上清液以1-2 bv/h流速上样至径高比1:5-7的大孔树脂层析柱，上样体积1-3 bv；上样完成后依次通入3 bv纯化水、2 bv10vol%乙醇进行除杂处理，再以1.5 bv/h的流速通入5 bv 60vol%乙醇洗脱，收集洗脱液；将上清液以1-2bv/h的流速上样至径高比1:5-7的大孔树脂层析柱，上样体积为1-3 bv；上样完成后依次通入2-4bv纯化水、1-3 bv 8-15 vol%乙醇溶液进行除杂，再以1-2 bv/h流速通入4-6bv 50-70vol%乙醇溶液洗脱，收集洗脱液。

17、优选地，所述水飞蓟提取物的制备方法为：向水飞蓟果实中加入石油醚进行索氏提取脱脂，脱脂完成后分离滤渣；再于惰性气体保护下向所得滤渣中加入丙酮进行加热恒温搅拌提取，之后过滤收集滤液得到水飞蓟提取液；所得提取液经浓缩脱除丙酮至膏状后，再往所得膏状物中加入石油醚搅拌，并静置至沉淀析出，最后将沉淀抽滤成滤饼，并对滤饼进行干燥，即获得水飞蓟提取物。

18、更优选地，所述索氏提取脱脂的温度为60-90℃，时间为7-9h。

19、更优选地，按体积比计，丙酮的加入量为水飞蓟果实滤渣的7-10倍。

20、更优选地，所述加热恒温搅拌提取的温度为40-60℃，时间为1-3h。

21、更优选地，所述浓缩为旋蒸浓缩，温度为35-40℃。

22、更优选地，按体积比计，石油醚的加入量为膏状物的3-5倍。

23、更优选地，往所得膏状物中加入石油醚后，在30-60℃下搅拌20-40min，并静置2-4h。

24、更优选地，所述加热恒温搅拌提取的次数为1-5次。

25、优选地，所述药物还包含药学上可接受的辅料，所述辅料包括增溶剂、乳化剂、着色剂、黏合剂、崩解剂、润滑剂、润湿剂、渗透压调节剂、稳定剂、助流剂、矫味剂、防腐剂、包衣材料、ph值调节剂、吸收剂、或抗氧剂。各类辅料可根据药物的给药途径、剂型特性及临床应用需求合理配伍，分别起到提升药物溶解性与分散性、保障制剂成型稳定性、调节制剂渗透压与ph值、改善用药顺应性、延缓药物降解变质、促进药物吸收利用等作用。

26、更优选地，所述药物的剂型包括口服制剂、注射制剂、吸入制剂或透皮制剂。不同剂型可针对性适配不同的临床给药场景，满足不同患者群体的用药需求。

27、与现有技术相比，本发明的有益效果是：

28、首先，在抗纤维化疗效这一核心质量指标上，相对于单用水飞蓟素或化橘红或朝鲜蓟中的任何单一组分，化橘红、朝鲜蓟、水飞蓟这三种天然植物化学物的组合物表现出明显的协同增效作用。其中，水飞蓟素作为现有保守治疗中的较好选择，主要通过抗氧化、抑制肝星状细胞活化等单一通路延缓纤维化进程，但其水溶性差、生物利用度低，在单独应用时逆转已形成的纤维化较为困难。而通过将其与化橘红所含的黄酮类成分（如柚皮苷）及朝鲜蓟富含的洋蓟酸、绿原酸等活性物质进行合理配伍，可以从多个节点同时干预肝纤维化病理链条：一方面增强了对活性氧的清除能力，减轻肝细胞脂质过氧化损伤；另一方面协同抑制转化生长因子-β（tgf-β）/smad 等关键促纤维化信号通路，同时促进细胞外基质降解。

29、其次，与肝移植和部分化学合成的抗纤维化药物相比，天然植物化学物组合物在安全性和患者耐受性方面具有突出优势。肝移植虽是终末期肝病的根本治疗手段，但存在供体短缺、手术创伤大、费用极其高昂且免疫排斥与并发症风险高等固有缺陷，难以作为早期和中期纤维化的普适性干预手段。现有的一些化学药物则可能伴随胃肠道反应、光敏性甚至肝酶升高。相比之下，本发明所采用的化橘红、朝鲜蓟和水飞蓟有长期食药用历史，组合后各组分用量经优化可低于单用时的有效剂量，毒副作用低，长期服用安全性良好。实验数据表明，该组合物在有效剂量下对正常肝细胞无明显细胞毒性。

30、此外，在加工、操作和使用便捷性以及资源节省方面，本发明同样具备明显的竞争优势。化橘红、朝鲜蓟和水飞蓟这三种原料均为种植广泛的植物，来源丰富，提取工艺成熟稳定，相比于肝移植的巨额花费和严格的供受体匹配要求，本药物组合成本低廉、易于推广，尤其适合在基层和肝病高发地区进行长期干预。同时，化橘红和朝鲜蓟的加入还能提高水飞蓟主要活性成分的生物利用度，从某种意义上相当于节省了高价提纯水飞蓟素的原料投入，以更少的资源消耗获得更优的治疗效果。

31、综上，本发明所构建的化橘红-朝鲜蓟-水飞蓟三元组合物，在协同增效提升抗纤维化质量、改善安全性与耐受性、扩大病因覆盖与整体调节效能、简化使用方式并降低社会经济成本等多个方面，均取得了实质性进步和预料不到的有益效果，为非终末期肝纤维化提供了一种高效、安全、简便且易推广的全新治疗策略。