用于纤维化和炎症的经修饰的免疫细胞的制作方法

背景技术：

1、纤维化是一种严重的健康问题，其特征在于过量的纤维结缔组织的形成，通常至少部分地由于修复性和/或反应性过程，例如响应于损伤。纤维化可发生在各种器官中，包括肺部、肝脏、心脏、肾脏、胰腺、皮肤和脑。当前可用于纤维化疾病、病症和病况的疗法功效有限。

2、炎性疾病是人类中发病率和死亡率的重要原因。许多副作用与当前用于炎症的治疗相关联，例如肾上腺抑制、骨骼弱化、肌肉萎缩、消化性溃疡、低钾血症和免疫系统抑制。

3、因此，存在用于开发经优化以减少和治疗纤维化和炎症的新治疗方式的需要。

技术实现思路

1、本公开涉及免疫细胞，其包括一种或多种外源性纤维裂解剂（fibrolyticagent）、一种或多种外源性抗炎剂、一种或多种外源性再生剂和/或一种或多种外源性胞葬剂（efferocytic agent），以及使用此类免疫细胞的方法。部分地，本公开涵盖如下认识：特异性修饰的免疫细胞的施用对于治疗纤维化和/或炎症的一种或多种症状是令人惊讶地有效的。

2、在一方面，本公开提供经修饰的免疫细胞，其包括编码以下的一种或多种核酸序列：（i）至少一种外源性纤维裂解剂，（ii）至少一种外源性抗炎剂，（iii）至少一种外源性再生剂，和/或（iv）至少一种外源性胞葬剂。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂是或者包括松弛素（relaxin）多肽、核心蛋白聚糖（decorin）多肽、显性负性tgf-β受体2（dntgfβr2）多肽、可溶性tgfβ受体和/或tgfβ开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括或者是细胞因子或细胞因子受体。在一些实施方式中，细胞因子包括或者是il-10、il-22和/或il-27。在一些实施方式中，细胞因子受体包括或者是il-17a开关受体。

3、在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-10。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-22。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-27。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-10。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-22。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-27。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括显性负性（dn）tgfβr2多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-10。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括dn tgfβr2多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-22。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括dn tgfβr2多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-27。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括dn tgfβr2多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-10。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-22。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-27。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-10。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-22。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-27。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括mmp13多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-10。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括mmp13多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-22。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括mmp13多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-27。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括mmp13多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体。

4、在一些实施方式中，至少一种外源性再生剂是或者包括成纤维细胞生长因子21（fibrotic growth factor 21，fgf21）、成纤维细胞生长因子19（fgf19）、血管内皮生长因子α（vegf-α）和/或肝细胞生长因子（hgf）。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括dn tgfβr2多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括dntgfβr2多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括dn tgfβr2多肽，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-10，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-10，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-10，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-10，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-22，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-22，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-22，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-22，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-27，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-27，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-27，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-27，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。

5、在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂是或者包括含t细胞免疫球蛋白和粘蛋白结构域4（tim4）多肽。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性纤维裂解剂包括核心蛋白聚糖多肽。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性纤维裂解剂包括dn tgfβr2多肽。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性纤维裂解剂包括可溶性tgfβ受体。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性纤维裂解剂包括tgfβ开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-22。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-27。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性抗炎剂包括il-17a开关受体。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf21。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性再生剂包括fgf19。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性再生剂包括vegf-α。在一些实施方式中，至少一种外源性胞葬剂包括tim4多肽，并且至少一种外源性再生剂包括hgf。

6、在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂、至少一种外源性抗炎剂、至少一种外源性再生剂和/或至少一种外源性胞葬剂系留（tether）于免疫细胞或从免疫细胞分泌。

7、在一些实施方式中，一种或多种核酸序列包括一种或多种肝脏特异性启动子或肝硬化特异性启动子。在一些实施方式中，一种或多种核酸序列包括cx3cr1启动子、胰岛素样生长因子1（igf1）或cd11b启动子。

8、在一些实施方式中，经修饰的免疫细胞包括巨噬细胞、单核细胞或树突状细胞。在一些实施方式中，巨噬细胞衍生自单核细胞或前体免疫细胞。在一些实施方式中，前体免疫细胞包括或者是造血干细胞、髓系祖细胞、成髓细胞、成单核细胞、前单核细胞、或其中间体。在一些实施方式中，巨噬细胞是g-mcsf衍生的巨噬细胞或m-csf衍生的巨噬细胞。

9、在一些实施方式中，本文描述的一种或多种核酸序列编码包括seq id no: 1-5或13-18中任一者的一种或多种氨基酸序列的一种或多种多肽。

10、在另一方面，本公开提供药物组合物，其包括本文描述的任何方面或实施方式的经修饰的免疫细胞。在一些实施方式中，药物组合物包括药学上可接受的载体。在一些实施方式中，药物组合物包括递送溶媒。在一些实施方式中，本文描述的递送溶媒是或者包括脂质纳米颗粒（例如mc3-脂质纳米颗粒）。

11、在另一方面，本公开提供核酸构建体，其包括编码以下的一种或多种核酸序列：本文描述的任何方面或实施方式的至少一种外源性纤维裂解剂、本文描述的任何方面或实施方式的至少一种外源性抗炎剂、和/或本文描述的任何方面或实施方式的至少一种外源性再生剂、和/或本文描述的任何方面或实施方式的至少一种胞葬剂。

12、在另一方面，本公开提供药物组合物，其包括本文描述的任何方面或实施方式的核酸构建体。在一些实施方式中，药物组合物包括药学上可接受的载体。

13、在另一方面，本公开提供治疗或预防受试者中的纤维化或炎症的方法，包括向受试者递送治疗有效量的本文描述的任何方面或实施方式的药物组合物。

14、在一些实施方式中，纤维化包括或者是肝脏、肺部、心脏、血管系统、肾脏、胰腺、皮肤、胃肠道、骨髓、造血组织、神经系统和/或眼部纤维化疾病、病症或病况。在一些实施方式中，肝脏纤维化疾病、病症或病况包括脂肪肝疾病、病症或病况。在一些实施方式中，脂肪肝疾病、病症或病况包括非酒精性脂肪肝病（nafl）或酒精性肝病。在一些实施方式中，nafl包括非酒精性脂肪肝病（nafld）或非酒精性脂肪性肝炎（nash）。在一些实施方式中，酒精性肝病包括酒精性脂肪肝病（afld）或酒精性脂肪性肝炎（ash）。在一些实施方式中，受试者患有肝硬化、肝损伤、肝癌、脂肪变性、肝衰竭风险增加、死亡风险增加和/或丙型肝炎感染（hcv）中的一种或多种。

15、在一些实施方式中，炎症包括或者是肝脏、胃肠道、肺部、皮肤、心血管系统、神经系统、肾脏、胰腺、关节、眼部和/或内分泌系统炎性疾病、病症或病况。

16、在一些实施方式中，本文描述的方法减少肝星状细胞的活化。在一些实施方式中，本文描述的方法改善肝脏再生和/或肝脏消退。在一些实施方式中，本文描述的方法平衡促纤维化和抗纤维化的巨噬细胞群体。

17、在另一方面，本公开提供修饰免疫细胞的方法，包括向免疫细胞递送核酸构建体，该核酸构建体包括编码以下的一种或多种核酸序列：本文描述的任何方面或实施方式的至少一种外源性抗纤维化剂、本文描述的任何方面或实施方式的至少一种外源性抗炎剂、本文描述的任何方面或实施方式的至少一种外源性再生剂和/或本文描述的任何方面或实施方式的至少一种外源性胞葬剂，从而形成经修饰的免疫细胞。

18、在一些实施方式中，递送包括用mrna、dna或化学修饰的mrna进行电穿孔或转染。在一些实施方式中，递送包括施用一种或多种脂质颗粒（例如脂质纳米颗粒或lnp）。在一些实施方式中，脂质颗粒包括阳离子脂质、peg-修饰的脂质、固醇、非阳离子脂质、或其组合。在一些实施方式中，阳离子脂质包括mc3。在一些实施方式中，递送包括施用一种或多种mc3-脂质纳米颗粒。在一些实施方式中，递送包括用腺相关病毒（aav）载体、腺病毒载体或逆转录病毒载体进行转导。在一些实施方式中，逆转录病毒载体包括慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。在一些实施方式中，递送包括用病毒载体（例如慢病毒载体）和至少一种vpx蛋白进行转导。在一些实施方式中，本文描述的免疫细胞在用病毒载体转染之前和/或同时，进行电穿孔或用至少一种vpx mrna转染中的一种或两种。在一些实施方式中，慢病毒载体用vpx蛋白包装。在一些实施方式中，腺病毒载体包括ad2载体或ad5载体。在一些实施方式中，ad5载体包括ad5f35腺病毒载体。

19、在另一方面，本公开提供产生经修饰的免疫细胞的方法，包括向受试者施用组合物，该组合物包括：（a）一种或多种核酸构建体，其包括编码以下的一种或多种核酸序列：（i）至少一种外源性纤维裂解剂、（ii）至少一种外源性抗炎剂、和/或（iii）至少一种外源性再生剂；以及（b）递送溶媒。在一些实施方式中，在施用组合物后，一种或多种核酸构建体在免疫细胞中翻译以产生经修饰的免疫细胞，其包括（i）所述至少一种外源性纤维裂解剂、（ii）所述至少一种外源性抗炎剂、和/或（iii）所述至少一种外源性再生剂。在一些实施方式中，经修饰的免疫细胞包括受试者中的巨噬细胞、单核细胞或树突状细胞。在一些实施方式中，递送溶媒是或者包括脂质纳米颗粒（例如mc3-脂质纳米颗粒）、脂质体、聚合物、腺相关病毒（aav）载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体、或其任何组合。

20、在另一方面，本公开提供经修饰的免疫细胞，其包括编码以下的一种或多种核酸序列：（i）至少一种外源性纤维裂解剂、和（ii）至少一种外源性胞葬剂。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种胞葬剂包括tim4多肽。在一些实施方式中，经修饰的免疫细胞包括巨噬细胞、单核细胞或树突状细胞。在一些实施方式中，巨噬细胞衍生自单核细胞或前体免疫细胞。在一些实施方式中，前体免疫细胞包括或者是造血干细胞、髓系祖细胞、成髓细胞、成单核细胞、前单核细胞、或其中间体。

21、在另一方面，本公开提供药物组合物，其包括本文描述的任何方面或实施方式的经修饰的免疫细胞。在一些实施方式中，巨噬细胞是g-mcsf衍生的巨噬细胞或m-csf衍生的巨噬细胞。

22、在另一方面，本公开提供修饰免疫细胞的方法，包括向免疫细胞递送核酸构建体，该核酸构建体包括编码以下的一种或多种核酸序列：（i）至少一种外源性纤维裂解剂、和（ii）至少一种外源性胞葬剂。在一些实施方式中，至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且至少一种胞葬剂包括tim4多肽。在一些实施方式中，免疫细胞包括巨噬细胞、单核细胞或树突状细胞。在一些实施方式中，巨噬细胞衍生自单核细胞或前体免疫细胞。在一些实施方式中，前体免疫细胞包括或者是造血干细胞、髓系祖细胞、成髓细胞、成单核细胞、前单核细胞、或其中间体。在一些实施方式中，递送包括用mrna、dna或化学修饰的mrna（例如包装在脂质体中）进行电穿孔或转染。在一些实施方式中，递送包括用腺相关病毒（aav）载体、腺病毒载体或逆转录病毒载体进行转导。在一些实施方式中，逆转录病毒载体包括慢病毒载体或γ逆转录病毒载体。在一些实施方式中，慢病毒载体用vpx蛋白包装。在一些实施方式中，vpx蛋白在核酸构建体之前、同时或之后递送至免疫细胞。在一些实施方式中，腺病毒载体包括ad2载体或ad5载体。在一些实施方式中，ad5载体包括ad5f35腺病毒载体。在一些实施方式中，递送包括递送溶媒。在一些实施方式中，本文描述的递送溶媒是或者包括脂质纳米颗粒（例如mc3-脂质纳米颗粒）。

23、在另一方面，本公开提供核酸构建体，其包括编码以下的一种或多种核酸序列：（i）至少一种外源性纤维裂解剂、和（ii）至少一种外源性胞葬剂。在一些实施方式中，编码至少一种外源性纤维裂解剂的核苷酸序列编码包括松弛素多肽的多肽，并且其中编码至少一种胞葬剂的核苷酸序列编码包括tim4多肽的多肽。在一些实施方式中，本文描述的核酸构建体进一步包括编码切割肽的核苷酸序列，其中切割肽包括猪捷申病毒-1（p2a）肽、thosea asigna病毒（t2a）肽、马鼻炎a病毒（e2a）肽、口蹄疫病毒（f2a）肽、和/或其变体中的一种或多种。

24、在另一方面，本公开提供产生经修饰的免疫细胞的方法，该方法包括向受试者施用组合物，该组合物包括：（a）一种或多种核酸构建体，其包括编码以下的一种或多种核酸序列：（i）至少一种外源性纤维裂解剂、和（ii）至少一种外源性胞葬剂；以及（b）递送溶媒。在一些实施方式中，在施用本文描述的组合物后，一种或多种核酸构建体在免疫细胞中翻译以产生经修饰的免疫细胞，其包括（i）至少一种外源性纤维裂解剂，和（ii）至少一种外源性胞葬剂。在一些实施方式中，经修饰的免疫细胞包括受试者中的巨噬细胞、单核细胞或树突状细胞。在一些实施方式中，所述至少一种外源性纤维裂解剂包括松弛素多肽，并且所述至少一种胞葬剂包括tim4多肽。在一些实施方式中，递送溶媒是或者包括脂质纳米颗粒（例如mc3-脂质纳米颗粒）、脂质体、聚合物、腺相关病毒（aav）载体、腺病毒载体、逆转录病毒载体、或其任何组合。