一种酶解工艺在制备具有提升免疫细胞活性的蜂王浆制剂中的应用的制作方法

本发明属于酶解，具体涉及一种酶解工艺在制备具有提升免疫细胞活性的蜂王浆制剂中的应用。

背景技术：

1、免疫力是人体抵御外界病原体入侵、维持机体内环境稳态的核心生理屏障，其功能强弱直接决定人体健康水平与抗病能力。随着现代社会生活节奏持续加快、工作压力显著增大，人群作息不规律、饮食结构失衡及环境污染加剧等问题日益突出，导致免疫功能低下成为普遍的亚健康状态，具体表现为反复感冒、持续性疲劳乏力、伤口愈合延迟、易受感染等症状，严重时还会大幅提升感染性疾病的发病概率，对人群健康生活与社会医疗资源造成双重压力。在此背景下，研发安全高效、具备明确提升免疫功效的功能原料，成为健康消费市场的现实诉求。

2、蜂王浆作为蜜蜂分泌的天然活性物质，富含蛋白质、多肽、氨基酸、脂肪酸、维生素及生物活性因子等多种营养成分，其在调节机体免疫、抗氧化、延缓衰老等方面的生理功能已得到广泛证实。然而，天然蜂王浆中部分大分子活性物质难以被人体直接吸收利用，且其生理活性易受外界环境影响而流失，限制了其在免疫增强领域的实际应用效果。

3、为突破这一技术瓶颈，酶解技术被广泛应用于蜂王浆的深加工处理，通过特定蛋白酶的定向催化作用，将蜂王浆中的大分子蛋白降解为小分子肽段，不仅能显著提升其生物利用率，还可富集并强化其特定生理活性，是优化蜂王浆产品功效的核心技术手段。

4、专利文献cn109198540a公开一种全面提取蜂王浆有效成分的工艺，包括以下步骤：按照蜂王浆与纯净水的重量比1:4-10，把蜂王浆加到纯净水中，混匀，浸提，离心分离，得到的上清液通过200-300目过滤介质过滤，收集蜂王浆滤饼；在蜂王浆中加入胰蛋白酶解液、蓝莓汁和生理盐水，在35-40℃条件下酶解70-80min；将酶解后的蜂王浆液体在100℃沸水中煮沸4-5min，迅速降温至3-5℃；用去离子水与蜂王浆液体混合均匀后，离心得到蜂王浆上清液，采用超滤膜过滤蜂王浆液体，冷冻干燥获得蜂王浆有效成分。该发明提取蜂王浆含有的非水溶性活性成分，将蜂王浆中非水溶性成分浸提到水中，然后再利用酶解法从水中回收非水溶性活性成分，提取效率高，提取出来的蜂王浆活性成分含量多，但该发明并未对其产品提升免疫细胞活性的功效进行研究。

5、专利文献cn113647591a公开了一种蜂王浆酶解物，该产物由蜂王浆经蛋白酶m-p001酶解制得，其酶解条件为：将蜂王浆配制成浓度5-20%的水溶液，按1500-2500u/g（以蜂王浆原料计）的比例添加蛋白酶m-p001，在ph6.0-8.0、33-36℃条件下酶解20-25小时。该蜂王浆酶解物，能够显著提高小鼠单核—巨噬细胞廓清能力，提高小鼠nk细胞活性，具有提高免疫力活性的功效，但该发明中的蛋白酶m-p001获取难度大，且生产成本较高，难以实现规模化的产业化推广与应用，无法满足工业化生产的实际需求。

6、综上，目前亟需开发一种安全性良好、工艺简便可控，并且能够有效提升免疫细胞活性的蜂王浆酶解产物，助力蜂王浆深加工技术在健康领域的产业化应用。

技术实现思路

1、为了解决上述技术问题，本发明提供了一种酶解工艺在制备具有提升免疫细胞活性的蜂王浆制剂中的应用。

2、为了实现上述目的，本发明提供如下技术方案：

3、第一方面，本发明提供了：一种制备具有提升免疫细胞活性的蜂王浆制剂的酶解工艺，包括如下步骤：

4、（1）蜂王浆和水混合均质，得到蜂王浆溶液；

5、（2）向蜂王浆溶液中加入复合酶a进行酶解，得到酶解液；

6、（3）向酶解液中加入复合酶b进行二次酶解，灭酶，固液分离，得到清液，干燥，即可；

7、步骤（2）中所述复合酶a为脂肪酶和风味蛋白酶；

8、步骤（3）中所述复合酶b为糜蛋白酶和菠萝蛋白酶。

9、在一些实施方案中，步骤（1）中所述蜂王浆和水的质量比为1:10-15；优选为1:10-13；进一步优选为1:11-12。

10、在一些实施方案中，步骤（1）中所述均质为5-15mpa下均质至少1次，每次3-5min；优选地，所述均质为5-12mpa下均质2-4次，每次3-5min；进一步优选为5-10mpa下均质2-3次，每次3-5min。

11、在一些实施方案中，步骤（2）中所述脂肪酶和风味蛋白酶的质量比为1:1-5；优选为1:2-4；进一步优选为1:3。

12、在一些实施方案中，步骤（2）中所述复合酶a的加入量为蜂王浆溶液质量的0.2%-0.8%；优选为0.4%-0.6%；进一步优选为0.5%。

13、在一些实施方案中，步骤（2）中所述酶解的条件为：40-45℃下酶解5-12h，ph 7.0-7.5。

14、在一些实施方案中，步骤（3）中所述糜蛋白酶和菠萝蛋白酶的质量比为3-8:1；优选为5-7:1；进一步优选为6:1。

15、在一些实施方案中，步骤（3）中所述复合酶b的加入量为蜂王浆溶液质量的0.3%-0.8%；优选为0.4%-0.6%；进一步优选为0.5%。

16、在一些实施方案中，步骤（3）中所述二次酶解的条件为：45-55℃下酶解5-12h，ph7.5-8.0。

17、在一些实施方案中，步骤（3）中所述灭酶为：100℃下灭酶5-10min。

18、在一些实施方案中，步骤（3）中所述固液分离为离心，具体为5000-10000rpm下离心15-30min；优选为6000-8000rpm下离心15-25min。

19、在一些实施方案中，步骤（3）中所述干燥为真空减压干燥，具体为：温度≤50℃，真空度-0.08至-0.1mpa。

20、第二方面，本发明提供了：上述酶解工艺在制备具有提升免疫细胞活性的蜂王浆制剂中的应用。

21、本发明中所述的蜂王浆制剂为药物。

22、本发明的有益效果为：

23、1.本发明采用复合酶a（脂肪酶+风味蛋白酶）降解脂类成分、初步水解短肽，再用复合酶b（糜蛋白酶+菠萝蛋白酶）针对性水解大分子蛋白，显著提升酶解效率和产物活性成分的释放量。

24、2.实验证明，本发明制备的酶解蜂王浆可以显著提高巨噬细胞的细胞活力以及吞噬能力，相比常规的酶解蜂王浆或未酶解蜂王浆，本发明在提升免疫细胞活性方面更具优势。

25、3.本发明中所用的四种酶，原料易得，且制备方法简单，满足产业化的要求。

26、4.本发明制备的酶解蜂王浆具有较好的提升免疫细胞活性的功效，可作为原料用于药物的制备，推动蜂王浆深加工技术在相关健康领域的产业化应用。

1.一种酶解工艺在制备具有提升免疫细胞活性的蜂王浆制剂中的应用，其特征在于，所述酶解工艺为先采用复合酶a进行酶解，再采用复合酶b进行二次酶解，所述复合酶a为质量比1:1-5的脂肪酶和风味蛋白酶；所述复合酶b为质量比3-8:1的糜蛋白酶和菠萝蛋白酶。

2.根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述酶解工艺，包括如下步骤：

3.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（1）中所述蜂王浆和水的质量比为1:10-15；

4.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（2）中所述脂肪酶和风味蛋白酶的质量比为1:2-4。

5.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（2）中所述复合酶a的加入量为蜂王浆溶液质量的0.2%-0.8%。

6.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（2）中所述酶解的条件为：40-45℃下酶解5-12h，ph 7.0-7.5。

7.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（3）中所述糜蛋白酶和菠萝蛋白酶的质量比为5-7:1。

8.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（3）中所述复合酶b的加入量为蜂王浆溶液质量的0.3%-0.8%。

9.根据权利要求2所述的应用，其特征在于，步骤（3）中所述二次酶解的条件为：45-55℃下酶解5-12h，ph 7.5-8.0。

10.一种制备具有提升免疫细胞活性的蜂王浆制剂的酶解工艺，其特征在于，包括如下步骤：