一种基于TIPE2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒及其制备方法和应用

本发明属于生物医药，具体涉及一种基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒及其制备方法和应用。

背景技术：

1、本发明背景技术中公开的信息旨在增加对本发明总体背景的理解，而不必然被视为承认或以任何形式暗示该信息构成已经成为本领域一般技术人员所公知的现有技术。

2、眼底新生血管是由眼底缺血缺氧、炎症刺激或遗传因素导致的异常血管增生。由于新生血管存在结构缺陷，易导致出血和渗出，最终导致视力下降甚至失明。玻璃体腔注射抗血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，vegf）是目前治疗眼底新生血管最常用的方法。该疗法需要反复实施侵入性操作，可能导致眼内炎、视网膜脱离、白内障和高眼压等并发症，部分患者可能出现无应答、复发或耐受，频繁注射会给家庭和社会带来沉重的心理和经济负担。此外，vegf也是一种重要的神经营养因子，长期使用抗vegf治疗可能导致视网膜萎缩或视网膜下纤维化，凸显了寻找新型治疗方法的紧迫性。研究已经证实眼底新生血管不仅与vegf过度表达有关，还与炎症密切相关。在病理状态下，视网膜内小胶质细胞激活、增殖、迁移‌，巨噬细胞浸润增加，二者释放大量炎症因子，破坏血-视网膜屏障，导致组织损伤。因此，抗新生血管之外的多靶点调控是此类疾病的治疗趋势。

3、在基因递送领域，质粒dna难以自主穿过细胞膜，且容易在内吞后被溶酶体降解。病毒基因载体存在免疫原性、包装容量、潜在插入风险、制备复杂和成本较高等问题。近期研究表明，使用腺相关病毒在眼部进行的基因治疗可能引发炎症反应以及对转基因产物或载体衣壳的先天性或适应性免疫应答。非病毒基因载体如pbae具有生物相容性好、稳定性高、无免疫原性等优点，但眼部泪液屏障、角膜屏障、结膜屏障、血-房水屏障、晶状体屏障和血-视网膜屏障等多重阻碍使得现有的pbae载体不能通过无创的给药方式将核酸递送至眼后段血管新生部位，亟待有效的解决方案。

4、因此，研发一种兼具穿透性与安全性的抗炎、抗新生血管双靶点纳米颗粒，实现眼底新生血管的无创性治疗，是解决当前治疗困境的关键需求。

技术实现思路

1、针对现有技术存在的不足，本发明的目的是提供一种基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒及其制备方法和应用。

2、为了实现上述目的，本发明是通过如下的技术方案来实现：

3、第一方面，本发明提供了一种基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒的制备方法，包括以下步骤：

4、（1）将1,4-丁二醇二丙烯酸酯与4-氨基-1-丁醇按质量比1~1.5:1混合，进行迈克尔加成反应，经洗涤、离心和冻干后得到末端具有丙烯酸酯基团的pbae；

5、（2）将所述末端含有丙烯酸酯基团的pbae与含巯基的tat-at7肽按质量比1:1~2在dmso中进行反应，然后依次经洗涤、离心和冻干后得到承药载体pbae-tat-at7；所述tat-at7肽的氨基酸序列为rkkrrqrrrcatwlppr（seq id no.1）；

6、（3）将所述pbae-tat-at7与调控tipe2表达的质粒按质量比5~100:1在水溶液中涡旋混合，静置后即得基于tipe2表达调控的pbae-tat-at7/tipe2质粒双靶点纳米颗粒；所述质粒调控tipe2表达的编码序列如seq id no.2所示。

7、第二方面，本发明提供了由上述制备方法制备得到的基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒。

8、第三方面，本发明提供了上述基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒的应用，所述应用为基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒在制备治疗眼底新生血管的药物中的应用。具体剂量可依据药物组合物的用药目的采用本领域常规方法确定。

9、与现有技术相比，本发明取得了以下有益效果：

10、1.本发明制备的基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒对眼底新生血管具有靶向性，兼具抗炎和抗血管生成的双重功能，为眼底新生血管的治疗提供了新的策略和思路。

11、2.本发明制备的基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒具有良好的组织穿透性与安全性，可通过滴眼给药，实现了眼底新生血管的无创性治疗，安全性高，依从性好，具备较高的临床转化价值。

12、3.本发明的纳米颗粒制备方法操作简便、温和，适合大规模生产，且具备良好的可重复性。

1.一种基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：

2.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤（1）中，反应时间为12~24h，反应温度为90~95℃。

3.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于，步骤（2）中，反应时间为12~24h，反应温度为10~30℃。

4.根据权利要求1所述制备方法，其特征在于：所述步骤（3）中质粒调控tipe2表达的编码序列如seq id no.2所示。

5.根据权利要求1-4任一项所述的基于tipe2表达调控的抗炎和抗新生血管双靶点纳米颗粒在制备治疗眼底新生血管的药物中的应用。