通过给予肠道瘤胃球菌实现的免疫检查点抑制剂的抗肿瘤效果的增强的制作方法

本发明涉及：用于增强免疫检查点抑制剂对对象的肿瘤或癌的效果的药物组合物。本发明尤其涉及与免疫检查点抑制剂组合给予且包含肠道瘤胃球菌(intestinalruminococcaceae bacterium)的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物的药物组合物。

背景技术：

1、免疫检查点抑制剂通过以免疫抑制机制为靶的治疗而对多种癌瘤带来显著临床效果。免疫检查点抑制剂已在恶性黑素瘤、肺癌、肾细胞癌、头颈部癌、胃癌等多种癌瘤中得到许可。但是，很难说免疫检查点抑制剂单一制剂已得到了充分的治疗效果。

2、提出了通过组合使用免疫抑制阻断疗法药、组合使用已得到许可的药物来同时解除多种免疫抑制机制、从而进一步激活抗肿瘤免疫、增强有效性的尝试（专利文献1），也进行了一些临床试验。但是，现状是称不上得到了充分的效果。

3、已知在肿瘤微环境中形成以免疫检查点分子及调节性t细胞为核心的免疫抑制网而引起免疫耐受（非专利文献1）。越来越多的报道表明，肠道常驻菌对这些免疫应答有影响（非专利文献2、非专利文献3）。

4、现有技术文献

5、专利文献

6、专利文献1 : 日本特表2015-518826

7、非专利文献

8、非专利文献1 : nature reviews cancer, 12, 252-264 (2012)

9、非专利文献2 : science, 359, 91-97 (2018)

10、非专利文献3 : science, 359, 97-103 (2018)

技术实现思路

1、发明要解决的问题

2、本发明的目的在于，提供能够增强免疫检查点抑制剂对对象的肿瘤或癌的效果的药物组合物。

3、用于解决问题的方案

4、本发明人们分析了接受免疫检查点抑制剂治疗的胃癌患者、肺癌患者的肠道细菌，结果发现免疫检查点抑制剂能够奏效的病例具有很多瘤胃球菌科的未定属细菌。进而，本发明人们为了研究特定细菌对抗肿瘤免疫造成的影响，从奏效病例的肠道内容物中对细菌进行了分离培养。将分离出的细菌给予至因给予抗菌剂而减少了原有的肠道细菌的小鼠并研究与免疫检查点抑制剂的组合使用效果，结果发现，保有具有序列号1所示的碱基序列的16s rrna基因的瘤胃球菌 yb328（ruminococcaceae yb328）可增强免疫检查点抑制剂的抗肿瘤效果，从而完成了本发明。

5、即，本发明非限定性地涉及以下方案。

6、［1］一种肠道瘤胃球菌的分离方法，其包括下述工序：

7、（i）将从下述哺乳动物得到的肠道内容物用厌氧性稀释液进行连续稀释，生成肠道内容物稀释液的工序，所述哺乳动物被给予了免疫检查点抑制剂、并且给予后通过ct图像评价得到了pr（部分奏效）以上的评价或sd（病情稳定）持续半年以上的评价；

8、（ii）将该肠道内容物稀释液的一部分接种于固体培养基，在厌氧性条件下培养，在固体培养基上生成肠道内容物稀释液所含的微生物的单个克隆来源的菌落（允许为多个）的工序；

9、（iii）确认该菌落中所含的细菌是否保有与序列号1所示的碱基序列具有95%以上的序列同一性的16s rrna基因的工序；及

10、（iv）获取确认了保有与序列号1所示的碱基序列具有95%以上的序列同一性的16srrna基因的细菌的工序。

11、［2］根据［1］所述的分离方法，其中，免疫检查点抑制剂为针对选自由pd-1、ctla-4、tim-3、btla、lag-3、a2ar、kir、vista、tigit、pd-l1、pd-l2、cd80、cd86、gal-9、hvem、cd160、mhc ii类、b7-h3、b7-h4、b7-h5、b7-h6、及b7-h7组成的组中的任意免疫检查点分子的抑制剂或这些抑制剂中的2种以上的组合。

12、［3］根据［2］所述的分离方法，其中，免疫检查点抑制剂选自针对前述免疫检查点分子的抗体、抗体的抗原结合性片段、及它们的组合。

13、［4］根据［3］所述的分离方法，其中，免疫检查点抑制剂选自由纳武单抗(nivolumab)、帕博利珠单抗（pembrolizumab）、西米普利单抗（cemiplimab）、阿维鲁单抗（avelumab）、阿特珠单抗（atezolizumab）、及度伐利尤单抗（durvalumab）组成的组。

14、［5］根据［1］～［4］中任一项所述的分离方法，其中，哺乳动物为人。

15、［6］一种药物组合物的制造方法，其包括下述工序：配混通过［1］～［5］中任一项所述的分离方法分离出的肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物，制成药物组合物。

16、［7］根据［6］所述的制造方法，其中，药物组合物为与免疫检查点抑制剂组合给予的药物组合物。

17、［8］一种药物组合物，其是通过［6］或［7］所述的制造方法而制造的。

18、［9］一种药物组合物，其包含肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物且与免疫检查点抑制剂组合给予。

19、［10］根据［9］所述的药物组合物，其包含肠道瘤胃球菌的活菌体。

20、［11］根据［9］或［10］所述的药物组合物，其中，肠道瘤胃球菌为保有与序列号1所示的碱基序列具有95%以上的同一性的16s rrna基因的细菌。

21、［12］根据［8］～［11］中任一项所述的药物组合物，其中，免疫检查点抑制剂为针对选自由pd-1、ctla-4、tim-3、btla、lag-3、a2ar、kir、vista、tigit、pd-l1、pd-l2、cd80、cd86、gal-9、hvem、cd160、mhc ii类、b7-h3、b7-h4、b7-h5、b7-h6、及b7-h7组成的组中的任意免疫检查点分子的抑制剂或这些抑制剂中的2种以上的组合。

22、［13］根据［12］所述的药物组合物，其中，免疫检查点抑制剂选自针对前述免疫检查点分子的抗体、抗体的抗原结合性片段、及它们的组合。

23、［14］根据［13］所述的药物组合物，其中，免疫检查点抑制剂选自由纳武单抗、帕博利珠单抗、西米普利单抗、阿维鲁单抗、阿特珠单抗、及度伐利尤单抗组成的组。

24、［15］根据［8］～［14］中任一项所述的药物组合物，其通过经口给予、经管给予、或灌肠给予（enema administration）来给予。

25、［16］根据［8］～［15］中任一项所述的药物组合物，其中，将免疫检查点抑制剂与肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物同时给予。

26、［17］根据［16］所述的药物组合物，其包含免疫检查点抑制剂且包含肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物。

27、［18］根据［8］～［15］中任一项所述的药物组合物，其中，将免疫检查点抑制剂与肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物分别给予。

28、［19］根据［18］所述的药物组合物，其中，在给予免疫检查点抑制剂前给予肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物。

29、［20］根据［18］所述的药物组合物，其中，在给予免疫检查点抑制剂后给予肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物。

30、［21］根据［8］～［20］中任一项所述的药物组合物，其用于在对象中活化cd8阳性t细胞。

31、［22］根据［8］～［21］中任一项所述的药物组合物，其用于在具有肿瘤或癌的对象中增强对肿瘤或癌的免疫应答。

32、［23］根据［22］所述的药物组合物，其中，与单独给予前述免疫检查点抑制剂的情况相比，对肿瘤或癌的免疫应答的增强效果大。

33、［24］根据［8］～［23］中任一项所述的药物组合物，其用于治疗对象的肿瘤或癌。

34、［25］根据［24］所述的药物组合物，其中，前述治疗使肿瘤或癌消失、缩小、或稳定化。

35、［26］根据［25］所述的药物组合物，其中，与单独给予前述免疫检查点抑制剂的情况相比，使肿瘤或癌消失、缩小、或稳定的效果大。

36、［27］根据［8］～［25］中任一项所述的药物组合物，其用于抑制对象的肿瘤或癌的复发或转移。

37、［28］根据［27］所述的药物组合物，其中，与单独给予前述免疫检查点抑制剂的情况相比，抑制肿瘤或癌的复发或转移的效果大。

38、［29］根据［22］～［28］中任一项所述的药物组合物，其中，进一步组合给予选自由手术疗法、化学疗法、及放射线疗法组成的组中的1种以上疗法。

39、［30］根据［22］～［29］中任一项所述的药物组合物，其中，肿瘤或癌选自由恶性胸膜间皮瘤、恶性腹膜间皮瘤、恶性黑素瘤、恶性淋巴瘤、脑肿瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、胸腺瘤、消化道间质瘤、神经内分泌肿瘤、睾丸肿瘤、软组织肉瘤、肾母细胞瘤、肝母细胞瘤、生殖细胞肿瘤、视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、急性髓系白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓系白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、成人t细胞白血病、多发性骨髓瘤、口腔咽癌、喉癌、舌癌、鼻腔癌、鼻窦癌、甲状腺癌、耳下腺癌、颌下腺癌、听觉器官癌、肺癌、乳腺癌、胸腺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、小肠癌、肝细胞癌、胆管癌、胆嚢癌、胰腺癌、肾细胞癌、肾盂/输尿管癌、膀胱癌、脐尿管癌、肾上腺癌、腹膜癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巣癌、阴道癌、外阴癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、神经内分泌癌、卡波西肉瘤、及原发灶不明癌组成的组。

40、［31］根据［8］～［20］中任一项所述的药物组合物，其用于与给予前相比增加哺乳动物的肠道常驻菌的多样性。

41、［32］一种增强对肿瘤或癌的免疫应答的方法，其包括下述步骤：向具有肿瘤或癌的对象组合给予有效量的免疫检查点抑制剂以及有效量的包含肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物的药物组合物。

42、［33］根据［32］所述的方法，其中，与单独给予前述免疫检查点抑制剂的情况相比，对肿瘤或癌的免疫应答的增强效果大。

43、［34］一种治疗肿瘤或癌的方法，其包括下述步骤：向具有肿瘤或癌的对象组合给予有效量的免疫检查点抑制剂以及有效量的包含肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物的药物组合物。

44、［35］根据［34］所述的方法，其中，前述治疗使肿瘤或癌消失、缩小、或稳定化。

45、［36］根据［35］所述的方法，其中，与单独给予前述免疫检查点抑制剂的情况相比，使肿瘤或癌消失、缩小、或稳定的效果大。

46、［37］一种抑制对象的肿瘤或癌的复发或转移的方法，其包括下述步骤：向具有肿瘤或癌的对象组合给予有效量的免疫检查点抑制剂以及有效量的包含肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物的药物组合物。

47、［38］根据［37］所述的方法，其中，与单独给予前述免疫检查点抑制剂的情况相比，抑制肿瘤或癌的复发或转移的效果大。

48、［39］根据［32］～［38］中任一项所述的方法，其中，将免疫检查点抑制剂与肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物同时给予。

49、［40］根据［32］～［38］中任一项所述的方法，其中，将免疫检查点抑制剂与肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物分别给予。

50、［41］根据［40］所述的方法，其中，在给予免疫检查点抑制剂前给予肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物。

51、［42］根据［40］所述的药物组合物，其中，在给予免疫检查点抑制剂后给予肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物。

52、［43］根据［32］～［42］中任一项所述的方法，其中，进一步组合实施选自由手术疗法、化学疗法、及放射线疗法组成的组中的1种以上疗法。

53、［44］根据［32］～［43］中任一项所述的方法，其中，肿瘤或癌选自由恶性胸膜间皮瘤、恶性腹膜间皮瘤、恶性黑素瘤、恶性淋巴瘤、脑肿瘤、神经胶质瘤、神经母细胞瘤、胸腺瘤、消化道间质瘤、神经内分泌肿瘤、睾丸肿瘤、软组织肉瘤、肾母细胞瘤、肝母细胞瘤、生殖细胞肿瘤、视网膜母细胞瘤、骨肉瘤、尤因肉瘤、横纹肌肉瘤、急性髓系白血病、急性淋巴细胞性白血病、慢性髓系白血病、慢性淋巴细胞性白血病、骨髓增生异常综合征、成人t细胞白血病、多发性骨髓瘤、口腔咽癌、喉癌、舌癌、鼻腔癌、鼻窦癌、甲状腺癌、耳下腺癌、颌下腺癌、听觉器官癌、肺癌、乳腺癌、胸腺癌、食道癌、胃癌、大肠癌、小肠癌、肝细胞癌、胆管癌、胆嚢癌、胰腺癌、肾细胞癌、肾盂/输尿管癌、膀胱癌、脐尿管癌、肾上腺癌、腹膜癌、前列腺癌、宫颈癌、子宫内膜癌、卵巣癌、阴道癌、外阴癌、基底细胞癌、鳞状细胞癌、神经内分泌癌、卡波西肉瘤、及原发灶不明癌组成的组。

54、［45］一种与给予前相比增加哺乳动物的肠道常驻菌的方法，其包括下述步骤：向该哺乳动物给予有效量的包含肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物的药物组合物。

55、［46］一种药物组合物，其用于将树突状细胞前体细胞诱导为i型树突状细胞，所述药物组合物包含除tlr4以外的多种tlr的激动剂。

56、［47］根据［46］所述的药物组合物，其中，前述多种tlr为tlr1、tlr3、tlr5、tlr7、及tlr9。

57、［48］根据［47］所述的药物组合物，其中，前述多种tlr为tlr5、tlr7、及tlr9。

58、［49］根据［48］所述的药物组合物，其中，前述激动剂为鞭毛蛋白、r848（雷西莫特，resiquimod）及cpg-odn的组合。

59、［50］根据［46］～［48］中任一项所述的药物组合物，其中，前述激动剂为肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物。

60、［51］根据［46］～［50］中任一项所述的药物组合物，其用于在对象中治疗肿瘤或癌。

61、［52］一种将树突状细胞前体细胞诱导为i型树突状细胞的方法，其包括使除tlr4以外的多种tlr的激动剂与树突状细胞前体细胞接触的步骤。

62、［53］根据［52］所述的方法，其在体外进行。

63、［54］根据［52］或［53］所述的方法，其中，前述多种tlr为tlr5、tlr7、及tlr9。

64、［55］根据［54］所述的方法，其中，前述激动剂为鞭毛蛋白、r848（雷西莫特）及cpg-odn的组合。

65、［56］根据［52］～［55］中任一项所述的方法，其中，前述激动剂为肠道瘤胃球菌的菌体、培养上清、代谢产物和/或菌体提取物。

66、［57］一种i型树突状细胞，其是通过［52］～［56］中任一项所述的方法诱导的。

67、［58］一种药物组合物，其包含［57］所述的i型树突状细胞且用于在对象中治疗肿瘤或癌。

68、［59］一种药物组合物，其包含［57］所述的i型树突状细胞且用于在具有肿瘤或癌的对象中增强对肿瘤或癌的免疫应答。

69、发明的效果

70、根据本发明，能够增强免疫检查点抑制剂对对象的肿瘤或癌的效果。