包括RDH12编码区的病毒载体和治疗视网膜营养不良的方法

本公开涉及医学治疗方法，例如用于治疗患有由于对视黄醇脱氢酶12蛋白（rdh12）进行编码的基因中的至少一个功能缺失突变而引起的眼科病状（例如，莱伯氏先天性黑蒙）的人类受试者的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的核酸，所述核酸包括腺相关病毒载体，所述腺相关病毒载体包括人rdh12互补dna（cdna）。

背景技术：

1、遗传性视网膜疾病（ird）是儿童法定失明（legal blindness）的主要原因。莱伯氏先天性黑蒙（lca）和早发性严重视网膜营养不良（eosrd）导致从出生到几岁发生严重视力障碍，两者加在一起占所有ird的5%或更多（koenekoop等人，2004）。lca/eosrd与常染色体显性和常染色体隐性遗传模式相关，涉及视网膜色素上皮和视杆光感受器及视锥光感受器作为主要靶（weleber等人，2013）。大约10%的lca/eosrd是由对rdh12进行编码的基因的突变引起的（kumaran等人，2017）。鉴于rdh12在为感光细胞提供发色团的视觉循环中的作用（haeseleer等人，2002；chen等，2012），以及

rdh12构成了一个重要的治疗靶点，

rdh12是最重要的lca基因之一。

2、尽管如遗传性视网膜疾病的眼科病状在人类和非人类哺乳动物中普遍存在，并且对对视黄醇脱氢酶进行编码的基因以及这些基因中的一些突变的影响有所了解，但是对于由

rdh12中的一个或多个突变引起的lca还没有已知的治疗方法。因此，在本领域中继续需要用于治疗如lca的视网膜营养不良的材料和方法，以及用于纠正可能导致这种营养不良的遗传异常的材料和方法。

技术实现思路

1、本发明提供了一种腺相关病毒（aav）载体，其包括对视黄醇脱氢酶进行编码的基因

rdh12的基因产物的编码区。包含

rdh12的aav载体可用于治疗视网膜营养不良病症（例如莱伯氏先天性黑蒙（lca）），其通过提供

rdh12编码区置于可调节或可控制的启动子（如异源启动子）的控制下的重组构建体来向缺乏野生型水平（如由

rdh12中的突变造成）的rdh12活性的受试者提供互补视黄醇脱氢酶。尽管具有相对较小的基因组大小、相对较低的整合入宿主dna的趋势和相对较低的免疫原性特征的优点，但令人惊讶的发现是，一些aav血清型组合或假型产生了编码的rdh12产物的表达水平，其在治疗视网膜营养不良的受试者给药的情况下不是治疗有效的和/或表现出不希望的毒性。与这一发现相一致的是，发现某些假类型（如aav2/5假类型）表现出与治疗视网膜营养不良症的治疗用途相一致的意想不到的和令人惊讶的有效表达水平和毒性特征。可以用本发明方法治疗的受试者可以包含通过光学相干断层扫描（oct）确定视觉功能丧失（例如，视网膜电图（erg）测试反应受损）但是保留了一些感光细胞的受试者。因此，在一个方面，本发明提供了一种治疗患有由于对视黄醇脱氢酶12（rdh12）蛋白的进行编码的基因中的一个或多个功能丧失突变引起的眼科病状（如莱伯氏先天性黑蒙或lca，或另一种临床定义的眼科病状）的人类受试者的方法。具体地，本公开的一个方面提供了一种治疗患有由于对视黄醇脱氢酶12（rdh12）蛋白的进行编码的基因中的一个或多个功能缺失突变引起的眼科病状的人类受试者的方法，所述方法包括向所述受试者的至少一只眼睛施用包括核酸的腺相关病毒载体，其中所述核酸包括人

rdh12dna（例如人

rdh12cdna），并且其中所述

rdh12dna（例如人

rdh12dna）对与seq id no: 2的全长至少70%、80%、90%、95%或99%相同的蛋白质进行编码。在上述一些实施例中，所述眼科病状是莱伯氏先天性黑蒙（lca）。在上面提到的一些实施例中，所述眼科病状是莱伯氏先天性黑蒙（lca）。在一些实施例中，

rdh12dna（例如

rdh12cdna）在人视紫红质激酶1（hgrk1）启动子的表达控制下，如其中hgrk1启动子包括seq id no: 3或基本上由seq id no: 3组成。在一些实施例中，所述腺相关病毒载体是aav-2、血清型-5（aav2/5）或aav-5。在一些实施例中，

rdh12dna（例如

rdh12cdna）包括与seq id no: 1至少60%或70%相同的序列。在一些实施例中，所述核酸以约2 × 1010病毒基因组每毫升（vg/ml）到约2 × 1012vg/ml的滴度施用，例如，约2 × 1010病毒基因组每毫升（vg/ml）到约2 × 1012vg/ml的滴度，如约2 × 1011vg/ml或约2 × 1012vg/ml。在一些实施例中，所述核酸被施用到视网膜下空间，例如，其中微注射套管插入到所述视网膜下空间中。

2、本公开的另一个方面涉及对人

rdh12dna进行编码的核酸（例如人

rdh12cdna），其中

rdh12dna（例如人

rdh12dna（如cdna））对与seq id no: 2的全长至少70%、80%、90%、95%或99%相同的蛋白质进行编码，其中

rdh12dna在人视紫红质激酶1（hgrk1）启动子的控制下。在一些实施例中，所述hgrk1启动子包括seq idno: 3或基本上由seq id no: 3组成。在一些实施例中，所述人

rdh12dna（例如人

rdh12cdna）对包括seq id no: 2的蛋白质进行编码。在一些实施例中，所述人

rdh12dna（例如人

rdh12cdna）与seq id no: 1的全长至少60%或70%相同。

3、本公开的又另一个方面是本文公开的用于治疗由于对视黄醇脱氢酶12（rdh12）蛋白进行编码的基因中的一个或多个功能缺失突变而患有眼科病状的人类受试者的核酸。在上述一些实施例中，所述眼科病状是莱伯氏先天性黑蒙（lca）。

4、本公开的又另一方面是一种病毒载体，其包括对本文所公开的rdh12进行编码的核酸。在一些实施例中，所述病毒载体是腺相关病毒载体。在一些实施例中，所述腺相关病毒载体是aav-2、血清型-5（aav2/5）或aav-5。

5、本公开的又另一个方面是本文公开的用于治疗由于对视黄醇脱氢酶12（rdh12）蛋白进行编码的基因中的一个或多个功能缺失突变而患有眼科病状的人类受试者的病毒载体。在上述一些实施例中，所述眼科病状是莱伯氏先天性黑蒙（lca）。

6、本公开的另一方面涉及分离的宿主细胞，其包括本文公开的病毒载体或本文公开的核酸。在一些实施例中，分离的宿主细胞表达人rdh12蛋白。

7、除非另外限定，否则本文中所使用的所有技术和科技术语具有本发明所属领域的技术人员通常所理解的相同含义。本文描述了用于本发明的方法和材料；也可以使用本领域已知的其它合适的方法和材料。材料、方法和实例仅是说明性的，而不是限制性的。本文提及的所有出版物、专利申请、专利、序列、数据库条目和其它参考文献均通过引用整体并入本文。在发生冲突的情况下，应以本说明书（包含定义）为准。

8、从下面的详细描述和附图以及权利要求中，本发明的其它特征和优点将变得清楚。