一种提高黑猪瘦肉率的添加剂的制作方法

本发明属于生物学，尤其涉及一种提高黑猪瘦肉率的添加剂。

背景技术：

1、松辽黑猪是中国优良地方黑猪品种之一，具有肉质鲜美、肌内脂肪含量高、耐粗饲、抗逆性强等特点，在优质猪肉生产领域具有较高的经济价值和市场认可度。然而，松辽黑猪在育肥过程中普遍存在脂肪沉积能力强、背膘较厚、瘦肉率偏低以及饲料能量向脂肪组织分配比例较高的问题，从而影响养殖效益和规模化推广应用。

2、目前，提高黑猪瘦肉率的技术主要包括遗传选育、限制饲喂、营养调控及添加功能性饲料添加剂等。多数方案主要通过提高蛋白沉积或促进脂肪氧化实现瘦肉率提升，其作用机制较为单一，对黑猪尤其是松辽黑猪这种高脂沉积型品种的改善效果有限。因此，亟需开发一种针对松辽黑猪脂肪沉积特点兼具安全性与作用能力的新型功能性添加剂，以提高松辽黑猪的瘦肉率和养殖经济效益。

技术实现思路

1、本发明的目的在于提供一种提高黑猪瘦肉率的添加剂，从而提高松辽黑猪的瘦肉率。

2、为实现上述目的，本发明提供了如下技术方案：

3、第一方面，本发明提供了一种提高黑猪瘦肉率的添加剂，所述添加剂为桑枝-莲房复合多糖/丁酸梭菌发酵代谢物复合物；

4、所述复合物是由桑枝-莲房复合多糖作为网络载体，负载丁酸梭菌发酵代谢物后，经氯化钙交联熟化制得的负载型复合物。

5、优选地，所述桑枝-莲房复合多糖的分子量为 10～100 kda；

6、所述复合物中，所述桑枝-莲房复合多糖与所述丁酸梭菌发酵代谢物的质量比为2:1；

7、所述黑猪为松辽黑猪。

8、优选地，所述复合物的制备方法包括如下步骤：

9、(1) 制备桑枝-莲房复合多糖：

10、将干桑枝和干莲房混合粉碎，经乙醇脱脂脱杂后，加入混合酶进行酶解，随后水提取、脱蛋白、脱色，并依次通过 100 kda 和 10 kda 超滤膜进行截留分离，收集 10～100kda 的复合多糖液，经醇沉、洗涤、复溶及冷冻干燥，得到桑枝-莲房复合多糖；

11、（2）制备丁酸梭菌发酵代谢物：

12、将丁酸梭菌接种于发酵培养基中进行厌氧密闭发酵，发酵结束后灭活，再加入蛋白酶进行酶解，灭酶后离心收集上清液，将上清液浓缩并加入保护剂后，进行冷冻干燥，得到丁酸梭菌发酵代谢物；

13、（3）构建负载复合物：

14、将所述桑枝-莲房复合多糖溶于水制成多糖溶液，向其中加入所述丁酸梭菌发酵代谢物溶液，搅拌混合均匀后调节 ph 值，得到复合溶液，随后缓慢滴加氯化钙水溶液，经静置熟化、冷冻干燥，即得所述桑枝-莲房复合多糖/丁酸梭菌发酵代谢物复合物。

15、优选地，所述步骤（1）中：

16、所述干桑枝与干莲房的质量比为 2 : 1；

17、所述混合酶为纤维素酶、果胶酶和木聚糖酶的混合物，以质量计，纤维素酶 : 果胶酶 : 木聚糖酶 = 5 : 3 : 2；酶解条件为：ph 为 5.6，温度为 50℃，时间为 90 min；

18、所述水提取的料液比为1:20。

19、优选地，所述步骤（1）的具体步骤如下：

20、（a）按质量份计，取干桑枝 200 份、干莲房 100 份，干燥后，粉碎过筛，混合均匀，得到桑枝-莲房混合粉；

21、（b）将桑枝-莲房混合粉使用乙醇脱脂处理，得到滤渣；

22、（c）将所述滤渣加入纯化水 6000 份，调节 ph 至 5.6，加入混合酶 3.0 份（以质量比计，纤维素酶 : 果胶酶 : 木聚糖酶 = 5:3:2），在 50℃、250 r/min 条件下酶解 90min；

23、（d）酶解后升温至 85℃，在 350 r/min 条件下提取 2 h，再升温至 95℃ 保温10 min 灭酶，过滤收集第一次提取液和滤渣a；

24、（e）向滤渣a中加入纯化水 4500 份，在 85℃、350 r/min 条件下再次提取 1.5h，过滤，合并两次提取液,得到合并提取液；

25、（f）将合并提取液在 55℃、真空度 -0.08 mpa 条件下浓缩至 1000 份，利用sevag 试剂脱蛋白，利用活性炭脱色处理，得到多糖滤液；

26、（g）将所述滤液先经 0.45 μm 微孔滤膜预过滤，再采用 100 kda 超滤膜进行超滤，保留透过液；

27、（h）将 透过液液再经 10 kda 超滤膜超滤，保留 10 kda 截留液，得到分子量为10～100 kda 的桑枝-莲房复合多糖液；

28、（i）将所述桑枝-莲房复合多糖液乙醇醇沉后，冷冻干燥，得到所述桑枝-莲房复合多糖。

29、优选地，所述步骤（2）中：

30、发酵过程中控制 ph 为 5.4～6.0；

31、所述酶解采用中性蛋白酶和风味蛋白酶的混合物，以质量计，中性蛋白酶 : 风味蛋白酶 = 2 : 1，酶解条件为：温度 50℃，时间 2 h；

32、所述保护剂由麦芽糊精、海藻糖和甘氨酸组成。

33、优选地，所述步骤（2）的具体步骤为：

34、1）将丁酸梭菌按 2% 的体积接种量接入种子培养基中，通入氮气 15 min 后密封，在温度 37℃、搅拌速度 100 r/min 的条件下厌氧培养 18 h，得到丁酸梭菌种子液；

35、2）按 5% 的体积接种量接入所述丁酸梭菌种子液，按照温度37℃，搅拌速度 120r/min，ph 5.4-6.0，发酵时间 36 h进行厌氧发酵；

36、3）发酵结束后，将发酵液进行热灭活，降温至50℃，ph 6.2，按照每10000份发酵液加入混合蛋白酶15份的量加入混合蛋白酶，在温度 50℃、搅拌速度 150 r/min 的条件下恒温酶解 2 h；

37、所述混合蛋白酶由中性蛋白酶和风味蛋白酶组成，所述中性蛋白酶和所述风味蛋白酶的质量比为 2:1；

38、4）酶解结束后，灭酶离心，收集上清液，减压浓缩为原体积的25%后，得到浓缩液；

39、5）按照50:7的料液比在浓缩液中，加入复合保护剂，搅拌均匀后，进行冷冻干燥，得到丁酸梭菌发酵代谢物；

40、所述复合保护剂包括麦芽糊精 、海藻糖 和甘氨酸，所述麦芽糊精、海藻糖和甘氨酸的质量比为10:3:1。

41、优选地，所述步骤（3）中：

42、所述ph值为6.4；所述氯化钙水溶液的质量百分浓度为 1%，所述复合溶液与所述氯化钙水溶液的体积比为12:1；

43、所述熟化的条件为：在 4℃ 条件下熟化 10 h，每隔 2 h 以 100 r/min 搅拌 5min。

44、优选地，所述步骤（3）的具体步骤如下：

45、（a）按质量份计，取所述桑枝-莲房复合多糖冻干粉 66.7 份，加入纯化水 1000份，使其完全复溶，得到多糖溶液；

46、（b）取所述丁酸梭菌发酵代谢物冻干粉 33.3 份，加入纯化水 200 份，搅拌离心取上清液，得到发酵代谢物溶液；

47、（c）将所述发酵代谢物溶液缓慢加入所述多糖溶液中，得到复合溶液a；

48、（d）将100 份1% 的氯化钙水溶液加入到所述复合溶液a，搅拌40min，得到复合溶液b；

49、（e）将上述复合溶液b置于 4℃ 的恒温环境中进行静置熟化，总熟化时间为 10h，每开启搅拌一次，搅拌速度为 100 r/min，每次持续搅拌 5 min；

50、（f）熟化结束后，进行冷冻干燥，得到桑枝-莲房复合多糖/丁酸梭菌发酵代谢物复合物。

51、第二方面，本发明提供了一种提高瘦肉率的黑猪饲料，所述黑猪饲料由基础日粮和上述的添加剂组成，所述添加剂在所述黑猪饲料中的添加量为500-1000g/t。

52、优选地，所述黑猪为松辽黑猪；所述添加剂在所述黑猪饲料中的添加量为750g/t；

53、所述黑猪饲料用于提高黑猪瘦肉率、降低背膘厚度、促进黑猪生长或降低料肉比。

54、第三方面，本发明提供了上述的添加剂在制备提高黑猪瘦肉率、降低背膘厚度、促进黑猪生长或降低料肉比的饲料中的应用。

55、优选地，所述黑猪为松辽黑猪，所述添加剂在所述饲料中的添加量为750g/t。

56、本发明的有益效果在于：

57、与现有通过促进脂肪氧化或提高蛋白沉积来改善黑猪体型的技术相比，本发明首次构建了桑枝-莲房复合多糖负载丁酸梭菌发酵代谢物的复合体系，利用复合多糖网络对发酵代谢物进行稳定负载和缓释，实现了对松辽黑猪脂肪沉积过程的源头调控。实验结果表明，本发明复合物能够显著抑制松辽黑猪前体脂肪细胞的成脂分化，降低脂滴形成和甘油三酯积累，其中高剂量复合物组对成脂分化的抑制率达到71.4%，明显高于理论联合抑制率46.0%；对甘油三酯积累的抑制率达到65.8%，显著高于bliss理论联合抑制率50.8%，表现出意想不到的协同增效作用。

58、进一步的动物试验结果表明，本发明复合物能够显著提高松辽黑猪生长性能和胴体品质，使平均日增重提高11.95%，料肉比降低9.25%；同时使背膘厚度降低21.84%，胴体瘦肉率提高13.14%，其改善效果均显著优于单独添加组和物理混合组。说明本发明不仅能够促进营养物质向肌肉组织沉积，而且能够有效减少脂肪组织过度增生，实现提高瘦肉率和改善胴体性状的双重效果。本发明原料来源广泛、安全性高、制备工艺简单，具有良好的产业化应用前景和推广价值。