检测猪格拉瑟氏菌的RAA引物对和探针组合及试剂盒

技术特征：
1.一种检测猪格拉瑟氏菌的raa引物对和探针，其特征在于，所述的引物对中上游引物的核苷酸序列为seq id no:1，下游引物的核苷酸序列为seq id no:2，所述的探针的核苷酸序列为seq id no:3。2.如权利要求1所述的raa引物对和探针，其特征在于，所述的探针自5
′
端起第31位碱基t标记fam发光基团，第32位碱基t被四氢呋喃thf代替，第33位碱基t标记bhq1淬灭基团，3
′
端进行c3-spacer阻断修饰。3.权利要求1或2所述的raa引物对和探针在制备用于检测猪格拉瑟氏菌的试剂盒中的应用。4.一种检测猪格拉瑟氏菌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含有权利要求1或2所述的raa引物对和探针。5.如权利要求4所述的检测猪格拉瑟氏菌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂盒包含有重组酶介导等温扩增反应的试剂体系和及荧光基础反应单元。6.如权利要求5所述的检测猪格拉瑟氏菌的试剂盒，其特征在于，所述的试剂体系具体包括反应缓冲液、去核酸酶水和醋酸镁。7.如权利要求5所述的检测猪格拉瑟氏菌的试剂盒，其特征在于，所述的荧光基础反应单元具体包含单链dna结合蛋白、重组酶和聚合酶，所述荧光基础反应单元以冻干粉的形式存在。8.一种基于重组酶介导等温扩增方法检测猪格拉瑟氏菌的方法，其特征在于，所述的方法是使用权利要求1或2所述的raa引物对和探针来检测猪格拉瑟氏菌。9.如权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的方法包括如下的步骤1)以常规方法提取待测样品dna；2)以提取的dna为模板，进行raa扩增，控制42℃下恒温扩增30min；3)结果判定，所述结果判定步骤是通过荧光定量检测仪或蓝光检测仪进行判断的。10.如权利要求9所述的方法，其特征在于，所述的结果判定，其中阴性对照无扩增曲线或可视化结果为无色，且阳性对照出现扩增曲线或可视化结果为绿色，则实验数据有效，否则实验结果为无效，需要重新检测；待检测样品无扩增曲线或可视化结果为无色，样品判为阴性；出现扩增曲线或可视化结果为绿色，样品判为阳性。

技术总结
本发明提供一种检测猪格拉瑟氏菌的RAA引物对和探针组合及试剂盒，可以简单、快速、灵敏、特异性检测使猪格拉瑟氏菌。所提供的RAA引物对和探针，其中引物对中上游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:1，下游引物的核苷酸序列为SEQ ID NO:2，所述的探针的核苷酸序列为SEQ ID NO:3。本发明所提供的基于上述引物对和探针用于检测猪格拉瑟氏菌的RAA试剂盒，只需在42℃恒温条件下反应30min即可完成，整个反应过程对仪器设备要求低，耗时短，操作简单，结果可实现肉眼可视化，更适用于基层现场诊断和即时检测，真正意义上实现了便携式快速核酸检测，可为格拉瑟氏病的快速诊断、实时监测防控提供技术支持。术支持。术支持。


技术研发人员：郭鑫 康浩然 张永宁 杨汉春 盖新娜 周磊 韩军
受保护的技术使用者：中国农业大学
技术研发日：2023.05.18
技术公布日：2023/9/8