一种人糜蛋白酶原及其制备方法和应用与流程

技术特征：
1.一种人糜蛋白酶原，其特征在于，所述人糜蛋白酶原包含如seq id no:1所示的氨基酸序列；优选地，编码所述人糜蛋白酶原的核酸包含如seq id no:2所示的核苷酸序列。2.如权利要求1所述的人糜蛋白酶原，其特征在于，编码所述人糜蛋白酶原的核酸包含如seq id no:3或seq id no:4所示的核苷酸序列。3.一种人糜蛋白酶，其特征在于为利用如权利要求1或2所述的人糜蛋白酶原制备得到。4.如权利要求3所述的人糜蛋白酶，其特征在于，所述人糜蛋白酶的3条链的氨基酸序列分别如seq id no:12-14所示。5.一种分离的核酸，其特征在于，其包含如seq id no:2、seq id no:3或seq id no:4所示的核苷酸序列。6.一种重组表达载体，其特征在于，其包含如权利要求5所述的分离的核酸；优选地，所述重组载体中包含的启动子的核苷酸序列如seq id no:5或seq id no:6所示，所述重组载体中包含的信号肽的核苷酸序列为编码氨基酸序列如seq id no:7、seq id no:8或seq id no:9所示的核苷酸序列。7.一种基因工程菌，其特征在于，其包含如权利要求5所述的分离的核酸或如权利要求6所述的重组表达载体；优选地，其宿主菌为大肠杆菌或毕赤酵母；更优选地，所述的宿主菌为毕赤酵母；进一步更优选地，所述的宿主菌为毕赤酵母gs115。8.一种制备如权利要求1或2所述的人糜蛋白酶原的方法，其特征在于，所述方法包括如下步骤：将如权利要求7所述的基因工程菌进行发酵培养，诱导所述人糜蛋白酶原表达，即得。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，所述的发酵培养的培养温度为20-37℃；和/或，所述发酵培养的溶氧量为0-50％；和/或，所述发酵培养的ph为3.0-7.4。10.根据权利要求8或9所述的方法，其特征在于，所述诱导使用的诱导剂为iptg或甲醇，和/或，所述诱导使用的诱导剂加入的时间为发酵培养开始后24-120小时。11.根据权利要求8-10中任一项所述的方法，其特征在于，所述基因工程菌经过验证正确后，进行扩大工业化生产人糜蛋白酶原。12.一种制备人糜蛋白酶的方法，所述方法包括：激活如权利要求1或2所述的人糜蛋白酶原。13.一种降解蛋白的方法，其特征在于，将如权利要求3或4所述的人糜蛋白酶与靶蛋白接触，使靶蛋白降解。14.如权利要求1或2所述的人糜蛋白酶原或权利要求3或4所述的人糜蛋白酶在制备治疗疾病的药物中的应用；较佳地，所述疾病选自浓痰、不孕不育、粘连、糖尿病足或烧烫伤引起的腐烂、脓肿血肿、炎症、体表囊肿和腱鞘囊肿疾病、蛇毒、外伤创口、手术伤口、泪道阻塞、口腔疾病、眼科疾病等；更佳地，在治疗眼科疾病时还可用于眼科手术以松弛睫状韧带。15.如权利要求1或2所述的人糜蛋白酶原或权利要求3或4所述的人糜蛋白酶在制备器械清洗的试剂中的应用，所述器械包括但不限于胃镜、肠镜、气管套管、手术器械、生化或血液检测仪器。

技术总结
本发明公开了一种重组人糜蛋白酶原及其制备方法。所述人糜蛋白酶原包含如SEQID NO.1所示的氨基酸序列。本发明的人糜蛋白酶原可在毕赤酵母中可溶性高效表达，表达量高，经激活得到的人糜蛋白酶活性高。本发明的人糜蛋白酶原可通过工业化进行大规模生产，使得人糜蛋白酶原的大量生产成为可能，为人糜蛋白酶广泛的临床应用奠定了基础。临床应用奠定了基础。


技术研发人员：刘彦君 王征 孙玉华 郑雷雷
受保护的技术使用者：上海宝济药业有限公司
技术研发日：2021.08.17
技术公布日：2023/2/17