TREX1的调节剂的制作方法

trex1的调节剂
1.相关申请
2.本技术要求于2020年5月1日提交的美国临时申请第63/018,808号的优先权，其全部内容以引用的方式并入本文。


背景技术：

3.与非自身的先天免疫系统识别有关的癌症需要潜在免疫疗法，用于检测和防止潜在的危险。癌细胞在抗原上不同于其正常细胞并且类似于病毒感染发出危险信号来警示免疫系统。这些包含损伤相关分子模式(damp)和病原体相关分子模式(pamp)的信号进一步激活先天免疫系统，从而保护宿主免受各种威胁(《细胞与感染微生物学前言(front.cell infect.microbiol.)》2012，2，168)。
4.异位表达的单链dna(ssdna)和双链dna(dsdna)是已知的pamp和/或damp，其由环状gmp-amp合成酶(cgas)(一种核酸传感器)识别(《自然(nature)》2011，478，515-518)。在感测到胞质dna后，cgas催化环状二核苷酸2',3'-cgamp(一种干扰素基因的er跨膜衔接蛋白刺激因子(sting)的强效第二信使和激活剂)的产生(《细胞报告(cell rep.)》2013，3，1355-1361)。sting激活通过tbk1触发irf3的磷酸化，这进而导致i型干扰素的产生和干扰素刺激基因(isgs)的激活；这是激活先天免疫和启动适应性免疫的先决条件。因此，i型干扰素的产生构成了先天免疫与适应性免疫之间的关键桥梁(《科学(science)》2013，341，903-906)。
5.过量i型ifn可能对宿主有害并且诱导自身免疫性，因此，存在抑制i型ifn介导的免疫激活的负反馈机制。3'修复核酸外切酶i(trex1)是负责去除异位表达的ssdna和dsdna的3'-5'dna核酸外切酶，并且因此是cgas/sting途径的关键阻遏物(《美国国家科学院院刊(pnas)》2015，112，5117-5122)。
6.i型干扰素和下游促炎性细胞因子应答对于免疫应答的发展以及其有效性至关重要。i型干扰素通过引发如cd40、cd80和cd86等共刺激性分子的上调来增强树突状细胞和巨噬细胞吸收、处理抗原、向t细胞呈递和交叉呈递抗原的能力，以及其刺激t细胞的效力(《实验医学杂志(j.exp.med.)》2011，208，2005-2016)。i型干扰素还结合其自身的受体并且激活干扰素应答基因，干扰素应答基因有助于激活参与适应性免疫的细胞(《欧洲分子生物学组织报告(embo rep.)》2015，16，202-212)。
7.从治疗的角度来看，i型干扰素和可以诱导i型干扰素产生的化合物具有用于治疗人类癌症的潜力(《自然免疫学评论(nat.rev.immunol.)》2015，15，405-414)。干扰素可以直接抑制人类肿瘤细胞增殖。另外，i型干扰素可以通过触发来自先天性免疫系统和适应性免疫系统两者的细胞的激活来增强抗肿瘤免疫性。重要地，pd-1阻断的抗肿瘤活性需要预先存在的肿瘤内t细胞。通过将冷肿瘤转变为热肿瘤并由此引发自发的抗肿瘤免疫，i型ifn诱导疗法有可能扩大对抗pd-1疗法有应答的患者群以及增强抗pd-1疗法的有效性。
8.人类和小鼠遗传研究表明trex1抑制可能适合于全身递送途径并且因此trex1抑制性化合物可以在抗肿瘤治疗领域中发挥重要作用。trex1是癌细胞对放射治疗作出应答
的免疫原性有限的关键决定因素[《细胞生物学趋势(trends in cell biol.)》2017，27(8)，543-4；《自然通讯(nature commun.)》2017，8，15618]。trex1由基因毒性应激诱导并且参与保护胶质瘤和黑色素瘤细胞以免受抗癌药物的影响[《生物化学与生物物理学学报(biochim.biophys.acta)》2013，1833，1832-43]。stact-trex1疗法在多种鼠癌症模型中表现出稳健的抗肿瘤功效[glickman等人，poster p235，第33届癌症免疫治疗学会年会，华盛顿特区，2018年11月7-11日]。(trex1)表达与宫颈癌细胞体外生长和体内疾病进展相关[《科学报告(scientific reports)1019，9，351]。除肿瘤学外，ifn途径激动剂也可用于抗病毒治疗，例如sting激动剂通过刺激ifn途径和上调isg来诱导针对乙型肝炎病毒的先天抗病毒免疫应答[《抗菌剂和化学疗法(antimicrob.agents chemother.)》2015，59：1273-1281]，并且trex1抑制hiv 1型的先天免疫应答[《自然免疫学(nature immunology)》2010，11(11)，1005]。


技术实现要素：

[0009]
本文提供了具有式i的化合物：
[0010][0011]
和其药学上可接受的盐以及其组合物，其中r1，r2，r3，r4，r5，x，m和n如本文所述。所公开的化合物和组合物调节trex1，并且可用于多种治疗性应用，例如，治疗癌症。
具体实施方式
[0012]
1.化合物的总体描述
[0013]
在第一实施例中，本文提供了式i的化合物：
[0014][0015]
或其药学上可接受的盐，其中：
[0016]
r1是氢、(c
1-c4)烷基、卤代(c
1-c4)烷基或3至4元环烷基；
[0017]
r2是氢或任选地被苯基取代的(c
1-c4)烷基，其中所述苯基任选地被选自卤素、(c
1-c4)烷基和卤代(c
1-c4)烷基的1至3个基团取代；
[0018]
环a和环b各自独立地是芳基、杂芳基、杂环基或环烷基；
[0019]
r3、r4和r6各自独立地是(c
1-c6)烷基、卤代(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷基orb、(c
2-c6)烯基、卤代(c
1-c6)烷氧基、卤素、苯基、-cn、-nrac(o)orb、-nrac(s)orb、-c(o)rb、-nrac(o)nrbrg、-nrac(s)nrbrg、-nras(o)2nrbrg、-c(s)rb、-s(o)2rc、-s(o)rc、-c(o)ord、-c(s)ord、-c(o)nrerf、-c(s)nrare、-nrac(o)rd、-nrac(s)rd、-ore、-sre、-o(c
1-c4)烷基ore、-nrerf、4至6元杂芳基或4至7元杂环基，其中
[0020]
i)用于r3和r4的所述苯基各自独立地并且任选地被选自rg的1或2个基团取代；
[0021]
ii)用于r3和r4的所述(c
1-c6)烷基各自独立地并且任选地被选自orh、-nr
jrk
、苯基和5至6元杂芳基的1或2个基团取代；
[0022]
ii)用于r3和r4的所述4至7元杂环基和4至6元杂芳基各自独立地并且任选地被选自rm的1或2个基团取代；
[0023]
iv)r3和r4中的(c
1-c6)烷基所列出的任选取代基的所述苯基和5至6元杂芳基各自独立地并且任选地被选自rg的1或2个基团取代；
[0024]
x是0、1或2；
[0025]
m和n各自独立地是0至3的整数；
[0026]
r5是(c
1-c6)烷基、卤代(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、-(c
1-c6)烷基ora、-(c
1-c6)烷基nrarb、-(c
1-c6)烷基(c
3-c7)环烷基、-(c
1-c6)烷基(4至7元杂环基)、-(c
1-c6)烷基(5至7元杂芳基)、苯基、5至7元杂芳基、(c
3-c7)环烷基、(c
3-c7)环烯基或4至7元杂环基，其中所述苯基、5至7元杂芳基、(c
3-c7)环烷基、(c
3-c7)环烯基或4至7元杂环基在每次出现时都任选地并且独立地被选自r6的1至3个基团取代，条件是r5不是任选地被取代的异噁唑基。
[0027]
ra、rb、rc、rd、re和rf各自独立地是氢、卤素、(c
1-c6)烷基、卤代(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、苯基、3至4元环烷基、4至6元杂芳基或4至7元杂环基，其中
[0028]
i)用于ra、rb、rc、rd、re和rf的所述(c
1-c6)烷基任选地被选自苯基、-orh和-nr
jrk
的1或2个基团取代；
[0029]
ii)用于ra、rb、rc、rd、re和rf的所述苯基、4至6元杂芳基和4至7元杂环基各自任选地并且独立地被选自rg的1或2个基团取代；
[0030]
iii)用于ra、rb、rc、rd、re和rf的所述4至7元杂环基进一步任选地被＝o取代；
[0031]
rg、rh、rj、rk和rm各自独立地是氢、卤素、(c
1-c6)烷基、卤代(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷氧基、卤代(c
1-c6)烷氧基、苯基、-(c
1-c6)烷基苯基、3至4元环烷基、4至6元杂芳基或4至7元杂环基，其中用于rg、rh、rj、rk的所述4至7元杂环基进一步任选地被＝o取代。
[0032]
2.定义
[0033]
当结合地用于描述可能具有多个连接点的化学基团时，连字符(-)表示所述基团与定义其的变量的连接点。例如，-nhc(o)ora和-nhc(s)ora意指此基团的连接点出现在氮原子上。
[0034]
术语“卤素”(halo/halogen)是指选自氟(氟代，-f)、氯(氯代，-cl)、溴(溴代，-br)和碘(碘代，-i)的原子。
[0035]
术语“烷基”当单独使用或作为如“卤代烷基”等较大部分的一部分等时，意指饱和直链或支链单价烃基。
[0036]
术语“烯基”当单独使用或作为较大部分的一部分时，意指具有1或2个双键的直链
或支链单价烃基。
[0037]“烷氧基”意指通过氧连接原子连接的由-o-烷基表示的烷基。例如，“(c
1-c4)烷氧基”包含甲氧基、乙氧基、丙氧基和丁氧基。
[0038]
术语“卤代烷基”包含单卤代烷基、多卤代烷基和全卤代烷基，其中卤素独立地选自氟、氯、溴和碘。
[0039]“卤代烷氧基”是通过氧原子如
–
ochf2或
–
ocf3连接到另一部分的卤代烷基。
[0040]
除非另有规定，否则术语“芳基”是指总共具有6至10个环成员的芳香族碳环系统。在某些实施例中，“芳基”是指包含但不限于苯基和萘基的芳香族环系统。应当理解，当规定时，芳基上的任选的取代基可以存在于任何可取代位置上并且包含例如连接芳基的位置。
[0041]
术语“杂芳基”当单独使用或作为较大部分的一部分时，是指含有1至4个选自n、o和s的杂原子的5至12元(例如，4至6元)芳香族基。只要大小允许，杂芳基可以是单环或双环的。单环杂芳基包含例如噻吩基、呋喃基、吡咯基、咪唑基、吡唑基、三唑基、四唑基、噁唑基、异噁唑基、三嗪基、四嗪基、噁二唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡啶基、哒嗪基、嘧啶基、吡嗪基等。双环杂芳基包含其中单环杂芳环与一个或多个芳基或杂芳环稠合的基团。非限制性实例包含吲哚基、咪唑并吡啶基、苯并噁唑基、苯并氧二唑基、吲唑基、苯并咪唑基、苯并噻唑基、喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、吡咯并吡啶基、吡咯并嘧啶基、吡唑并吡啶基、噻吩并吡啶基、噻吩并嘧啶基、吲哚嗪基、嘌呤基、萘啶基和蝶啶基。应当理解，当规定时，杂芳基上的任选的取代基可以存在于任何可取代位置上并且包含例如连接杂芳基的位置。
[0042]
除非另有规定，否则术语“环烷基”是指具有3至10个碳环原子的饱和环烃。单环环烷基包含但不限于环丙基、环丁基、环戊基、环己基、环庚基和环辛基。应当理解，当规定时，环烷基上的任选的取代基可以存在于任何可取代位置上并且包含例如连接环烷基的位置。
[0043]
除非另有规定，否则术语“环烯基”是指具有3至10个碳原子的部分饱和环烃。环烯基包含但不限于环丙烯、环丁烯、环戊烯、环己烯和环庚烯。应当理解，当规定时，环烯基上的任选的取代基可以存在于任何可取代位置上并且包含例如连接环烯基的位置。
[0044]
所公开的化合物以各种立体异构形式存在。立体异构体是仅在其空间排列方面不同的化合物。对映异构体为镜像不可重叠的立体异构体对，最常是因为其含有充当手性中心的不对称取代碳原子。“对映异构体”意指为彼此的镜像且不可重叠的一对分子中的一个。非对映异构体为含有两个或多个不对称取代碳原子的立体异构体。“r”和“s”表示围绕一个或多个手性碳原子的取代基的构型。
[0045]“外消旋体”或“外消旋混合物”意指等摩尔量的两种对映异构体的化合物，其中此类混合物不表现出光学活性，即其不使偏振光平面旋转。
[0046]
当所公开的化合物的立体化学按照结构命名或描述时，所命名或描述的立体异构体相对于所有其它立体异构体具有按重量计至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％的纯度。相对于所有其它立体异构体的按重量计的纯度百分比是一种立体异构体的重量与其它立体异构体的重量的比率。当单一对映异构体按照结构命名或描述时，所描述或命名的对映异构体具有按重量计至少60％、70％、80％、90％、99％或99.9％的光学纯度。按重量计的光学纯度百分比是对映异构体的重量与对映异构体的重量加上其光学异构体的重量的比率。
[0047]
当所公开的化合物按照结构命名或描述而没有表明立体化学，并且化合物具有一
个手性中心时，应当理解，该名称或结构涵盖化合物的一种对映异构体，该对映异构体不含对应的光学异构体、该化合物的外消旋混合物或一种对映异构体相对于其对应的光学异构体富集的混合物。
[0048]
术语“trex1”是指3'修复核酸外切酶1或dna修复核酸外切酶1，其是在人类中由trex1基因编码的酶。mazur dj,perrino fw(1999年8月)。“编码哺乳动物3'
‑‑
》5'核酸外切酶的trex1和trex2 cdna序列的鉴定和表达”。《生物化学杂志(j biol chem.)》274(28)：19655
–
60。doi：:10.1074/jbc.274.28.19655。pmid 10391904；hoss m，robins p，naven tj，pappin dj，sgouros j，lindahl t(1999年8月)。“与大肠杆菌dnaq/mutd蛋白同源的人类dna编辑酶”。embo j.18(13)：3868
–
75。doi：:10.1093/emboj/18.13.3868。pmc 1171463。pmid 10393201。此基因编码人细胞中主要的3'
‑‑
》5'dna核酸外切酶。蛋白质是可以为人类dna聚合酶提供校对功能的非加工性核酸外切酶。该蛋白质也是set复合物的组分，并且用于在颗粒酶a介导的细胞死亡期间迅速降解带切口dna的3'末端。缺乏功能性trex1的细胞表现出慢性dna损伤检查点激活和内源性单链dna底物的核外积累。似乎trex1蛋白通常作用于由处理异常复制中间体产生的单链dna多核苷酸物种。trex1的这种作用减弱dna损伤检查点信号传导并阻止病理性免疫激活。trex1代谢内源性逆转录因子的逆转录单链dna，作为细胞内抗病毒监测功能，从而产生强效的i型ifn应答。trex1通过降解细胞质中的病毒cdna来帮助hiv-1逃避胞质感测。
[0049]
术语“trex2”是指3'修复核酸外切酶2，是在人类中由trex2基因编码的酶。此基因编码具有3'至5'核酸外切酶活性的核蛋白。编码的蛋白质参与双链dna断裂修复，并且可以与dna聚合酶δ相互作用。具有此活性的酶参与dna复制、修复和重组。trex2是主要在角化细胞中表达并且有助于表皮对uvb诱导的dna损伤作出应答的3'核酸外切酶。trex2生物化学和结构性质类似于trex1，但是两者并不相同。该两种蛋白质共享二聚体结构并且可以在体外以几乎相同的k
ca
值处理ssdna和dsdna底物。然而，与酶动力学、结构域和亚细胞分布相关的若干个特征将trex2与trex1区分开来。与trex1相比，trex2在体外对dna底物的亲和力降低了10倍。与trex1相比，trex2缺乏可以介导蛋白质-蛋白质相互作用的cooh-末端结构域。trex2位于细胞质和细胞核两者中，而trex1存在于内质网中并且在颗粒酶a介导的细胞死亡期间或在dna损伤后被动员到细胞核中。
[0050]
术语“受试者”和“患者”可以互换使用，并且意指需要治疗的哺乳动物，例如，伴侣动物(例如，狗、猫等)、农场动物(例如，牛、猪、马、绵羊、山羊等)和实验室动物(例如，大鼠、小鼠、豚鼠等)。通常，受试者是需要治疗的人。
[0051]
术语“抑制(inhibit、inhibition或inhibiting)”包含降低生物活性或过程的基线活性。
[0052]
如本文所使用的，术语“治疗(treatment、treat和treating)”是指逆转、缓解、延迟如本文所述的疾病或病症或其一种或多种症状的发作或抑制其进展。在一些方面中，可以在出现一种或多种症状后施用治疗，即治疗性治疗。在其它方面中，可以在不存在症状的情况下施用治疗。例如，可以在症状发作之前(例如，根据症状历史和/或根据暴露于特定生物体或其它易感因素)向易感个体施用治疗，即预防性治疗。还可以在症状已经消退之后继续治疗，例如以延迟其复发。
[0053]
术语“药学上可接受的载体”是指不会破坏与其一起调配的化合物的药理学活性
的无毒的载体、佐剂或媒剂。可以用于本文所述组合物的药学上可接受的载体、佐剂或媒剂包含但不限于离子交换剂、氧化铝、硬脂酸铝、卵磷脂、血清蛋白(如人血清白蛋白)、缓冲物质(如磷酸盐)、甘氨酸、山梨酸、山梨酸钾、饱和植物脂肪酸的部分甘油酯混合物、水、盐或电解质(如硫酸鱼精蛋白、磷酸氢二钠、磷酸氢钾、氯化钠、锌盐、胶态二氧化硅、三硅酸镁、聚乙烯吡咯烷酮、基于纤维素的物质、聚乙二醇、羧甲基纤维素钠、聚丙烯酸酯、蜡、聚乙烯-聚氧丙烯嵌段聚合物、聚乙二醇和羊毛脂)。
[0054]
对于在药物中的使用，本文所述化合物的盐是指无毒的“药学上可接受的盐”。药学上可接受的盐形式包含药学上可接受的酸性/阴离子或碱性/阳离子盐。本文所述化合物的合适的药学上可接受的酸加成盐包含例如无机酸(如盐酸、氢溴酸、磷酸、硝酸和硫酸)和有机酸(如乙酸、苯磺酸、苯甲酸、甲磺酸和对甲苯磺酸)的盐。具有如羧酸等酸性基团的本发明教导的化合物可以与药学上可接受的碱形成药学上可接受的盐。合适的药学上可接受的碱性盐包含例如铵盐、碱金属盐(如钠盐和钾盐)和碱土金属盐(如镁盐和钙盐)。具有季铵基团的化合物也含有抗衡阴离子，如氯离子、溴离子、碘离子、乙酸根、过氯酸根等。此类盐的其它实例包含盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、甲烷磺酸盐、硝酸盐、苯甲酸盐以及含有如谷氨酸等氨基酸的盐。
[0055]
术语“有效量”或“治疗有效量”是指将引发受试者的所需或有益生物或医疗应答的本文所述化合物的量，例如介于0.01-100mg/kg体重/天之间的剂量。
[0056]
3.化合物
[0057]
在第二实施例中，式i的化合物是式ii的化合物：
[0058][0059]
或其药学上可接受的盐，其中变量如以上针对式i所述。
[0060]
在第三实施例中，式i的化合物是式iii的化合物：
[0061][0062]
或其药学上可接受的盐，其中变量如以上针对式i所述。
[0063]
在第四实施例中，式i的化合物是式iv的化合物：
[0064][0065]
或其药学上可接受的盐，其中变量如以上针对式i所述。
[0066]
在第五实施例中，式i、ii、iii或iv的化合物中的r2是(c
1-c4)烷基，其中变量如以上针对式i所述。
[0067]
在第六实施例中，式i的化合物是式v的化合物：
[0068][0069]
或其药学上可接受的盐，其中变量如以上针对式i所述。
[0070]
在第七实施例中，式i、ii、iii、iv或v的化合物中的r1是(c
1-c4)烷基，其中变量如以上针对式i或第五实施例所述。
[0071]
在第八实施例中，式i的化合物为式vi的化合物：
[0072][0073]
或其药学上可接受的盐，其中变量如以上针对式i所述。
[0074]
在第九实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r3和r4独立地选自(c
1-c4)烷基、卤代(c
1-c4)烷基、(c
1-c4)烷氧基、卤代(c
1-c4)烷氧基、卤素和cn，其中变量如以上针对式i或第五或第七实施例所述。
[0075]
在第十实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r3是卤素，其中变量如以上针对式i或第五、第七或第九实施例所述。可替代地，作为第十实施例的一部分，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r3是氯，其中变量如以上针对式i或第五、第七或第九实施例所述。
[0076]
在第十一实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的m是0或1，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九或第十实施例所述。
[0077]
在第十二实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的n是0，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十或第十一实施例所述。
[0078]
在第十三实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r5是(c
1-c6)烷基、卤代
(c
1-c6)烷基、(c
2-c6)烯基、-(c
1-c6)烷基ora、-(c
1-c6)烷基(c
3-c7)环烷基、苯基、5至7元杂芳基、(c
3-c7)环烷基、(c
3-c7)环烯基或4至7元杂环基，其中所述苯基、5至7元杂芳基、(c
3-c7)环烷基、(c
3-c7)环烯基或4至7元杂环基在每次出现时都任选地并且独立地被选自r6的1至3个基团取代，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十、第十一或第十二实施例所述。可替代地，作为第十三实施例的一部分，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r5是(c
1-c4)烷基、卤代(c
1-c4)烷基、(c
3-c5)烯基、-(c
1-c4)烷基o(c
1-c4)烷基、-(c
1-c4)烷基(c
4-c6)环烷基、苯基、5至6元杂芳基、(c
3-c6)环烷基、(c
4-c6)环烯基或4至6元杂环基，其中所述苯基、5至6元杂芳基、(c
3-c6)环烷基、(c
4-c6)环烯基或4至6元杂环基在每次出现时都任选地并且独立地被选自r6的1至3个基团取代，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十、第十一或第十二实施例所述。在另一替代方案中，作为第十三实施例的一部分，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r5是(c
1-c4)烷基、卤代(c
1-c4)烷基、(c
3-c5)烯基、-(c
1-c4)烷基o(c
1-c4)烷基、-(c
1-c4)烷基环丙基、环丁基、环戊烯基、环丁烯基、苯基、吡啶基、嘧啶基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、吡咯基、吡唑基或四唑基，其中所述环丙基、环丁基、环戊烯基、环丁烯基、苯基、吡啶基、嘧啶基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噻二唑基、吡咯基、吡唑基和四唑基各自任选地并且独立地被选自r6的1至3个基团取代，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十、第十一或第十二实施例所述。在另一替代方案中，作为第十三实施例的一部分，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r5是苯基、吡啶基、嘧啶基、噁唑基、噻唑基、异噻唑基、噁二唑基、吡咯基、吡唑基或四唑基，其各自任选地且独立地被选自r6的1至3个基团取代，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十、第十一或第十二实施例所述。
[0079]
在第十四实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r6是(c
1-c6)烷基、卤代(c
1-c6)烷基、(c
1-c6)烷基orb、(c
2-c6)烯基、o(c
1-c4)烷基ore、卤代(c
1-c6)烷氧基、卤素、-nrac(o)orb、-nrac(s)orb、-c(o)rb、-nrac(o)nrbrg、-nrac(s)nrbrg、-nras(o)2nrbrg、-c(s)rb、s(o)2rb、s(o)rbc、-c(o)orb、-c(s)orb、-c(o)nrerf、-c(s)nrare、-nrac(o)rd、-nrac(s)rb、-ore、-sre或-nrerf，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十、第十一、第十二或第十三实施例所述。
[0080]
在第十五实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的ra、rb、rc、re、rf和rg各自独立地是氢、(c
1-c6)烷基或卤代(c
1-c6)烷基，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十、第十一、第十二、第十三或第十四实施例所述。
[0081]
在第十六实施例中，式i、ii、iii、iv、v或vi的化合物中的r6是(c
1-c4)烷基或卤代(c
1-c4)烷基，其中变量如以上针对式i或第五、第七、第九、第十、第十一、第十二、第十三、第十四或第十五实施例所述。
[0082]
在本文所述化合物的一个方面，包含任何一个公开的实施例，r5不是任选地被取代的异噁唑-4-基。
[0083]
具有式i的化合物在范例中进一步公开并且包含在本公开中。包含其药学上可接受的盐以及中性形式。
[0084]
4.用途、调配和施用
[0085]
本文所述的化合物和组合物通常对调节trex1的活性是有用的。在一些方面，本文所述的化合物和药物组合物抑制trex1的活性。
[0086]
在一些方面，本文所述的化合物和药物组合物可用于治疗与trex1功能相关的病症。因此，本文提供治疗与trex1功能相关的病症的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用治疗有效量的本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或包括所公开的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物。还提供了本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或包括所公开的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物用于制造用于治疗与trex1功能相关的病症的药物的用途。还提供了本文所述的化合物、或其药学上可接受的盐、或包括所公开的化合物或其药学上可接受的盐的药物组合物，其用于治疗与trex1相关的病症。
[0087]
在一些方面，本文所述的化合物和药物组合物可用于治疗癌症。
[0088]
在一些方面，由本文所述的化合物和药物组合物治疗的癌症选自结肠癌、胃癌、甲状腺癌、肺癌、白血病、胰腺癌、黑色素瘤、多发性黑色素瘤、脑癌、cns癌、肾癌、前列腺癌、卵巢癌、白血病和乳腺癌。
[0089]
在一些方面，由本文所述的化合物和药物组合物治疗的癌症选自肺癌、乳腺癌、胰腺癌、结直肠癌和黑色素瘤。
[0090]
在某些方面，本文所述的药物组合物被调配成用于向需要此类组合物的患者施用。本文所述的药物组合物可经口、肠胃外、通过吸入喷雾、局部、经直肠、经鼻、经颊、经阴道或经由植入式贮器施用。如本文所用的术语“肠胃外”包含皮下、静脉内、肌肉内、关节内、滑膜内、胸骨内、鞘内、肝内、病灶内和颅内注射或输注技术。在一些实施例中，所述组合物经口、腹膜内或静脉内施用。本文所述的药物组合物的无菌可注射形式可以是水性或油性悬浮液。这些悬浮液可以根据本领域已知的技术使用合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来调配。
[0091]
在一些方面，所述药物组合物经口施用。
[0092]
用于任何特定患者的具体剂量和治疗方案将取决于各种因素，这些因素包含所用具体化合物的活性、年龄、体重、总体健康状况、性别、饮食、施用时间、排泄率、药物组合和治疗医生的判断以及所治疗的特定疾病的严重强度。组合物中的本文所述的化合物的量还将取决于药物组合物中的特定化合物。
[0093]
范例
[0094]
化学合成
[0095]
以下代表性实例旨在帮助说明本公开，并且其不旨在也不应解释为限制本发明的范围。
[0096]
除非另有说明，否则所使用的一般起始材料从商业资源获得或在其他实例中制备。
[0097]
以下缩写有明确的含义：
[0098]
ac＝乙酰基；acn＝乙腈；aco＝乙酸根；boc＝t-叔丁氧羰基；cbz＝苄氧羰基；cdi＝羰二咪唑；dbu＝1,8-二氮杂双环十一-7-烯；dcc＝1,3-二环己基碳二亚胺；dce＝1,2-二氯乙烷；di＝去离子水；diad＝偶氮二甲酸二异丙酯；dibal＝二异丁基氢化铝；dipa＝二异丙胺；dipea或diea＝n,n-二异丙基乙胺，也被称为hunig's碱；dma＝二甲基乙酰胺；dmap＝4-二甲氨基吡啶；dmf＝二甲基甲酰胺；dmp＝戴斯-马丁高价碘化物；dppa＝叠氮磷酸二苯酯；dppp＝1,3-双(二苯基膦)丙烷；dtbbpy＝4,4'-二叔丁基-2,2'-联吡啶；edc或edci＝1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亚胺盐酸盐；edta＝乙二胺四乙酸四钠盐；etoac＝乙
酸乙酯；fab＝快原子轰击；fmoc＝9-芴甲基羰基；hmpa＝六甲基磷酸胺；hatu＝(9-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-n,n,n,n-四甲基脲六氟磷酸盐)；hoat＝1-羟基-7-氮杂苯并三唑或3h-[1,2,3]三唑[4,5-b]吡啶-3-醇；hobt＝1-羟基苯并三氮唑；hrms＝高分辨率质谱仪；khmds＝六甲基二硅基胺基钾；lc-ms＝液相色谱-质谱法；lda＝二异丙基氨基锂；lihmds＝双胺基锂；mcpba＝间氯过氧苯甲酸；mmpp＝单过氧邻苯二甲酸镁六水合物；ms＝甲基磺酰基＝甲磺酰基；mso＝甲磺酸盐＝甲磺酸酯；mtbe＝甲基叔丁基醚；nbs＝n-溴代琥珀酰亚胺；nmm＝4-甲基吗啡啉；nmp＝n-甲基吡咯烷酮；nmr＝核磁共振；pcc＝氯铬酸吡啶盐；pdc＝重铬酸吡啶盐；ph＝苯基；ppts＝吡啶对甲苯磺酸盐；ptsa＝对甲苯磺酸；r.t./rt＝室温；rac.＝外消旋；t3p＝2,4,6-三丙基-1,3,5,2,4,6-三氧三磷酸；tea＝三乙胺；tfa＝三氟乙酸；tfo＝三氟甲磺酸＝三氟甲磺酸盐；thf＝四氢呋喃；tlc＝薄层色谱法；tmscl＝三甲基氯硅烷。
[0099]
反应过程通常采用tlc或lc-ms进行监测。采用下列方法之一记录lc-ms。
[0100]
lcms方法-1：
[0101][0102][0103]
lcms方法-2：
[0104][0105]
lcms方法-3：
[0106][0107]
lcms方法-4：
[0108][0109][0110]
lcms方法-5：
[0111][0112]
lcms方法-5：
[0113][0114]
除非另有说明，否则在室温下在瓦里安inova 400或500兆赫光谱仪上记录nmr，以溶剂峰作为参考，或在布鲁克300或400兆赫光谱仪上记录，以tms峰作为内部参考。
[0115]
本文所述的化合物可以使用下列方法和方案制备。除非另有规定，否则所有使用的起始材料都是市售的。
[0116]
方法1
[0117][0118]
方法1是2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯的2步合成方案，该2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯始于按下列文献方法制备的2-氯-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯。(《合成(synthesis)》2006，8，1343-1350)
[0119]
方法2
[0120][0121]
方法2是羟基嘧啶类似物的2步制备方案，该羟基嘧啶类似物始于按方法1制备的2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯。该方法适用于烷基胺。
[0122]
方法3
[0123][0124]
方法3是羟基嘧啶类似物的3步制备方案，该羟基嘧啶类似物始于按方法1制备的2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯。方法3适用于包括杂芳基胺在内的芳基胺。
[0125]
以下代表性实例旨在帮助说明本公开，并且其不旨在也不应解释为限制本发明的范围。
[0126][0127]
方法1，步骤1：2-(二苯甲基氨基)-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯：向50℃的2-氯-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代嘧啶-4-羧酸乙酯(4.0g，16.2mmol)和氟化铯(2.4g，16.2mmol)的dmf(70ml)混合溶液中分批加入二苯甲胺(4.5g，24.3mmol)。搅拌6小时后，用etoac稀释反应混合物，并用盐水洗涤。收集有机层，经na2so4干燥，然后真空浓缩。所得原料经硅胶柱层析(etoac/pet＝2:3，乙醚)进行纯化。将含有产物的组分合并在一起，真空去除溶剂，得到的所需产物为黄色固体(5.2g，收率：70％)。lcms：m/z＝394.1[m 1]。
[0128][0129]
方法1，步骤2：2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯：向2-[(二苯甲基)氨基]-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代嘧啶-4-羧酸乙酯(4.2g，10.7mmol)和碳酸铯(7.0g，21.4mmol)的dmf(100ml)混合溶液中分批加入甲基碘(4.6g，32.1mmol)。搅拌4小时后，用etoac稀释反应混合物，并用盐水洗涤。然后收集有机层，经na2so4干燥，然后真空浓缩。所得原料经反相c18层析(乙腈/水＝4:1(0.1％fa))进行纯化。将含有产物的组分合并在一起，真空去除溶剂，得到的所需产物为黄色固体(3.1g，收率：66％)。lcms：m/z＝408.3[m 1]。
[0130][0131]
方法2，步骤1：2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-羟基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯：向2-[(二苯甲基)(甲基)氨基]-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代嘧啶-4-羧酸乙酯(2.0g，4.90mmol)的dmf(80ml)混合溶液中加入固体溴化锂(6.4g，73.5mmol)。所得混合物加热至80℃，并搅拌8小时。然后，用etoac稀释反应混合物，用盐水洗涤，经na2so4干燥，并真空浓缩。所得原料经反相c18层析(乙腈/水＝1:1(0.1％fa))进行纯化。将含有产物的组分合并在一起，真空去除溶剂，得到的所需产物为米白色固体(1g，收率：50％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ9.87(s,1h),7.47
–
7.39(m,4h),7.27(dd,j＝8.3,6.9hz,4h),7.22
–
7.13(m,2h),5.58(s,1h),4.22(q,j＝7.1hz,2h),3.64(s,3h),2.49(s,3h),1.27(t,j＝7.1hz,3h)。lcms：m/z＝394.3[m 1]。
[0132][0133]
方法2，步骤2：2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-羟基-1-甲基-n-(2-甲代烯丙基)-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-甲酰胺：将2-[(二苯甲基)(甲基)氨基]-5-羟基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸乙酯(30mg，76.2μmol)和2-甲基丙烯-2-烯-1-胺(62.1mg，874μmol)装入微波瓶。然后，将混合物溶于dmf(0.9ml)中，密封反应釜，并加热至100℃。搅拌过夜后，用lcms观察所需产物的形成。然后，用制备型hplc纯化粗反应混合物。将含有产物的组分合并在一起，真空去除溶剂，得到所需产物(18.34mg，收率：57％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ8.59(s,1h),7.52
–
7.44(m,4h),7.25(dd,j＝8.3,6.9hz,4h),7.19
–
7.10(m,2h),5.80(s,1h),4.87
–
4.79(m,1h),4.70(t,j＝1.4hz,1h),3.82(d,j＝6.3hz,2h),3.64(s,3h),2.51(s,3h),1.70(s,3h)。
[0134]
表1
[0135]
[0136]
[0137][0138]
方法3，步骤1：2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸：向2-[(二苯甲基)(甲基)氨基]-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代嘧啶-4-羧酸乙酯(1.5g，3.60mmol)的thf(10ml)混合溶液中加入氢氧化锂(264.48mg，11.0mmol)和水(5.00ml)。将所得混合物在室温下搅拌6小时。完成后，用etoac洗涤水层，然后用hcl溶液使其ph值达到6。然后用ch2cl2提取产物。真空浓缩有机层，得到的所需产物为米白色固体(1.4g，收率：98％)。
[0139][0140]
方法3，步骤1：2-(二苯甲基(甲基)氨基)-5-羟基-1-甲基-6-氧代-n-(吡啶-2-基)-1,6-二氢嘧啶-4-甲酰胺：向2-[(二苯甲基)(甲基)氨基]-5-甲氧基-1-甲基-6-氧代-1,6-二氢嘧啶-4-羧酸(18.9mg，0.05mmol)的dmf(0.5ml)混合溶液中加入hatu试剂(28.5mg，0.075mmol)和hunigs碱(0.026ml，0.150mmol)，再加入嘧啶-2-胺(4.7mg，0.05mmol)。该反应在室温下搅拌1小时，此时，用lcms观察到完全转化为所需的酰胺。反应中加入溴化锂(43.4mg，0.5mmol)和水(0.10ml)，混合物加热至70℃，并用lcms进行监测。在此温度下搅拌4小时后，另外加入溴化锂(22mg，0.25mmol)，继续反应，在70℃时搅拌过夜。用lcms观察到完全转化为所需产物后，反应冷却至室温，并用ch2cl2稀释，用盐水洗涤，然后真空浓缩。用制备型hplc纯化粗反应原料，将含有产物的组分合并在一起，然后真空浓缩，得到的所需产物为白色固体(6.3mg，收率：28％)。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ＝8.47(d,j＝4.9hz,1h),8.14-8.03(m,1h),7.96-7.74(m,2h),7.51(d,j＝7.8hz,5h),7.33-7.19(m,7h),7.19-7.04(m,3h),5.69(s,1h),3.32-3.22(m,4h),2.56(s,3h)。
[0141]
表2
[0142]
[0143]
[0144]
[0145][0146]
生物化学测定
[0147]
1.使肿瘤细胞中的trex1沉默
[0148]
在感测胞质dna和随后的i型ifn产生后，cgas/sting途径的激活可以发生在肿瘤细胞和先天性免疫细胞，特别是树突状细胞中发生。为了评估trex1是否通过一种充分描述的在通过sting激动剂激活i型ifn后会经历免疫介导排斥的冷同基因型肿瘤模型来阻止i型ifn的产生，使用crispr在b16f10肿瘤细胞中将trex1敲低(图1a)。通过肿瘤细胞的dna转染积累胞质dna使得相对于亲本肿瘤细胞，trex1敲除b16f10细胞的ifnβ产生增加约5倍，这表明trex1减弱b16f10肿瘤细胞中cgas/sting途径的激活(图1b)。
[0149]
2.trex1正常型和缺陷型b16f10肿瘤细胞在体内的生长
[0150]
评估了trex1正常型和缺陷型b16f10肿瘤细胞在体内的生长。将c57bl/6j小鼠在右胁腹皮下接种300,000个亲本或trex1敲除b16f10肿瘤细胞。每周收集体重两次，并且每周进行肿瘤测量两到三次，在肿瘤变得可测量时开始并且在研究的剩余持续时间内持续。与亲本b16f10肿瘤相比，trex1被沉默的肿瘤的体积显著变小(图2)。
[0151]
在研究终止后的第19天采集肿瘤，并且消化成单细胞悬浮液以使得能够进行肿瘤浸润的免疫群体的流式细胞术定量。发现trex1敲除b16f10肿瘤表现出总体免疫细胞的显著增加，这反映肿瘤浸润的cd4和cd8t细胞以及浆细胞样树突状细胞(pdc)的数量增加(图3)。已知pdc在诱导抗原特异性抗肿瘤免疫应答中起核心作用，而已知t细胞是小鼠和人类中抗肿瘤功效的主要效应物。因此，缺乏trex1的肿瘤在免疫浸润上的深刻变化表明对后者肿瘤生长的抑制至少部分是免疫介导的。
[0152]
trex1的生物化学测定
[0153]
通过荧光测定评估化合物效力，该荧光测定测量在相对链上具有荧光团-淬灭剂对的定制dsdna底物的降解。dsdna的降解会释放游离荧光团以产生荧光信号。具体地，将7.5μl的含在n端带his-tev标签的全长人类trex1(在大肠杆菌(e.coli)中表达并在内部纯化)的反应缓冲液(50mm的tris(ph为7.4)，150mm的nacl，2mm的dtt，0.1mg/ml的bsa，0.01％(v/v)的吐温-20和100mm的mgcl2)添加到已经含有dmso中不同浓度的化合物(150nl)作为10点剂量应答的384孔板black proxiplate plus(珀金埃尔默(perkin elmer)中。向其中添加7.5μl的含dsdna底物(链a：5'tex615/gct agg cag 3'；链b：5'ctg cct agc/iabrqsp(集成dna技术)的反应缓冲液。最终浓度为具有1.0％dmso(v/v)的反应缓冲液中150pm的trex1、60nm的dsdna底物。在室温下25分钟之后，通过添加5μl终止缓冲液(与反应缓冲液加200mm的edta相同)来将反应淬灭。淬灭反应中的最终浓度为20μl体积中112.5pm的trex1、45nm的dna和50mm的edta。在室温下温育5分钟后，在激光源envision(perkin-elmer)中读取板材，在用570nm的光激发后测量615nm处的荧光。通过使用非线性最小二乘四参数拟合和genedata或graphpad prism(graphpad软件公司(graphpad software,inc.))将在615nm下测得的荧光相对于用终止缓冲液预淬灭的对照孔(100％抑制)和无抑制剂(0％抑制)对
照的比率进行比较来计算ic
50
值。
[0154]
trex2的生物化学测定
[0155]
通过荧光测定评估化合物效力，该荧光测定测量在相对链上具有荧光团-淬灭剂对的定制dsdna底物的降解。dsdna的降解会释放游离荧光团以产生荧光信号。具体地，将7.5μl的含在n端带his-tev标签的全长人类trex2(残基m44-a279，在大肠杆菌(e.coli)中表达并在内部纯化)的反应缓冲液(50mm的tris(ph为7.4)，150mm的nacl，2mm的dtt，0.1mg/ml的bsa，0.01％(v/v)的吐温-20和100mm的mgcl2)添加到已经含有dmso中不同浓度的化合物(150nl)作为10点剂量应答的384孔板black proxiplate plus(珀金埃尔默(perkin elmer)中。向其中添加7.5μl的含dsdna底物(链a：5'tex615/gct agg cag 3'；链b：5'ctg cct agc/iabrqsp(集成dna技术(idt))的反应缓冲液。最终浓度为具有1.0％dmso(v/v)的反应缓冲液中2.5nm的trex2、60nm的dsdna底物。在室温下25分钟之后，通过添加5μl终止缓冲液(与反应缓冲液加200mm的edta相同)来将反应淬灭。淬灭反应中的最终浓度为20μl体积中1.875pm的trex2、45nm的dna和50mm的edta。在室温下温育5分钟后，在激光源envision(perkin-elmer)中读取板材，在用570nm的光激发后测量615nm处的荧光。通过使用非线性最小二乘四参数拟合和genedata或graphpad prism(graphpad软件公司(graphpad software,inc.))将在615nm下测得的荧光相对于用终止缓冲液预淬灭的对照孔(100％抑制)和无抑制剂(0％抑制)对照的比率进行比较来计算ic
50
值。
[0156]
结果在表1中示出。trex1 ic
50
：a＝《0.1μm；b＝0.1至1μm；c＝1至10μm；d＝》10μm。trex2 ic
50
：a＝《1μm；b＝1至10μm；c＝10至100μm；d＝》100μm。
[0157]
表3
[0158]
实例trex1 ic
50
trex2 ic
50
1cc2cc3dc4dc5cc6cc7cc8cb9dc10cc11dc12dc13bc14bb15aa16aa17aa18ba
19cc20ba21ba22aa23cb24bb25ba26cb27dc28dc29ba30ba31bb32ab33bc34cb35cc36bb37cc38cc39bc
[0159]
虽然我们已经描述了多个实施例，但显而易见的是，可以改变本发明的基础实例以提供利用本发明的化合物和方法的其它实施例。因此，应了解，本发明范围应该由所附权利要求书而不是所举例表示的特定实施例来限定。
[0160]
在整个本技术中引用的所有参考文献(包含文献参考、授予的专利、公开的专利申请以及共同待决专利申请)的内容特此以全文引用的方式明确地并入本文。除非另有定义，否则本文所使用的所有技术术语和科学术语均与本领域的普通技术人员通常已知的含义一致。