基于UPLC同时测定烟用香精中十种羰基化合物含量的方法与流程

基于uplc同时测定烟用香精中十种羰基化合物含量的方法
技术领域
1.本发明涉及烟用香精中羰基化合物的分析测定方法技术领域，尤其涉及一种基于uplc同时测定烟用香精中十种羰基化合物含量的方法。


背景技术：

2.在现有技术中，烟用香精在传统卷烟和电子烟油中的应用已经相当成熟，无论是烟丝在加香工艺中对吸味和品质的改善，还是烟油中不同风味口感的调配，都起到至关重要的作用，然而在其燃烧和雾化过程中，羰基化合物是一类对人体感觉系统和呼吸系统有强烈刺激作用的有害物质；特别是甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮、丁醛、乙偶姻和双乙酰等羰基化合物，各国已制定了相应的法规对其含量进行管控，因此，针对烟用香精中这十种羰基化合物建立高效、快速的分析方法尤为重要。
3.由于烟用香精基质的多样性和复杂性使得定性定量分析具有很高难度；进一步还需要从这种复杂基质中分离出十种物质相互分离的峰进行定性定量分析，无疑更具有处理难度和分析复杂性；而在现有技术中公开，申请号为201510523425.5的文件公开一种电子烟烟液中8种羰基化合物的测定方法，其采用稀盐酸配制的dnph溶液与电子烟烟液中羰基化合物发生衍生化反应，采用tris碱调节反应溶液ph，保持反应产物稳定性，采用hplc分析测定电子烟烟液中8种羰基化合物；但是，相较于前述所需要分析的十种物质，还有乙偶姻和双乙酰无法在该方法中进行分析测定，且整个方法的分析时长也较长；另外，还有申请号为201510425214.8的文件公开了一种使用uplc-ie法测定卷烟烟丝中主要羰基化合物的方法，其通过超高效液相色谱等度洗脱法(uplc-ie)分析卷烟烟丝中的主要羰基化合物，但是该方法也是只能测定“甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2－丁酮、丁醛”，而无法测定乙偶姻和双乙酰这两种羰基化合物；由此可见，在现有技术中，由于烟用香精基质复杂度高，无法同时分析测定甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮、丁醛、乙偶姻和双乙酰这十种羰基化合物，因此有必要建立一种准确快速测定烟用香精中十种羰基化合物的分析方法。


技术实现要素：

4.针对上述技术中存在的：无法实现对烟用香精中十种羰基化合物进行有效分离、并准确快速测定的问题；本技术提供一种技术方案进行解决。
5.为实现上述目的，本发明提供一种基于uplc同时测定烟用香精中十种羰基化合物含量的方法，包括以下步骤：
6.(1)衍生化试剂的配置
7.称取2.00g dnph-hcl于2l烧杯中，分别加入500ml乙腈和40ml磷酸水溶液，溶解后加入500ml水混合均匀得到衍生化试剂；转入棕色试剂瓶中避光储存；
8.(2)标准溶液的制备
9.分别称取0.1000g乙偶姻和双乙酰于10ml棕色容量瓶中，用乙腈稀释并定容至刻
度得到乙偶姻溶液和双乙酰溶液，-18℃避光储存；然后量取0.1ml乙偶姻溶液和0.1ml双乙酰溶液于25ml棕色容量瓶中，加入20ml衍生化试剂，摇匀，室温反应20min，加入1ml吡啶，用乙腈定容至刻度，即得第一混合标准储备液；
10.分别精密称取0.0250g甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮和丁醛的dnph衍生化合物于25ml棕色容量瓶中，用50％乙腈溶解定容至刻度，即得第二混合标准储备液；
11.分别精确量取0.5ml第一混合标准储备液和0.3ml第二混合标准储备液于50ml棕色容量瓶中用50％乙腈溶解定容至刻度，即得混合标准母液；
12.精确量取混合标准母液0.3ml、0.5ml、1ml、3ml、5ml至10ml棕色容量瓶中，用50％乙腈溶解定容至刻度，得到梯度标准溶液；
13.(3)待测试样品的制备
14.称取电子烟液0.8000g于10ml棕色容量瓶中，加入8ml衍生化试剂，摇匀，室温反应20min，加入0.4ml吡啶，用乙腈定容至刻度；再用ptfe滤膜过滤得到待测样品滤液；
15.超高效液相色谱条件：
16.色谱柱采用hss t3，规格为2.1
×
100mm，2.7μm；
17.流动相：a相为0.1％甲酸溶液：乙腈＝80:20；b相为0.1％甲酸溶液：乙腈＝50:50；c相为0.1％甲酸乙腈溶液；梯度洗脱条件如下表：
[0018][0019]
流速0.3ml/min；柱温32℃；检测波长365nm；进样量10μl；将梯度标准溶液和待测样品滤液按照上述步骤测定。其中，以上实验方法中所采用的乙腈、甲酸、磷酸、吡啶均为液相色谱纯试剂；dnph-hcl纯度≥98％；在标准溶液中使用的乙偶姻、甲醛、乙醛、双乙酰、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮和丁醛；其纯度均≥98.0％。更优选的，首先进行空白样品试验，能够排除基质的干扰。
[0020]
本发明的有益效果是：本发明公开一种基于uplc同时测定烟用香精中十种羰基化
合物含量的方法；其通过超高液相色谱法、并特殊选定hss t3色谱柱，以及采用dnph-hcl(2,4-二硝基苯肼盐酸盐)柱前衍生和三元流动相进行梯度洗脱，辅以适配的其它实验手段，实现了同时分析测定烟用香精中的甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮、丁醛、乙偶姻和双乙酰十种羰基化合物；相较于现有技术中仅能测定其中八种羰基化合物技术效果显著，能够快速有效对烟用香精中十种羰基化合物达到完全分离。
附图说明
[0021]
图1为本发明对十种羰基化合物标准对照品试验得到的液相色谱图；
[0022]
图2为本发明的1号电子烟液样品的液相色谱图；
[0023]
图3为本发明的2号电子烟液样品的液相色谱图；
[0024]
图4为本发明的3号电子烟液样品的液相色谱图；
[0025]
图5为本发明的4号电子烟液样品的液相色谱图；
[0026]
图6为本发明的5号电子烟液样品的液相色谱图；
[0027]
图7为本发明的6号电子烟液样品的液相色谱图。
具体实施方式
[0028]
为了更清楚地表述本发明，下面结合附图对本发明作进一步地描述。
[0029]
在下文描述中，给出了普选实例细节以便提供对本发明更为深入的理解。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例。应当理解所述具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
[0030]
应当理解的是，当在本说明书中使用术语“包含”和/或“包括”时，其指明存在特征、整体、步骤、操作、元件或组件，但不排除存在或附加一个或多个其他特征、整体、步骤、操作、元件、组件或它们的组合。
[0031]
如背景技术中所述，现有技术中烟用香精由于基质实在复杂，采用uplc-ie法和hplc法均只能做到对其中八种物质的有效分离，而且在其方法中还存在公开不充分的问题，在此不赘述；由此可见，复杂基质中对目标物质的分离难度非常高，并且也是本领域技术人员长期想要解决而未能解决的问题；而本发明，则采用区别于现有技术中技术手段的方案，能够做到同时有效分离十种物质；为了解决这一问题，本技术公开一种技术方案。
[0032]
本发明提供一种基于uplc同时测定烟用香精中十种羰基化合物含量的方法，包括以下步骤：
[0033]
(1)衍生化试剂的配置
[0034]
称取2.00g dnph-hcl(2,4-二硝基苯肼盐酸盐)于2l烧杯中，分别加入500ml乙腈和40ml磷酸水溶液，溶解后加入500ml水混合均匀得到衍生化试剂；转入棕色试剂瓶中避光储存；有效期为1周；
[0035]
(2)标准溶液的制备
[0036]
分别称取0.1000g乙偶姻和双乙酰于10ml棕色容量瓶中，用乙腈稀释并定容至刻度(即10ml)得到乙偶姻溶液和双乙酰溶液，-18℃避光储存；然后量取0.1ml乙偶姻溶液和0.1ml双乙酰溶液于25ml棕色容量瓶中，加入20ml衍生化试剂，摇匀，室温反应20min，加入1ml吡啶，用乙腈定容至刻度(即25ml)，即得第一混合标准储备液；在现有技术中，乙偶姻和
双乙酰没有能够对应的dnph衍生物对照品，通过这种方法则能够得到对应的衍生物进行分析，也是完成本次测定的关键手段；
[0037]
分别精密称取0.0250g甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮和丁醛的dnph衍生化合物于25ml棕色容量瓶中，用50％乙腈溶解定容至刻度(即25ml)，即得第二混合标准储备液；
[0038]
分别精确量取0.5ml第一混合标准储备液和0.3ml第二混合标准储备液于50ml棕色容量瓶中用50％乙腈溶解定容至刻度(即50ml)，即得混合标准母液；
[0039]
精确量取混合标准母液0.3ml、0.5ml、1ml、3ml、5ml至10ml棕色容量瓶中，用50％乙腈溶解定容至刻度，得到梯度标准溶液；
[0040]
(3)待测试样品的制备
[0041]
称取电子烟液0.8000g于10ml棕色容量瓶中，加入8ml衍生化试剂，摇匀，室温反应20min，加入0.4ml吡啶，用乙腈定容至刻度；再用ptfe滤膜过滤得到待测样品滤液；
[0042]
超高效液相色谱条件：
[0043]
色谱柱采用hss t3，规格为2.1
×
100mm，2.7μm；
[0044]
流动相：a相为0.1％甲酸溶液：乙腈＝80:20；b相为0.1％甲酸溶液：乙腈＝50:50；c相为0.1％甲酸乙腈溶液；梯度洗脱条件如下表：其所示的0.1％和份数比为体积百分比，为本领域的公知常识常规解释，不再赘述；
[0045][0046]
流速0.3ml/min；柱温32℃；检测波长365nm；进样量10μl；将梯度标准溶液和待测样品滤液按照上述步骤测定。
[0047]
作为优选，乙腈、甲酸、磷酸、吡啶均为液相色谱纯试剂；dnph-hcl纯度≥98％；在标准溶液中使用的乙偶姻、甲醛、乙醛、双乙酰、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮和丁醛；其纯度均≥98.0％。更优选的，首先进行空白样品试验，能够排除基质的干扰。
[0048]
实施例
[0049]
采用上述方法，对市场上6批烟用香精进行分析测试；其结果如下：
[0050][0051][0052]
备注：—表示未检出；结果中甲醛含量为经过换算后的甲醛含量；
[0053]
具体的，参见图1-图7，其中在图中所用的缩写分别为：acn：表示乙偶姻-dnph；for：表示甲醛-dnph；ace：表示乙醛-dnph；dia：表示双乙酰-dnph；acet：表示丙酮-dnph；
acr：表示丙烯醛-dnph；pio：表示丙醛-dnph；cro：表示巴豆醛-dnph；buta：表示2-丁醛-dnph；tyra：表示丁醛-dnph。图1是通过本方法对十种羰基化合物标准对照品试验得到的液相色谱图；图2为1号电子烟液样品的液相色谱图，图3为2号电子烟液样品的液相色谱图，图4为3号电子烟液样品的液相色谱图，图5为4号电子烟液样品的液相色谱图，图6为5号电子烟液样品的液相色谱图，图7为6号电子烟液样品的液相色谱图；由图中出峰可见，该十种物质均能够被准确分离，且可以看到在烟用香精中的基质成分非常复杂，对目标成分干扰大，不利于准确的定性定量，而本方案中采用三元梯度洗脱，配合其它的实验手段，因此能够清晰、准确分离这十种羰基化合物的峰，难度非常高；同时从图1中可以知道，成功分离得到十种羰基化合物的峰仅需要33min，技术效果远远优于现有技术，对于实际应用来说具有重大意义和价值。
[0054]
本发明的优势在于：
[0055]
通过超高液相色谱法，并特殊选定hss t3色谱柱，以及采用dnph-hcl(2,4-二硝基苯肼盐酸盐)柱前衍生和三元流动相进行梯度洗脱，辅以适配的其它实验手段，实现了同时分析测定烟用香精中的甲醛、乙醛、丙酮、丙烯醛、丙醛、巴豆醛、2-丁酮、丁醛、乙偶姻和双乙酰十种羰基化合物；相较于现有技术中仅能测定其中八种羰基化合物技术效果显著，能够快速有效对烟用香精中十种羰基化合物达到完全分离。
[0056]
以上公开的仅为本发明的几个具体实施例，但是本发明并非局限于此，任何本领域的技术人员能思之的变化都应落入本发明的保护范围。