一组胰腺炎导致ADM病变的肠道菌群标志物及其筛选方法与应用与流程

技术特征：
和它们的“功能”对应起来。4.如权利要求3所述的一组胰腺炎导致adm病变的肠道菌群标志物的筛选方法，其特征是，步骤(1)中所述的胆源性胰腺炎模型和so组的构建的具体方法为：大鼠禁食12h，自由饮水，腹腔注射40mg/kg戊巴比妥钠进行麻醉，麻醉成功后取仰卧位，固定于鼠板，上腹部脱毛备皮，在无菌操作下行正中切口入腹，充分暴露术野，用小动脉夹夹闭肝门处胰胆管，于胰胆管汇合处按0.1mg/100g体重逆行注射5.0％牛磺胆酸钠；作为对照，so组大鼠于胰胆管逆行注射等量无菌生理盐水。5.如权利要求3所述的一组胰腺炎导致adm病变的肠道菌群标志物的筛选方法，其特征是，步骤(2.1)dna提取的详细方法为：
①
称取100mg样本和200mg玻璃珠于ep管中，加入300μl sp1和10μl蛋白酶k，涡旋混匀后，70℃水浴10min；
②
将ep管置于冰上2min，然后加入100μl sp2,涡旋混匀，冰上放置5min；
③
13,000-20,000g离心5min，吸取上清液到1.5ml ep管中，并加入200μl htr溶液，涡旋混匀后，室温静置2min；
④
13,000g离心2min，取上清液转到ep管中，加入10μlrnasea，涡旋混匀后于70℃水浴3min，再加入250μl无水乙醇和250μl bl buffer，涡旋混匀；
⑤
将上述溶液转到hibind柱子中，置于2ml收集管，13,000g离心1min；将hibind柱子置于新的2ml收集管，然后加入500μl hb buffer，13,000g离心1min，弃滤液和收集管；换新2ml收集管，加入750μldnawash buffer，13,000g离心1min，弃滤液并将柱子重新放回收集管中；
⑥
将柱子置于干净的1.5ml离心管中，加200μl的60℃-70℃预热的elution buffer洗脱，室温静置2min后，13,000g离心1min，滤液即是总dna。6.如权利要求3所述的一组胰腺炎导致adm病变的肠道菌群标志物的筛选方法，其特征是，步骤(2.2)中所述的pcr扩增的变性、退火、延伸的条件为：98℃初始变性30s，98℃变性10s，54℃退火30s，72℃延伸45s，共45个循环，最后72℃延伸10min。7.如权利要求3所述的一组胰腺炎导致adm病变的肠道菌群标志物的筛选方法，其特征是，步骤(2.3)中所述的上机测序的具体步骤为：使用miseq reagent kitv3600cycles试剂在illumina miseq测序仪进行2
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300bp的双端测序。8.一组胰腺炎导致adm病变的肠道菌群标志物的应用，其特征是，应用在制备胰腺炎愈后监测检测产品中。9.如权利要求1所述的一组胰腺炎导致adm病变的肠道菌群标志物的应用，其特征是，所述产品包括试剂盒、试纸、芯片。10.一组胰腺炎导致adm病变的肠道菌群标志物的应用，其特征是，应用在筛选治疗或预防胰腺炎的药物中。

技术总结
本发明属于肠道微生物技术领域，公开了一组胰腺炎导致ADM病变的肠道菌群标志物及其筛选方法与应用，肠道菌群标志物包括微生物标志物1乳酸杆菌属Lactobacillus、微生物标志物2孪生球菌属Gemella和微生物标志物3拟杆菌属Bacteroides，与急性胰腺炎具有显著的相关性，是判断胰腺炎是否发生ADM转化最为灵敏和特异的、先于临床病理学特征的标志物，对临床医生进行胰腺炎患者管理具有一定的指导作用，可以应用在制备胰腺炎预后监测检测试剂盒中，或应用在筛选治疗或预防胰腺炎的药物中。用在筛选治疗或预防胰腺炎的药物中。


技术研发人员：李南南
受保护的技术使用者：康德（深圳）生物技术有限公司
技术研发日：2022.11.11
技术公布日：2023/2/3