一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法

1.本发明涉及花粉管生长路径检测技术领域，更具体地说是涉及一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法。


背景技术：

2.砂仁(amomum villosum lour.)是姜科，豆蔻属多年生草本植物。以果实入药，其果实产量取决于从花芽分化发育到开花、结果，直到座果各个生殖阶段表现，其中结果阶段结果率是限制砂仁产量的一个关键阶段，从以往的砂仁低产地调查中发现砂仁结果率只有2-5％，严重制约了砂仁产量。实际上，成功结果取决于一系列复杂的生殖过程，包括成熟花粉降落并粘附到柱头上，在柱头上萌发形成花粉管，花粉管再经过花柱、子房，进入胚珠，完成受精。清楚这一个过程的影响因素，才可以更好的提高产量，但是在此之前，需要先找到一种方法，可以快速检测到这一个过程。
3.目前，砂仁这方面研究较少，有使用石蜡切片观察砂仁花粉管在花柱、子房及胚珠中生长的研究，但该方法主要是用来观察砂仁雌配子体发育和授精过程的，且相对处理过程复杂，耗时耗力，不易观察。
4.因此，如何提供一种便捷、快速、高效的花粉管生长路径检测方法，可以完整的检测到砂仁花粉粒降落并粘附到柱头上，在柱头上萌发形成花粉管，花粉管再经过花柱、子房，进入胚珠的路径是本领域技术人员亟需解决的问题。


技术实现要素：

5.有鉴于此，本发明提供了一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法，通过faa固定，naclo、naoh溶液透明软化、苯胺蓝染色、分类装片及压片的过程，可以检测到花粉管的生长路径，为提高砂仁产量奠定了理论基础。
6.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
7.一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法，过程包括：
8.1)采样与固定：采集授粉的花朵，将雌蕊在faa中固定；
9.2)透明、软化、染色：将保存在faa固定液中的雌蕊取出，置于naclo溶液中，再转移至naoh溶液中透明软化，然后置于苯胺蓝染色液中染色；
10.3)装片：将雌蕊从花柱与子房顶端连接处切断，柱头及花柱部分理顺，滴加苯胺蓝染液，盖上盖玻片，完成柱头及花柱的装片；剩余子房部分置于新的载玻片上，滴加苯胺蓝染液，制备子房装片；
11.(4)压片及观察：将装片置于荧光显微镜下，观察花粉管的生长路径。
12.作为上述技术方案优选的技术方案，步骤1)中，采集已授粉的砂仁花花朵，剥离花瓣和雄蕊，留下包括花柱和子房在内的雌蕊部分作为待检材料置于faa中固定，避光保存。
13.作为上述技术方案优选的技术方案，faa由70％乙醇：38％甲醛:乙酸按照8:1:1的体积比配比而成。
14.作为上述技术方案优选的技术方案，faa固定时间不少于48h。
15.作为上述技术方案优选的技术方案，步骤2)中，naclo溶液有效氯含量为1.6％-4.8％，浸泡时间2-6h，naoh溶液浓度为8-20mol/l，浸泡时间2-6h。
16.作为上述技术方案优选的技术方案，步骤3)中，制备子房装片的过程为：用解剖刀从子房中间纵切，两个切面向着载玻片平展摊开，使材料完全浸润在染色液中，盖上另一片载玻片，完成子房装片。
17.作为上述技术方案优选的技术方案，对于子房内有花粉管的材料，完成子房压片观察后，取走上面载玻片，用解剖刀或镊子轻敲并移动子房，使子房切面部分胚珠涂抹于下面载玻片上，之后移走子房，滴加苯胺蓝染液，使胚珠浸润在染色液中，盖上盖玻片，完成胚珠装片。
18.作为上述技术方案优选的技术方案，步骤4)中，完成装片的柱头及花柱片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使柱头及花柱分散，露出包裹于柱头和花柱中的花粉及花粉管，便于观察；完成装片的子房片置于荧光显微镜下，食指轻压上部载玻片，使切面内的胚珠及胎座尽量处于同一个平面，便于观察进入子房内的花粉管生长路径；完成装片的胚珠装片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使胚珠从珠孔处开裂，观察花粉管进入珠心的路径。
19.经由上述的技术方案可知，与现有技术相比，本发明取得的技术效果是：
20.1)“透明及软化”阶段，由于整个雌蕊各部分，包括柱头、花柱、子房、胚珠的大小、软硬不同，因此完整材料透明及软化处理时，处理太过，小的材料包括柱头、花柱容易溶化，影响花粉粒或花粉管的观察；处理不够时，大的材料像子房、胚珠，后期不易染色，亦影响花粉管观察。经过不断试验naclo和naoh溶液处理浓度及处理时间对雌蕊各部分透化效果、软化效果及染色效果的观察，最终找到最佳的naclo和naoh溶液处理浓度及处理时间组合，在保证整个雌蕊材料完整性情况下，对各部分材料进行了一定程度透明及软化，使材料易染色，花粉管或花粉管易显荧光。
21.2)本发明的装片方法根据雌蕊各部分大小、软硬等特性，分类装片，将一个完成雌蕊分成“柱头-花柱”、“子房”、“胚珠”3张片子，确保了后期“压片及观察”阶段花粉粒或花粉管从柱头到胚珠珠心全生长路径的顺利观察，其中“柱头-花柱”片中柱头及花柱相对软，厚度一致，装一张片，盖上盖玻片，后期即可将材料压开；“子房”片相对大、厚、硬，单独装片，将子房从中间纵切，使切面向着载玻片平展摊开，方便观察花粉管进入子房路径，且使用载玻片盖片，方便后期“压片及观察”时，给子房增加压力；“胚珠”片只留胚珠在载玻片上，方便后期“压片及观察”，避免了直接在子房中处理胚珠，因为子房壁及胚珠重叠等原因影响，使胚珠不易破碎，影响花粉管进入胚珠珠心观察。
22.3)通过本发明压片方法，可最大限度将花粉粒或花粉管在各部位的生长路径展露在荧光显微镜下，确保观察到花粉粒或花粉管从柱头到花柱、子房、直到胚珠珠心生长的清晰完整路径。多数植物花粉在柱头表面萌发，荧光显微镜下可直接看到柱头上花粉管粘附萌发情况。试验过程中，发现砂仁柱头上的花粉粒，只有通过柱头上漏斗形开口进入柱头内部的花粉粒才萌发生长，而柱头表面并无花粉粘附及萌发，因此观察“柱头-花柱”片子时，需要食指轻敲盖玻片，使柱头及花柱分散，露出包裹于柱头和花柱内部的花粉及花粉管，以便于观察。观察“子房”片子中花粉管进入子房路径时，通过食指轻压上部载玻片的方法，在
最大限度保留子房内容结构情况下，使切面内的胚珠及胎座尽量处于同一个平面，可清晰观察到进入子房内的花粉管生长路径；“胚珠”片子中花粉管进入胚珠路径观察时，通过食指轻敲盖玻片的方法，使子房从珠孔处开裂，可清晰观察到花粉管进入珠心的路径。
附图说明
23.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据提供的附图获得其他的附图。
24.图1附图为naclo溶液处理后砂仁花粉管生长路径荧光显微观察图；其中，a-d为对照，依次代表:授粉砂仁雌蕊未经naclo溶液，柱头、花柱、子房，及胚珠染色情况，及花粉粒或花粉管在各部分荧光染色情况；e-h依次代表:在有效氯含量为1.6％-6.4％naclo溶液各处理1-8h后，柱头、花柱、子房，及胚珠染色情况，及花粉粒或花粉管在各部分荧光染色情况；i-l依次代表:在有效氯含量为1.6％-4.8％naclo溶液中处理24h后，或者有效氯含量为8％naclo溶液中处理1h后，柱头、花柱、子房，及胚珠染色情况，及花粉粒或花粉管在各部分荧光染色情况。箭头指向花粉粒或花粉管；
25.图2附图为naoh溶液处理后砂仁花粉管生长路径荧光显微观察图；其中，a-d依次代表:授粉砂仁雌蕊在4mol/lnaoh溶液中各处理1-6h，或在8-20mol/lnaoh溶液中各处理1h后，柱头、花柱、子房，及胚珠染色情况，及花粉粒或花粉管在各部分荧光染色情况；e-h依次代表:授粉砂仁雌蕊在8-20mol/lnaoh溶液中各处理2-6h后，柱头、花柱、子房，及胚珠染色情况，及花粉粒或花粉管在各部分荧光染色情况，箭头指向花粉粒或花粉管；
26.图3附图为naclo溶液和naoh溶液依次处理后砂仁花粉管生长路径荧光显微观察图；其中，a-d依次代表:授粉砂仁雌蕊在有效氯含量为1.6％-4.8％naclo溶液及8-20mol/lnaoh溶液中各处理1h后，柱头、花柱、子房，及胚珠染色情况，及花粉粒或花粉管在各部分荧光染色情况；e-h依次代表:授粉砂仁雌蕊在有效氯含量为1.6％-4.8％naclo溶液及8-20mol/lnaoh溶液中各处理2-6h后，柱头、花柱、子房，及胚珠染色情况，及花粉粒或花粉管在各部分荧光染色情况，箭头指向花粉粒或花粉管。
27.图4附图为不同装片处理花粉及花粉管生长路径图，a-d表示完整雌蕊且子房未切装片后，压片观察到的子房未破裂(a)、子房破裂露出胚珠(b-c)，柱头及花柱(d)各部分的形态，及其中的花粉或花粉管；
28.图5,附图为不同装片处理花粉及花粉管生长路径图，完整雌蕊且子房纵切装片后，轻压观察到的子房(a)、柱头及花柱(b)的形态及其中的花粉或花粉管，及用力压片观察到的子房(c)、柱头及花柱(d)的形态及其中的花粉或花粉管；箭头指向花粉粒或花粉管。
具体实施方式
29.下面将结合本发明实施例中的附图，对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
30.实施例1
31.一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法，过程包括：
32.(1)采样与固定：摘下已授粉2天的砂仁花花朵，剥离花瓣和雄蕊，仅留下包括花柱和子房在内的雌蕊部分作为待检材料置于faa(70％乙醇：38％甲醛:乙酸＝8:1:1)中固定，避光保存；
33.(2)透明及软化处理：将保存在faa固定液中48小时的待检材料取出后置于有效氯含量为1.6％的naclo溶液中2小时，再转移至8mol/lnaoh溶液中2小时，达到透明及软化的目的；
34.(3)染色：将完成透明及软化的待检材料置于质量分数为0.2％水溶性苯胺蓝染液中避光染色，过夜；
35.(4)装片：用镊子取出经过染色的待检材料，置于载玻片上，用解剖刀将雌蕊从花柱与子房顶端连接处切断，柱头及花柱部分理顺，滴加苯胺蓝染液，使材料完全浸润在染色液中，盖上盖玻片，完成“柱头及花柱”装片；剩余子房部分置于新的载玻片上，用解剖刀从子房中间纵切，两个切面向着载玻片平展摊开，滴加苯胺蓝染液，使材料完全浸润在染色液中，盖上另一片载玻片，完成“子房”装片；对于子房内有花粉管的材料，完成子房压片观察后，取走上面载玻片，用解剖刀或镊子轻敲并移动子房，使子房切面部分胚珠涂抹于下面载玻片上，之后移走子房，滴加苯胺蓝染液，使胚珠浸润在染色液中，盖上盖玻片，完成“胚珠”装片；
36.(5)压片及观察：完成装片的“柱头及花柱”片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使柱头及花柱分散，露出包裹于柱头和花柱中的花粉及花粉管，便于观察；完成装片的“子房”片置于荧光显微镜下，食指轻压上部载玻片，使切面内的胚珠及胎座尽量处于同一个平面，便于观察进入子房内的花粉管生长路径；完成装片的“胚珠”片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使胚珠从珠孔处开裂，观察花粉管进入珠心的路径。
37.实施例2
38.一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法，过程包括：
39.(1)采样与固定：摘下已授粉2天的砂仁花花朵，剥离花瓣和雄蕊，仅留下包括花柱和子房在内的雌蕊部分作为待检材料置于faa(70％乙醇：38％甲醛:乙酸＝8:1:1)中固定，避光保存；
40.(2)透明及软化处理：将保存在faa固定液中50h的待检材料取出后置于有效氯含量为4.8％的naclo溶液中6小时，再转移至20mol/lnaoh溶液中6小时，达到透明及软化的目的；
41.(3)染色：将完成透明及软化的待检材料置于质量分数为0.2％水溶性苯胺蓝染液中避光染色，过夜；
42.(4)装片：用镊子取出经过染色的待检材料，置于载玻片上，用解剖刀将雌蕊从花柱与子房顶端连接处切断，柱头及花柱部分理顺，滴加苯胺蓝染液，使材料完全浸润在染色液中，盖上盖玻片，完成“柱头及花柱”装片；剩余子房部分置于新的载玻片上，用解剖刀从子房中间纵切，两个切面向着载玻片平展摊开，滴加苯胺蓝染液，使材料完全浸润在染色液中，盖上另一片载玻片，完成“子房”装片；对于子房内有花粉管的材料，完成子房压片观察后，取走上面载玻片，用解剖刀或镊子轻敲并移动子房，使子房切面部分胚珠涂抹于下面载
玻片上，之后移走子房，滴加苯胺蓝染液，使胚珠浸润在染色液中，盖上盖玻片，完成“胚珠”装片；
43.(5)压片及观察：完成装片的“柱头及花柱”片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使柱头及花柱分散，露出包裹于柱头和花柱中的花粉及花粉管，便于观察；完成装片的“子房”片置于荧光显微镜下，食指轻压上部载玻片，使切面内的胚珠及胎座尽量处于同一个平面，便于观察进入子房内的花粉管生长路径；完成装片的“胚珠”片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使胚珠从珠孔处开裂，观察花粉管进入珠心的路径。
44.实施例3
45.一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法，过程包括：
46.(1)采样与固定：摘下已授粉2天的砂仁花花朵，剥离花瓣和雄蕊，仅留下包括花柱和子房在内的雌蕊部分作为待检材料置于faa(70％乙醇：38％甲醛:乙酸＝8:1:1)中固定，避光保存；
47.(2)透明及软化处理：将保存在faa固定液中52h的待检材料取出后置于有效氯含量为3.2％的naclo溶液中4小时，再转移至10mol/lnaoh溶液中4小时，达到透明及软化的目的；
48.(3)染色：将完成透明及软化的待检材料置于质量分数为0.2％水溶性苯胺蓝染液中避光染色，过夜；
49.(4)装片：用镊子取出经过染色的待检材料，置于载玻片上，用解剖刀将雌蕊从花柱与子房顶端连接处切断，柱头及花柱部分理顺，滴加苯胺蓝染液，使材料完全浸润在染色液中，盖上盖玻片，完成“柱头及花柱”装片；剩余子房部分置于新的载玻片上，用解剖刀从子房中间纵切，两个切面向着载玻片平展摊开，滴加苯胺蓝染液，使材料完全浸润在染色液中，盖上另一片载玻片，完成“子房”装片；对于子房内有花粉管的材料，完成子房压片观察后，取走上面载玻片，用解剖刀或镊子轻敲并移动子房，使子房切面部分胚珠涂抹于下面载玻片上，之后移走子房，滴加苯胺蓝染液，使胚珠浸润在染色液中，盖上盖玻片，完成“胚珠”装片；
50.(5)压片及观察：完成装片的“柱头及花柱”片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使柱头及花柱分散，露出包裹于柱头和花柱中的花粉及花粉管，便于观察；完成装片的“子房”片置于荧光显微镜下，食指轻压上部载玻片，使切面内的胚珠及胎座尽量处于同一个平面，便于观察进入子房内的花粉管生长路径；完成装片的“胚珠”片置于荧光显微镜下，食指轻敲盖玻片，使胚珠从珠孔处开裂，观察花粉管进入珠心的路径。
51.实施例4不同浓度不同时间naclo溶液处理后花粉管生长路径的荧光显微观察试验
52.该试验过程同实施例3，采用了不同浓度不同时间naclo溶液处理，具体见表1，其中0％、0h naclo溶液处理设为对照，其他步骤内容完全同实施例1。
53.表1不同浓度不同时间naclo溶液处理设置
[0054][0055]
结果发现，对照未经naclo溶液处理，直接0.2％苯胺蓝过夜染色，荧光观察时，发现材料硬，柱头、花柱及胚珠均不易压开，各部分染色浅，看不到花粉管荧光染色生长路径(图1,a-d)。
[0056]
naclo溶液处理可以透化材料，有效氯含量为1.6％-6.4％naclo溶液处理1-8h后，完整柱头内部的花粉粒比对照更清晰，但看不到花粉管，压开后可观察到内部的花粉粒及花粉管，荧光颜色浅，呈亮浅黄色或亮浅蓝色；子房内花粉管及胚珠均染色浅，花粉管不易观察到(图1,i-l)。有效氯含量为1.6％-6.4％naclo溶液处理24h后，有效氯含量为8％naclo溶液处理1h后，会出现透化太过问题，压开柱头及花柱，只可以看到花粉粒，花粉管透化太过，与花柱同色，观察不到花粉管，子房壁、胚珠、花粉管同色，看不到花粉管在其中生长的路径(图1,e-h)。综合考虑材料透化后花粉管荧光染色效果，选择有效氯含量为1.6％-6.4％naclo溶液，处理1-8h为宜。
[0057]
同时，naclo溶液处理可以软化材料，有效氯含量为1.6％naclo溶液处理1h后，柱头及花柱较对照容易压开，子房也容易纵切，胚珠较易从珠孔处压开；软化效果随着浓度及软化时间增加而提高，有效氯含量为8％naclo溶液处理1h后，柱头及花柱开始变软溶化，处理2h后，柱头及花柱溶化，子房壁太过软化，不易切割观察。有效氯含量为1.6％-6.4％naclo溶液处理8h后，材料依然基本完整，不会软化溶解，但高浓度时，花柱容易从子房顶端断裂。综合考虑材料软化程度及完整性，选择有效氯含量为1.6％-4.8％naclo溶液，处理1-6h为宜。
[0058]
综合考虑naclo溶液处理后，材料透化后花粉管荧光染色效果及材料软化程度及完整性，选择有效氯含量为1.6％-4.8％naclo溶液，处理时间1-6h为宜。
[0059]
实施例5不同浓度不同时间naoh溶液处理后花粉管生长路径的荧光显微观察试验
[0060]
该试验过程同实施例3，其中的“透明及软化处理”步骤本实例中设置了不同浓度、不同时间naoh溶液处理，具体见表2，其他步骤内容完全同发明内容。
[0061]
表2不同浓度不同时间naoh溶液处理设置
[0062][0063]
结果发现，naoh溶液处理可促进材料染色，试验中各处理材料均可染色，随着请naoh溶液处理浓度及处理时间增加，花粉管荧光染色效果提高。从总的结果看，在8-20mol/lnaoh溶液中处理2-6h，花粉及花粉管荧光染色效果(图2,e-h)好于其他处理结果(图2,a-d)，特别在子房中，花粉管荧光在普遍弱，较难观察。因此初步选择naoh溶液浓度8-20mol/l，处理2-6h为宜。
[0064]
另外，naoh溶液处理不会透化及软化雌蕊材料，柱头、花柱及胚珠均较硬，不易压开，因此花粉管在柱头及花柱上的生长路径，及花粉管进入珠心的路径均不易观察到。
[0065]
实施例6不同浓度不同时间naclo-naoh溶液处理后花粉管生长路径的荧光显微观察试验
[0066]
该试验过程同实施例3，具体包括砂仁花雌蕊的采样与固定、透明与软化、染色、装片、压片及观察五步骤组成，其中的“透明及软化处理”步骤本实例中只采用了不同浓度不同时间naclo-naoh溶液处理，具体见表3，其他步骤内容完全同实施例3。
[0067]
表3不同浓度不同时间naclo-naoh溶液处理设置
[0068][0069]
结果发现，naclo溶液及naoh溶液依次处理后，既可促进材料透化及软化，又可以
促进材料染色，材料柱头、花柱及胚珠易压开，花粉及花粉管荧光染色效果好，可清晰观察到花粉管生长路径。从总的结果看，依次在有效氯含量为1.6％-4.8％naclo溶液处理2-6h、在8-20mol/lnaoh溶液溶液中处理2-6h，花粉及花粉管荧光染色效果(图3,e-h)好于各浓度下处理1h结果(图3,a-d)。
[0070]
实施例7验证本发明的装片对最终结果的影响
[0071]
粉管生长路径的检测方法，过程包括：
[0072]
(1)采样与固定：摘下已授粉2天的砂仁花花朵，剥离花瓣和雄蕊，仅留下包括花柱和子房在内的雌蕊部分作为待检材料置于faa(70％乙醇：38％甲醛:乙酸＝8:1:1)中固定，避光保存；
[0073]
(2)透明及软化处理：将保存在faa固定液中52h的待检材料取出后置于有效氯含量为1.6％的naclo溶液中4小时，再转移至12mol/lnaoh溶液中4小时，达到透明及软化的目的；
[0074]
(3)染色：将完成透明及软化的待检材料置于质量分数为0.2％水溶性苯胺蓝染液中避光染色，过夜；
[0075]
(4)装片：用镊子取出经过染色的待检材料，置于载玻片上，由于子房大且柱头及花柱细长(子房大小约：0.5cm*0.2cm*0.2cm，柱头及花柱长约3cm，直径约0.01cm)，为了尽量集中观察视野，将花柱s型折叠置与子房顶端，滴加苯胺蓝染液，盖上另一片载玻片，完成装片；
[0076]
(5)压片及观察：完成装片的待检材料置于荧光显微镜下，食指用力挤压上面载玻片，使材料尽量分散，观察包裹于雌蕊各部分中的花粉及花粉管。
[0077]
结果：压片观察时发现，单个子房即可占满最大观察视野(图4a)，因此单个视野无法呈现完整雌蕊，且由于子房未纵切，受子房壁阻挡，压片后只可观察到部分压出子房的胚珠，花粉管在子房中生长路径难于观察(图4，b，c)；另外由于子房大，压片时受力部位集中在子房，柱头及花柱细小，受到压力小，难压开，因此看不到包裹于其中的花粉及花粉管(图4，d)。
[0078]
实施例8验证本发明的装片对最终结果的影响
[0079]
一种砂仁花授粉后花粉管生长路径的检测方法，过程包括：
[0080]
(1)采样与固定：摘下已授粉2天的砂仁花花朵，剥离花瓣和雄蕊，仅留下包括花柱和子房在内的雌蕊部分作为待检材料置于faa(70％乙醇：38％甲醛:乙酸＝8:1:1)中固定，避光保存；
[0081]
(2)透明及软化处理：将保存在faa固定液中120d的待检材料取出后置于有效氯含量为3.2％的naclo溶液中4小时，再转移至10mol/lnaoh溶液中4小时，达到透明及软化的目的；
[0082]
(3)染色：将完成透明及软化的待检材料置于质量分数为0.2％水溶性苯胺蓝染液中避光染色，过夜；
[0083]
(4)装片：用镊子取出经过染色的待检材料，置于载玻片上，用解剖刀将子房中间纵切，两个切面向着载玻片平展摊开，将花柱与柱头s型折叠置与子房顶端，滴加苯胺蓝染液，盖上另一片载玻片，完成装片；
[0084]
(5)压片及观察：完成装片的待检材料置于荧光显微镜下，食指轻压上部载玻片，
使切面内的胚珠及胎座尽量处于同一个平面，便于观察进入子房内的花粉管生长路径；之后再用力挤压上部载玻片，尽量使雌蕊各部分散开，观察花粉管在雌蕊各部分生长路径。
[0085]
结果：食指轻压待检材料时，子房切面内破坏少，轻压使胚珠及胎座尽量处于同一个平面，易于观察到进入子房内的花粉管生长路径(图5，a)；但由于子房大，轻压时受力集中在子房，柱头及花柱细小，受到压力小，难开裂，因此较难看到包裹于其中的花粉及花粉管(图5，b)；食指用力挤压待检材料时，子房切面内结构破坏，胚珠散落于胎座之间，且难压开，进入子房的花粉管散落在挤压变形的胎座中亦不易观察到(图5，c)，用力压时，柱头及花柱由于子房阻碍，受到压力有限，开裂少，因此较难看到包裹于其中的花粉及花粉管(图5，d)。
[0086]
本说明书中各个实施例采用递进的方式描述，每个实施例重点说明的都是与其他实施例的不同之处，各个实施例之间相同相似部分互相参见即可。对所公开的实施例的上述说明，使本领域专业技术人员能够实现或使用本发明。对这些实施例的多种修改对本领域的专业技术人员来说将是显而易见的，本文中所定义的一般原理可以在不脱离本发明的精神或范围的情况下，在其它实施例中实现。因此，本发明将不会被限制于本文所示的这些实施例，而是要符合与本文所公开的原理和新颖特点相一致的最宽的范围。