一种表面活性剂萃取黄芩中黄芩苷的方法

1.本发明专利涉及一种表面活性剂萃取黄芩中黄芩苷的新方法，尤其涉及表面活性剂水溶液作为萃取剂的新方法，属于中药制剂技术领域。


背景技术：

2.黄芩苷(baicalin)，化学式为c
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，是从中药材黄芩(scutellariabaicalensisgeorgi)中提取分离出的黄酮类化合物。黄芩苷具有显著的抗氧化作用, 能抑制过氧化脂质的生成,清除自由基,能保护皮肤细胞不受氧自由基过度氧化的影响,从而延长皮肤细胞寿命,增强抗衰老的能力。可应用于心脑血管类疾病，可改善多种原因导致的心脏、大脑及全身组织发生的缺血性或出血性疾病，具有抗菌、抗病毒作用。黄芩苷具有抗菌、抗病毒活性，对多种细菌、真菌、病毒有抑制作用。黄芩苷可抑制大肠杆菌活性，明显增加大肠杆菌菌液的电导率和碱性磷酸酶含量，通过增加菌体细胞膜与细胞壁通透性，对其造成破坏。黄芩苷可通过影响炎症信号通路进而抑制多种炎症因子的表达，达到抗炎效果抗肿瘤作用。
3.黄芩苷萃取方法有酸沉淀法、渗滤法、闪式萃取法、乙醇回流萃取法、超声法、双水相分配提取法、超高压提取法、及co2超临界萃取法。在黄芩苷的制备方法中，酸沉淀法和渗滤法为黄芩中黄芩苷萃取的常用方法，但其提取方法存在提取不完整，杂质遗留多，溶剂使用量大，所需时间久且操作复杂。且常使用溶剂为传统的甲醇、丙酮等低沸点有机溶剂，存在毒性大、产率低、生产成本高等缺陷。
4.浊点萃取法(cloud point extraction，cpe)属于一种新兴的液-液萃取技术，它最大的优势在于不使用低沸点有机溶剂，选用的萃取剂通常是表面活性剂，这就对环境影响甚微，价格也低廉。它通过表面活性剂胶束水溶液的溶解性、改变试验参数等条件引发相分离，将亲水性物质与疏水性物质分离。同与传统的液
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液萃取技术相比，浊点萃取技术有如下优点：
①
易于操作；
②
萃取效率高，应用范围广，富集因子大；
③
易于和仪器分析方法联用；
④
不使用对环境破坏较大的有毒、有害等有机溶剂，而且所需的表面活性剂的量少，这样就把对环境产生污染的有机物用量控制在最低限度，也符合现代绿色化工的理念。
5.表面活性剂主要有直链烷基苯磺酸(labsa)，α-烯烃磺酸盐(aos)，十二烷基苯磺酸钠(sdbs)，硬脂酸钠(822-16-2)，十二烷基硫酸钠(sds)，月桂基两性醋酸钠(lad-30)，十二烷基肌氨酸钠(sls)，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)、月桂醇醚硫酸钠(2eo)。相对于其他溶剂，表面活性剂萃取剂具有以下优点：浊点萃取富集率好、用量少、生物降解性能好、不受水硬度的影响、绿色环保无污染，且价格低廉,性质温和，低刺激，去污效果好，抗硬水性能好，低温洗涤效果好。
6.用高效液相色谱法测定黄芩苷的含量，分析速度快，灵敏度高、分离效率高、结果精密度高，该方法已成为化学、医学、工业、农学等学科领域中重要的分离分析技术。


技术实现要素：

7.本发明目的提供一种离子表面活性剂萃取黄芩中黄芩苷的新方法，尤其涉及表面活性剂水溶液作为萃取剂的新方法。
8.上述的目的通过以下技术方案实现
9.1.一种表面活性剂萃取黄芩中黄芩苷的新方法及其应用，其特征在于，所述方法中选用黄芩为全黄芩，购于兰州市各大药店。
10.2.一种表面活性剂萃取黄芩中黄芩苷的新方法及其应用，其特征在于，所述方法中选用的离子表面活性剂为直链烷基苯磺酸(labsa)，α-烯烃磺酸盐 (aos)，十二烷基苯磺酸钠(sdbs)，硬脂酸钠(822-16-2)，十二烷基硫酸钠(sds)，月桂基两性醋酸钠(lad-30)，十二烷基肌氨酸钠(sls)，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)、月桂醇醚硫酸钠(2eo)，用量为1％～15％(体积分数)。
11.3.一种表面活性剂萃取黄芪中黄芩苷的新方法及其应用，其特征在于，其包括以下步骤：
12.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
13.步骤2)表面活性剂水溶液配制：量取一定体积的表面活性剂溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～15％(体积分数) 的表面活性剂水溶液
14.步骤3)表面活性剂水溶液萃取：量取一定体积的表面活性剂水溶液置于圆底烧瓶中，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
15.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
16.步骤5)hplc系统分析：在步骤3管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc系统进行分析。
17.色谱柱选用acclaim
tm c18(4.6x250mm，5μm)，柱温控制在35℃。流速为1ml/min，进样量为10μl，检测波长280nm，流动相为甲醇和0.2％的磷酸水溶液(甲醇：磷酸水溶液＝47:53，v/v)进行等度洗脱。谱峰的鉴定通过与阿魏酸对照品的保留时间之间进行比较而得，采用峰面积进行定量。
18.采用上述所提供的萃取剂，对黄芩苷具有好的选择性，比已报道的挥发性有机溶剂萃取剂更环保，成本更低廉。下面结合附图、实施例对本发明进一步说明。
附图说明
19.图1：黄芩苷对照品甲醇溶液；
20.图2:黄芩苷甲醇溶液；
21.图3：2％十二烷基硫酸钠水溶液萃取黄芩中的黄芩苷。
22.本发明的优点在于：选用表面活性剂作为萃取剂，克服了传统大量使用甲醇、丙酮等低沸点有机溶剂作为萃取剂的弊端，传统方法存在毒性大、产率低、生产成本高等缺陷；而且所需的表面活性剂的用量少，对环境无污染，价格也低廉；不需再次去除表面活性剂，直接将含有黄芩苷的表面活性剂水溶液按照一定比例添加入日化品中，即提高了日化产品中的表面活性剂活性成分，又将黄芩苷加入到日化产品中。不仅选择性高、提取率高，而且工艺简单，生产成本低。
23.具体实施方法：下面将结合具体实施方式对本发明作进一步阐述，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。
24.实施例一
25.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
26.步骤2)直链烷基苯磺酸(labsa)水溶液配制：量取一定体积的直链烷基苯磺酸(labsa)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～15％(体积分数)的直链烷基苯磺酸(labsa)水溶液
27.步骤3)直链烷基苯磺酸(labsa)水溶液萃取：量取一定体积的直链烷基苯磺酸(labsa)水溶液置于圆底烧瓶中，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
28.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
29.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc系统进行分析。
30.实施例二
31.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
32.步骤2)α-烯烃磺酸盐(aos)水溶液配制：量取一定体积的α-烯烃磺酸盐(aos)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～ 15％(体积分数)的α-烯烃磺酸盐(aos)水溶液
33.步骤3)α-烯烃磺酸盐(aos)水溶液萃取：量取一定体积的α-烯烃磺酸盐 (aos)水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在 8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
34.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心
5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
35.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc系统进行分析。
36.实施例三
37.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
38.步骤2)十二烷基苯磺酸钠(sdbs)水溶液配制：量取一定体积的十二烷基苯磺酸钠(sdbs)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～15％(体积分数)的十二烷基苯磺酸钠(sdbs)水溶液
39.步骤3)十二烷基苯磺酸钠(sdbs)溶液萃取：量取一定体积的十二烷基苯磺酸钠(sdbs)水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
40.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
41.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc系统进行分析。
42.实施例四
43.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
44.步骤2)硬脂酸钠(822-16-2)水溶液配制：量取一定体积的硬脂酸钠 (822-16-2)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为 1％～15％(体积分数)的硬脂酸钠(822-16-2)水溶液
45.步骤3)硬脂酸钠(822-16-2)水溶液萃取：量取一定体积的硬脂酸钠 (822-16-2)水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
46.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相
则留在管中；
47.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc系统进行分析。
48.实施例五
49.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
50.步骤2)十二烷基硫酸钠(sds)水溶液配制：量取一定体积的十二烷基硫酸钠 (sds)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～ 15％(体积分数)的十二烷基硫酸钠(sds)水溶液
51.步骤3)十二烷基硫酸钠(sds)水溶液萃取：量取一定体积的十二烷基硫酸钠水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在 8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
52.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
53.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc 系统进行分析。
54.实施例六
55.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
56.步骤2)月桂基两性醋酸钠(lad-30)表面活性剂水溶液配制：量取一定体积的月桂基两性醋酸钠(lad-30)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～15％(体积分数)的月桂基两性醋酸钠(lad-30)水溶液
57.步骤3)月桂基两性醋酸钠(lad-30)水溶液萃取：量取一定体积的月桂基两性醋酸钠(lad-30)水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
58.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
59.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc 系统进行分析。
60.实施例七
61.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
62.步骤2)十二烷基肌氨酸钠(sls)水溶液配制：量取一定体积的十二烷基肌氨酸钠(sls)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为 1％～15％(体积分数)的十二烷基肌氨酸钠(sls)水溶液
63.步骤3)十二烷基肌氨酸钠(sls)水溶液萃取：量取一定体积的十二烷基肌氨酸钠(sls)水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
64.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
65.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc 系统进行分析。
66.实施例八
67.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
68.步骤2)脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)水溶液配制：量取一定体积的表脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～15％(体积分数)的脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)水溶液
69.步骤3)脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)水溶液萃取：量取一定体积的脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至 25ml
70.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
71.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc 系统进行分析。
72.实施例九
73.步骤1)黄芩预处理：将采购到的黄芩洗净、阴干后进行粉碎，过50目筛，得到细的粉末，密封保存备用；
74.步骤2)月桂醇醚硫酸钠(2eo)水溶液配制：量取一定体积的月桂醇醚硫酸钠 (2eo)溶液置于容量瓶中，加入一定体积的去离子水在容量瓶中定容配制为1％～ 15％(体积分数)的月桂醇醚硫酸钠(2eo)水溶液
75.步骤3)月桂醇醚硫酸钠(2eo)水溶液萃取：量取一定体积的月桂醇醚硫酸钠 (2eo)水溶液置于圆底烧瓶中用盐酸水溶液调ph值至1～2，准确称取一定量的黄芩粉末加入，一定温度加热磁力搅拌一定时间，为防止溶剂和被分析物损失，在圆底烧瓶上面连接内通冷凝水的冷凝管；加热三十分钟，将溶液移至离心管中，在8000r/min的条件下离心5min,取1ml上清液将其稀释至25ml
76.步骤4)浊点萃取法富集：将上述产物转移到离心管中，于8000r/min的条件下离心5min，上清液转移到另一个离心管中并加入15％(w/v)的氯化钠涡旋2 min。然后将该样品溶液置于100℃恒温水浴中加热直到该溶液完全分成不同的两相，上层是体积较小的表面活性剂相，下层是体积较大的水相。水相用具有长针头的注射器吸出，较粘的表面活性剂相则留在管中；
77.步骤5)hplc系统分析：在步骤4管中加入甲醇以降低表面活性剂相的粘度，补齐至浊点萃取前溶液量，混合均匀，并用0.45μm的滤膜过滤后注入hplc 系统进行分析。
78.1.实施例一至实施例九为：所用的表面活性剂直链烷基苯磺酸(labsa)，α
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烯烃磺酸盐(aos)，十二烷基苯磺酸钠(sdbs)，硬脂酸钠(822-16-2)，十二烷基硫酸钠(sds)，月桂基两性醋酸钠(lad-30)，十二烷基肌氨酸钠(sls)，脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)、月桂醇醚硫酸钠(2eo)，用量为1％～15％(体积分数)。对黄芩中黄芩苷的萃取。黄芩苷的提取率见表1。
79.表1实施例一至实施例九中黄芩苷的提取率数据
80.实施例萃取剂提取率实施例一直链烷基苯磺酸(labsa)132mg/g实施例二α-烯烃磺酸盐(aos)115mg/g实施例三十二烷基苯磺酸钠(sdbs)132mg/g实施例四硬脂酸钠(822-16-2)97mg/g实施例五十二烷基硫酸钠(sds)85mg/g实施例六月桂基两性醋酸钠(lad-30)98mg/g实施例七十二烷基肌氨酸钠(sls)111mg/g实施例八脂肪醇聚氧乙烯醚硫酸钠(aes)82mg/g实施例九月桂醇醚硫酸钠(2eo)125mg/g
81.以上所述的具体实施例仅是本发明中的一部分实施方法，在不脱离本发明内容的前提下，还可对本发明方法做出改进和修正，这些改进和修正也应视为本发明的保护范围之内。