一种谷朊粉总脂肪的检测方法与流程

1.本发明涉及检测方法技术领域，具体涉及一种谷朊粉总脂肪的检测方法。


背景技术：

2.谷朊粉又称活性面筋粉、小麦面筋蛋白，是从小麦(面粉)中提取出来的天然蛋白质，呈淡黄色，蛋白质含量高达75％～85％，是营养丰富的植物蛋白资源，具有粘性、弹性、延伸性、成膜性和吸脂性等多种特性。谷朊粉作为一种优质的植物性蛋白原料，在水产料中可替代鱼粉使用。而脂肪作为饲料六大概率养分之一，在畜禽机体起到供能等重要作用。谷朊粉中游离脂肪含量《1％，大部分脂肪含量由蛋白质包裹在组织内。且谷朊粉水合后具有高度的粘弹性，对其脂肪含量的检测造成一定的干扰。因此，如何精确、可靠地检测谷朊粉总脂肪含量对其采购、仓储及合理高效使用具有重要意义。


技术实现要素：

3.本发明的目的是提供一种谷朊粉总脂肪的检测方法，适用于谷朊粉总脂肪含量的检测。
4.本发明的目的可以通过以下技术方案来实现：一种谷朊粉总脂肪的检测方法，包括以下步骤：
5.(1)试样蛋白酶溶解：称取试样，与胃蛋白酶混合，加入盐酸溶液，使试样完全溶解；
6.(2)总脂肪水解：试样完全溶解后，加入浓盐酸，水浴至试样脂肪游离消化完全；
7.(3)总脂肪提取：萃取得到上清液；
8.(4)总脂肪浓缩、烘干、称重：将装有上清液的恒重容器于水浴上蒸干后在100～110℃干燥至恒重，称重，记为m1；
9.(5)结果计算：谷朊粉总脂肪含量ee(％)按下式进行计算：
[0010][0011]
式中：
[0012]m1-已恒重的“容器 油脂”质量，单位为g；
[0013]m0-已恒重的空容器质量，单位为g；
[0014]
m-试样质量，单位为g。
[0015]
优选地，步骤(1)称取试样2～5g，记为m，与等质量胃蛋白酶混合均匀，置于250ml带塞磨口瓶中，加入20～50ml的盐酸溶液。
[0016]
优选地，步骤(1)所述的盐酸溶液为新配制的并已预热至42～45℃的盐酸溶液。
[0017]
优选地，步骤(1)所述的盐酸溶液ph为1～2。
[0018]
优选地，步骤(2)试样完全溶解后，加入20～50ml浓盐酸，加盖，放置于70～80℃水浴中，每隔5min摇匀一次，至样品脂肪游离消化完全为止。
[0019]
优选地，步骤(2)水解过程中，如水分蒸发，应适当补加水，保持溶液总体积不变，
以避免酸浓度升高。
[0020]
优选地，步骤(3)取出盛有水解后的溶液的容器，加入乙醇后，混匀，转移至分液漏斗中，用石油醚润洗容器，洗涤液一起并入分液漏斗中，混匀，冷却后再加入石油醚，加塞振荡，开塞放出气体，再塞好，静置，取上部澄清液体于100～110℃恒重的烧杯内，再加入石油醚，加塞振荡，开塞放出气体，再塞好，静置，取上部澄清液体于同一个100～110℃恒重的烧杯内，重复提取，上部澄清液体并入同一个100～110℃恒重的烧杯内。
[0021]
进一步优选地，步骤(3)取出具塞磨口瓶，加入10ml乙醇后，混匀，转移至分液漏斗中，用石油醚少量多次润洗磨口瓶，洗涤液一起并入分液漏斗中，混匀，冷却后再加入50ml石油醚，加塞振荡1min，开塞放出气体，再塞好，静置10min，取上部澄清液体于105℃恒重的烧杯内，再加入50ml石油醚，加塞振荡1min，开塞放出气体，再塞好，静置10min，取上部澄清液体于同一个105℃恒重的烧杯内，重复提取3～5次，上部澄清液体(醚层)并入同一个105℃恒重的烧杯内。
[0022]
优选地，步骤(4)将装有上部澄清液体的恒重容器于水浴上蒸干后在105℃烘箱中干燥至恒重。
[0023]
优选地，步骤(4)干燥至恒重的过程中，先烘1.5h，取出冷却后称重，再烘0.5h，取出冷却后称重，直到恒重。
[0024]
与现有技术相比，本发明具有以下优点：
[0025]
1.本发明方法检测结果稳定性好，准确度高，重复性好；
[0026]
2.本发明通过胃蛋白酶除去谷朊粉水合粘弹性对脂肪测定的干扰：谷朊粉中游离脂肪含量《1％，大部分脂肪含量由蛋白质包裹在组织内，如果直接溶于水再进行提取，谷朊粉水合粘弹性会影响脂肪提取效率，检测结果也会存在较大偏差，因此本发明采用特定的酶解，破坏其蛋白结构，从而降低谷朊粉水合产生的粘弹性，使得脂肪更易从组织内游离出来，大大提升提取效率，结果也更稳定可靠；
[0027]
3.本发明替代酸水解仪法，能够减少谷朊粉从检测滤袋中漏出的风险：酸水解仪配备使用的样品检测滤袋及硅藻土吸附剂，在检测过程中，因谷朊粉细度较小，硅藻土包裹不完全，会导致试样未经酸水解就直接从滤袋流失，直接影响试样最终测定结果；
[0028]
4.目前还未制定关于谷朊粉总脂肪含量测定的国家标准——gb/t 5512-2008粮油检验粮食中粗脂肪含量测定(已废止)，本发明提供了一种新的谷朊粉总脂肪的检测方法，具有重要意义；
[0029]
5.本发明通过萃取方式的设计，使得谷朊粉组织内的脂肪游离出来后能够充分溶解于石油醚中，同时通过多次萃取，尽可能地将脂肪无损地转移并溶解于石油醚中，减少脂肪在实验过程中的损失，提高检测结果的准确性；
[0030]
6.本发明在试样蛋白酶溶解时通过对盐酸进行预热，加速蛋白酶的溶解，提高蛋白酶的活性，使得蛋白酶的活性能够保持在最佳状态，避免谷朊粉水合产生的粘弹性对检测结果造成的不利影响。
具体实施方式
[0031]
下面对本发明的实施例作详细说明，以下实施例在以本发明技术方案为前提下进行实施，给出了详细的实施方式和具体的操作过程，但本发明的保护范围不限于下述的实
施例。
[0032]
以下实施例中的试剂和材料如下所示：
[0033]
1、蒸馏水：实验室用水，三级水；
[0034]
2、胃蛋白酶：活性1:3000生化级胃蛋白酶；
[0035]
3、盐酸溶液：将6.1ml浓盐酸稀释至1000ml水中(ph≈1-2)，加热至42-45℃；
[0036]
4、无水乙醇：ar；
[0037]
5、石油醚：沸程30～60℃，ar；
[0038]
6、恒温水浴锅；
[0039]
7、电热鼓风干燥箱：温度可控制在105
±
2℃(控温精度1℃，加热范围覆盖105℃)；
[0040]
8、干燥器：盛有有效的干燥剂；
[0041]
9、分析天平：感量为0.0001g；
[0042]
10、分液漏斗等其他实验室常用器皿。
[0043]
实施例1
[0044]
一种谷朊粉总脂肪的检测方法，本发明的检测方法步骤是：
①
试样蛋白酶溶解；
②
总脂肪水解；
③
总脂肪提取；
④
总脂肪浓缩，烘干、称重；
⑤
结果计算；
⑥
重复性验证。
[0045]
该检测方法步骤如下：
[0046]
①
试样蛋白酶溶解：称取适量试样2～5g，记为m，与等质量(1:1)胃蛋白酶混合均匀，置于250ml带塞磨口瓶中，加入20～50ml新配制的并已预热至42-45℃的盐酸溶液，应确保样品完全溶解。
[0047]
②
总脂肪水解：试样完全溶解后，加入20～50ml浓盐酸，加盖，放置于70～80℃水浴中，每隔5min摇匀一次，至样品脂肪游离消化完全为止，时间约需40～50min。水解过程中，如水分蒸发，应适当补加水，保持溶液总体积不变，以避免酸浓度升高。
[0048]
③
总脂肪提取：取出具塞磨口瓶，加入10ml乙醇后，混匀，转移至分液漏斗中，用石油醚少量多次润洗磨口瓶，洗涤液一起并入分液漏斗中，混匀。冷却后再加入50ml石油醚，加塞振荡1min，小心开塞放出气体，再塞好，静置10min，取上部澄清液体(醚层)于105℃恒重的250ml烧杯(m0)内，再加入50ml石油醚，加塞振荡1min，小心开塞放出气体，再塞好，静置10min，取上部澄清液体(醚层)于同一个105℃恒重的250ml烧杯内，重复提取3～5次，上部澄清液体(醚层)并入同一个105℃恒重的250ml烧杯内。
[0049]
④
总脂肪浓缩、烘干、称重：将装有醚层的恒重烧杯于水浴上蒸干后在105℃烘箱中干燥至恒重(m1)(先烘1.5h，取出冷却后称重，再烘0.5h，取出冷却后称重，直到恒重)。称量总脂肪的重量，计算总脂肪的含量。
[0050]
⑤
结果计算：谷朊粉总脂肪含量ee(％)可按下式进行计算：
[0051][0052]
式中：
[0053]
m1——已恒重的“烧杯 油脂”质量，单位为克(g)；
[0054]
m0——已恒重的空烧杯质量，单位为克(g)；
[0055]
m——试样质量，单位为克(g)。
[0056]
具体的实验参数和结果如下表所示：
[0057][0058][0059]
从上表可知，本发明检测结果稳定性好，准确度高，重复性好。
[0060]
上述的对实施例的描述是为便于该技术领域的普通技术人员能理解和使用发明。熟悉本领域技术的人员显然可以容易地对这些实施例做出各种修改，并把在此说明的一般原理应用到其他实施例中而不必经过创造性的劳动。因此，本发明不限于上述实施例，本领域技术人员根据本发明的揭示，不脱离本发明范畴所做出的改进和修改都应该在本发明的保护范围之内。