一种陈皮精油、其制备方法及应用与流程

1.本发明属于提取物制备技术领域，具体涉及一种陈皮精油、其制备方法及应用。


背景技术：

2.作为一种常见的卫生害虫，蚊虫无处不在，并通过叮咬、振翅骚扰等方式，严重影响人们的休息和生活。此外，蚊虫更是多种疾病的传播者，每年都有大量人群因蚊虫叮咬患上疟疾等疾病。研究表明，每年因得疟疾而死亡的人数为100-200万人。目前，人工合成的杀蚊剂被广泛运用在日常生活当中，如拟除虫菊酯类药物。
3.但是，随着化学杀蚊剂的持续应用，蚊虫出现了对化学杀虫剂的抗性，且化学杀虫剂成本高、在自然界中降解缓慢，严重污染环境并且影响人体健康。随着经济与科技的高速发展，人们的健康意识、环保意识不断增强，绿色健康的防蚊控蚊措施越来越受到重视。由于植物源杀蚊剂相对安全无毒，在控制蚊虫方面具有广阔的前景，因此，新型植物性杀蚊剂亟待开发。
4.精油作为杀蚊剂、驱虫剂和杀菌剂的活性成分引起了人们的极大兴趣。陈皮(pericarpium citri reticulatae)是芸香科柑橘属植物橘(citrus reticulata blanco)及其栽培变种的干燥果皮，其在中国药典中被记载具有理气健脾，燥湿化痰的功效。陈皮作为一味中国传统中药，被广泛应用于治疗消化不良和改善如支气管炎和哮喘等呼吸道疾病。除用于治疗疾病外，陈皮还可用于制作凉果、茶饮，以及作为菜肴的调味品。然而，针对陈皮精油，其在日化应用领域的研究与应用仍然较少，陈皮精油还存在极大的开发利用空间。
5.鉴于现有技术中防蚊控蚊的主要措施还是使用化学药物毒杀蚊虫，其具有一定毒性且功能单一等缺点。因此，制备一种低毒、安全的植物源杀蚊剂是目前需解决的技术问题。


技术实现要素：

6.本发明的目的在于克服上述现有技术中存在的问题，提供一种陈皮精油、其制备方法及其抗蚊、抗菌方面的双功能应用。
7.本发明是通过下述技术方案进行实现的：
8.本发明提供一种陈皮精油，包括如下组分：α-蒎烯、β-蒎烯、d-柠檬烯、β-月桂烯、γ-松油烯和2-甲氨基苯甲酸甲酯。
9.本发明提供的陈皮精油的主要组分为α-蒎烯、β-蒎烯、d-柠檬烯、β-月桂烯、γ-松油烯和2-甲氨基苯甲酸甲酯，由以上组分组成的陈皮精油具有灭蚊和抗菌的双重功效。能够有效杀灭蚊子幼虫，且具有显著的杀菌效果。本发明的陈皮精油从陈皮中提取，安全无毒，能够作为植物源灭蚊成分在灭蚊、抗菌产品中进行广泛应用。
10.作为本发明所述陈皮精油的优选实施方式，所述陈皮精油包括如下质量份数的组分：α-蒎烯2.94～4.19份、β-蒎烯2.99～4.09份、d-柠檬烯47.90～56.39份、β-月桂烯4.29
～5.33份、γ-松油烯14.98～17.03份和2-甲氨基苯甲酸甲酯2.79～4.27份。
11.作为本发明所述陈皮精油的优选实施方式，所述陈皮精油还包括如下质量份数的组分：4-松油醇0.53～1.08份、α-松油醇1.12～2.39份。
12.优选地，本发明所选陈皮原料为广陈皮，年份为1～15年份。
13.本发明的另一目的在于提供一种含上述陈皮精油的灭蚊组合物，包括上述陈皮精油和乳化剂；所述陈皮精油和所述乳化剂的重量比为1：(2～10)。
14.本发明提供的含陈皮精油灭蚊组合物采用陈皮精油与乳化剂(优选吐温20)复配使用，能够提高陈皮精油的抗蚊活性，并且使其具有一定的缓释效果；使陈皮精油的灭蚊、抗菌性能充分展现，对皮肤和呼吸道无刺激性，安全无害且有效灭杀蚊虫，可广泛应用于灭蚊抗菌产品中。
15.作为本发明所述灭蚊组合物的优选实施方式，所述陈皮精油占所述灭蚊组合物的重量百分比不小于0.5％；进一步地，所述陈皮精油占所述灭蚊组合物的重量百分比为0.5％～9％。
16.优选地，所述灭蚊组合物按质量百分比计包括：陈皮精油0.5％～9％、乳化剂1％～90％，余量为水。
17.优选地，所述灭蚊组合物的制备方法为：将陈皮精油和乳化剂(吐温20)投入搅拌罐内搅拌10min～15min，使其完全混匀；将适量去离子水，逐滴加入上述搅拌罐中搅拌10～15min，形成均质乳液，即成。
18.本发明的再一目的在于提供一种上述的陈皮精油的制备方法，包括以下步骤：采用超临界co2流体对陈皮进行萃取，分液，向油相中加入干燥剂，过滤，即成。
19.本发明采用超临界co2流体萃取法对陈皮进行萃取得到陈皮精油，co2是一种无毒、廉价的有机溶剂，对陈皮中有效成分地破坏少，能够将陈皮中的有效成分稳定、无毒、安全地进行提取，且不残留在产物中。本发明制得的陈皮精油绿色、无毒且具有抗菌、抗蚊的多功能性。
20.作为本发明所述制备方法的优选实施方式，在所述萃取前对陈皮进行预处理；所述预处理包括粉碎，过10～40目筛。优选地，将1kg～2kg陈皮粉碎后，过10～40目筛。进一步地，陈皮质量为2kg，粉碎后过20目筛。
21.作为本发明所述制备方法的优选实施方式，所述萃取时的压力为10mpa～40mpa；所述萃取的温度为30℃～50℃，时间为60min～100min；所述co2的流量为1l/h～5l/h，萃取时分离压力为1mpa～5mpa，分离温度为-20℃～20℃。
22.优选地，所述采用超临界co2流体对陈皮进行萃取的压力为25mpa，萃取温度为40℃，萃取时间为80min，co2的流量为5l/h，分离压力为35mpa，分离温度为-10℃。
23.作为本发明所述制备方法的优选实施方式，所述干燥剂包括无水硫酸镁；所述过滤采用孔径为0.1μm～0.45μm的滤膜。
24.具体地，本发明陈皮精油的制备方法，包括以下步骤：将预处理后的陈皮装填于萃取罐，使用超临界co2流体萃取法进行萃取；将萃取得到的提取液进行分液处理，取上层油相，加入干燥剂，经微孔滤膜过滤后得到所述陈皮精油。优选地，本发明所选陈皮原料为广陈皮，年份为1～15年份。进一步优选地，本发明的陈皮为10年份陈皮。
25.本发明的又一目的在于提供上述陈皮精油和上述灭蚊组合物在灭蚊、抗菌产品中
的应用。
26.本发明的陈皮精油从陈皮中提取得到，绿色安全，且具有显著的灭蚊和抑菌杀菌效果，因此，可以作为植物源组分广泛应用于灭蚊、抗菌产品中。
27.进一步地，本发明还提供了制得的不同年份陈皮精油在灭蚊、抗菌产品中的应用。
28.作为本发明所述应用的优选实施方式，所述陈皮精油占产品的质量浓度不低于4mg/ml。
29.本发明具有如下有益效果：
30.本发明采用超临界co2流体萃取法对陈皮进行萃取得到陈皮精油，能够将陈皮中的有效成分稳定、无毒、安全地进行提取，制得的陈皮精油绿色、无毒且具有抗菌、灭蚊的多功能性；无环境污染，安全可靠，并且带有宜人的气味，令人感到愉悦。同时工艺流程简单，不必经过反复萃取操作，通过降低压力即可析出提取液，再将提取液分液处理得到上层油相，制得的陈皮精油能够有效杀灭蚊子幼虫，在灭蚊产品领域有广泛的应用前景；本发明进一步提供的灭蚊组合物无人工合成防腐剂和香精，对皮肤和呼吸道无刺激性，安全无害。该灭蚊组合物可以提高陈皮精油本身的杀蚊效果，并且具有明确、高效的抗蚊、抗菌作用；同时具有缓释效果，可以长效杀蚊。
附图说明
31.图1为不同年份陈皮精油对白纹伊蚊幼虫毒性拟合结果图；
32.图2为实施例4-6的灭蚊组合物的粒径测试图；
33.图3为10年份陈皮精油丙酮溶液、实施例4-6和对比例1-4的灭蚊组合物的抗蚊试验结果统计图；其中1为实施例4，2为实施例5，3为实施例6，4为对比例1，5为对比例2，6为对比例3，7为对比例4；
34.图4为10年份陈皮精油和实施例6的灭蚊组合物的缓释效果测试图；
35.图5为灭蚊组合物对不同菌种的抑菌效果图；其中a为白色葡萄球菌，b为金黄色葡萄球菌，c为表皮葡萄球菌，d为耐甲氧西林金黄色葡萄球菌，e为鼠伤寒沙门氏菌，f为大肠杆菌。
具体实施方式
36.为更好地说明本发明的目的、技术方案和优点，下面将结合具体实施例对本发明作进一步说明。本领域技术人员应当理解，此处所描述的具体实施例仅用以解释本发明，并不用于限定本发明。
37.实施例中所用的试验方法如无特殊说明，均为常规方法；所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
38.实施例1
39.一种陈皮精油的制备方法，包括以下步骤：
40.(1)将陈皮粉碎，过20目筛；
41.(2)取2kg步骤(1)所得陈皮装填于萃取罐，使用超临界co2流体萃取法进行萃取；萃取条件为：压力25mpa，萃取温度40℃，co2流量5l/h，分离压力3mpa，分离温度-10℃，萃取时间80min；
42.(3)将步骤(2)中得到的提取液进行分液处理，取上层油相，加入干燥剂硫酸镁，经0.25μm微孔滤膜过滤后得到陈皮精油。
43.实施例2
44.一种陈皮精油的制备方法，包括以下步骤：
45.(1)将陈皮粉碎，过40目筛；
46.(2)取1.8kg步骤(1)所得陈皮装填于萃取罐，使用超临界co2流体萃取法进行萃取；萃取条件为：压力20mpa，萃取温度25℃，co2流量5l/h，分离压力3mpa，分离温度-10℃，萃取时间90min；
47.(3)将步骤(2)中得到的提取液进行分液处理，取上层油相，加入干燥剂硫酸镁，经0.45μm微孔滤膜过滤后得到陈皮精油。
48.实施例3
49.一种陈皮精油的制备方法，包括以下步骤：
50.(1)将陈皮粉碎，过10目筛；
51.(2)取1.9kg步骤(1)所得陈皮装填于萃取罐，使用超临界co2流体萃取法进行萃取；萃取条件为：压力30mpa，萃取温度35℃，co2流量5l/h，分离压力3mpa，分离温度-10℃，萃取时间60min；
52.(3)将步骤(2)中得到的提取液进行分液处理，取上层油相，加入干燥剂硫酸镁，经0.1μm微孔滤膜过滤后得到陈皮精油。
53.实施例4
54.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油0.5％、吐温20 1％、去离子水98.45％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
55.本实施例灭蚊组合物的制备方法为：
56.(1)将陈皮精油和吐温20按所述重量百分比投入搅拌罐内搅拌10min，使其完全混匀；
57.(2)将去离子水逐滴加入上述搅拌罐中搅拌15min，即成。
58.实施例5
59.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油0.5％、吐温20 2.5％、去离子水96.95％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
60.本实施例灭蚊组合物的制备方法与实施例4相同。
61.实施例6
62.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油0.5％、吐温20 5％、去离子水94.5％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
63.本实施例灭蚊组合物的制备方法与实施例4相同。
64.对比例1
65.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油0.5％、吐温20 10％、去离子水89.5％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
66.本对比例灭蚊组合物的制备方法与实施例4相同。
67.对比例2
68.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油
0.5％、吐温20 15％、去离子水84.5％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
69.本对比例灭蚊组合物的制备方法与实施例4相同。
70.对比例3
71.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油0.5％、吐温20 20％、去离子水79.5％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
72.本对比例灭蚊组合物的制备方法与实施例4相同。
73.对比例4
74.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油0.5％、吐温20 25％、去离子水74.5％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
75.本对比例灭蚊组合物的制备方法与实施例4相同。
76.对比例5
77.一种包含本发明陈皮精油的灭蚊组合物，包括以下质量百分比的组分：陈皮精油0.4％、吐温20 2.5％、去离子水97.1％。所述陈皮精油为10年份陈皮精油。
78.本对比例灭蚊组合物的制备方法与实施例4相同。
79.将1年份、5年份、10年份、15年份陈皮采用实施例1所述的制备方法制备得到相应年份的陈皮精油，并进行抗菌、灭蚊效果验证，具体如下：
80.试验例1：最小抑菌浓度(mic)和最小杀菌浓度(mbc)测试
81.试验过程：使用dmso配制梯度浓度不同年份陈皮精油溶液，并以dmso为阴性对照、加替沙星为阳性对照，用96孔板测定mic和mbc。样品组的每个微孔加5μl样品液和195μl菌悬液，阴性对照组加5μldmso和195μl液体培养基。微孔板放置恒温培养箱内，37℃培养16h～24h后观察结果；从测定mic的微孔中选取无细菌生长的微孔，取50μl涂布于平板培养基上，放置37℃恒温培养箱内，培养24h后观察结果，无细菌生长的精油浓度为对应的mbc值，实验结果如表1所示。
82.表1不同年份精油mic和mbc
[0083][0084][0085]
表1结果表明陈皮精油对实验所选的6种细菌具有明显的生长抑制活性，4mg/ml的
陈皮精油即具有抑菌效果，16mg/ml的陈皮精油即具有显著的杀菌效果，试验结果表明本发明陈皮精油具有优异的抑菌、杀菌作用。
[0086]
试验例2：陈皮精油对白纹伊蚊幼虫毒性测试
[0087]
试验过程：以丙酮为溶剂，将待测样品稀释成梯度浓度样品待测液。通过预实验确定待测样品的浓度梯度范围，选择致死率在10-90％的样品梯度浓度8-10个，以丙酮为空白对照，溴氰菊酯为阳性对照，进行样品的活性测试。每个样品浓度重复3次取平均值。用量筒准确量取99ml纯水，加入一次性测试杯中备用。准确计数20只iv龄幼虫，用漏勺转移至上述测试杯中，然后用移液枪加入1ml样品溶液，用玻璃棒轻轻搅拌均匀。将测试杯转移至恒温恒温培养箱中，设定温度为28
±
2℃，湿度为80
±
5％，光周期为10h～14h，培养24h后记录每个测试杯中幼虫的死亡数量。幼虫死亡判断规则：如果幼虫在用细针或者移液管尖处轻轻触碰幼虫却不动弹，则将其视为死亡。通过软件spss 25.0对精油的测试结果进行样品浓度与死亡率分析，实验结果如表2所示，表中95％ci为95％的置信区间，χ2为卡方值。
[0088]
表2四种不同年份陈皮精油对白纹伊蚊幼虫毒杀活性
[0089]
名称lc
50
(ppm)95％cilc
90
(ppm)95％ciχ21年份陈皮精油60.0856.42～63.8688.7881.32～100.858.75n.s.5年份陈皮精油54.5050.99～57.9080.9974.96～89.8111.64n.s.10年份陈皮精油68.2362.85～75.6794.3283.01～121.056.84n.s15年份陈皮精油66.9461.93～71.9983.0376.57～95.639.14n.s
[0090]
由表2可知，本发明的陈皮精油可以杀死白纹伊蚊幼虫，且具有剂量依赖性。其中，5年份的陈皮精油对白纹伊蚊毒杀作用最强，lc
50
＝54.50ppm；其余陈皮精油也具有明显的毒杀白纹伊蚊幼虫活性。丙酮空白对照组中白纹伊蚊幼虫无死亡情况，表明以丙酮为溶剂配制样品不会影响实验结果的准确性。图1为不同年份陈皮精油对白纹伊蚊幼虫毒性拟合结果图，该试验结果表明陈皮精油具有灭蚊的功效。
[0091]
本发明还进一步对制得的陈皮精油的进行了成分分析，并对主要成分的抑菌和杀蚊性能进行了探究，成分分析方法如下：
[0092]
使用thermo scientific trace 1300 gc-ms系统，tg-5 ms毛细管柱(30m
×
0.25mm，0.25μm，thermo scientific)。载气为氦气，流速为1ml/min。每种精油用正己烷稀释至1％(v/v)，然后以20:1的分流比注入gc-ms。进样器、传输线和离子源的温度分别设置为280、280和230℃。柱温箱温度从35℃开始并保持5min，然后以3℃/min升至120℃并保持3min，然后以10℃/min升至280℃。质谱电子轰击能量为70ev，质量数范围为35至500m/z。
[0093]
经成分分析，1年份陈皮精油的主要包括以下质量百分比的成分：α-蒎烯3.31％、β-蒎烯3.65％、d-柠檬烯56.39％、β-月桂烯5.33％、γ-松油烯17.03％、4-松油醇0.53％、α-松油醇1.12％和2-甲氨基苯甲酸甲酯2.98％。
[0094]
5年份陈皮精油的主要包括以下质量百分比的成分：α-蒎烯3.34％、β-蒎烯3.64％、d-柠檬烯55.46％、β-月桂烯4.96％、γ-松油烯16.15％、4-松油醇0.96％、α-松油醇1.7％和2-甲氨基苯甲酸甲酯2.79％。
[0095]
10年份陈皮精油的主要包括以下质量百分比的成分：α-蒎烯2.94％、β-蒎烯2.99％、d-柠檬烯47.90％、β-月桂烯4.29％、γ-松油烯14.98％、4-松油醇1.08％、α-松油醇2.39％和2-甲氨基苯甲酸甲酯4.27％。
[0096]
15年份陈皮精油的主要包括以下质量百分比的成分：α-蒎烯4.19％、β-蒎烯4.09％、d-柠檬烯53.65％、β-月桂烯5.17％、γ-松油烯15.19％、4-松油醇0.87％、α-松油醇1.72％和2-甲氨基苯甲酸甲酯3.22％。
[0097]
试验例3：陈皮精油主要成分对白纹伊蚊幼虫毒杀活性
[0098]
采用与试验例2相同的方法对陈皮精油中的主要成分α-蒎烯、β-蒎烯、d-柠檬烯、β-月桂烯、γ-松油烯、4-松油醇、α-松油醇和2-甲氨基苯甲酸甲酯进行白纹伊蚊幼毒杀活性测定，试验结果如表3所示。
[0099]
表3陈皮精油主要成分对白纹伊蚊幼虫毒杀活性
[0100]
名称lc
50
(ppm)95％cilc
90
(ppm)95％ciχ2α-蒎烯72.3169.35～75.1687.8883.79～93.991.14n.s.β-蒎烯69.5266.26～72.6288.4083.94～94.648.15n.s.萜品油烯57.6947.62～67.4179.4167.89～111.2240.60γ-松油烯64.2857.65～70.1579.3772.43～94.307.84n.s.d-柠檬烯56.1753.04～59.2167.3863.30～75.0222.10β-月桂烯54.5152.84～56.1364.6862.31～68.023.54n.s2-甲氨基苯甲酸甲酯76.6868.25～84.7299.2688.98～125.699.06n.s.α-松油醇＞190
‑‑‑‑
4-松油醇＞190
‑‑‑‑
溴氰菊酯0.020.017～0.0230.0920.076～0.11810.16n.s.
[0101]
由表3可知，除α-松油醇和4-松油醇外，其余陈皮精油的主要成分均具有良好的灭杀白纹伊蚊幼虫活性；β-月桂烯对白纹伊蚊幼虫毒杀作用最强，lc
50
＝54.51ppm。该试验结果进一步证明了陈皮精油具有灭杀白纹伊蚊幼虫活性。
[0102]
试验例4：陈皮精油主要成分最小抑菌浓度mic和最小杀菌浓度mbc测试
[0103]
采用与试验例1相同的方法对陈皮油中的主要成分α-蒎烯、β-蒎烯、d-柠檬烯、β-月桂烯、γ-松油烯、4-松油醇、α-松油醇和2-甲氨基苯甲酸甲酯进行最小抑菌浓度mic和最小杀菌浓度mbc测试，试验结果如表4所示。
[0104]
表4陈皮精油主要成分mic和mbc
[0105]
[0106][0107]
表4结果表明，陈皮精油中的主要成分均具有良好的抑菌效果，特别是α-松油醇，其对革兰氏阴性菌具有良好的抑制活性，对大肠杆菌的mic和mbc浓度达到了0.25mg/ml；该实验结果进一步说明了陈皮精油具有良好的抑菌活性。
[0108]
试验例5：灭蚊组合物表征
[0109]
使用纳米粒度与zeta电位仪对实施例4、实施例5、实施例6制备得到的含陈皮精油的灭蚊组合物进行表征，结果显示在图2和表5中。
[0110]
表5含陈皮精油的灭蚊组合物的粒径及其聚合物分散性指数(pdi)
[0111]
测试样品陈皮精油(％)吐温20(％)粒径(nm)pdi实施例40.51115.70
±
5.340.16
±
0.99实施例50.52.5187.38
±
7.160.09
±
0.03实施例60.554.79
±
0.030.05
±
0.01
[0112]
测试结果表明，将本发明的含陈皮精油的灭蚊组合物进行搅拌得到的纳米乳液具
有粒径小，粒径分布均匀，并且重复性好的优点。
[0113]
试验例6：灭蚊组合物的抗蚊试验
[0114]
蚊种：白纹伊蚊(aedes albopictus)
[0115]
测试方法：(1)用量筒准确量取99ml纯水，加入一次性测试杯中备用。(2)准确计数20只ⅳ龄幼虫，用漏勺转移至上述测试杯中，然后使用移液枪加入1ml陈皮精油纳米乳，用玻璃棒轻轻搅拌均匀；(3)将测试杯转移至恒温恒湿培养箱中，设定温度为28
±
2℃，湿度为80
±
5％，光周期为10h～14h，培养24h后记录每个测试杯中幼虫的死亡数量；(4)幼虫死亡判断规则：如果幼虫在用细针或者移液管尖处轻轻触碰幼虫却不动弹，则将其视为死亡。
[0116]
为更好地展示本发明中陈皮精油纳米乳液的效果，采用丙酮溶解相同浓度的陈皮精油作为对比，将实施例4-6以及对比例1-5制得的灭蚊组合物纳米乳液进行上述抗蚊试验，每个样品重复3次，取平均值。
[0117]
实施例4-6以及对比例1-4的试验结果如图3所示。图3表明，本发明提供的陈皮精油灭蚊组合物效果优异，可在低浓度的陈皮精油下灭杀100％的蚊子幼虫。并且10年份陈皮精油与乳化剂吐温20配合使用，能够提升陈皮精油的灭蚊性能，吐温20与陈皮精油的重量比在(2～10)：1时，本发明灭蚊组合物的效果最好。对比例5的含陈皮精油的灭蚊组合物中，陈皮精油的含量过低，该抗蚊试验中白纹伊蚊的死亡率为23.33％。表明陈皮精油低于0.5％时，灭蚊组合物的杀蚊效果明显下降。
[0118]
试验例7：灭蚊组合物的缓释效果测试
[0119]
测试方法：将完成试验例6抗蚊试验后的蚊虫从溶液中滤出，并向实施例6和10年份陈皮精油的滤液重新加入20只ⅳ龄幼虫，再次进行试验例6的抗蚊试验。
[0120]
测试结果如图4所示，与纯陈皮精油单独使用相比，本技术的灭蚊组合物具有一定的缓释效果，能够将陈皮精油逐渐释放，延长杀蚊时长。
[0121]
试验例8：灭蚊组合物的最小抑菌浓度(mic)和最小杀菌浓度(mbc)测试
[0122]
试验过程：(1)采用本发明所述灭蚊组合物的制备方法制备含不同浓度陈皮精油的灭蚊组合物纳米乳液(吐温20固定为2.5％)；(2)使用96微孔板测定mic和mbc，向每个微孔中加入5μl样品液和195μl菌悬液，不含陈皮精油的纳米乳液为阴性对照、加替沙星为阳性对照，空白对照组则加入5μl不含陈皮精油的纳米乳液和195μl液体培养基；(3)将微孔板放置恒温培养箱内，于37℃下培养24h后观察结果；(4)从测定mic的微孔板中选取无细菌生长的微孔，取50μl液体涂布于平板培养基上，放置于37℃恒温培养箱培养24h后观察结果，无细菌生长的培养基所对应的陈皮精油浓度为对应的mbc值。结果如表6所示。
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表6灭蚊组合物的mic和mbc测试结果
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表6的结果表明本发明提供的含陈皮精油的灭蚊组合物具有一定的抑菌、杀菌效果。
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试验例9：灭蚊组合物的抑菌动力学测定
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试验过程：根据试验例8所测定的最小抑菌浓度mic值，设定0.5倍mic，1倍mic以及2倍mic浓度，以dmso为阴性对照、加替沙星为药物阳性对照，用96孔板测定，置于37℃恒温培养箱中培养24h，并利用多功能酶标仪每隔2h测定od值以跟踪细菌的生长情况，连续监测24h。
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测试结果如图5所示，图5结果表明含陈皮精油的灭蚊组合物对实验所选的6种细菌具有明显的生长抑制活性，并且对细菌的抑制活性受时间和剂量的影响。本试验所测试的3个浓度均可抑制抑菌生长8h以上。含陈皮精油的灭蚊组合物前期抑菌作用明显，后期抑菌作用不足，这是精油的挥发性导致的。
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最后所应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。