香菇多糖的核心片段-香菇六糖的高效合成方法与流程

1.本发明涉及具有生物活性的、特别是可用作抗肿瘤药的香菇多糖的核心片段-香菇六糖的高效合成方法，香菇九糖的制备方法类似。


背景技术：

2.许多菌类多糖, 如 lentinan(香菇多糖)(来源于 lentinus edodes, 香菇) ，grifolan(灰树花多糖)(来源于 grifola frondosa, 灰树花), schizophyllan(裂褶菌多糖)(来源于schizophyllum commune 裂褶菌)以及 pochyman(茯苓聚糖)(来源于 poria cocos, 茯苓)等都具有抗肿瘤活性, 并且现在越来越受到人们的关注。
3.现代研究表明多糖的抗肿瘤活性主要是通过人体的免疫系统起作用而不是直接抑制肿瘤细胞的生长, 所以多糖抗肿瘤药物要比其它抗肿瘤药物对人体毒副作用小的多。香菇多糖是一种胸腺依赖型t细胞导向并有巨噬细胞参与的特殊免疫佐剂。它能识别脾脏及肝脏中抗原的巨噬细胞，促进淋巴细胞活化因子的产生，释放各种辅助性t细胞因子，增强宿主腹腔巨噬细胞吞噬率，当宿主机体注射香菇多糖数小时后，一些具生理活性的血清因子如急性期蛋白诱导因子、血管扩张和出血诱导因子、il-1生成诱导因子、il3和集落刺激因子的水平达到峰值。这些因子作用于淋巴细胞、肝细胞、血管内皮细胞后，产生许多有效免疫应答，同时导致胸腺内的前体t细胞趋于成熟、分化、增殖并向外周释放。目前我国批准了一些香菇多糖的药物. 这些具有生物活性多糖的共同结构特征是含有β-(1
→
6)支链β-(1
→
3)主链的葡聚寡糖。这些多糖多来源于lentinus edodes（香菇）的lentinan香菇多糖。然而像大多数天然提取的多糖一样，lentinan(香菇多糖)不能获得很高的纯度, 而且分子量常常不确定, 因而大大影响了它在临床上的应用。
4.本发明涉及的香菇多糖的核心片段β-（1
→
6）支链β-（1
→
3）主链的香菇六糖、香菇九糖，采用路线极简、操作方便、高效的合成方式制备，通过此化学法获得的香菇六糖、香菇九糖纯度高，产率高，品质可控。目前已有六糖、七糖的化学制备方法的报道，但其反应操作性复杂、操作困难，中间体后处理复杂，含有杂质时容易使反应失败，对技术人员要求极高，无法进行产业化。本专利提供的方法反应合成路线简单、选择性强，原料利用率高，对操作人员技术要求不高，产率高，适合产业化。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种路线极简、操作方便、高效的合成方法，来合成具有生物活性的、特别是可用作抗肿瘤药作用的β-（1
→
6）支链β-（1
→
3）主链的香菇六糖、香菇九糖。
6.本发明的目的是这样实现的：以2-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖1为糖基受体，以4,6-苄叉基-2,3-二-o-苯甲酰基-硫乙基葡萄糖3为糖基供体，在tmsotf的作用下偶联获得二糖4，脱去苄基后得到二糖受体5，以2-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖1用苯甲酰基保护后得到2,4,6-三-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖2为单糖供体，单糖供
体2与二糖受体5在tmsotf的作用下得到三糖供体6。
7.三糖供体6脱去苄基后得到三糖受体7。
8.三糖供体6与三糖受体7在tmsotf、nis的作用下偶联获得六糖8，脱去苄基后得到六糖9，再脱除所有的保护基即得到目标产物香菇六糖10。
9.以六糖8为糖基供体，与三糖受体7在tmsotf、nis的作用下偶联获得九糖11，脱除苄基得到九糖12，再脱除所有保护基得到目标香菇九糖13。本发明的合成方法在于：（1）以1摩尔2-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖1为糖基受体，以1.2摩尔4,6-苄叉基-2,3-二-o-苯甲酰基-硫乙基葡萄糖3为糖基供体，在tmsotf的作用下偶联获得二糖4，脱去苄基后得到二糖受体5，以2-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖1用苯甲酰基保护后得到2,4,6-三-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖2为单糖供体，1.2摩尔单糖供体2与1摩尔二糖受体5在tmsotf的作用下得到三糖供体6。如下式所示：bz为：c6h5(c=o)-；bn为c6h5ch
2-；ph为c6h
5-；set为c2h5s-;;（2）三糖供体6在pd(oh)
2-c和甲酸作用下，脱去苄基后得到三糖受体7。如下式所示：bz为：c6h5(c=o)-；bn为c6h5ch
2-；ph为c6h
5-；set为c2h5s-;（3）2摩尔三糖供体6与1摩尔三糖受体7在tmsotf、nis的作用下偶联获得六糖8，在pd(oh)
2-c和甲酸作用下，脱去苄基后得到六糖9，再脱除所有的保护基即得到目标产物香菇六糖10。如下式所示：bz为：c6h5(c=o)-；bn为c6h5ch
2-；ph为c6h
5-；set为c2h5s-;
（4）以2摩尔六糖8为糖基供体，与1摩尔三糖受体7在tmsotf、nis的作用下偶联获得九糖11，脱除苄基得到九糖12，再脱除所有保护基得到目标香菇九糖13。如下式所示：bz为：c6h5(c=o)-；bn为c6h5ch
2-；ph为c6h
5-；set为c2h5s-;
[0010] 本发明涉及具有生物活性的、特别是可用作抗肿瘤药的香菇多糖的核心片段-香菇六糖、香菇九糖的高效合成方法。
具体实施方式
[0011]
以下以具体实施例来说明本发明的技术方案，但本发明的保护范围不限于此。
实施例
[0012]
三糖供体6的制备（1）2-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖1（2.17克，5毫摩尔）溶于15毫升dmf中，加入三乙胺（1.67毫升，12毫摩尔），冰浴下滴加苯甲酰氯（1.39毫升，12毫摩尔）,在60℃下搅拌6小时后，薄层色谱分析表明反应完成，向反应体系中加入30毫升二氯甲烷，再依次
使用饱和碳酸氢钠（25毫升
×
2）、饱和氯化钠洗涤（25毫升
×
1）洗涤，收集有机相，减压蒸掉溶剂，苯甲酰基保护后得到2,4,6-三-o-苯甲酰基-3-o-苄基-硫乙基葡萄糖2，产率为98.6%。
[0013]
（2）单糖1（4.33克，10毫摩尔）溶于20毫升二氯甲烷中，得到溶液a，单糖3（6.25克，12毫摩尔）溶于25毫升二氯甲烷中，得到溶液b，将a和b混合得到溶液c，向c中加入tmsotf（580微升，5毫摩尔），再加入4
ꢀå
分子筛，在25℃下反应4小时后，薄层色谱分析表明反应完成。抽滤，减压蒸掉溶剂，得到二糖4，产率为95.4%。
[0014]
（3）二糖4（4.90克，5.5毫摩尔）溶于50毫升四氢呋喃：甲醇（v:v 9:1）混合溶液，加入 pd(oh)
2-c (20 wt%, 0.4 g)和 88% 甲酸 (1.6毫升，44毫摩尔），25℃下搅拌10分钟，薄层色谱分析表明反应完成，过滤，用100毫升甲醇洗涤，蒸干后得到二糖受体5，产率为98.3%。
[0015]
（4）单糖2（7.69克，12毫摩尔）溶于30毫升二氯甲烷中，得到溶液d，二糖受体5（8.02克，10毫摩尔）溶于30毫升二氯甲烷中，得到溶液e，将d和e混合得到溶液f，向f中加入tmsotf（580微升，5毫摩尔），再加入4
ꢀå
分子筛，在25℃下反应8小时后，薄层色谱分析表明反应完成。抽滤，减压蒸掉溶剂，得到三糖供体6，采用柱层析分离，用乙酸乙酯/环己烷（1/3）作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到纯的三糖供体6，产率为93.9%。
[0016]
三糖受体7的制备三糖供体6（6.91克，5毫摩尔）溶于50毫升四氢呋喃：甲醇（v:v 9:1）混合溶液，加入 pd(oh)
2-c (20 wt%, 0.4 g)和 88% 甲酸 (1.6毫升，44毫摩尔），25℃下搅拌10分钟，薄层色谱分析表明反应完成，过滤，用100毫升甲醇洗涤，蒸干得到三糖受体7，产率为94.3%。
[0017]
香菇六糖10的制备（1）三糖供体6（27.62克，20毫摩尔）溶于100毫升二氯甲烷中，得到溶液a，三糖受体7（12.91克，10毫摩尔）溶于50毫升二氯甲烷中，得到溶液b，将a和b混合得到溶液c，向c中加入tmsotf（690微升，6毫摩尔）、nis（0.65毫升，6毫摩尔），再加入4
ꢀå
分子筛，在25℃下反应8小时后，薄层色谱分析表明反应完成。抽滤，减压蒸掉溶剂，用柱层析分离，用乙酸乙酯/环己烷（1.5/1）作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到六糖8，产率为96.6%。
[0018]
（2）六糖8（26.09克，10毫摩尔）溶于100毫升四氢呋喃：甲醇（v:v 9:1）混合溶液，加入 pd(oh)
2-c (20 wt%, 0.8 g)和 88% 甲酸 (3.2毫升，88毫摩尔），25℃下搅拌15分钟，薄层色谱分析表明反应完成，过滤，用200毫升甲醇洗涤，蒸干后得到六糖9，产率为92.5%。
[0019]
（3）六糖9（25.19克，10毫摩尔）溶于90毫升甲醇中，先滴加乙酰氯（0.07毫升，1毫摩尔），在25℃下反应2.5小时后，再缓慢加入碳酸钾（2.76克，20毫摩尔），在25℃下反应24小时后，薄层色谱分析表明反应完成，浓缩后葡聚糖凝胶lh-20（甲醇）柱分离得到纯的香菇六糖10，产率为97.4%。ms：990.4 [m 1]
‑ꢀ
。
[0020]
香菇九糖13的制备（1）六糖供体8（52.18克，20毫摩尔）溶于200毫升二氯甲烷中，得到溶液a，三糖受体7（12.91克，10毫摩尔）溶于50毫升二氯甲烷中，得到溶液b，将a和b混合得到溶液c，向c中加入tmsotf（690微升，6毫摩尔）、nis（0.65毫升，6毫摩尔），再加入4
ꢀå
分子筛，在25℃下反
应12小时后，薄层色谱分析表明反应完成。抽滤，减压蒸掉溶剂，用柱层析分离，用乙酸乙酯/环己烷（2.5/1）作为淋洗液淋洗，收集相应组分，得到九糖11，产率为90.4%。
[0021]
（2）九糖11（30.70克，8毫摩尔）溶于150毫升四氢呋喃：甲醇（v:v 9:1）混合溶液，加入 pd(oh)
2-c (20 wt%, 0.8 g)和 88% 甲酸(3.2毫升，88毫摩尔），25℃下搅拌30分钟，薄层色谱分析表明反应完成，过滤，用300毫升甲醇洗涤，蒸干后得到九糖12，产率为93.5%。
[0022]
（3）九糖12（37.78克，10毫摩尔）溶于130毫升甲醇中，先滴加乙酰氯（0.07毫升，1毫摩尔），在25℃下反应2小时后，再缓慢加入碳酸钾（2.76克，20毫摩尔），在25℃下反应30小时后，薄层色谱分析表明反应完成，浓缩后葡聚糖凝胶lh-20（甲醇）柱分离得到纯的香菇九糖13，产率为95.7%。ms：1477.3 [m 1]
‑ꢀ
。
[0023]
上述实施例为本发明优选的实施方式，但本发明的实施方式并不受上述实施例的限制，其他的任何未背离本发明所做的改变均应为等效的置换方式，都包含在本发明的保护范围之内。