一种米黑根毛霉脂肪酶突变体及提高米黑根毛霉脂肪酶活性和/或甲醇耐受性的方法

技术特征：
1.一种米黑根毛霉脂肪酶突变体，其特征在于，所述的米黑根毛霉脂肪酶突变体的氨基酸序列上引入有n-糖基化位点，所述的n-糖基化位点上连接有n-糖链。2.根据权利要求1所述的米黑根毛霉脂肪酶突变体，其特征在于，所述的米黑根毛霉脂肪酶突变体的氨基酸序列上引入有n-糖基化位点是通过以下方法获得的：将如seq id no.1所示的氨基酸序列上的第167位由p突变为n、第242位由l突变n、第267位由r突变为n或第300位由p突变为n。3.一种提高米黑根毛霉脂肪酶活性和/或甲醇耐受性的方法，其特征在于，在米黑根毛霉脂肪酶成熟肽β-sheet二级结构中引入n-糖链。4.根据权利要求3所述的方法，其特征在于，具体步骤如下：在如seq id no.1所示的氨基酸序列上引入n-糖基化位点，所述的n-糖基化位点上连接有n-糖链。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述的在如seq id no.1所示的氨基酸序列上引入n-糖基化位点是将seq id no.1所示的氨基酸序列上的第167位由p突变为n、第242位由l突变n、第267位由r突变为n或第300位由p突变为n。6.权利要求1或2所述的米黑根毛霉脂肪酶突变体在催化油脂转化生物柴油中的应用。

技术总结
本发明公开了一种米黑根毛霉脂肪酶突变体及提高米黑根毛霉脂肪酶活性和/或甲醇耐受性的方法。本发明在米黑根毛霉脂肪酶成熟肽的β-sheet二级结构中引入糖基化修饰，获得了高活性高甲醇耐受性的脂肪酶突变体。与改造前相比，本发明产生的突变酶P167N，L242N，R267N和P300N酶活分别提高了33.90，17.90，14.07和12.26倍。当在60％的甲醇溶液中孵育1h后，突变酶残余活力由改造前的19.10％提高到60％以上。本发明产生的突变酶实现高效利用废油脂一步甲醇法制备生物柴油，这不仅提高了反应效率，缩短了反应时间，还简化了反应工艺。还简化了反应工艺。还简化了反应工艺。


技术研发人员：吕鹏梅 田苗 罗文 王治元 付俊鹰 李惠文
受保护的技术使用者：中国科学院广州能源研究所
技术研发日：2021.05.19
技术公布日：2022/11/22