一株产高分子量普鲁兰多糖的短梗霉YAT007菌株及其应用

技术特征：
1.一种产黑色素短梗霉(aureobasidium melanogenum)yat007菌株，已保藏于中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心，保藏菌号为cgmcc 40201。2.如权利要求1所述的产黑色素短梗霉yat007菌株的获得方法包括以下步骤：于连云港海州湾燕尾港海域(34
°
29
′0″
n，119
°
47
′0″
e)采集海泥样品，称取1g海泥样品，加入到9ml无菌水中，用玻璃棒搅拌约20min，使样品与无菌水充分混合，将其进行10倍浓度梯度稀释，稀释为10-4
、10-5
、10-6
等不同的稀释度；将稀释液倒到产黑色素pda培养基上，加入100μg/ml氨苄青霉素和40μg/ml氯霉素，每种稀释液浓度分别涂布三个平板，培养3d后挑取在培养基上产生黑色素的菌株；挑选的单菌落接种在ypd培养基和产黑色素pda培养基上并进行纯培养和复筛，在28℃培养箱中培养2d后，移入4℃的冰箱内保存备用；将待筛菌株活化后接种至种子培养基，在28℃和180rpm条件下培养24小时，然后将2.5ml种子液接种至50ml产普鲁兰多糖筛选培养基中，在28℃和180rpm下摇瓶培养3-5天，筛选出产普鲁兰多糖最多的菌株，命名为yat007。3.如权利要求1所述的产黑色素短梗霉yat007菌株用于发酵生产普鲁兰多糖。4.如权利要求1所述的产黑色素短梗霉yat007菌株用于发酵生产普鲁兰多糖方法，具体步骤如下：(1)菌种活化：将4℃斜面保藏产黑色素短梗霉yat007菌株转接到pda培养基培养活化；(2)种子培养：将yat007菌株挑取单菌落接种于种子培养基培养获得种子液；(3)发酵培养：按照10％(v/v)接种量将种子液转接至发酵培养基进行发酵培养；(4)胞外多糖的提取和纯化：发酵结束后取发酵液煮沸后离心，取上清液加入预冷的无水乙醇，冷却过夜静置沉淀，离心后弃去上清液，收集沉淀，烘至恒重得到胞外多糖，将粗提的胞外多糖加入无菌去离子水溶解后，重复乙醇进行沉淀提取纯化。5.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(1)中菌种培养活化条件为28
±
2℃培养4～6天。6.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(2)中种子培养条件为28℃，180rpm，培养24h。7.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(3)中的接种比例为10％(v/v)，发酵产酶条件为28℃，180rpm条件下进行发酵培养120小时。8.根据权利要求4所述的方法，其特征在于，所述步骤(4)中胞外多糖的提取和纯化的条件为：发酵结束后取发酵液至离心管中，12000
×
g离心10min，取上清于100℃煮沸15min后12000
×
g离心10min，冷却至室温，取上清液于新的离心管中，加入预冷的无水乙醇，充分混匀，4℃过夜静置沉淀，9000
×
g，4℃离心5min，弃上清液，80℃烘至恒重，将粗提的胞外多糖加入无菌去离子水溶解后，重复乙醇进行沉淀提取纯化3次。9.根据权利要求1所述的产黑色素短梗霉yat007菌株生产的普鲁兰多糖制备而成的硬胶囊，包括以下组分：0.85份结冷胶，200份普鲁兰多糖，17份甘油，1.3柠檬酸钾。10.根据权利要求1所述的产黑色素短梗霉yat007生产的普鲁兰多糖用于制备结冷胶基硬胶囊的方法，包括以下步骤：s1：将普鲁兰多糖用万能粉碎机粉碎、过筛、密封；s2：按照结冷胶浓度为0.85g/l，普鲁兰多糖浓度为200.0g/l，甘油浓度为17.0g/l，柠
檬酸钾浓度为1.3g/l，配制100ml混合胶液，将混合胶液进行超声脱气处理，于50℃条件下保温30min；s3：在15℃条件下蘸胶后，于50℃干燥箱中干燥30min，进行拔壳、剪切、套合、储存即可获得普鲁兰多糖-结冷胶基硬胶囊。

技术总结
本发明属于生物工程技术领域，本发明属于生物工程技术领域，特别涉及一种高分子量普鲁兰多糖的菌株筛选鉴定、制备方法及应用。本发明建立了高产普鲁兰多糖的菌株筛选方法及发酵产糖的方法，该菌株相比之前报道的短梗霉菌株，YAT007菌株胞外普鲁兰多糖浓度高且分子量大；且YAT007菌株产高分子普鲁兰多糖制备的普鲁兰多糖-结冷胶基硬胶囊具有良好的性能，因此本研究筛选到的YAT007菌株在胞外多糖的生产中有很好的应用前景。产中有很好的应用前景。


技术研发人员：杨光 胡志红 磨鸿娟 王毓涵 苏彦文 东倬含 耿晓萌
受保护的技术使用者：江苏海洋大学
技术研发日：2022.08.02
技术公布日：2022/11/18