作为JAK2抑制剂的环状化合物及其应用

作为jak2抑制剂的环状化合物及其应用
技术领域
1.本发明涉及药物化学领域；具体地说，本发明涉及新型jak2抑制剂及其应用。


背景技术：

2.janus激酶(jak)是一种非受体型酪氨酸蛋白激酶，是酪氨酸激酶家族的相对较大的蛋白质(120-130kda)。jak家族共有四个成员：jak1、jak2、tyk2和jak3。其中前三者在生物体内广泛表达，而jak3仅在髓系和淋巴系细胞中表达。jak家族的所有成员都含有7个不同长度的同源结构域，酪氨酸激酶结构域jh1和假激酶结构域jh2位于羧基末端部分。假激酶结构域jh2能调节激酶结构域活性并产生抑制作用。结构域jh3-jh4在结构上与sh2结构域相似。jh4-jh7结构域位于激酶的氨基末端，其对于jaks激酶与细胞因子受体在细胞表面的结合和维持受体表达是非常重要的。
3.jak激酶在许多细胞因子受体的信号传导过程中起枢纽作用，其主要是通过jak-stat信号通路来调节信号传导过程。jak-stat是指jak激酶-细胞信号转导与转录活化因子通路，该通路在50多种细胞因子和生长因子的下游运行，被认为是免疫系统的重要交流节点。jak-stas信号传导过程通常包括以下过程，首先，细胞因子与细胞膜上的特异性受体结合，诱导受体-jak复合物的二聚化，jak激酶被激活。然后，活化的jak磷酸化细胞因子受体的细胞质结构域中的酪氨酸残基为stat提供停靠位点。特定的stat通过其sh2结构域结合细胞因子受体，并通过jak在酪氨酸残基上磷酸化，导致通过sh2-磷酸盐相互作用形成同源或异源二聚体。接着，二聚体stat从细胞质转移到细胞核，在那里它们通过与特定dna结合调节基因的表达。
4.jak在先天和适应性免疫以及造血中都起着关键作用，使其成为许多治疗适应症的有吸引力的靶标。因此，自1990年代初期被发现以来，jak一直作为新药的目标而逐渐受到关注。现在，临床上存在多种化学实体，涵盖各种适应症，包括骨髓增生性疾病和各种炎症性疾病。
5.jak2信号在骨髓增生性疾病的发病机制中具有关键作用，在约90％的真性红细胞增多症患者，以及约50％的原发性骨髓纤维化和原发性血小板增多症患者体内发现jak2假激酶结构域v617f的点突变。该突变导致jak2不依赖细胞因子连续激活，并活化下游信号通路。在ph阴性慢性髓系白血病、慢性髓系单核细胞白血病、巨核细胞性急性髓性白血病的发病和青少年髓系单核细胞白血病中也发现了该突变(10-20％)。jak2假激酶结构域中的其他突变(包括arg683的点突变)已在大约20％的唐氏综合征相关的急性淋巴细胞白血病和急性髓性白血病中检测到。因此，jak2已成为该领域的热门靶点，jak2抑制剂在炎症、自身免疫性疾病、骨髓纤维化及多种血液恶性肿瘤中有很好的应用前景。
6.目前为止，已上市的jak小分子抑制剂大多为泛抑制剂，对jak家族成员缺乏足够的选择性，这就导致其在临床应用过程中可能出现一些不良反应。例如，jak2抑制剂同时抑制jak3，会导致免疫缺陷。因此，研究开发对jak2具有高选择性的新结构具有重要的临床意义和应用价值。


技术实现要素：

7.本发明的目的在于提供一种新型的大环类jak抑制剂，这种抑制剂对jak2具有选择性抑制作用，从而能够具备临床意义和应用前景。
8.本发明的第一方面，提供了一种如下式i所示的化合物，或其立体异构体或光学异构体、药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，
[0009][0010]
式中，
[0011]
x选自n、ch；
[0012]
r1选自下组：氢、卤素、c
1-c
10
烷基、羟基、c
1-c
10
烷氧基、硝基、氨基、乙酰氨基、c
1-c3烷基甲酰基、羟基乙酰基、c
1-c3烷氧基甲酰基；n选自0、1、2、3；
[0013]
r2选自下组：氢、卤素、c
1-c
10
烷基、c
2-c
10
酰基；
[0014]
r3选自下组：氢、卤素、羟基、氨基、c
1-c
10
烷基、c
1-c
10
烷氧基、或被一个或多个c
1-c
10
烷基或c
1-c
10
烷氧基取代的4元～6元含氮或含氧杂环；
[0015]
r4选自下组：氢、取代或未取代的c
1-c
10
烷基、取代或未取代的c
1-c
10
烷基-(4～6元含氮或含氧杂环)；
[0016]
x1为-(l)
m-，其中，所述的l选自下组：-chr-、-c(o)-、-nr-、-o-、-ch＝ch-、r为h或c
1-c4烷基；m为2、3、4、5、6、7、8、9、10或11；
[0017]
除非特别说明，所述的取代指基团上的一个或多个氢原子被选自下组的取代基取代：卤素、c
1-c
10
烷基。
[0018]
在另一优选例中，所述的x1为选自下组的链状结构：
[0019][0020]
其中，r5为c
1-c3烷基；
[0021]
l、m、o和r各自独立地选自0、1或2；
[0022]
p和q各自独立选自0，1，2，3；
[0023]
在另一优选例中，所述的式i化合物具有如下式iii所示的结构：
[0024][0025]
式中
[0026]
r2、r3、r4、x1的定义如权利要求1所述。
[0027]
在另一优选例中，所述的式i化合物具有如下式iii所示的结构：
[0028][0029]
其中，x1选自
[0030][0031]
r4选自下组：氢、甲基、或选自下组的结构单元：
[0032][0033]
其中，x为1、2或3。
[0034]
在另一优选例中，所述的r5选自下组：氢、甲基、乙基、c
1-c
10
烷基取代的4-6元含氮或含氧杂环。
[0035]
在另一优选例中，所述的式i化合物具有如下式iv所示的结构：
[0036]
[0037]
r4选自：
[0038]
x1选自：
[0039]
在另一优选例中，所述化合物选自下组：
[0040][0041]
本发明的第二方面，提供了一种药物组合物，所述药物组合物含有本发明第一方面所述的化合物或其立体异构体或光学异构体，或其药学上可接受的盐、前药或溶剂化物，以及药学上可接受的载体或赋形剂。
[0042]
本发明的第三方面，提供了一种本发明第一方面所述的化合物或其立体异构体或光学异构体，或其药学上可接受的盐、前药或溶剂化物的用途，其特征在于，用于制备用于预防或治疗jak2介导的疾病的药物；和/或用于制备jak2抑制剂。
[0043]
在另一优选例中，所述jak2介导的疾病为骨髓增生异常综合征(mds)、嗜酸粒细胞增多症、肿瘤、炎性疾病或细菌、病毒或真菌引起的感染；
[0044]
优选地，所述肿瘤选自下组：骨髓增殖癌(mpn)、黑色素瘤、肺癌、肾癌、卵巢癌、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、骨癌、胰腺癌、皮肤癌、头颈癌、子宫癌、直肠癌、肛门癌、胃癌、睾丸癌、输卵管癌、子宫内膜癌、子宫颈癌、阴道癌、外阴癌、何杰金氏病、非何杰金淋巴瘤、食道癌、小肠癌、内分泌系统癌、甲状腺癌、甲状旁腺癌、肾上腺癌、软组织肉瘤、尿道癌、阴茎癌、急性髓性白血病、慢性髓性白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性淋巴细胞白血病、小儿实体瘤、淋巴细胞性淋巴瘤、膀胱癌、肾或输尿管癌、肾盂癌、中枢神经系统(cns)肿瘤、原发性cns淋巴瘤、肿瘤血管生成、脊轴瘤、脑干神经胶质瘤、垂体腺瘤、卡波西肉瘤、表皮样癌、鳞状细胞癌、t细胞淋巴瘤；和/或
[0045]
所述炎性疾病选自下组：类风湿性关节炎、强直性脊柱炎、自身免疫性溶血性贫血、关节炎、重症肌无力、系统性红斑狼疮、恶性贫血、多肌炎；和/或
[0046]
所述病毒选自下组：肝炎病毒(甲型、乙型和丙型)、孢疹病毒、流感病毒、腺病毒、冠状病毒、麻疹病毒、登革热病毒、脊髓灰质炎病毒、狂犬病病毒；和/或
[0047]
所述细菌选自下组：衣原体、立克次氏体、分枝杆菌、葡萄球菌、肺炎球菌、霍乱、破伤风；和/或
[0048]
所述真菌选自下组：假丝酵母、曲霉、皮炎芽酵母。
[0049]
本发明的第四方面，提供了一种jak2抑制剂，所述的jak2抑制剂含有本发明第一方面所述的化合物或其立体异构体或光学异构体，或其药学上可接受的盐、前药或溶剂化物或本发明第二方面所述的药物组合物。
[0050]
应理解，在本发明范围内中，本发明的上述各技术特征和在下文(如实施例)中具体描述的各技术特征之间都可以互相组合，从而构成新的或优选的技术方案。限于篇幅，在此不再一一累述。
附图说明
[0051]
图1为化合物l-4的激酶谱树状图；
[0052]
图2为化合物l-4的激酶选择性谱图；
[0053]
图3为l-4对小鼠溃疡性结肠炎的影响；(a)小鼠体重变化图；(b)小鼠dai变化图；(c)l13对结肠质量长度之比的影响。
具体实施方式
[0054]
发明人经过广泛而深入的研究，发现了氨基嘧啶类大环结构作为jak抑制剂的潜在用途，最终发现了一系列新型的能够选择性抑制jak2激酶的大环类化合物，为免疫炎症和抗肿瘤药物的开发提供了全新的物质基础。在此基础上，发明人完成了本发明。
[0055]
术语定义
[0056]
除非另有定义，本文中使用的所有技术和科学术语具有与所公开的发明所属领域的技术人员的普遍理解相同的含义。为便于理解本发明，对本发明涉及的相关术语作如下定义，但本发明的范围并不限于这些具体的定义。
[0057]
本文中，“jak2”是指janus激酶2，这是一种胞质内非受体型可溶性蛋白酪氨酸激酶。jak-stat是janus激酶-细胞信号转导及转录活化因子通路，是当前细胞因子研究领域的热点。
[0058]
本文中，“烷基”是指由碳原子和氢原子构成的直链或支链的饱和基团。例如，“c
1-c
10
烷基”是指碳链长度为1-10个碳原子的饱和的支链或直链烷基，优选1-6个碳原子，更优选1-3个碳原子的烷基。烷基的例子包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、庚基、戊基等等。
[0059]
本文中，“烷氧基”指被烷基取代的氧基。在具体的实施方式中，本文所用的烷氧基是1-10个碳原子长的烷氧基，更优选1-4个碳原子长的烷氧基。烷氧基的例子包括但不限于甲氧基、乙氧基、丙氧基等。在进一步的实施方式中，烷氧基可以是取代的烷氧基，例如，卤素取代的烷氧基。在具体的实施方式中，优选卤素取代的c
1-c3烷氧基。
[0060]
本文中，“卤素”指氟、氯、溴和碘。在优选的实施方式中，卤素是氟或氯。
[0061]
本文中，“卤代”指氟代、氯代、溴代和碘代。
[0062]
本文中，“取代或未取代的”或“任选取代的”指被该术语所修饰的取代基可任选地被1-5个(例如，1、2、3、4或5个)选自以下的取代基取代：卤素、c1-4醛基、c1-6直链或支链烷基、卤素取代的c1-6直链或支链烷基(例如三氟甲基)、c1-6烷氧基、卤素取代的c1-6烷氧基(例如三氟甲氧基)、氰基、硝基、氨基、羟基、羟甲基、羧基、乙氧甲酰基、n(ch3)和c1-4酰基。
[0063]
活性成分
[0064]
如本文所用，“本发明化合物”指式(i)所示的化合物，并且还包括及式(i)化合物的各种晶型形式、药学上可接受的盐、水合物或溶剂合物，
[0065][0066]
在式i中，r1、r2、r3、r4、n和x1如上文所述。
[0067]
基于本发明的教导以及本领域的公知常识，本领域技术人员会理解，本发明化合物中的各基团可以作进一步的取代，从而得到能够具备与本发明具体公开的化合物活性相同或相似的衍生物。本发明化合物中的各基团可以被本领域常规的各种取代基取代，只要这种取代不违反化学合成规则或者化合价规则。
[0068]
本文所用的术语“取代”是指特定基团上的一个或多个氢原子被特定的取代基所替代。特定的取代基可以是前文中相应描述的取代基，也可以是各实施例中出现的具体取代基或者本领域的常规取代基。因此，在本发明中，通式中的取代基也可以各自独立地为实施例中具体化合物中的相应基团；即，本发明既包括上述通式中各取代基的组合，也包括通式中所示部分取代基与实施例中出现的其它具体取代基的组合。制备具有这样的取代基组合的化合物并检测所得化合物是活性是本领域技术人员基于本领域的惯常技术手段不难做到的。
[0069]
本文所用的术语，“药学上可接受的盐”是指本发明化合物与酸或碱所形成的适合用作药物的盐。药学上可接受的盐包括无机盐和有机盐。一类优选的盐是本发明化合物与酸形成的盐。适合形成盐的酸包括但并不限于：盐酸、氢溴酸、氢氟酸、硫酸、硝酸、磷酸等无机酸，甲酸、乙酸、丙酸、草酸、丙二酸、琥珀酸、富马酸、马来酸、乳酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、苦味酸、甲磺酸、苯甲磺酸，苯磺酸等有机酸；以及天冬氨酸、谷氨酸等酸性氨基酸。
[0070]
除非特别说明，本发明所描述的结构式意在包括所有的同分异构形式(如对映异构，非对映异构和几何异构体(或构象异构体))：例如含有不对称中心的r、s构型，双键的(z)、(e)异构体等。因此，本发明化合物的单个立体化学异构体或其对映异构体、非对映异构体或几何异构体(或构象异构体)的混合物都属于本发明的范围。
[0071]
本文所用的术语，“互变异构体”表示具有不同能量的结构同分异构体可以超过低能垒，从而互相转化。比如，质子互变异构体(即质子移变)包括通过质子迁移进行互变，如1h-吲唑与2h-吲唑。化合价互变异构体包括通过一些成键电子重组而进行互变。
[0072]
本文所用的术语，“溶剂合物”是指本发明化合物与溶剂分子配位形成特定比例的配合物。
[0073]
本文所用的术语，“水合物”是指本发明化合物与水进行配位形成的配合物。
[0074]
药物组合物和施用方法
[0075]
由于本发明化合物具有优异的jak激酶的抑制活性，因此本发明化合物及其各种晶型，药学上可接受的无机或有机盐，水合物或溶剂合物，以及含有本发明化合物为主要活性成分的药物组合物可用于预防和/或治疗(稳定、减轻或治愈)jak激酶相关疾病。
[0076]
本发明的药物组合物包含安全有效量范围内的本发明化合物及药学上可以接受的赋形剂或载体。其中“安全有效量”指的是：化合物的量足以明显改善病情，而不至于产生严重的副作用。通常，药物组合物含有1-2000mg本发明化合物/剂，更佳地，含有10-200mg本发明化合物/剂。较佳地，所述的“一剂”为一个胶囊或药片。
[0077]“药学上可接受的载体”指的是：一种或多种相容性固体或液体填料或凝胶物质，它们适合于人使用，而且必须有足够的纯度和足够低的毒性。“相容性”在此指的是组合物中各组份能和本发明化合物以及它们之间相互掺和，而不明显降低化合物的药效。药学上可以接受的载体部分例子有纤维素及其衍生物(如羧甲基纤维素钠、乙基纤维素钠、纤维素乙酸酯等)、明胶、滑石、固体润滑剂(如硬脂酸、硬脂酸镁)、硫酸钙、植物油(如豆油、芝麻油、花生油、橄榄油等)、多元醇(如丙二醇、甘油、甘露醇、山梨醇等)、乳化剂(如)、润湿剂(如十二烷基硫酸钠)、着色剂、调味剂、稳定剂、抗氧化剂、防腐剂、无热原水等。
[0078]
本发明化合物或药物组合物的施用方式没有特别限制，代表性的施用方式包括(但并不限于)：口服、肠胃外(静脉内、肌肉内或皮下)。
[0079]
用于口服给药的固体剂型包括胶囊剂、片剂、丸剂、散剂和颗粒剂。在这些固体剂型中，活性化合物与至少一种常规惰性赋形剂(或载体)混合，如柠檬酸钠或磷酸二钙，或与下述成分混合：(a)填料或增容剂，例如，淀粉、乳糖、蔗糖、葡萄糖、甘露醇和硅酸；(b)粘合剂，例如，羟甲基纤维素、藻酸盐、明胶、聚乙烯基吡咯烷酮、蔗糖和阿拉伯胶；(c)保湿剂，例如，甘油；(d)崩解剂，例如，琼脂、碳酸钙、马铃薯淀粉或木薯淀粉、藻酸、某些复合硅酸盐、和碳酸钠；(e)缓溶剂，例如石蜡；(f)吸收加速剂，例如，季胺化合物；(g)润湿剂，例如鲸蜡醇和单硬脂酸甘油酯；(h)吸附剂，例如，高岭土；和(i)润滑剂，例如，滑石、硬脂酸钙、硬脂酸镁、固体聚乙二醇、十二烷基硫酸钠，或其混合物。胶囊剂、片剂和丸剂中，剂型也可包含缓冲剂。
[0080]
固体剂型如片剂、糖丸、胶囊剂、丸剂和颗粒剂可采用包衣和壳材制备，如肠衣和其它本领域公知的材料。它们可包含不透明剂，并且，这种组合物中活性化合物或化合物的释放可以延迟的方式在消化道内的某一部分中释放。可采用的包埋组分的实例是聚合物质和蜡类物质。必要时，活性化合物也可与上述赋形剂中的一种或多种形成微胶囊形式。
[0081]
用于口服给药的液体剂型包括药学上可接受的乳液、溶液、悬浮液、糖浆或酊剂。除了活性化合物外，液体剂型可包含本领域中常规采用的惰性稀释剂，如水或其它溶剂，增溶剂和乳化剂，例知，乙醇、异丙醇、碳酸乙酯、乙酸乙酯、丙二醇、1,3-丁二醇、二甲基甲酰胺以及油，特别是棉籽油、花生油、玉米胚油、橄榄油、蓖麻油和芝麻油或这些物质的混合物等。
[0082]
除了这些惰性稀释剂外，组合物也可包含助剂，如润湿剂、乳化剂和悬浮剂、甜味
剂、矫味剂和香料。
[0083]
除了活性化合物外，悬浮液可包含悬浮剂，例如，乙氧基化异十八烷醇、聚氧乙烯山梨醇和脱水山梨醇酯、微晶纤维素、甲醇铝和琼脂或这些物质的混合物等。
[0084]
用于肠胃外注射的组合物可包含生理上可接受的无菌含水或无水溶液、分散液、悬浮液或乳液，和用于重新溶解成无菌的可注射溶液或分散液的无菌粉末。适宜的含水和非水载体、稀释剂、溶剂或赋形剂包括水、乙醇、多元醇及其适宜的混合物。
[0085]
本发明化合物可以单独给药，或者与其他药学上可接受的化合物联合给药。
[0086]
联合给药时，所述药物组合物还包括与一种或多种(2种，3种，4种，或更多种)其他药学上可接受的化合物。该其他药学上可接受的化合物中的一种或多种可与本发明的化合物同时、分开或顺序地施用。
[0087]
使用药物组合物时，是将安全有效量的本发明化合物适用于需要治疗的哺乳动物(如人)，其中施用时剂量为药学上认为的有效给药剂量，对于60kg体重的人而言，日给药剂量通常为1～2000mg，优选20～500mg。当然，具体剂量还应考虑给药途径、病人健康状况等因素，这些都是熟练医师技能范围之内的。
[0088]
制备方法
[0089]
本发明的化合物可以按照常规路线或方法制备得到，也可以按照本文中描述的方法或路线获得。例如路线1。
[0090]
合成路线1：
[0091][0092]
14元环的合成路线a[0093]
14元环大环化合物的合成路线如上。
[0094]a试剂与条件：(a)cs2co3,xantphos,pd2(dba)3,dioxane,reflux,5h,45％；(b)naoh,h2o,meoh,40℃,1h,78％；(c)cs2co3,dmf,100℃,overnight,50.6％；(d)nabh3cn,meoh,r.t.,12h,70％；(e)hatu,dipea,dmf,r.t.,1h,54％；(f)10％pd/c,h2,meoh,40℃,
1h,46.7％；(g)cs2co3,xantphos,pd2(dba)3,dmf,140℃,6h,56％.
[0095]
合成路线2：
[0096][0097]
19元环的合成路线
[0098]
14元环大环化合物的合成路线如上。
[0099]a试剂与条件：(a)naoh,bu4nhso4,h2o,ch2cl2,r.t.,3h,40％；(b)nah,dmf,0℃,1h,53％；(c)cs2co3,xantphos,pd2(dba)3,dmf,80℃,10h,60％；(d)sncl2,ch2cl2,meoh,r.t.,18h,41.7％；(e)tsoh
·
h2o,n-butanol,105℃,2h,74.4％.
[0100]
本发明的主要优点在于：
[0101]
1.本发明的化合物结构新颖且具有优异的jak激酶抑制剂作用；
[0102]
2.本发明的化合物对于jak2的选择抑制性更好。
[0103]
下面结合具体实施例，进一步阐述本发明。应理解，这些实施例仅用于说明本发明而不用于限制本发明的范围。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，通常按照常规条件，或按照制造厂商所建议的条件。除非另外说明，否则百分比和份数按重量计算。
[0104]
以下实施例中所用的实验材料和试剂如无特别说明均可从市售渠道获得。
[0105]
本文中，“reflux”表示回流。
[0106]
实施例1制备化合物l-1
[0107]
1)1)3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸甲酯的合成
[0108][0109]
将2-氯-4-氨基-5-甲基嘧啶(500.00mg,3.4826mmol)加入反应瓶，然后加入3-溴苯甲酸甲酯(898.73mg,4.1792mmol)、cs2co3(3.40g,10.4352mmol)、xantphos(403.00mg,0.6965mmol)、pd2(dba)3(319.00mg,0.3484mmol)，n2置换后，加入无水1,4-二氧六环溶液，加热回流约5h。反应完成后过滤，二氯甲烷萃取，产物经硅胶柱层析(pe:ea＝5:1)分离，得黄色固体3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸甲酯435.22mg(45％)。
[0110]1h-nmr(400mhz,dmso)δ9.05(s,1h),8.26(s,1h),8.09(s,1h),8.03(d,j＝8.1,1.2hz,1h),7.69(d,j＝7.8hz,1h),7.52(t,j＝7.9hz,1h),3.87(s,3h),2.19(s,3h).lc-ms(m/z):278.10/280.10(m h) .
[0111]
2)3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基苯甲酸的合成
[0112][0113]
将3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸甲酯(100mg,0.3600mmol)溶于甲醇(3ml)，加入naoh(345.7mg,8.6425mmol)的水溶液(1ml)，40℃搅拌约40min。反应完成后，加水稀释，旋干甲醇，加入1m hcl调ph值为2。乙酸乙酯萃取，合并有机相，旋干得棕色固体3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸74.06mg(78％)。
[0114]1h-nmr(400mhz,cd3od)δ8.24(s,1h),7.99
–
7.92(m,2h),7.80(d,j＝7.7hz,1h),7.46(t,j＝7.9hz,1h),2.21(s,3h).lc-ms(m/z):264.10/266.10(m h)

.
[0115]
3)5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯甲醛的合成
[0116][0117]
将2-羟基-5-硝基苯甲醛(500.00mg,2.9919mmol)，氯乙基吡咯烷盐酸盐(712.40mg,4.1886mmol)，cs2co3(1.462g，4.4879mmol)加入反应瓶，然后加入无水dmf(8ml)溶解，升温至100℃搅拌过夜。tlc监测反应进度，反应完成后，降温，将反应液倒入冰水中，二氯甲烷萃取，盐水洗涤，合并有机相后浓缩。产物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝30:1)分离，得黄色粘稠状固体5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯甲醛400mg(50.6％)。
[0118]1h-nmr(400mhz,dmso)δ10.34(s,1h),8.49(dd,j＝9.2,2.9hz,1h),8.41(d,j＝2.9hz,1h),7.50(d,j＝9.2hz,1h),4.41(t,j＝5.4hz,2h),2.95(t,j＝5.2hz,2h),2.60(s,4h),1.70(s,4h).lc-ms(m/z):265.20(m h)

.
[0119]
4)n-甲基-1-(5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)甲胺的合成
[0120][0121]
将5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯甲醛(316.00mg,1.1970mmol)加入反应瓶，加入甲醇(5ml)溶解，然后依次加入甲胺盐酸盐(162.00mg,2.3993mmol)，nabh3cn(90.26mg,1.4363mmol)，n2置换，室温反应约12h。反应完成后，乙酸乙酯萃取，盐水洗涤。合并有机相后浓缩。产物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝10:10)分离，得黄色粘稠状固体n-甲基-1-(5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)甲胺234.05mg(70％)。
[0122]1h-nmr(400mhz,dmso)δ8.18(s,1h),8.11(d,j＝8.9hz,1h),7.18(d,j＝9.0hz,1h),4.21(t,j＝5.5hz,2h),3.63(s,2h),2.81(t,j＝5.5hz,2h),2.50
–
2.41(m,4h),2.25(s,3h),1.69
–
1.62(m,4h).lc-ms(m/z):280.20(m h)

.
[0123]
5)3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)n-甲基-n-(5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄基)苯甲酰胺的合成
[0124][0125]
将3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)苯甲酸(34.00mg,0.1289mmol)，n-甲基-1-(5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)甲胺(43.17mg,0.1547mmol)和dipea(166.60mg,1.2891mmol)溶于dmf，加入hatu(68.60mg,0.1804mmol)，室温反应约1h。反应完成后，乙酸乙酯萃取，依次用饱和nahco3水溶液、盐水洗。合并有机相后浓缩。产物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝30:1)分离，得黄色固体3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)n-甲基-n-(5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄基)甲酰胺36.55mg(54％)。
[0126]1h-nmr(400mhz,cd3od)δ7.88(s,1h),7.82(s,1h),7.76
–
7.67(m,2h),7.48(d,j＝7.9hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.28(d,j＝7.4hz,1h),7.24(d,j＝7.7hz,1h),6.84(d,j＝8.5hz,1h),4.62(s,2h),3.97(t,j＝5.5hz,2h),3.03(s,3h),2.74(t,j＝5.5hz,2h),2.54
–
2.46(m,4h),2.03(s,3h),1.76
–
1.69(m,4h).lc-ms(m/z):525.20/527.20(m h)

.
[0127]
6)3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)n-甲基-n-(5-氨基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄基)苯甲酰胺的合成
[0128][0129]
将3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)n-甲基-n-(5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄基)苯甲酰胺(68.00mg,0.1295mmol)溶于甲醇(2ml)，加入10％pd/c(13.60mg,20％)，h2置换后，40℃反应约30min。反应完成后，硅藻土过滤，旋干，产物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝30:1)分离，得棕色固体3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)n-甲基-n-(5-氨基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄基)苯甲酰胺30mg(46.7％)。
[0130]1h-nmr(400mhz,cd3od)δ7.88(s,1h),7.82(s,1h),7.76
–
7.67(m,2h),7.48(d,j＝7.9hz,1h),7.40(t,j＝7.8hz,1h),7.28(d,j＝7.4hz,1h),7.24(d,j＝7.7hz,1h),6.84(d,j＝8.5hz,1h),4.76(s,2h),4.62(s,2h),3.97(t,j＝5.5hz,2h),3.03(s,3h),2.74(t,j＝5.5hz,2h),2.54
–
2.46(m,4h),2.03(s,3h),1.76
–
1.69(m,4h).lc-ms(m/z):495.20/497.20(m h)

.
[0131]
7)35,7-二甲基-1
4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)-2,4,7-三氮杂-3(2,4)-嘧啶-1,5(1,3)-二苯并环八烷-6-酮(l-1)的合成
[0132][0133]
将3-((2-氯-5-甲基嘧啶-4-基)氨基)n-甲基-n-(5-氨基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苄基)苯甲酰胺(50.00mg,0.1010mmol)加入反应瓶，然后加入cs2co3(131.60mg,0.4039mmol)，xantphos(16.36mg,0.0283mmol)，pd2(dba)3(18.50mg,0.0202mmol)，n2置换，加入无水dmf溶液(1.5ml)，140℃加热反应约6h。反应完成后过滤，二氯甲烷萃取，产物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝20:1)分离，得淡黄色固体(l-1)25.90mg(56％)。
[0134]1h-nmr(400mhz,dmso)δ9.11(s,1h),8.83(d,j＝2.3hz,1h),8.72(s,1h),7.89(s,1h),7.65(s,1h),7.42(t,j＝7.8hz,1h),7.25(d,j＝7.6hz,1h),7.06(d,j＝7.3hz,1h),7.04
–
6.97(m,1h),6.90(d,j＝8.9hz,1h),4.27(s,2h),4.03(t,2h),2.94(s,3h),2.81(t,2h),2.57
–
2.52(m,4h),2.11(s,3h),1.74
–
1.65(m,4h).
13
c nmr(151mhz,dmso)δ170.58,159.24,157.89,156.77,150.08,139.64,137.56,135.26,128.83,124.70,124.48,122.75,120.15,119.67,118.25,112.92,104.37,67.48,54.50,54.11,47.74,32.20,23.27,13.45.hrms(esi):(m/z):[m h] calcd for c
26h31
n6o
2 459.2508；found 459.2507.
[0135]
实施例2制备化合物l-2
[0136][0137]
用合成l-1的方法合成l-2，得淡黄色固体23mg(56％)。
[0138]1h-nmr(400mhz,dmso)δ9.19(s,1h),8.85(d,j＝5.3hz,2h),7.94(s,1h),7.53(s,1h),7.12(d,j＝10.7hz,1h),7.03(dd,j＝8.8,2.6hz,1h),6.96(d,j＝8.5hz,1h),6.91(d,j＝8.9hz,1h),4.27(s,2h),4.03(t,j＝5.4hz,2h),2.93(s,3h),2.79(s,2h),2.50
–
2.46(m,4h),2.12(s,3h),1.73
–
1.64(m,4h).
13
c-nmr(151mhz,dmso)δ169.19,161.06,158.94,157.85,157.19,150.18,141.68,138.97,135.13,124.52,120.20,119.78,118.34,112.93,109.32,107.00,104.63,67.55,54.52,54.13,48.67,32.26,23.29,13.39.hrms(esi):(m/z):[m h] calcd for c
26h30
fn6o
2 477.2414；found 477.2416.
[0139]
实施例3制备化合物l-3
[0140][0141]
用合成l-1的方法合成l-3，得淡黄色固体18mg(56％)。
[0142]1h-nmr(400mhz,dmso)δ9.12(s,1h),8.53(d,j＝5.9hz,2h),7.91(s,1h),7.66(d,j＝6.7hz,1h),7.42
–
7.34(m,1h),7.21(s,1h),7.02(d,j＝6.6hz,1h),6.90(d,j＝8.7hz,1h),4.26(s,2h),4.02(t,j＝5.5hz,2h),2.94(s,4h),2.79(t,2h),2.50
–
2.48(m,4h),2.11(s,3h),1.75
–
1.62(m,5h).
13
c-nmr(151mhz,dmso)δ169.81,159.26,157.88,157.03,154.37,150.16,135.21,133.48,128.81,126.73,124.65,122.76,119.40,118.48,115.98,112.99,104.31,67.56,54.52,54.12,48.66,32.43,23.30,13.35.hrms(esi):(m/z):[m h] calcd for c
26h30
fn6o
2 477.2414；found 477.2415.
[0143]
实施例4制备化合物l-4
[0144]
1-((4-溴-2-丁烯氧基)甲基)-3-溴苯的合成
[0145][0146]
将3-溴苯甲醇(200.00mg,1.0693mmol)，1,4-二溴-2-丁烯(206mg,0.9631mmol)和
bu4nhso4(36mg,0.1060mmol)溶于二氯甲烷(4ml)，滴加氢氧化钠(342mg,8.5500mmol)的饱和水溶液，室温反应3h。tlc监测反应结束后，二氯甲烷萃取，合并有机相后无水硫酸钠干燥，浓缩。产物经硅胶柱层析(pe:ea＝100:1)分离，得无色油状液体136.00mg(40％)。
[0147]1h-nmr(400mhz,dmso)δ7.52
–
7.46(m,2h),7.36
–
7.30(m,2h),6.02
–
5.86(m,2h),4.47(s,2h),4.15(dd,j＝4.5,1.7hz,2h),4.02(d,j＝3.1hz,2h).
[0148]
2)1-(吡咯烷-1-基)乙氧基)-(2-((4-(3-溴苄氧基)丁基-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-硝基苯的合成
[0149][0150]
(5-硝基-2-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)苯基)乙醇(100mg,0.3755mmol)，60％nah(18.78mg,0.4694mmol)加入反应瓶中，n2置换，加入无水dmf(4ml)，0℃搅拌40min。滴加1-((4-溴-2-丁烯氧基)甲基)-3-溴苯(156.23mg，0.4882mmol)，0℃反应约1h。反应完成后，将反应液倒入冰水中，二氯甲烷萃取，合并有机相后浓缩。产物经硅胶柱层析(dcm:meoh＝50:1)分离，得黄色固体1-(吡咯烷-1-基)乙氧基)-(2-((4-(3-溴苄氧基)丁基-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-硝基苯100.58mg(53％)。
[0151]1h-nmr(400mhz,dmso)δ8.18(d,j＝7.3hz,2h),7.58
–
7.40(m,2h),7.38
–
7.26(m,2h),7.22(d,j＝9.7hz,1h),5.87(d,j＝18.6hz,2h),4.50(s,2h),4.47(s,2h),4.24(t,j＝5.6hz,2h),4.10(s,2h),4.02(s,2h),2.81(t,j＝5.6hz,2h),2.50(s,4h),1.65(s,4h).lc-ms(m/z):506.05(m h) .
[0152]
3)2-氯-5-甲基-n-(3-(((4-((5-硝基-2-(2-(吡啶-1-基)乙氧基)氧)丁基)-2-烯-1-基)氧)甲基)苯基)嘧啶-4-胺的合成
[0153][0154]
将1-(吡咯烷-1-基)乙氧基)-(2-((4-(3-溴苄氧基)丁基-2-烯-1-基)氧基)甲基)-4-硝基苯(500.00mg,0.9893mmol)、2-氯-5-甲基-4-氨基嘧啶(118mg,0.8219mmol)、cs2co3(967mg,2.9679mmol)、xantphos(114mg,0.1970mmol)、pd2(dba)3(90mg,0.0983mmol)加入反应瓶，n2保护，加入无水dmf(10ml)，80℃反应约10h。反应完成后，用硅藻土过滤，ea
萃取三次，合并有机相后无水硫酸钠干燥、旋干。产物经硅胶柱层析湿法上样(dcm:meoh＝50:1)分离，得黄色固体2-氯-5-甲基-n-(3-(((4-((5-硝基-2-(2-(吡啶-1-基)乙氧基)氧)丁基)-2-烯-1-基)氧)甲基)苯基)嘧啶-4-胺337.19mg(60％)。
[0155]1h-nmr(400mhz,dmso)δ8.90(s,1h),8.18(d,j＝7.4hz,2h),8.03(s,1h),7.60(s,2h),7.38
–
7.29(m,1h),7.22(d,j＝9.2hz,2h),7.06(d,j＝7.2hz,1h),5.93
–
5.82(m,2h),4.49(d,j＝7.7hz,4h),4.23(t,j＝5.4hz,2h),4.11(s,2h),4.05(s,2h),2.80(t,j＝5.4hz,2h),2.50(s,4h),2.16(s,3h),1.64(s,4h).
[0156]
4)2-氯-5-甲基-n-(3-(((4-((5-氨基-2-(2-(吡啶-1-基)乙氧基)氧)丁基)-2-烯-1-基)氧)甲基)苯基)嘧啶-4-胺的合成
[0157][0158]
将2-氯-5-甲基-n-(3-(((4-((5-硝基-2-(2-(吡啶-1-基)乙氧基)氧)丁基)-2-烯-1-基)氧)甲基)苯基)嘧啶-4-胺(100mg,0.1760mmol)溶于dcm:meoh＝1:1的混合溶液(4ml)，冰浴下加入sncl2(133.49mg,0.7040mmol)，移至室温反应约18h，tlc监测反应进度。反应完成后，旋干溶剂，加入少量二氯甲烷溶解，缓慢加入饱和na2co3水溶液调ph为8，然后用砂芯漏斗抽滤，滤液用二氯甲烷萃取三次，滤饼用甲醇洗至无产物，合并有机相后，无水硫酸钠干燥，旋干，经硅胶柱层析(dcm:meoh＝30:1)纯化得黄色固体39.5g(41.7％)。
[0159]1h-nmr(400mhz,dmso)δ8.91(s,1h),8.04(s,1h),7.62(d,j＝8.2hz,1h),7.59(s,1h),7.34(t,j＝7.8hz,1h),7.06(d,j＝7.5hz,1h),6.68(d,j＝8.6hz,1h),6.60(d,j＝2.5hz,1h),6.43(dd,j＝8.5,2.7hz,1h),5.88-5.79(m,2h),4.63(s,2h),4.48(s,2h),4.36(s,2h),4.03(s,2h),4.00(s,2h),3.90(t,j＝5.9hz,2h),2.69(t,j＝5.9hz,2h),2.49-2.42(m,4h),2.17(s,3h),1.67-1.59(m,4h).lc-ms(m/z):539.25/541.20(m h) .
[0160]
5)3
5-甲基-1
4-(2-(吡咯烷-1-基)乙氧基)-7,12-二氧杂-2,4-二氮杂-3(2,4)-嘧啶-1,5(1,3)-二苯并环十三烷-9-烯(l-4)的合成
[0161][0162]
将2-氯-5-甲基-n-(3-(((4-((5-氨基-2-(2-(吡啶-1-基)乙氧基)氧)丁基)-2-烯-1-基)氧)甲基)苯基)嘧啶-4-胺(750mg,1.3938mmol)溶于正丁醇(15ml)，升温至105℃，
一次性加入tsoh
·
h2o(530.26mg,2.7876mmol)，105℃反应约2h。反应完成后，用饱和na2co3水溶液调ph为8-9，二氯甲烷萃取三次，有机相经盐水洗、无水硫酸钠干燥、旋干，硅胶柱层析(dcm:meoh＝20:1)纯化得黄色固体520mg(74.4％)。
[0163]1h-nmr(400mhz,dmso)δ8.64(s,1h),8.30(s,1h),7.85(s,1h),7.61(s,1h),7.55(s,1h),7.28(d,j＝7.7hz,1h),7.19-7.07(m,2h),6.98(d,j＝7.2hz,1h),6.79(d,j＝8.7hz,1h),5.56-5.36(m,2h),4.30(s,2h),4.14(s,2h),4.02-3.93(m,4h),3.84(d,j＝3.7hz,2h),2.76(t,j＝5.6hz,2h),2.58-2.51(m,4h),2.08(s,3h),1.73-1.64(m,4h).
13
c-nmr(151mhz,dmso)δ169.81,159.26,157.88,157.03,154.37,150.16,135.21,133.48,128.81,126.73,124.65,122.76,119.40,118.48,115.98,112.99,104.31,67.56,54.52,54.12,48.66,32.43,23.30,13.35.hrms(esi):(m/z):[m h] calcd for c
29h36
n5o
3 502.2818；found 502.2820.
[0164]
实施例5制备化合物l-5
[0165][0166]
用合成l-4的方法合成l-5，得黄色固体121mg(54％)。
[0167]1h-nmr(400mhz,dmso)δ8.77(s,1h),8.50(s,1h),7.89(s,1h),7.63(d,j＝2.5hz,1h),7.43(s,1h),7.18(d,j＝11.5hz,1h),7.10(dd,j＝8.7,2.5hz,1h),6.82(d,j＝8.8hz,1h),6.77(d,j＝9.1hz,1h),5.58
–
5.31(m,2h),4.31(s,2h),4.18(s,2h),4.03
–
3.94(m,4h),3.84(d,j＝4.8hz,2h),2.77(t,j＝5.8hz,2h),2.53(s,4h),2.09(s,3h),1.68(s,4h).
13
c-nmr(151mhz,dmso)δ162.68,161.09,158.76,156.84,151.35,141.98,141.45,133.81,129.98,129.48,126.74,122.08,120.92,116.94,112.22,108.50,108.34,105.01,71.38,70.55,69.49,67.84,66.60,54.56,54.25,23.31,13.51.hrms(esi):(m/z):[m h] calcd for c
29h35
fn5o
3 520.2724；found 520.2727.
[0168]
实施例6制备化合物l-6
[0169][0170]
用合成l-4的方法合成l-6，得黄色固体21mg(54％)。
[0171]1h-nmr(400mhz,dmso)δ8.71(s,1h),8.23(s,1h),7.82(s,1h),7.49
–
7.42(m,2h),7.34(s,1h),7.25(d,j＝10.1hz,1h),7.20(d,j＝4.9hz,1h),6.65(d,j＝9.0hz,1h),5.85
–
5.45(m,2h),4.43(s,2h),4.26(s,2h),4.01
–
3.94(m,4h),3.93(s,2h),2.74(t,j＝5.5hz,2h),2.50(s,5h),2.08(s,3h),1.67(s,4h).
13
c-nmr(151mhz,dmso)δ159.97,158.49,
155.64,155.22,149.60,134.99,133.51,130.38,129.58,127.22,126.86,126.57,125.70,119.98,118.51,115.73,111.89,104.90,70.50,69.85,69.51,67.31,60.99,53.78,53.00,22.78,13.95.hrms(esi):(m/z):[m h] calcd for c
29h35
fn5o
3 520.2724；found 520.2725.
[0172]
实施例7制备化合物l-7
[0173][0174]
用合成l-4的方法合成l-7，得黄色固体47mg(54％)。
[0175]1h nmr(400mhz,dmso)δ8.65(s,1h),8.32(s,1h),7.85(s,1h),7.61(s,1h),7.55(d,j＝2.1hz,1h),7.28(d,j＝7.9hz,1h),7.18-7.10(m,2h),6.98(d,j＝7.4hz,1h),6.79(d,j＝8.8hz,1h),5.57-5.34(m,2h),4.30(s,2h),4.13(s,2h),3.96(d,j＝5.3hz,2h),3.82(d,j＝4.5hz,2h),3.71(s,3h),2.09(s,3h).
13
c nmr(151mhz,dmso)δ159.14,158.76,156.32,152.13,139.82,139.74,133.83,129.96,129.46,127.90,126.28,122.24,121.88,121.55,120.88,110.99,104.79,71.59,70.29,69.05,66.52,55.58,13.59.hrms(esi):(m/z):[m h] calcd for c
24h27
n4o
3 419.2083；found 419.2082.
[0176]
实验例8jak2抑制剂分子水平活性测试
[0177]
jak2激酶抑制活性测试：
[0178]
实验原理：
[0179]
jak2能催化三磷酸腺苷(atp)的一个磷酸基团转移到多肽底物上，而多肽底物标记有两个荧光基团香豆素(coumarin)和荧光素(fluorescein)。基于荧光能量共振转移(fret)的方法，jak2催化atp发生反应导致两个荧光基团接近，供体(coumarin)在400nm处被激发，部分能量释放，发射波长为445nm，另一部分能量转移到fluorescein，发射波长为520nm。不同化合物对jak2的抑制程度不同，导致底物磷酸化的程度不同，从而通过测定酶催化底物磷酸化百分比的比值，计算不同化合物的抑制率。
[0180]
实验方法：
[0181]
在384孔板中加入2.5μl测试化合物，5μl激酶/肽底物混合物，2.5μl atp溶液，10μl反应体系振荡30s混匀，室温孵育1h；加入5μl蛋白水解酶，15μl反应体系振荡30s混匀，室温孵育1h；加入5μl停止试剂，总体积20μl反应体系振荡30s混匀，使用酶标仪进行荧光信号的检测，激发波长为400nm，发射波长分别为445nm和520nm。测定化合物在7个浓度梯度下的抑制率，通过origin8.0拟合曲线计算各个化合物的ic
50
值。实验过程进行阳性对照确证反应体系可行性，每次实验三个平行。实验过程采用fedratinib为阳性对照，每次实验至少设三个平行。
[0182]
表1.化合物在体外酶测定中对jak2的活性
[0183][0184][0185]
cck-8细胞增殖检测：
[0186]
实验原理：
[0187]
wst-8(化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2h-四唑单钠盐)，它在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯(1-methoxy pms)的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物(formazan dye)。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可以通过测定450nm处的光吸收值间接计算出细胞的存活率。通过cck-8法测定化合物对h3122、set2、hel细胞增殖的半数抑制率。
[0188]
实验方法：
[0189]
使用含有10％fbs的rpim培养基培养细胞，每孔加入100μl,3500个细胞接种至96孔板，置于37℃，5％co2培养箱中培养24h，待细胞汇合度达到50％-70％，分别加入不同浓度梯度的药物，继续孵育72h之后，每孔加入10μl cck-8震荡混匀，37℃孵育2h，最后在450nm波长下，测定各孔光吸收值。最后通过origin软件进行计算ic
50
值。
[0190]
注：hel，set-2，baf3细胞均购自atcc(american type culture collection)，z'-lytetm kinase assay platform购自invitrogen，cell counting kit-8购自碧云天。
[0191]
表2.化合物对细胞的抗增殖活性
[0192][0193]
激酶谱测试：
[0194]
激酶选择性谱图是由discoverx公司完成。化合物l-4以100nm浓度进行激酶筛选，筛选的靶标包括人类多种野生型激酶及突变体、病原体、脂质体等468种。筛选结果以“percent control”来表示(见图1)，其中数字越小表示命中越强，即与靶标的结合作用越强。在激酶谱树状图中，发现的有结合作用的激酶用红色圆圈标记，红色圆圈越大表示结合亲和力越高。
[0195]
化合物l-4的激酶选择性谱图见图2所示，结果显示，本发明的化合物l-4对于jak2激酶有较好的选择性。
[0196]
小鼠体内uc模型：
[0197]
实验动物购自上海西普尔-必凯实验动物有限公司，为balb/c雄性小鼠，体重20-22g。葡聚糖硫酸钠盐(dss)购自翊圣生物。以sasp为阳性药。小鼠1-7天造模，第8天重新分为四组灌胃给药，每日一次：model自来水、control自来水、sasp500mg/kg、l13 5mg/kg。第15天取结肠测量长度，并用甲醛将1～2cm的结肠固定。
[0198]
l-4对小鼠溃疡性结肠炎的影响结果如图3中所示，图3(a)显示了小鼠体重变化图，给药后，小鼠的体重变化与造模组以及sasp组无差异。图3(b)显示了小鼠dai变化图，给药后小鼠的dai分值相对于造模组有显著改善，与sasp组相当；图3(c)显示了化合物l-4对结肠质量长度之比的影响，结果显示，给药后小鼠该指标相对于造模组有显著改善，与sasp组相当。
[0199]
在本发明提及的所有文献都在本技术中引用作为参考，就如同每一篇文献被单独引用作为参考那样。此外应理解，在阅读了本发明的上述讲授内容之后，本领域技术人员可以对本发明作各种改动或修改，这些等价形式同样落于本技术所附权利要求书所限定的范围。