用于治疗休克患者的抗肾上腺髓质素(adm)结合剂
1.本发明的主题是一种用于治疗休克患者和/或用于治疗需要患者进入icu的疾病的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架。
背景技术：
2.多种疾病或疾患可能具有共同的部分非特异性的症状，对于患有所述疾病的个体而言，所述症状可能在从令人不愉快到难以忍受的范围内。遭受一种以上症状的个体经常需要服用若干种药物才能减轻这些症状。持续需要新的形式来治疗或预防与许多不同的潜在疾病或疾患相关的症状。特别地，提供可用于治疗或预防与潜在疾病或疾患相关的一种以上症状的药剂或药物是有帮助的。本发明解决了这一需求。
3.1993年首次描述了肽肾上腺髓质素(adm)(kitamura k.等人,1993.《生物化学与生物物理学研究通讯》第192卷(2):553-560)为一种从人嗜铬细胞分离的包含52个氨基酸的新型降压肽。同年，还描述了编码包含185个氨基酸的前体肽的cdna和这种前体肽的完整氨基酸序列。所述前体肽尤其在n端包含21个氨基酸的信号序列，被称为“肾上腺髓质素原前体”(pre-proadm)。在本说明书中，指定的所有氨基酸位置通常都相对于包含所述185个氨基酸的pre-proadm。肽肾上腺髓质素(adm)是包含52个氨基酸(seq id no:1)并且包含pre-proadm的95至146位氨基酸的肽，它是由pre-proadm被蛋白水解切割形成。迄今为止，切割pre-proadm时形成的肽片段中只有几个片段得到了较准确的表征，特别是生理活性肽肾上腺髓质素(adm)和“pamp”，后者是一种包含20个氨基酸(22-41)的肽，跟在pre-proadm中信号肽的21个氨基酸之后。1993年，adm的发现和表征引发了密集的研究活动，其结果已经在各种综述文章中进行了总结，在本说明书的背景下，特别参考了可见于《肽》专门针对adm的一期中的文章，特别是(editorial,takahashi k.2001.《肽》22:1691)和(eto t.2001.《肽》22:1693-1711)。另一综述为(hinson等人,2000.《内分泌学综述》21(2):138-167)。在迄今为止的科学研究中，尤其发现了adm可以被视为一种多功能调节肽。它以通过甘氨酸延长的非活性形式释放到循环中(kitamura k.等人,1998.《生物化学和生物物理学研究通讯》244(2):551-555)。还有一种结合蛋白(pio r.等人,2001.《生物化学杂志》276(15):12292-12300)，它对adm特异并且同样可能调节adm的作用。adm以及pamp在迄今为止的研究中最为重要的那些生理作用是影响血压的作用。
4.adm是一种有效的血管扩张剂，有可能将降压作用与adm的c端部分的特定肽段相关联。此外已经发现，上述由pre-proadm形成的另一生理活性肽pamp同样表现出降压作用，即使它看似具有与adm不同的作用机制。
5.此外已经发现，在许多病理状态下，可以在循环和其它生物液体中测量的adm浓度明显高于在健康对照者中发现的浓度。因此，充血性心力衰竭、心肌梗塞、肾脏疾病、高血压障碍、糖尿病、休克急性期以及脓毒症和脓毒性休克患者的adm水平有不同程度的显著提高。在某些所述病理状态中，pamp浓度也升高，但血浆水平相对于adm较低(eto,t.,同上)。此外，已知在脓毒症中会观察到异常高浓度的adm，在脓毒性休克中观察到最高浓度(参见(eto,t.,同上)和(hirata等人,《临床内分泌学与代谢杂志》1996.81(4):1449-1453；
ehlenz k.等人,1997.《实验与临床内分泌学与糖尿病》105:156-162)；tomoda y.等人,2001.《肽》22:1783-1794；ueda s.等人,1999.《美国呼吸与重症医学杂志》160:132-136；以及wangp.《肽》2001.22:1835-1840)。
6.wo-a1 2004/097423描述了针对肾上腺髓质素的抗体用于心血管障碍的诊断、预后和治疗的用途。本领域还描述了通过阻断adm受体来治疗疾病(例如wo-a1 2006/027147、pct/ep2005/012844)，所述疾病可以是脓毒症、脓毒性休克、心血管疾病、感染、皮肤疾病、内分泌疾病、代谢疾病、肠胃道疾病、癌症、炎症、血液学疾病、呼吸道疾病、肌肉骨骼疾病、神经系统疾病、泌尿系统疾病。
7.据报告，对于早期脓毒症，adm改善了心脏功能以及肝脏、脾脏、肾脏和小肠的血液供应。在早期脓毒症过程中，adm中和性抗体中和之前提到的效应(wang,p.,“脓毒症中的肾上腺髓质素和心血管反应(adrenomedullin and cardiovascular responses in sepsis)”,《肽》,第22卷,第1835-1840页(2001)。
8.对于其它疾病，在一定程度上阻断adm可能是有益的。然而，如果adm被完全中和，也可能是有害的，因为若干生理功能可能需要一定量的adm。很多报告中都强调了施用adm在某些疾病中可能是有益的。与此相反，在其它报告中，据报告adm在某些病症中施用时会危及生命。
9.本领域描述了施用adm与adm结合蛋白-1的组合以用于治疗脓毒症和脓毒性休克。假设用adm和adm结合蛋白1治疗脓毒症动物能防止向晚期脓毒症过渡。必须注意，在活的生物体中，adm结合蛋白(补体因子h)以高浓度存在于所述生物体的循环中(pio等人,作为肾上腺髓质素结合蛋白存在于人血浆中的因子h的鉴定、表征和生理作用(identification,characterization,and physiological actions of factor h as an adrenomedullin binding protein present in human plasma)；《显微镜研究与技术》,55:23-27(2002)和martinez等人,人补体因子h中的肾上腺髓质素结合域的图谱(mapping of the adrenomedullin-binding domains in human complement factor h)；《高血压研究》第26卷,增刊(2003),s56-59)。
10.在clp诱导型脓毒症小鼠的存活率研究中研究了靶向adm的n端的非中和性抗体的功效。用非中和性抗体进行预处理降低了儿茶酚胺输注率、肾功能障碍，并最终提高了存活率(struck等人,2013.《重症监护医学实验》1(1):22；wagner等人,2013.《重症监护医学实验》1(1):21)。
11.由于这些成果，已经开发出一种n端抗adm抗体的人源化型式，命名为阿德珠单抗(adrecizumab)，以供进一步临床开发。最近在全身炎症和脓毒症的临床前模型中证明了阿德珠单抗对血管屏障功能和存活率的有益作用(geven等人,2018.《休克》50(6):648-654)。在这项研究中，用阿德珠单抗预处理减轻了内毒素血症大鼠以及clp诱导型脓毒症小鼠的肾血管渗漏，这与保护性肽ang-1的肾脏表达增加和有害肽血管内皮生长因子的表达减少相吻合。此外，用阿德珠单抗进行预处理在单剂量施用时将clp诱导型脓毒症小鼠的7天存活率从10％提高到50％，在重复剂量施用时从0％提高到40％。特别关注所提出的阿德珠单抗作用机制。动物和人类数据都表明施用此抗体后循环adm发生了有效的剂量依赖性增加。根据药代动力学数据和mr-proadm(与adm相同的激素原衍生的无活性肽片段)没有增加，循环adm水平升高不能用产量增加来解释。
12.这种增加的机制解释可能是循环中的过量抗体可能会将adm从间质排出到循环中，因为adm小到足以越过内皮屏障，而抗体不能(geven等人,2018.《休克》.50(2):132-140；以及voors等人(《欧洲心力衰竭杂志》.2019年2月；21(2):163-171))。此外，抗体与adm结合导致adm半衰期延长。尽管nt-adm抗体部分抑制adm介导的信号传导，但循环adm大量增加导致了血液隔室中adm活性的整体“净”增加，它对ec发挥有益作用(主要是屏障稳定化)，而减少了adm对间质中的vsmc的不利影响(血管舒张)。
13.然而，本发明的一个目的在于确定施用针对adm的抗体的最佳时机，以便使患者最佳地受益于上述机制。
14.wo2013/072510描述了一种用于治疗患者的严重慢性或急性疾病或急性病症以降低所述患者的死亡风险的非中和性抗adm抗体。
15.wo2013/072511描述了一种用于治疗患者的慢性或急性疾病或急性病症以预防或减轻器官功能障碍或器官衰竭的非中和性抗adm抗体。
16.wo2013/072512描述了一种非中和性抗adm抗体，它是一种提高肾上腺髓质素在血清、血液、血浆中的半衰期(t
1/2
半保留时间)的adm稳定化抗体。这种adm稳定化抗体阻断低于80％的adm生物活性。
17.wo2013/072513示出了在需要稳定循环的患有慢性或急性疾病或急性病症的患者中，抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架稳定了患者的血液循环并减少了所述患者对血管加压剂如儿茶酚胺的需求。
18.wo2013/072514示出了抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架可以有效地用于调节患有慢性或急性疾病或急性病症的患者，尤其是患有体液失衡的icu(重症监护病房)患者的流体平衡。
19.wo2017/182561描述了用于确定患者样品中的dpp3总量或活性以诊断与坏死过程有关的疾病的方法。它还描述了一种通过针对dpp3的抗体治疗坏死相关疾病的方法。
20.发明人现已发现，抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架治疗当在一定时间段内施用时在治疗休克、特别是脓毒性休克患者方面可能特别有效。
21.因此，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架可以在患者需要抗adm治疗的时间点，特别是在进入icu之后施用。根据本发明，所述患者在休克后和/或在进入icu后的最佳时机接受治疗。
22.除了上述作用之外和/或连同上述作用，本发明还令人惊讶地发现，如果体液样品中的dpp3水平低于阈值，则休克患者会最受益于抗adm抗体治疗。
23.定义
24.在详细描述本发明之前，宜为整篇描述所用的某些技术术语提供定义。尽管将针对特定实施方式描述本发明，但此描述不应被视为限制性的。在详细描述本发明的示例性实施方式之前，给出了对于理解本发明来说重要的定义。
25.如本说明书和所附权利要求书中所用，除非上下文另外明确指出，否则单数形式“一个”和“一种”还包括相应的复数。
26.在本发明的背景下，术语“约”和“大约”表示本领域技术人员会理解为仍确保所述特征的技术作用的精度范围。所述术语通常表示与所指示的数值的偏差为
±
20％，优选为
±
15％，更优选为
±
10％，甚至更优选为
±
5％。
27.应当理解，术语“包含”不是限制性的。出于本发明的目的，术语“由......组成”被视为术语“包含”的一个优选实施方式。如果下文将一个组定义为包含至少一定数量的实施方式，则这意味着还涵盖优选地仅由这些实施方式组成的组。
28.还应理解，本文所用的术语仅出于描述特定实施方式的目的，而不旨在限制本发明的范围，本发明的范围将仅受所附权利要求书限制。
29.根据本发明，adm结合蛋白1还可以称为adm结合蛋白1(补体因子h)。
30.如本文所用，术语“休克”的特征在于氧输送减少和/或氧消耗增加或氧利用不足导致细胞和组织缺氧。它是一种危及生命的循环衰竭病症，最常见表现为低血压(收缩压低于90mmhg或map低于65mmhg)。根据根本原因，休克分为四种主要类型：低血容量性休克、心源性休克、阻塞性休克和分布性休克(vincent和de backer 2014.《新英格兰医学杂志》370(6):583)。
31.术语“心源性休克”是指其中患者可能患有急性冠脉综合征(例如急性心肌梗塞)或其中所述患者患有心力衰竭(例如急性失代偿性心力衰竭)、心肌炎、心律失常、心肌病、瓣膜性心脏病、主动脉夹层伴急性主动脉瓣狭窄、外伤性腱索断裂或大面积肺栓塞的休克。心源性休克(cs)定义为由于心输出量减少而导致的关键终末器官灌注不足的状态。值得注意的是，cs形成了从轻度灌注不足到深度休克范围内的疾病谱。用于诊断cs的既定标准为：(i)收缩压≤90mmhg持续》30分钟，或需要血管加压剂来实现血压≥90mmhg；(ii)肺充血或左心室充盈压升高；(iii)具有以下准则中至少一项的器官灌注受损征象：(a)精神状态改变；(b)皮肤湿冷；(c)少尿(《0.5ml/kg/h或《30ml/h)；(d)血清乳酸升高(reynolds和hochman 2008.《循环》117:686-697)。急性心肌梗塞(ami)继发心室功能障碍是cs的最常见病因，占病例的约80％。机械性并发症如心室隔膜(4％)或游离壁破裂(2％)以及急性重度二尖瓣反流(7％)为ami后cs的较少见病因。(hochman等人,2000.《美国心脏病学杂志》36:1063-1070)。非ami相关cs可能由失代偿性瓣膜心脏病、急性心肌炎、心律失常等引起，具有不同的治疗选项。这意味着美国每年有40 000至50 000名患者，而欧洲则为60 000至70 000名患者。尽管主要通过早期血管重建取得了治疗进展并降低了后续死亡率，但根据最近的登记和随机试验，cs仍然是ami的主要死亡原因，死亡率仍接近40-50％(goldberg等人,2009.《循环》119:1211-1219)。
32.术语“低血容量性休克”是指其中患者可能患有出血性疾病，包括胃肠道出血、外伤、血管性病因(例如腹主动脉瘤破裂、肿瘤侵蚀到主血管中)和使用抗凝剂情形下的自发性出血，或者非出血性疾病，包括呕吐、腹泻、肾功能减退、皮肤缺损/无感失水(例如烧伤、中暑)、或胰腺炎、肝硬化、肠梗阻、外伤情形下的第三间隙体液丧失的休克。低血容量性休克的特征在于血管内容量减少，并且可以分为两大亚型：出血性和非出血性。出血性低血容量性休克的常见原因包括胃肠道出血、外伤、血管病因(例如腹主动脉瘤破裂、肿瘤侵蚀到主要血管中)和使用抗凝剂情形下的自发性出血。非出血性低血容量性休克的常见原因包括呕吐、腹泻、肾功能减退、皮肤缺损/无感失水(例如烧伤、中暑)、或胰腺炎、肝硬化、肠梗阻、外伤情形下的第三间隙体液丧失。关于综述，参见koya和paul 2018.《休克》.statpearls[internet].treasure island(fl):statpearls publishing；2019-2018 10月27日。
[0033]
术语“阻塞性休克”是指其中患者可能患有心脏压塞、张力性气胸、肺栓塞或主动脉瓣狭窄的休克。阻塞性休克由大血管或心脏本身的物理阻塞造成。有若干种病症会导致这种形式的休克(例如心脏压塞、张力性气胸、肺栓塞、主动脉瓣狭窄)。关于综述，参见koya和paul 2018.《休克》.statpearls[internet].treasure island(fl):statpearls publishing；2019-2018 10月27日。
[0034]
术语“分布性休克”是指其中患者可能患有脓毒性休克、神经源性休克、过敏性休克或由于肾上腺危象引起的休克的休克。根据病因，存在四种类型的分布性休克：神经源性休克(交感神经刺激减弱导致血管张力降低)、过敏性休克、脓毒性休克和由肾上腺危象引起的休克。除了脓毒症以外，分布性休克还可以由除感染以外的其它病症如胰腺炎、烧伤或外伤造成的全身炎性反应综合征(sirs)引起。其它病因包括中毒性休克综合征(tss)、过敏反应(突发性严重过敏反应)、肾上腺功能不全(慢性肾上腺功能不全的急性恶化、肾上腺的破坏或切除、由外源类固醇造成的肾上腺功能的抑制、垂体功能减退和激素生产的代谢性障碍)、对药物或毒素的反应、重金属中毒、肝(肝脏)功能不全和中枢神经系统损伤。关于综述，参见koya和paul 2018.《休克》.statpearls[internet].treasure island(fl):statpearls publishing；2019-2018 10月27日。
[0035]
难治性休克定义为尽管容量复苏充分，但仍需要》0.5μg/kg/min的去甲肾上腺素输注。这些患者的死亡率可高达94％，并且为了存活，这些患者的评价和管理需要更加激进的方法。术语“难治性休克”用于所采用的初始矫正措施(例如血管加压剂)不能恢复组织灌注时，因此可以称为“高血管加压剂依赖性”或“耐血管加压剂性”休克(udupa和shetty2018.《印度呼吸护理杂志》7:67-72)。难治性休克患者可能具有灌注不足的特征如低血压(平均动脉压《65mmhg)、心动过速、外周冰冷、毛细血管再充盈时间延长和由缺氧和酸中毒引起的呼吸急促。发热可见于脓毒性休克。还可见其它灌注不足征象如感觉改变、高乳酸血症和少尿。这些众所周知的休克征象在鉴定问题是在于泵(心脏)还是线路(血管和组织)方面没有帮助。不同类型的休克可以共存，并且所有形式的休克都可能变成难治性的，如通过对高剂量血管加压剂无反应所证明(udupa和shetty 2018.《印度呼吸护理杂志》7:67-72)。
[0036]
休克的优选实例为由于低血容量引起的休克、心源性休克、阻塞性休克和分布性休克，特别是心源性休克、脓毒性休克、由于covid-19引起的休克、由于烧伤引起的休克和外伤性休克。下文更详细地定义了这些实例。
[0037]
如本文所用，术语“进入icu”是指进入重症监护的患者为患有或可能患有一种或若干种需要使用器官支持方法的急性直接危及生命的功能障碍的患者。已经制定了患者进入重症监护病房的标准，这些标准在本领域中有充分记录(nates等人,(2016),《重症监护医学》44:1553-1602)。术语“进入icu”应当包括符合这些标准的进入。
[0038]
器官支持的类型包括：
[0039]
·
呼吸支持治疗：
[0040]
·
包括高级呼吸支持治疗，如气管插管和机械通气支持
[0041]
·
基本呼吸支持治疗，如使用补充氧气、使用激励性肺活量计、胸部叩击、雾化等。
[0042]
·
循环支持治疗，如机械循环支持(例如使用主动脉内球囊泵和心室辅助装置)和药物治疗，包括使用血管紧张肽转化酶、β阻断剂等。
[0043]
·
肾支持治疗，如血液透析和腹膜透析，
[0044]
·
血流动力学监测或支持治疗，如测量血液的压力、流量和氧含量、流体复苏或输血以及使用血管作用药物(例如硝酸甘油、一氧化氮等)，
[0045]
·
神经系统监测或支持，如脑室内导管。
[0046]
体外器官支持详细描述于例如《icu管理与实践》,第18卷,第1期,2018中。
[0047]
以下定义sirs、脓毒症、严重脓毒症、脓毒性休克的临床标准。
[0048]
1)以下列症状中的至少两种为特征的全身炎性宿主反应(sirs)
[0049]
·
患者表现出低血压(平均动脉压《65mm hg)
[0050]
·
血清乳酸水平升高，》4mmol/l
[0051]
·
血糖》7.7mmol/l(无糖尿病的情况下)
[0052]
·
中心静脉压不在8-12mm hg的范围内
[0053]
·
排尿量《0.5ml
×
kg-1
×
h-1
[0054]
·
中心静脉(上腔静脉)氧饱和度《70％或混合静脉氧饱和度《65％
[0055]
·
心率》90下/分钟
[0056]
·
体温《36℃或》38℃
[0057]
·
呼吸率》20/分钟
[0058]
·
白细胞计数《4或》12
×
109/l(白血球)；》10％不成熟中性粒细胞
[0059]
2)脓毒症
[0060]
按照1)下提到的至少两种症状，并且另外有新感染的临床嫌疑：
[0061]
·
咳嗽/痰/胸痛
[0062]
·
腹痛/腹胀/腹泻
[0063]
·
血行感染(line infection)
[0064]
·
心内膜炎
[0065]
·
排尿困难
[0066]
·
头痛伴颈强直
[0067]
·
蜂窝组织炎/创伤/关节感染
[0068]
·
任何感染微生物阳性
[0069]
3)重度脓毒症
[0070]
在患者中表现为脓毒症的前提下，另外有任何器官功能障碍的临床嫌疑：
[0071]
·
收缩压《90/平均值；《65mmhg
[0072]
·
乳酸》2mmol/l
[0073]
·
胆红素》34μmol/l
[0074]
·
2小时排尿量《0.5ml/kg/h
[0075]
·
肌酸酐》177μmol/l
[0076]
·
血小板《100
×
109/l
[0077]
·
spo2》90％，除非给与o2[0078]
4)脓毒性休克
[0079]“脓毒性休克”是指一种在脓毒症(响应于感染的器官损伤或破坏)导致危险的低血压和细胞代谢异常时发生的可能致死的医学病症。脓毒症和脓毒性休克的第三次国际共
识定义(sepsis-3)将脓毒性休克定义为脓毒症的一个子集，其中与单独的脓毒症相比，特别深度的循环、细胞和代谢异常与更高的死亡风险相关联。脓毒性休克患者在临床上可以通过不存在低血容量的情况下需要血管加压剂来维持65mmhg以上的平均动脉压和高于2mmol/l(》18mg/dl)的血清乳酸水平来鉴定。这种组合与高于40％的医院死亡率相关(singer等人,2016.jama.315(8):801-10)。原发性感染最常见由细菌引起，但还可能由真菌、病毒或寄生虫引起。它可能位于身体的任何部位，但最常见于肺、脑、泌尿道、皮肤或腹部器官。它会导致多器官功能障碍综合征(以前称为多器官衰竭)和死亡。通常，脓毒性休克患者在重症监护室接受治疗。它最通常影响儿童、免疫受损个体和老年人，因为他们的免疫系统无法像健康成年人那样有效地应对感染。脓毒性休克的死亡率为约25-50％。“脓毒性休克”还指由于宿主对已证实或疑似感染的反应失调而导致危及生命的器官功能障碍，导致平均动脉压(map)至少下降至《65mmhg，对流体复苏无反应，并且需要血管加压剂。对流体复苏无反应定义为对每公斤体重施用30ml流体缺乏反应，或者根据临床医生的不足血流动力学结果的评价来确定。在根据本发明的脓毒性休克中，表现出如上文在3)下提到的终末器官功能障碍的至少一种征象。如果存在对治疗无反应的难治性低血压且单独静脉内流体施用不足以维持患者血压不变成低血压，还提供根据本发明的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架的施用，则表明存在脓毒性休克。
[0080]
抗肾上腺髓质素(adm)抗体为特异性结合至adm的抗体，抗肾上腺髓质素抗体片段为抗adm抗体的片段，其中所述片段特异性结合至adm。抗adm非ig支架为特异性结合至adm的非ig支架。
[0081]
在一个实施方式中，根据本发明的抗adm抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架减少了所述患者的血管加压剂需求，例如儿茶酚胺需求。患者的血管加压剂需求，例如儿茶酚胺需求是所述患者的循环状况的指标。因此，抗adm抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架可以在患者需要血管加压剂例如儿茶酚胺时施用。
[0082]
在本发明的一个实施方式中，所述患者是需要增加血压的休克患者。
[0083]
尽管进行了充分的补液，但有些脓毒性休克诱导型低灌注患者可能保持低血压。在这些情况下，需要血管加压剂来增加map。因此，在本发明的一个实施方式中，患有慢性或急性疾病或急性病症的患者是需要血管加压剂来增加map的患者。儿茶酚胺如多巴胺、肾上腺素(epinephrine/adrenaline)、去甲肾上腺素(norepinephrine/noradrenaline)和苯肾上腺素传统上用于升高脓毒性休克患者的血压。最近还提出血管加压素为用于需要稳定循环的休克患者的潜在血管加压剂。
[0084]
血管加压剂如儿茶酚胺可以稳定患有慢性或急性疾病或急性病症的患者的循环。在患者的病症(低血压)非常危急的情况下，单独非血管加压剂施用，例如儿茶酚胺施用可能无法防止循环故障。额外施用抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架连同施用例如儿茶酚胺可能有助于稳定患者的循环，所述患者的病症危急到了施用儿茶酚胺而不施用抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架不足以稳定所述患者的循环。
[0085]
此外，血管加压剂可能具有严重的副作用。多巴胺刺激肾局部循环中的d1受体，从而产生血管舒张并增加血流量。这是临床医生利用低剂量多巴胺来保护肾脏功能的原因之一。此外，对于其它血管加压剂，已经表明用某些药物增加血压，尽管其在直觉上似乎是有益的事情，但可能与更糟糕的结果相关联。
[0086]
因此，本发明的主题是用于治疗休克患者以完全或部分代替施用血管加压剂的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架。这意味着根据本发明的患者可以是需要血管加压剂或血管加压剂治疗的患者或接受血管加压剂治疗的患者。
[0087]
因此，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架的循环稳定作用可能支持休克的主要治疗。这意味着在一个实施方式中，除了一线治疗(主要治疗)以外，还施用了抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架。在休克如脓毒性休克等的情况下，主要治疗是例如施用抗生素。抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架会稳定循环，并且将有助于防止所述患者的危急病症恶化，直到例如抗生素施用见效为止。如之前所述，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架可以以预防方式或以治疗方式施用，这意味着为了预防循环问题或为了在所述患者存在循环问题时稳定循环。
[0088]
应当强调，本发明所包含的循环问题可以是根据本发明的一个具体实施方式的急性循环问题。
[0089]
在本发明的一个实施方式中，抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架与血管加压剂如儿茶酚胺组合使用，其中所述组合用于治疗休克患者以稳定所述患者的循环。
[0090]
在本发明的一个实施方式中，所述需要稳定循环的休克患者的特征在于所述患者需要得到血管加压剂施用，例如儿茶酚胺施用。
[0091]
因此，在一个具体实施方式中，本发明的主题是用于治疗需要血管加压剂施用，例如儿茶酚胺施用的患者的结合至adm的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或者结合至adm的抗adm非ig支架。
[0092]
此外，在本发明的一个实施方式中，抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架与静脉内施用的流体组合使用，其中所述组合用于治疗休克患者以稳定所述患者的循环。在本发明的一个实施方式中，所述患有休克并且需要稳定循环的患者的特征在于所述患者需要得到静脉内流体。
[0093]
因此，在一个具体实施方式中，本发明的主题是一种用于治疗休克、特别是需要静脉内流体的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架。
[0094]
本发明的实施方式的具体描述
[0095]
下面提供了本发明的实施方式。注意，一般来说，实施方式可以与同一类别(产品、过程、用途、方法)的任何其它实施方式组合。
[0096]
本发明的一个实施方式涉及一种用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者：
[0097]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点患有休克、特别是脓毒性休克不超过10小时，和/或
[0098]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或
[0099]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，并且
[0100]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0101]
本发明的一个实施方式涉及一种用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者：
[0102]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点患有休克、特别是脓毒性休克不超过8.4小时，和/或
[0103]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或
[0104]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，并且
[0105]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0106]
在一个优选实施方式中，肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者，其中所述患者：
[0107]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点患有休克、特别是脓毒性休克不超过10小时，和/或
[0108]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或
[0109]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，并且
[0110]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)，并且
[0111]
其中当患者患有休克、特别是脓毒性休克a)不超过10小时并且进入icu b)不超过10小时时，开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点是a)和b)中最短的时间点。
[0112]
在另一个实施方式中，当患者进入icu a)不超过10小时并且c)接受器官支持不超过10小时时，开始用抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点是a)和c)中最短的时间点。
[0113]
在另一个实施方式中，当患者患有休克、特别是脓毒性休克b)不超过10小时并且接受c)器官支持不超过10小时时，开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点是b)和c)中最短的时间点。
[0114]
在另一个实施方式中，当患者患有休克、特别是脓毒性休克a)不超过10小时并且所述患者处于休克b)不超过10小时并且接受c)器官支持不超过10小时时，开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点是a)、b)和c)中最短的时间点。
[0115]
在另一个实施方式中，本发明涉及一种用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者：
[0116]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或
[0117]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或
[0118]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，并且
[0119]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0120]
在一个优选实施方式中，所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点患有休克、特别是脓毒性休克不超过9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.24天)、5小时、优选4小时、优选3小时。
[0121]
在一个优选实施方式中，所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点患有休克、特别是脓毒性休克不超过8.4小时，优选8.26小时(0.344天)。
[0122]
在一个优选实施方式中，所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.24天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时。
[0123]
在一个优选实施方式中，所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过8.4小时、优选不超过8.26小时(0.344天)。
[0124]
在一个优选实施方式中，所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点接受器官支持不超过9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.24天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时。
[0125]
在一个优选实施方式中，所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点接受器官支持不超过8.4小时、优选不超过8.26小时(0.344天)。
[0126]
在另一个实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在以下情况下施用：
[0127]
·
在所述患者发生休克之后10小时内，和/或
[0128]
·
在所述患者进入icu之后10小时内，和/或
[0129]
·
在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时，并且
[0130]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0131]
在另一个实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在以下情况下施用：
[0132]
·
在所述患者发生休克之后8.4小时内，和/或
[0133]
·
在所述患者进入icu之后8.4小时内，和/或
[0134]
·
在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时，并且
[0135]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0136]
在优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在以下情况下施用：
[0137]
·
在所述患者发生休克之后10小时内，和/或
[0138]
·
在所述患者进入icu之后10小时内，和/或
[0139]
·
在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时，并且
[0140]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)，并且
[0141]
·
其中当所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架可以a)在所述患者发生休克之后10小时内和b)在所述患者进入icu之后10小时内施用时，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在a)和b)中最短的时间点施用。
[0142]
在另一个实施方式中，当所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架可以a)在所述患者发生休克之后10小时内和c)在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时的情况下施用时，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在a)和c)中最短的时间点施用。
[0143]
在另一个实施方式中，当所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架可以b)在所述患者进入icu之后10小时内和c)在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时的情况下施用时，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在b)和c)中最短的时间点施用。
[0144]
在另一个实施方式中，当所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架可以a)在所述患者发生休克之后10小时内，b)在所述患者进入icu之后10小时内和c)在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时的情况下施用时，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在a)、b)和c)中最短的时间点施用。
[0145]
在另一个实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在以下情况下施用：
[0146]
·
在所述患者发生休克之后10小时内，和/或
[0147]
·
在所述患者进入icu之后10小时内，和/或
[0148]
·
在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时，并且
[0149]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0150]
在一个优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克和/或脓毒症之后9小时、优选8.4小时、优选
8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.25天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。
[0151]
在一个优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克和/或脓毒症之后8.4小时、优选8.26小时(0.344天)内施用。
[0152]
在一个优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者进入icu之后9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.25天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。
[0153]
在一个优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者进入icu之后8.4小时、优选8.26小时(0.344天)内施用。
[0154]
在一个优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点距所述患者接受器官支持之后9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.25天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。
[0155]
在一个优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点距患者接受器官支持之后8.4小时、优选8.26小时(0.344天)内施用。
[0156]
在本发明的另一个具体实施方式中，所述休克选自由于低血容量引起的休克、心源性休克、阻塞性休克和分布性休克，特别是心源性休克或脓毒性休克。
[0157]
在本发明的一个具体实施方式中，所述休克选自：
[0158]
·
在心源性休克的情况下，所述患者患有急性冠脉综合征(例如急性心肌梗塞)或患有心力衰竭(例如急性失代偿性心力衰竭)、心肌炎、心律失常、心肌病、瓣膜性心脏病、主动脉夹层伴急性主动脉瓣狭窄、外伤性腱索断裂或大面积肺栓塞，或者
[0159]
·
在低血容量性休克的情况下，所述患者可能患有出血性疾病，包括胃肠道出血、外伤、血管性病因(例如腹主动脉瘤破裂、肿瘤侵蚀到大血管中)和使用抗凝剂情形下的自发性出血，或者非出血性疾病，包括呕吐、腹泻、肾功能减退、皮肤缺损/无感失水(例如烧伤、中暑)、或胰腺炎、肝硬化、肠梗阻、外伤情形下的第三间隙体液丧失，或者
[0160]
·
在阻塞性休克的情况下，所述患者可能患有心脏压塞、张力性气胸、肺栓塞或主动脉瓣狭窄，或者
[0161]
·
在分布性休克的情况下，所述患者患有脓毒性休克、神经源性休克、过敏性休克或由肾上腺危象引起的休克。
[0162]
在一个更优选实施方式中，所述休克是脓毒性休克、由于covid-19引起的休克、由于烧伤引起的休克或外伤性休克。
[0163]
在一个最优选实施方式中，所述休克与脓毒症相关。
[0164]
在另一个实施方式中，本发明涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗
adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，其中取自所述患者的体液样品表现出bioadm水平》70pg/ml，并且其中所述体液选自全血、血浆、血清。
[0165]
尽管已知现有技术中很多标志物与休克有关，但并没有特别提出dpp3为休克标志物。此类生物标志物的实例包括mr-proadm、乳酸、c反应蛋白(crp)和降钙素原(pct)(ana maria navio serano,1 joaqu
í
n valle alonso,2,*gustavo rene 3 alejandro rodriguez camacho,4 josefa soriano benet,5和manuel vaquero6,《急症与创伤公报》(bull emerg trauma.)2019年7月；7(3):232-239.)，以及最近的一篇综述(charalampos pierrakos,dimitrios velissaris,max bisdorff,john c.marshall和jean-louis vincent,《重症监护》第24卷,文章编号:287(2020)《脓毒症的生物标志物：重新评估的时间》(biomarkers of sepsis:time for a reappraisal))中引用的正五聚蛋白3、肝素结合蛋白、可溶性触发受体、park7和il-8。
[0166]
在一个优选实施方式中，bio-adm从血浆中测量。然而，在分析物测量的技术生命周期改进中，通常有可能在其它(至少基于血液的)基质而不仅仅是血浆中测量此类分析物。举例来说，在bio-adm的情况下，已经开发了使用全(edta)血的另一种技术，称为ib10bio-adm(https://www.nexus-dx.com/wp-content/uploads/2020/07/bio-adm-ifu-rev-a.pdf)。ib10是一种用于在人edta全血和血浆中体外定量测定人酰胺化肾上腺髓质素肽(1-52)，以下称为生物活性肾上腺髓质素的快速即时医护(poc)免疫测定法。
[0167]
二肽基肽酶3也称为二肽基氨基肽酶iii、二肽基芳基酰胺酶iii、二肽基肽酶iii、脑啡肽酶b或红细胞血管紧张肽酶，简称为dpp3、dppiii，是一种可从生理活性肽如脑啡肽和血管紧张肽除去二肽的金属肽酶。ellis和nuenke 1967在纯化的牛垂体前叶提取物中首次鉴定出dpp3并测量了它的活性。作为ec 3.4.14.4列出的酶具有约83kda的分子质量，并且在原核生物和真核生物中高度保守(prajapati和chauhan 2011)。人类变体的氨基酸序列描述于seq id no 1中。二肽基肽酶iii是一种遍在表达的主要胞质肽酶。尽管缺少信号序列，但数项研究报告了膜活性(lee和snyder 1982)。
[0168]
dpp3是一种属于肽酶家族m49的锌依赖性外肽酶。它对从三/四个至十个氨基酸的不同组成的寡肽具有广泛的底物特异性，并且还能够在脯氨酸后切割。已知dpp3从其底物，包括血管紧张肽ii、iii和iv、leu-脑啡肽和met-脑啡肽、内啡肽1和2的n端使二肽水解。金属肽酶dpp3在ph 8.0-9.0下具有其最佳活性，并且可以通过添加二价金属离子如co
2
和mg
2
来激活。
[0169]
dpp3的结构分析揭示了催化基序hellgh(hdpp3 450-455)和eecrae(hdpp3 507-512)以及对底物结合和水解来说重要的以下氨基酸：glu316、tyr318、asp366、asn391、asn394、his568、arg572、arg577、lys666和arg669(prajapati和chauhan 2011；kumar等人,2016；编号是指人dpp3的序列，参见seq id no.1)。考虑到参与底物结合和水解的所有已知氨基酸或序列区域，可以将人dpp3的活性位点定义为氨基酸316和669之间的区域。
[0170]
dpp3的最主要底物是血管紧张肽ii(ang ii)，即肾素-血管紧张肽系统(ras)的主要效应子。ras在心血管疾病(dostal等人,1997.《分子与细胞心脏病学杂志》29:2893-902；roks等人,1997.《心血管》.增刊12:119-24)、脓毒症和脓毒性休克(corr
ê
a等人,2015.《重症监护》2015；19:98)中被激活。具体来说，已经证明ang ii调节许多心血管功能，包括血压控制和心脏重塑。
[0171]
最近，产生、表征并验证了特异性检测人类体液(例如血液、血浆、血清)中的dpp3的两种测定法：检测dpp3蛋白浓度的发光免疫测定法(lia)和检测特异性dpp3活性的酶捕获活性测定法(eca)(rehfeld等人,2019.jalm 3(6):943-953)。在对dpp3活性进行真正检测之前进行洗涤步骤以除去所有干扰物质。两种方法都是高度特异的，并且允许重复检测血液样品中的dpp3。
[0172]
心源性休克患者的循环dpp3水平被证明有所升高，并且与短期死亡率和严重器官功能障碍风险增加相关(deaniau等人,2019.《欧洲心力衰竭杂志》.印刷中)。此外，在纳入时测量的dpp3可区分确实发生了难治性休克与非难治性休克的心源性休克患者，并且将dpp3浓度≥59.1ng/ml与更高的死亡风险相关联(takagi等人,2020.《欧洲心力衰竭杂志》.2020年2月；22(2):279-286)。
[0173]
本发明还涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过9小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过9小时，并且其中取自所述患者的体液样品表现出dpp3水平低于阈值，并且其中所述体液选自全血、血浆、血清。
[0174]
在一个最优选实施方式中，所述患者的特征在于体液样品中的dpp3水平低于阈值，所述患者的体液样品中dpp3的所述阈值在20和120ng/ml之间，更优选在30和80ng/ml之间，甚至更优选在40和60ng/ml之间，最优选所述阈值为50ng/ml。
[0175]
在本发明的一个具体实施方式中，dpp3水平的阈值为正常健康人群的5倍中位数浓度，优选为4倍中位数浓度，更优选为3倍中位数浓度，最优选为2倍中位数浓度。
[0176]
所述受试者的体液样品中作为dpp3蛋白的量和/或dpp3活性的dpp3水平可以通过不同的方法来确定，例如免疫测定法、活性测定法、质谱法等。
[0177]
根据本发明，任何类型的结合测定法(免疫测定法和使用其它类型的抗原特异性结合剂代替抗体的类似测定法)，和b)通过在确定酶活性前使用特异性结合剂(抗dpp3抗体或其它类型结合剂)从样品中特异性捕获dpp3而对dpp3特异的dpp3酶活性测定法。
[0178]
可以通过检测dpp3特异性底物的切割产物来测量dpp3活性。已知的肽激素底物包括leu-脑啡肽、met-脑啡肽、内啡肽1和2、valorphin、β-酪啡肽、强啡肽、原肠肽、acth(促肾上腺皮质激素)和msh(黑素细胞刺激激素；等人,2000；等人,2007；dhanda等人,2008)。可以通过检测相应的切割产物来监测上述肽激素以及其它无标签寡肽(例如ala-ala-ala-ala，dhanda等人,2008)的切割。检测方法包括但不限于hplc分析(例如lee和snyder 1982)、质谱(例如等人,2000)、h1-nmr分析(例如vandenberg等人,
1985)、毛细管区带电泳(ce；例如等人,2007)、薄层色谱(例如dhanda等人,2008)或反相色谱(例如mazocco等人,2006)。
[0179]
检测由于产荧光底物被dpp3水解而产生的荧光是监测dpp3活性的标准程序。那些底物是与荧光团偶联的特定二肽或三肽(arg-arg、ala-ala、ala-arg、ala-phe、asp-arg、gly-ala、gly-arg、gly-phe、leu-ala、leu-gly、lys-ala、phe-arg、suc-ala-ala-phe)。荧光团包括但不限于β-萘基酰胺(2-萘基酰胺、βna、2na)、4-甲氧基-β-萘基酰胺(4-甲氧基-2-萘基酰胺)和7-酰氨基-4-甲基香豆素(amc、mca；等人,2000,ohkubo等人,1999)。这些产荧光底物的切割分别导致荧光β-萘基胺或7-氨基-4-甲基香豆素的释放。在液相测定法或eca中，将底物和dpp3以例如96孔板形式温育，并使用荧光检测器测量荧光(ellis和nuenke,1967)。此外，可以将携带dpp3的样品固定在凝胶上并通过电泳加以分离，用产荧光底物(例如arg-arg-βna)和fast garnet gbc将凝胶染色，并且通过荧光读取器检测荧光蛋白条带(ohkubo等人,1999)。同样的肽(arg-arg、ala-ala、ala-arg、ala-phe、asp-arg、gly-ala、gly-arg、gly-phe、leu-ala、leu-gly、lys-ala、phe-arg、suc-ala-ala-phe)可以与发色团如对硝基苯胺二乙酸酯偶联。检测由于发色底物水解引起的颜色变化可用于监测dpp3活性。
[0180]
用于检测dpp3活性的另一个选项是protease-glo
tm
测定法(可以从promega商购)。在所述方法的这个实施方式中，dpp3特异性二肽或三肽(arg-arg、ala-ala、ala-arg、ala-phe、asp-arg、gly-ala、gly-arg、gly-phe、leu-ala、leu-gly、lys-ala、phe-arg、suc-ala-ala-phe)与氨基荧光素偶联。在被dpp3切割后，氨基萤光素被释放出来，并充当发出可检测发光的偶联荧光素酶反应底物。
[0181]
在一个优选实施方式中，通过添加产荧光底物arg-arg-βna并实时监测荧光来测量dpp3活性。
[0182]
在所述确定受试者体液样品中的活性dpp3的方法的一个具体实施方式中，将与dpp3具有反应性的所述捕获结合剂固定在固相上。
[0183]
使测试样品通过固定结合剂，而dpp3如果存在则结合至所述结合剂并且本身被固定以供检测。然后可以添加底物，并且可以检测反应产物以指明测试样品中dpp3的存在或量。出于本说明书的目的，术语“固相”可用于包括可以在其中或其上进行测定的任何材料或容器，并且包括但不限于：多孔材料、无孔材料、试管、孔、载片、琼脂糖树脂(例如来自通用医疗生命科学部的sepharose)、磁性粒子(例如来自于赛默飞世尔科技的dynabeads
tm
或pierce
tm
磁珠)等。
[0184]
在本发明的另一个实施方式中，通过使所述体液样品与特异性结合至dpp3的捕获结合剂接触来确定dpp3水平。
[0185]
在本发明的另一个优选实施方式中，所述用于确定dpp3水平的捕获结合剂可以选自抗体、抗体片段或非igg支架。
[0186]
在本发明的一个具体实施方式中，所述捕获结合剂是抗体。
[0187]
可以例如通过以下方法之一来确定所述受试者的体液样品中的dpp3蛋白的量和/或dpp3活性：
[0188]
1.用于定量dpp3蛋白浓度的发光免疫测定法(lia)(rehfeld等人,2019 jalm 3(6):943-953)。
[0189]
所述lia是使用白色高结合性聚苯乙烯微量滴定板作为固相的一步化学发光夹心免疫测定法。将这些板用单克隆抗dpp3抗体ak2555(捕获抗体)包被。将示踪剂抗dpp3抗体ak2553用ma70-吖啶-nhs-酯标记，并以每孔20ng的浓度使用。将二十微升样品(例如源自于患者血液的血清、肝素-血浆、柠檬酸盐-血浆或edta-血浆)和校准物吸取到包被的白色微量滴定板中。在添加示踪剂抗体ak2553后，将所述微量滴定板在室温和600rpm下温育3小时。然后通过4个洗涤步骤(每孔350μl)除去未结合的示踪剂。通过使用微量滴定板发光计测量每个孔的剩余化学发光1秒。用6点校准曲线来确定dpp3浓度。校准物和样品优选以一式两份运作。
[0190]
2.用于定量dpp3活性的酶捕获活性测定法(eca)(rehfeld等人,2019 jalm 3(6):943-953)。
[0191]
eca是一种使用黑色高结合性聚苯乙烯微量滴定板作为固相的dpp3特异性活性测定法。将这些板用单克隆抗dpp3抗体ak2555(捕获抗体)包被。将二十微升样品(例如血清、肝素-血浆、柠檬酸盐-血浆、edta-血浆、脑脊液和尿液)和校准物吸取到经过包被的黑色微量滴定板中。在添加测定缓冲液(200μl)后，将所述微量滴定板在22℃和600rpm下温育2小时。样品中存在的dpp3通过结合到所述捕获抗体而被固定。通过4个洗涤步骤(每孔350μl)除去未结合的样品组分。通过在反应缓冲液中添加产荧光底物arg-arg-β-萘基酰胺(arg2-βna)，然后在37℃下温育1小时来测量固定的dpp3的比活性。dpp3将arg2-βna特异性切割成arg-arg二肽和荧光β-萘基胺。利用荧光计，使用340nm激发波长并在410nm检测发光来测量荧光。用6点校准曲线来确定dpp3活性。校准物和样品优选以一式两份运作。
[0192]
3.用于定量dpp3活性的液相测定法(laa)(从jones等人,《分析生物化学》,1982修改而来)。
[0193]
laa是一种使用黑色非结合性聚苯乙烯微量滴定板来测量dpp3活性的液相测定法。将二十微升样品(例如血清、肝素-血浆、柠檬酸盐-血浆)和校准物吸取到非结合性黑色微量滴定板中。在测定缓冲液(200μl)中添加产荧光底物arg2-βna后，在荧光计中使用340nm激发波长(t＝0)并在410nm检测发光测量初始βna荧光。然后将板在37℃下温育1小时。测量(t＝60)的最终荧光。计算最终荧光和初始荧光之间的差。用6点校准曲线来确定dpp3活性。校准物和样品优选以一式两份运作。
[0194]
在一个具体实施方式中，使用测定法来确定dpp3水平，其中所述测定法的测定灵敏度能够定量健康受试者的dpp3并且为《20ng/ml，优选为《30ng/ml，更优选为《40ng/ml。
[0195]
4.可利用另一种从全血样品的血浆中测量dpp3的免疫测定方法，即ib10dpp3(https://www.nexus-dx.com/wp-content/uploads/2020/11/dpp3-022-00072-ifu-rev-b_8x11.pdf)。ib10dpp3是一种用于在人edta全血和血浆中体外定量测定二肽基肽酶3(dpp3)的快速即时医护(poc)免疫测定法。nexus ib10免疫化学系统将化学与微流体和离心流组合，以便从全血快速制备无细胞血浆，然后可以使其通过通道以进行再水合、溶解并与冻干的免疫缀合物混合。
[0196]
在一个具体实施方式中，所述结合剂表现出对dpp3的结合亲和力为至少107m-1
，优选为108m-1
，更优选亲和力为大于109m-1
，最优选为大于10
10
m-1
。本领域技术人员知道可以考虑通过施用较高剂量的化合物来补偿较低的亲和力，并且这种措施不会导致超出本发明的范围。
[0197]
在本发明的另一个实施方式中，所述体液样品选自全血、血浆和血清。
[0198]
在一个具体实施方式中，用免疫测定法测量dpp3水平。从文献中知道了用于测定dpp3的免疫测定法。更具体来说，使用如例如wo2017/182561所述的免疫测定法。可用于确定dpp3或其至少5个氨基酸的片段的水平的免疫测定法可以包括实施例中所用的和权利要求所提及的步骤。所有阈值和值都必须与根据实施例使用的测试和校准相关。本领域技术人员可以知道，阈值的绝对值可能会受所用校准影响。这意味着本文给出的所有值和阈值都将在所用校准的背景下进行理解。
[0199]
通过测量健康对照物的dpp3浓度和或dpp3活性并计算例如相应的75百分位数、更优选90百分位数、甚至更优选95百分位数来预定阈值。75百分位数、更优选90百分位数、甚至更优选95百分位数的上边界定义了健康人对比患病患者的阈值。关于所述百分位数，在血浆中使用夹心型抗dpp3免疫测定法，区分健康人和患病患者的阈值可以在5和25ng/ml之间，更优选在7和20ng/ml之间，更优选在8和18ng/ml之间，最优选在10和15ng/ml之间(参见实施例3)。在血浆dpp3特异性酶捕获活性测定中，区分健康人和患病患者的阈值可以在0.5和2nmolβna min-1
ml-1
之间，更优选在0.7和1.8nmolβna min-1
ml-1
之间，更优选0.8至1.5nmolβna min-1
ml-1
之间，最优选在1.0至1.3nmolβna min-1
ml-1
(参见实施例5)。
[0200]
本领域技术人员知道如何从进行的先前研究确定阈值。本领域技术人员知道，特定阈值可能取决于用于计算预定阈值的组群，所述预定阈值可以稍后用于常规程序。本领域技术人员知道特定阈值可能取决于测定所用的校准。本领域技术人员知道特定阈值可能取决于从业者似乎可接受的灵敏度和/或特异性。
[0201]
诊断测试的灵敏度和特异性不仅仅取决于测试的分析“质量”，还取决于对什么构成了异常结果的定义。在实践中，通常通过绘制变量值对比其在“正常”人群(即表观上健康)和“疾病”人群(即患有感染的患者)中的相对频率的图来计算接受者操作特性曲线(roc曲线)。取决于要解决的特定诊断问题，参考组未必是“正常人”，而可能是与目标患病组不同的患有另一种疾病或病症的一组患者。对于任何特定的标志物，患有疾病和未患疾病的受试者的标志物水平分布可能会重叠。在此类条件下，测试不能以100％准确度绝对区分正常与疾病，重叠区域表示测试无法区分正常与疾病的情况。选择一个阈值，高于该阈值(或低于该阈值，取决于标志物如何随疾病变化)时，测试被视为异常，而低于该阈值时，测试被视为正常。roc曲线下面积是感知测量允许正确鉴定病症的概率的度量。即使测试结果未必给出准确数字时，也可以使用roc曲线。只要可以对结果进行排序，就可以生成roc曲线。举例来说，“疾病”样品的测试结果可以根据程度进行排序(例如，1＝低，2＝正常，3＝高)。可以将这种排序与“正常”人群的结果相关联，并生成roc曲线。这些方法在本领域中是众所周知的(参见例如hartley等人,1982)。优选地，选择一个阈值以提供大于约0.5、更优选大于约0.7的roc曲线面积。术语“约”在这种背景下是指给定测量值 /-5％。
[0202]
一旦通过使用先前的研究组群并考虑所有上述点来确定阈值，医生便将预定阈值用于根据本发明的疾病诊断方法，并且会确定受试者的值是高于还是低于所述预定阈值，以便做出适当的诊断。
[0203]
本技术的一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行
所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，其中所述患者的特征还在于体液样品中的adm-nh2水平高于阈值，并且其中所述体液选自全血、血浆、血清。
[0204]
本技术的一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，其中所述患者的特征还在于体液样品中的adm-nh2水平高于阈值，并且其中所述体液选自全血、血浆、血清。
[0205]
在本技术的一个优选实施方式中，所述患者的体液样品中adm-nh2的所述阈值在40和100p g/ml之间，更优选在50和90pg/ml之间，甚至更优选在60和80pg/ml之间，最优选所述阈值为70pg/ml。
[0206]
本技术的另一个实施方式涉及一种用于治疗或预防患者休克的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中通过使所述体液样品与特异性结合至adm-nh2的捕获结合剂接触来确定adm-nh2水平。
[0207]
所述抗体或片段或支架结合至n端adm(seq id no:4)，如下文所详述。
[0208]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，其特征在于所述抗体、抗体片段或非ig支架结合至肾上腺髓质素的中部区域部分aa 21-42：
[0209]
ctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.3)
[0210]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，其特征在于所述抗体、抗体片段或非ig支架结合至肾上腺髓质素的中部区域部分aa 21-42：
[0211]
ctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.3)
[0212]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，并且根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或抗体片段或非ig支架是单特异性的，特别是单克隆的。
[0213]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗
adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，并且根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或抗体片段或非ig支架是单特异性的，特别是单克隆的。
[0214]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中通过使用biacore2000系统进行无标记物表面等离子体共振，所述抗体或片段或支架表现出对adm的结合亲和力为至少10-7
m。在一个更优选实施方式中，通过使用biacore 2000系统进行无标记物表面等离子体共振，所述抗体或片段或支架表现出对adm的结合亲和力在1
×
10-9
至3
×
10-9
之间。更优选地，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是igg1抗体。
[0215]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架不是adm结合蛋白-1(补体因子h)。
[0216]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架不是adm结合蛋白-1(补体因子h)。
[0217]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架识别并结合至adm的n端末端(aa 1)。
[0218]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开
始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架识别并结合至adm的n端末端(aa 1)。
[0219]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架是使adm在血清、血液、血浆中的半衰期(t
1/2
半保留时间)提高至少10％、优选至少50％、更优选》50％、最优选》100％的adm稳定化抗体或片段或支架。
[0220]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中在表达人重组adm受体的cho-k1细胞中，使用hadm 22-52作为参考拮抗剂，所述抗体或片段或支架阻断不超过80％，优选不超过50％的adm生物活性。
[0221]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段是结合至adm的n端区域(aa 1-21)(seq id no.4)或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中重链包含以下序列：
[0222]
cdr1：seq id no:5
[0223]
gytfsryw
[0224]
cdr2：seq id no:6
[0225]
ilpgsgst
[0226]
cdr3：seq id no:7
[0227]
tegyeydgfdy
[0228]
并且其中轻链包含以下序列：
[0229]
cdr1：seq id no:8
[0230]
qsivysngnty
[0231]
cdr2：
[0232]
rvs
[0233]
cdr3：seq id no:9
[0234]
fqgshipyt。
[0235]
在本发明的一个优选实施方式中涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段是结合至adm的n端区域(aa 1-21)(seq id no.4)或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中重链包含以下序列：
[0236]
cdr1：seq id no:5
[0237]
gytfsryw
[0238]
cdr2：seq id no:6
[0239]
ilpgsgst
[0240]
cdr3：seq id no:7
[0241]
tegyeydgfdy
[0242]
并且其中轻链包含以下序列：
[0243]
cdr1：seq id no:8
[0244]
qsivysngnty
[0245]
cdr2：
[0246]
rvs
[0247]
cdr3：seq id no:9
[0248]
fqgshipyt。
[0249]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列作为vh区：
[0250]
seq id no:10(am-vh-c)
[0251]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0252]
seq id no:11(am-vh1)
[0253]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhh
hh
[0254]
seq id no:12(am-vh2-e40)
[0255]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0256]
seq id no:13(am-vh3-t26-e55)
[0257]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0258]
seq id no:14(am-vh4-t26-e40-e55)
[0259]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhh
[0260]
并且包含以下序列作为vl区：
[0261]
seq id no:15(am-vl-c)
[0262]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0263]
seq id no:16(am-vl1)
[0264]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0265]
seq id no:17(am-vl2-e40)
[0266]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0267]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列作为vh区：
[0268]
seq id no:10(am-vh-c)
[0269]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgcl
vkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0270]
seq id no:11(am-vh1)
[0271]
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[0272]
seq id no:12(am-vh2-e40)
[0273]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0274]
seq id no:13(am-vh3-t26-e55)
[0275]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0276]
seq id no:14(am-vh4-t26-e40-e55)
[0277]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0278]
并且包含以下序列作为vl区：
[0279]
seq id no:15(am-vl-c)
[0280]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0281]
seq id no:16(am-vl1)
[0282]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0283]
seq id no:17(am-vl2-e40)
[0284]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0285]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素
(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段包含以下序列作为重链：
[0286]
seq id no:22
[0287]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0288]
并且包含以下序列作为轻链：
[0289]
seq id no:23
[0290]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0291]
在本发明的一个具体实施方式中，所述抗体包含以下序列或与它具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为重链：
[0292]
seq id no:22
[0293]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0294]
并且包含以下序列或与它具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为轻链：
[0295]
seq id no:23
[0296]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0297]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过8.4小时，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过8.4小时，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过8.4小时，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段包含以下序列作为重链：
[0298]
seq id no:22
[0299]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrv
titadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0300]
并且包含以下序列作为轻链：
[0301]
seq id no:23
[0302]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0303]
在本发明的一个具体实施方式中，所述抗体包含以下序列或与它具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为重链：
[0304]
seq id no:22
[0305]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0306]
并且包含以下序列或与它具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为轻链：
[0307]
seq id no:23
[0308]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0309]
为了评价两个氨基酸序列之间的同一性，进行了逐对比对。同一性定义了比对中直接匹配的氨基酸的百分比。
[0310]
在另一个实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架用于治疗或预防患者休克，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架结合至adm的n端部分(氨基酸1-10)：yrqsmnnfqg(seq id no.25)。
[0311]
然而，本发明并不特别局限于使用阿德珠单抗。没有理由怀疑对阿德珠单抗成立的情况对共享主要基本特征(特别是亲和力和表位特异性)的抗体也将成立。必须预期靶向相同区域的抗体具有相同的技术效果，前提是它们具有相同的亲和力和相同或非常相似的结构特征(大小、形状
……
)。
[0312]
包含上述抗体的药物组合物。
[0313]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时
(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持，根据前述实施方式中的任一个，与已知药物或其它干预组合使用。特别地，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架可以与抗微生物治疗(抗生素、抗真菌剂
……
)、手术或微生物源的其它机械根除方式、血管加压剂/强心剂、流体复苏用胶体或晶体液、机械通气、ecmo(体外膜氧合)、体外肝脏支持、肾代替治疗组合使用。在一个优选实施方式中，所述用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架与主要药物组合使用。在感染的情况下，所述主要药物可以是抗生素；血管加压剂，例如儿茶酚胺和/或静脉内施用流体。本发明的主题还在于一种与tnf-α抗体组合使用的根据本发明的抗adm抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架。
[0314]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，所述药物制剂包含根据前述实施方式中任一个所述的抗体或片段或支架，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持。
[0315]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持，根据前述实施方式，其中所述药物制剂为溶液，优选为即用型溶液。
[0316]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持，根据前述实施方式，其中所述药物制剂呈冻干状态。
[0317]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持，根据前述实施方式，其中所述药物制剂经肌肉内施用。
[0318]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物
制剂，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持，根据前述实施方式，其中所述药物制剂经血管内施用。
[0319]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持，根据前述实施方式，其中所述药物制剂经由输注施用。
[0320]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)的器官支持，根据前述实施方式，其中所述药物制剂全身施用。
[0321]
此外，在本发明的实施方式中，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是单特异性的。单特异性抗adm抗体或单特异性抗adm抗体片段或单特异性抗adm非ig支架意指所述抗体或抗体片段或非ig支架结合至靶标adm内包含至少5个氨基酸的一个特定区域。单特异性抗adm抗体或单特异性抗adm抗体片段或单特异性抗adm非ig支架是全都对同一抗原具有亲和力的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架。在一个具体且优选的实施方式中，本发明提供了一种单特异性抗adm抗体或单特异性抗adm抗体片段或单特异性抗adm非ig支架，其特征在于所述抗体或抗体片段或非ig支架结合至靶标adm内包含至少4个氨基酸的一个特定区域。在另一个具体实施方式中，所述结合至adm的抗adm抗体或抗体片段是单特异性抗体。单特异性意指所述抗体或抗体片段结合至靶标adm内优选包含至少4个或至少5个氨基酸的一个特定区域。单特异性抗体或片段为全都对同一抗原具有亲和力的抗体或片段。单克隆抗体为单特异性的，但单特异性抗体还可以通过除了由普通生殖细胞产生它们以外的其它手段产生。
[0322]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，并且其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0323]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，并且其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0324]
所述症状可以选自休克，所述休克选自由于低血容量引起的休克、心源性休克、阻塞性休克和分布性休克。
[0325]
在本发明的另一个具体实施方式中，所述休克选自由于低血容量引起的休克、心源性休克、阻塞性休克和分布性休克，特别是心源性休克或脓毒性休克。
[0326]
在本发明的一个具体实施方式中，所述休克选自：
[0327]
·
在心源性休克的情况下，所述患者患有急性冠脉综合征(例如急性心肌梗塞)或患有心力衰竭(例如急性失代偿性心力衰竭)、心肌炎、心律失常、心肌病、瓣膜性心脏病、主动脉夹层伴急性主动脉瓣狭窄、外伤性腱索断裂或大面积肺栓塞，或者
[0328]
·
在低血容量性休克的情况下，所述患者可能患有出血性疾病，包括胃肠道出血、外伤、血管性病因(例如腹主动脉瘤破裂、肿瘤侵蚀到大血管中)和使用抗凝剂情形下的自发性出血，或者非出血性疾病，包括呕吐、腹泻、肾功能减退、皮肤缺损/无感失水(例如烧伤、中暑)、或胰腺炎、肝硬化、肠梗阻、外伤情形下的第三间隙体液丧失，或者
[0329]
·
在阻塞性休克的情况下，所述患者可能患有心脏压塞、张力性气胸、肺栓塞或主动脉瓣狭窄，或者
[0330]
·
在分布性休克的情况下，所述患者患有脓毒性休克、神经源性休克、过敏性休克或由肾上腺危象引起的休克。
[0331]
在一个更优选实施方式中，所述休克是脓毒性休克、由于covid-19引起的休克、由于烧伤引起的休克或外伤性休克。在一个最优选实施方式中，所述休克与脓毒性休克相关。
[0332]
在一个优选实施方式中，本发明涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，并且其中所述患者的特征在于完全没有接受器官支持或接受不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)。
[0333]
在一个最优选实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后不到7小时、优选6小时、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。此外或在另一个实施方式中，所述治疗在所述患者进入icu之后不到7小时、优选6小时、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。
[0334]
在另一个实施方式中，本发明涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时
(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，其中取自所述患者的体液样品表现出bioadm水平》70pg/ml，并且其中所述体液选自全血、血浆、血清。
[0335]
本发明涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，其中取自所述患者的体液样品表现出bioadm水平》70pg/ml，并且其中所述体液选自全血、血浆、血清。
[0336]
本发明还涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，其中取自所述患者的体液样品表现出dpp3水平低于阈值，并且其中所述体液选自全血、血浆、血清。
[0337]
在一个最优选实施方式中，所述患者的特征在于体液样品中的dpp3水平低于阈值，所述患者的体液样品中dpp3的所述阈值在20和120ng/ml之间，更优选在30和80ng/ml之间，甚至更优选在40和60ng/ml之间，最优选所述阈值为50ng/ml。
[0338]
所述抗体或片段或支架结合至成熟adm，例如adm的氨基酸1至52(seq id no:1)，或成熟adm的片段，例如adm的中部区域(mr-adm)(seq id no:3)或adm的n端(seq id no:4)，如下文所详述。
[0339]
因此，本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，其中所述抗体或片段或支架结合至成熟adm，例如adm的氨基酸1至52(seq id no:1)，或如上文定义的其片段。
[0340]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：
[0341]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0342]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35
天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其特征在于所述抗体、抗体片段或非ig支架结合至肾上腺髓质素的中部区域部分aa 21-42：
[0343]
ctvqklahqiyqftdkdkdnva(seq id no.3)。
[0344]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或抗体片段或非ig支架是单特异性的，特别是单克隆的。
[0345]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中通过使用biacore 2000系统进行无标记物表面等离子体共振，所述抗体或片段或支架表现出对adm的结合亲和力为至少10-7
m。
[0346]
在一个更优选实施方式中，通过使用biacore 2000系统进行无标记物表面等离子体共振，所述抗体或片段或支架表现出对adm的结合亲和力在1
×
10-9
至3
×
10-9
之间。更优选地，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是igg1抗体。
[0347]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架不是adm结合蛋白-1(补体因子h)。
[0348]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架识别并结合至adm的n端末端(aa 1)。
[0349]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段或支架是使adm在血清、血液、血浆中的半衰期
(t
1/2
半保留时间)提高至少10％、优选至少50％、更优选》50％、最优选》100％的adm稳定化抗体或片段或支架。
[0350]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中在表达人重组adm受体的cho-k1细胞中，使用hadm 22-52作为参考拮抗剂，所述抗体或片段或支架阻断不超过80％、优选不超过50％的adm生物活性。
[0351]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段是结合至adm的n端区域(aa 1-21)(seq id no.4)或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中重链包含以下序列：
[0352]
cdr1：seq id no:5
[0353]
gytfsryw
[0354]
cdr2：seq id no:6
[0355]
ilpgsgst
[0356]
cdr3：seq id no:7
[0357]
tegyeydgfdy
[0358]
并且其中轻链包含以下序列：
[0359]
cdr1：seq id no:8
[0360]
qsivysngnty
[0361]
cdr2：
[0362]
rvs
[0363]
cdr3：seq id no:9
[0364]
fqgshipyt。
[0365]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列作为vh区：
[0366]
seq id no:10(am-vh-c)
[0367]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhh
hh
[0368]
seq id no:11(am-vh1)
[0369]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0370]
seq id no:12(am-vh2-e40)
[0371]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0372]
seq id no:13(am-vh3-t26-e55)
[0373]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0374]
seq id no:14(am-vh4-t26-e40-e55)
[0375]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0376]
并且包含以下序列作为vl区：
[0377]
seq id no:15(am-vl-c)
[0378]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0379]
seq id no:16(am-vl1)
[0380]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0381]
seq id no:17(am-vl2-e40)
[0382]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0383]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实
施方式中的任一个，其中所述抗体或片段包含以下序列作为重链：
[0384]
seq id no:22
[0385]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0386]
并且包含以下序列作为轻链：
[0387]
seq id no:23
[0388]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0389]
在本发明的一个具体实施方式中，所述抗体包含以下序列或与它具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为重链：
[0390]
seq id no:22
[0391]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0392]
并且包含以下序列或与它具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为轻链：
[0393]
seq id no:23
[0394]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0395]
为了评价两个氨基酸序列之间的同一性，进行了逐对比对。同一性定义了比对中直接匹配的氨基酸的百分比。
[0396]
在本发明的一个具体实施方式中，所述抗体包含以下序列或包含与seq id no.:5、seq id no.:6和/或seq id no.:7具有100％同一性的cdr序列并且与seq id no:22具有》95％、优选》98％、优选》99％同一性的序列作为重链：
[0397]
seq id no:32
[0398]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsd
iavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0399]
并且包含以下序列或包含与seq id no.:8和/或seq id no.:9具有100％同一性的cdr序列并且与seq id no:23具有》98％、优选》99％同一性的序列作为轻链：
[0400]
seq id no:33
[0401]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0402]
在另一个实施方式中，所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架用于治疗或预防患者休克，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架结合至adm的n端部分(氨基酸1-10)：yrqsmnnfqg(seq id no.25)。
[0403]
包含上述抗体的药物组合物。
[0404]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式中的任一个，与已知药物或其它干预组合使用。特别地，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架可以与抗微生物治疗(抗生素、抗真菌剂
……
)、手术或微生物源的其它机械根除方式、血管加压剂/强心剂、流体复苏用胶体或晶体液、机械通气、ecmo(体外膜氧合)、体外肝脏支持、肾代替治疗组合使用。在一个优选实施方式中，所述用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架与主要药物组合使用。在感染的情况下，所述主要药物可以是抗生素；血管加压剂，例如儿茶酚胺和/或静脉内施用流体。本发明的主题还在于一种与tnf-α抗体组合使用的根据本发明的抗adm抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架。
[0405]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，所述药物制剂包含根据前述实施方式中任一个所述的抗体或片段或支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用。
[0406]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式，其中所述药物制剂为溶液，优选为即用型溶液。
[0407]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10
小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式，其中所述药物制剂呈冻干状态。
[0408]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式，其中所述药物制剂经肌肉内施用。
[0409]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式，其中所述药物制剂经血管内施用。
[0410]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式，其中所述药物制剂经由输注施用。
[0411]
本发明的另一个实施方式涉及一种用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的药物制剂，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，其中所述药物制剂全身施用。
[0412]
根据本发明的抗体是包括实质上由特异性结合抗原的免疫球蛋白基因编码的一种或多种多肽的蛋白质。公认的免疫球蛋白基因包括κ、λ、α(iga)、γ(igg1、igg2、igg3、igg4)、δ(igd)、ε(ige)和μ(igm)恒定区基因，以及无数个免疫球蛋白可变区基因。全长免疫球蛋白轻链的长度通常为约25kda或214个氨基酸。全长免疫球蛋白重链的长度通常为约50kda或446个氨基酸。轻链由nh2端的可变区基因(长度约110个氨基酸)和cooh端的κ或λ恒定区基因编码。重链类似地由可变区基因(长度约116个氨基酸)和其它恒定区基因之一编码。
[0413]
抗体的基本结构单元通常是由两对相同的免疫球蛋白链组成的四聚体，每一对具有一个轻链和一个重链。在每一对中，轻链和重链可变区结合至抗原，恒定区介导效应子功能。免疫球蛋白还以多种其它形式存在，包括例如fv、fab和(fab')2以及双功能杂合抗体和单链(例如，lanzavecchia等人,1987.《欧洲免疫学杂志》17:105；huston等人,1988.pnas 85:5879-5883；bird等人,1988.《科学》242:423-426；hood等人,1984,《免疫学》,beniamin,n.y.,第2版；hunkapiller和hood,1986.《自然》323:15-16)。免疫球蛋白轻链或重链可变区包括间杂三个高变区，也称为互补决定区(cdr)的框架区(参见《具有免疫学意义的蛋白质
序列》(sequences of proteins of immunological interest),e.kabat等人,美国卫生与公众服务部,1983)。如上所述，cdr主要负责与抗原的表位结合。免疫复合物是特异性结合抗原的抗体，如单克隆抗体、嵌合抗体、人源化抗体或人抗体，或功能性抗体片段。
[0414]
嵌合抗体是通常通过基因工程从属于不同物种的免疫球蛋白可变区和恒定区基因构建其轻链和重链基因的抗体。举例来说，来自小鼠单克隆抗体的基因的可变片段可以连接到人类恒定片段，如κ和γ1或γ3。在一个实例中，治疗性嵌合抗体因此是由来自小鼠抗体的可变或抗原结合域和来自人抗体的恒定或效应域构成的杂合蛋白，也可以使用其它哺乳动物物种，或者可以通过分子技术产生可变区。制备嵌合抗体的方法是本领域众所周知的，例如参见美国专利第5,807,715号。“人源化”免疫球蛋白是包括人框架区和来自非人(如小鼠、大鼠或合成的)免疫球蛋白的一个或多个cdr的免疫球蛋白。提供cdr的非人免疫球蛋白称为“供体”，提供框架的人免疫球蛋白称为“受体”。在一个实施方式中，所有cdr都来自人源化免疫球蛋白中的供体免疫球蛋白。恒定区不一定存在，但如果它们存在，则它们必须与人免疫球蛋白恒定区基本同一，即具有至少约85-90％，如约95％以上的同一性。因此，人源化免疫球蛋白中可能除了cdr以外的所有部分都与天然人免疫球蛋白序列的相应部分基本同一。“人源化抗体”是包含人源化轻链和人源化重链免疫球蛋白的抗体。人源化抗体与提供cdr的供体抗体结合至相同的抗原。人源化免疫球蛋白或抗体的受体框架可以具有有限数量的取自供体框架的氨基酸替换。人源化或其它单克隆抗体可以具有额外的保守氨基酸替换，所述替换对抗原结合或其它免疫球蛋白功能基本上没有影响。示例性保守替换为诸如gly、ala；val、ile、leu；asp、glu；asn、gln；ser、thr；lys、arg；以及phe、tyr。可以通过基因工程构建人源化免疫球蛋白(例如，参见美国专利第5,585,089号)。人抗体是其中轻链和重链基因来源于人的抗体。可以使用本领域已知的方法产生人抗体。可以通过使分泌目标抗体的人b细胞永生化来产生人抗体。举例来说，可以通过ebv感染或通过将人b细胞与骨髓瘤或杂交瘤细胞融合以产生三瘤细胞来实现永生化。人抗体还可以通过噬菌体呈现方法产生(参见例如dower等人,pct公开第wo 91/17271号；mccafferty等人；pct公开第wo92/001047号；以及winter,pct公开第wo 92/20791号)，或选自人组合单克隆抗体文库(参见morphosys网站)。人抗体还可以通过使用携带人免疫球蛋白基因的转基因动物来制备(例如，参见pct公开第wo 93/12227号；以及pct公开第wo 91/10741号)。
[0415]
因此，抗adm抗体可以具有本领域已知的形式。实例为人抗体、单克隆抗体、人源化抗体、嵌合抗体、cdr移植抗体。在一个优选实施方式中，根据本发明的抗体是重组产生的抗体，例如典型全长免疫球蛋白igg或至少含有重链和/或轻链的f可变域的抗体片段，例如化学偶联抗体(抗原结合片段)，包括但不限于fab片段，包括fab微型抗体、单链fab抗体、具有表位标签的单价fab抗体，例如fab-v5sx2；与ch3结构域二聚的二价fab(微型抗体)；二价fab或多价fab，例如在异源结构域的帮助下通过多聚形成，例如通过dhlx结构域二聚，例如fab-dhlx-fsx2；f(ab')2片段、scfv片段、多聚多价或/和多特异性scfv片段、二价和/或双特异性双体抗体、(双特异性t细胞衔接子)、三体抗体、多价抗体，例如来自与g不同的类别；单域抗体，例如来自骆驼或鱼类免疫球蛋白的纳米抗体等等。
[0416]
除了抗adm抗体以外，其它生物聚合物支架在本领域中众所周知可复合靶分子并且已经用于产生高靶标特异性生物聚合物。实例为适体、镜像异构体、抗运载蛋白和芋螺毒素。有关抗体形式的说明，请参见wo 2013/072513的图1a、1b和1c。
[0417]
根据本发明的抗体片段是根据本发明的抗体的抗原结合片段。
[0418]
在一个优选实施方式中，抗adm抗体形式选自fv片段、scfv片段、fab片段、scfab片段、f(ab)2片段和scfv-fc融合蛋白。在另一个优选实施方式中，抗体形式选自scfab片段、fab片段、scfv片段和其生物利用率优化缀合物，如peg化片段。最优选形式之一为scfab形式。
[0419]
非ig支架可以是蛋白质支架并且可以用作抗体模拟物，因为它们能够结合配体或抗原。非ig支架可以选自基于四连蛋白的非ig支架(例如描述于us 2010/0028995)、纤连蛋白支架(例如描述于ep 1266 025)、基于脂质运载蛋白的支架(例如描述于wo 2011/154420)；泛素支架(例如描述于wo 2011/073214)、转铁蛋白支架(例如描述于us 2004/0023334)、蛋白a支架(例如描述于ep 2231860)、基于锚蛋白重复单元的支架(例如描述于wo 2010/060748)、微生物蛋白(优选形成半胱氨酸结的微生物蛋白)支架(例如描述于ep 2314308)、基于fyn sh3结构域的支架(例如描述于wo 2011/023685)、基于egfr-a结构域的支架(例如描述于wo 2005/040229)和基于kunitz结构域的支架(例如描述于ep 1941867)。
[0420]
在本发明的一个实施方式中，可以如下产生根据本发明的抗体：将balb/c小鼠在第0天和第14天用100μg adm-肽-bsa缀合物(乳化在100μl完全弗氏佐剂中)并且在第21天和第28天用50μg(在100μl不完全弗氏佐剂中)进行免疫接种。在进行融合实验之前三天，动物接受溶解在100μl盐水中的50μg缀合物，作为一次腹膜内注射和一次静脉内注射给与。在37℃下用1ml 50％聚乙二醇使已免疫接种小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系sp2/0的细胞融合30秒。洗涤后，将细胞接种在96孔细胞培养板中。通过在hat培养基(补充有20％胎牛血清和hat补充剂的rpmi 1640培养基)中生长来选择杂交克隆。两周后，将hat培养基更换为ht培养基进行三次传代，然后返回正常细胞培养基。融合之后三周，针对抗原特异性igg抗体对细胞培养物上清液进行初步筛检。将阳性测试微培养物转移到24孔板中进行繁殖。重新测试之后，使用限制稀释技术克隆和重新克隆所选培养物并确定同种型(另见lane,r.d.1985.《免疫学方法杂志》81:223-228；zieglerb.等人,1996.《激素与代谢研究》28:11-15)。
[0421]
还可以根据以下程序通过噬菌体呈现来产生抗体：使用人天然抗体基因文库hal7/8分离针对adm肽的重组单链f可变域(scfv)。筛检抗体基因文库，所用淘选策略包括使用含有通过两个不同的间隔物连接至adm肽序列的生物素标签的肽。使用非特异性结合抗原和链霉亲和素结合抗原的淘选轮的混合来最小化非特异性结合剂的背景。来自第三轮淘选的洗脱噬菌体已用于产生表达单克隆scfv的大肠杆菌(e.coli)菌株。这些克隆菌株的培养上清液已直接用于抗原elisa测试(参见wo 2013/072513所引用的参考文献，它们整体并入本文)。
[0422]
鼠抗体人源化可以根据以下程序进行：对于鼠源抗体的人源化，分析抗体序列的框架区(fr)与互补决定区(cdr)和抗原的结构相互作用。基于结构模型，选择适当的人源fr，并且将鼠cdr序列移植到人fr中。可以在cdr或fr的氨基酸序列中引入变化以恢复因fr序列的物种转换而被消除的结构相互作用。这种恢复结构相互作用可以通过使用噬菌体呈现文库的随机方法或通过分子模型指导的定向方法来实现(almagro和fransson 2008.《生物科学前沿》13:1619-33)。在一个优选实施方式中，adm抗体形式选自fv片段、scfv片段、fab片段、scfab片段、f(ab)2片段和scfv-fc融合蛋白。在另一个优选实施方式中，抗体形式
选自scfab片段、fab片段、scfv片段和其生物利用率优化缀合物，如peg化片段。最优选形式之一为scfab形式。在另一个优选实施方式中，抗adm抗体、抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是全长抗体、抗体片段或非ig支架。
[0423]
在一个优选实施方式中，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合至adm中所含的长度为至少5个氨基酸的表位。
[0424]
在另一个更优选实施方式中，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合至adm中所含的长度为至少4个氨基酸的表位。
[0425]
在本发明的一个具体实施方式中，提供了一种结合至adm的抗adm抗体或抗adm抗体片段或结合至adm的抗adm非ig支架以用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，根据前述实施方式，其中所述抗体或片段或支架结合至成熟人adm的aa 1-21序列内优选至少4个或至少5个氨基酸的区域：
[0426]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.:4)。
[0427]
在本发明的一个具体实施方式中，提供了一种结合至adm的抗adm抗体或抗adm抗体片段或结合至adm的抗adm非ig支架以用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式，其中所述抗体或片段或支架结合至成熟人adm的aa 1-21序列内优选至少4个或至少5个氨基酸的区域：
[0428]
yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.:4)。
[0429]
在本发明的一个优选实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架结合至位于adm的n端部分(氨基酸1-21)中的adm区域。
[0430]
在另一个优选实施方式中，所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架识别并结合至adm的n端末端(aa1)。n端末端意指氨基酸1，即seq id no.1或4的“y”，它对于抗体结合是必需的。所述抗体或片段或非ig支架既不会结合n端延伸或n端修饰的adm，又不会结合n端降解的adm。
[0431]
在一个优选实施方式中，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合至adm中、优选人adm中所含的长度为至少5个氨基酸的表位。
[0432]
在一个优选实施方式中，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架针对并且可以结合至adm中、优选人adm中所含的长度为至少4个氨基酸的表位。
[0433]
在一个具体实施方式中，优选使用根据本发明的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或所述抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是使adm在血清、血液、血浆中的半衰期(t
1/2
；半保留时间)提高至少10％、优选至少50％、更优选》50％、最优选》100％的adm稳定化抗体或adm稳定化抗体片段或adm稳定化非ig支架。可以分别在不存在和存在adm稳定化抗体或adm稳定化抗体片段或adm稳定化非ig支架的情况下使用免疫测定法定量adm来确定adm在人血浆中的半衰期(半保留时间)。
[0434]
可以进行以下步骤：
[0435]-可以分别在不存在和存在adm稳定化抗体或adm稳定化抗体片段或adm稳定化非
ig支架的情况下将adm稀释在人柠檬酸盐血浆中，并且可以在24℃温育；
[0436]-在选定时间点(例如，在24小时内)取出等分试样，并且可以通过在-20℃冷冻来停止所述等分试样中的adm降解；
[0437]-如果所选测定法不受稳定化抗体影响，则可以通过hadm免疫测定法直接确定adm的量。替代地，可以用变性剂(如hcl)处理等分试样，在清除样品后(例如通过离心)，可以中和ph，并通过adm免疫测定法进行adm定量。替代地，非免疫测定技术(例如rp-hplc)可以用于adm定量。
[0438]-针对分别在不存在和存在adm稳定化抗体或adm稳定化抗体片段或adm稳定化非ig支架的情况下温育的adm计算adm半衰期。
[0439]
针对稳定adm计算半衰期增加，与已经在不存在adm稳定化抗体或肾上腺髓质素稳定化抗体片段或肾上腺髓质素稳定化非ig支架的情况下温育的adm进行比较。
[0440]
adm半衰期增为两倍是半衰期增加100％。半衰期(半保留时间)定义为特定体液或血液中特定化学品或药物的浓度降至半基线浓度经过的时间段。
[0441]
在一个具体实施方式中，所述抗adm抗体、抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是非中和性抗体、片段或非ig支架。中和性抗adm抗体、抗adm抗体片段或抗adm非ig支架阻断接近100％、至少超过90％、优选至少超过95％的adm生物活性。
[0442]
相比之下，非中和性抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架阻断低于100％、优选低于95％、优选低于90％、更优选低于80％、甚至更优选低于50％的adm生物活性。这意味着与非中和性抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架结合的adm的残余生物活性将超过0％，优选超过5％，优选超过10％，更优选超过20％，更优选超过50％。在这个背景下，作为具有“非中和性抗adm活性”并且例如阻断低于80％的adm生物活性的分子的抗体或抗体片段或非ig支架，这里为简单起见统称为“非中和性”抗adm抗体、抗体片段或非ig支架，定义为：结合至adm的一个或多个分子，所述分子在添加到表达由crlr(降钙素受体样受体)和ramp3(受体活性修饰蛋白3)构成的功能人重组adm受体的真核细胞系培养物后，减少了通过平行添加的人合成adm肽的作用由所述细胞系产生的camp的量，其中所述添加的人合成adm的添加量在不存在待分析的非中和性抗体的情况下导致camp合成的半最大刺激，其中即使当结合至待分析的adm的非中和性分子的添加量是为了获得用待分析的非中和性抗体可获得的camp合成的最大减少所需的量的10倍以上时，通过所述分子结合至adm引起的camp减少也发生到不超过80％的程度。同样的定义适用于其它范围；95％、90％、50％等。
[0443]
在根据本发明的一个具体实施方式中，使用抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或抗体片段或非ig支架阻断低于(基线值的)80％，优选低于50％的adm生物活性。这分别意味着阻断不超过80％或不超过50％的循环adm。已经理解，即使在抗体、抗体片段或非ig支架的浓度过量(意指抗体、抗体片段或非ig支架相对于adm过量)时，adm生物活性的所述有限阻断也会发生。所述有限阻断是adm结合剂本身的固有特性。这意味着所述抗体、抗体片段或非ig支架分别具有80％或50％的最大抑制。这含蓄地意味着尽管施用了适量或过量的抗体、抗体片段或非ig支架，但分别仍存在20％或50％残余adm生物活性。
[0444]
在一个优选实施方式中，所述抗adm抗体、抗adm抗体片段或抗adm非ig支架阻断至
少5％的adm生物活性。这含蓄地意味着仍存在残余95％循环adm生物活性。这是施用所述抗adm抗体、抗adm抗体片段或抗adm非ig支架之后剩余的生物活性的下限。生物活性定义为物质在体内或体外(例如在测定中)与活生物体或组织或器官或功能单元相互作用后对其产生的影响。在adm生物活性的情况下，这可能是adm在人重组adm受体camp功能测定中的作用。因此，根据本发明，经由adm受体camp功能测定来定义生物活性。可以进行以下步骤以确定adm在这种测定中的生物活性：
[0445]-在所述人重组adm受体camp功能测定中用adm进行剂量反应曲线。
[0446]-可以计算半最大camp刺激的adm浓度。
[0447]-在恒定半最大camp刺激adm浓度下，分别通过adm稳定化抗体或adm稳定化抗体片段或adm稳定化非ig支架进行剂量反应曲线(直至100μl最终浓度)。
[0448]
所述adm稳定化抗体的50％最大(在最大剂量下)抑制意指所述adm抗体或所述adm抗体片段或所述adm非ig支架分别阻断基线值50％的生物活性。所述adm生物测定中的80％最大抑制意指所述抗adm抗体或所述抗adm抗体片段或所述抗adm非ig支架分别阻断80％的adm生物活性。这意味着阻断不超过80％的adm生物活性。
[0449]
在一个优选实施方式中，使用调节性抗adm抗体或调节性抗adm抗体片段或调节性抗adm非ig支架。“调节性”抗adm抗体或调节性抗adm抗体片段或调节性抗adm非ig支架是使adm在血清、血液、血浆中的半衰期(t半停留时间)提高至少10％、优选至少50％、更优选》50％、最优选》100％并且阻断低于80％、优选低于50％的adm生物活性的抗体或adm抗体片段或非ig支架，并且其中所述抗adm抗体、抗adm抗体片段或抗adm非ig支架阻断至少5％的adm生物活性。这些与半衰期和生物活性阻断相关的值必须结合为了确定这些值的前述测定来理解。这分别意味着阻断不超过80％或不超过50％的循环adm。这分别意味着仍存在20％残余adm生物活性，或仍存在50％残余adm生物活性。这种调节性抗adm抗体或调节性抗adm抗体片段或调节性抗adm非ig支架提供了便于施用剂量的优点。部分阻断或部分降低adm生物活性和增加体内半衰期(增加adm生物活性)的组合有益地简化了抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架给药。在过量内源性adm的情况下，活性降低作用是抗体或片段或支架的主要影响，从而限制了adm的(负面)作用。在低或正常内源adm浓度的情况下，抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架的生物学作用是降低(通过部分阻断)和增加(通过增加adm半衰期)的组合。因此，非中和性和调节性抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架如同adm生物活性缓冲剂那样起作用，以便将adm生物活性保持在一定的生理范围内。
[0450]
根据本发明的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架表现出对人adm的亲和力，亲和力常数大于10-7
m，优选10-8
m，优选亲和力大于10-9
m，最优选高于10-10
m。本领域技术人员知道可以考虑通过施用较高剂量的化合物来补偿较低的亲和力，并且这种措施不会导致超出本发明的范围。可以根据如wo 2013/072513的实施例1所述的方法确定亲和力常数。
[0451]
应当强调，术语“adm结合蛋白”包括adm结合蛋白-1(补体因子h)。然而，根据本发明定义的所述adm结合蛋白既不是非中和性抗adm抗体/抗体片段/非ig支架，也不是调节性抗adm抗体/抗体片段/非ig支架。本发明的主题还是一种根据本发明的用于治疗患者的急性疾病或急性病症的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或抗体
片段或非ig支架可以与其它活性成分组合使用。
[0452]
本发明的主题还是一种包含根据本发明的抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架的药物制剂。本发明的主题还是一种根据本发明的药物制剂，其中所述药物制剂是溶液，优选为即用型溶液。在另一个实施方式中，本发明的主题还是一种根据本发明的药物制剂，其中所述药物制剂呈干燥状态，以便在使用前复原。所述药物制剂可以经肌肉内施用。所述药物制剂可以经血管内施用。所述药物制剂可以通过输注施用。在另一个实施方式中，本发明的主题还是一种根据本发明的药物制剂，其中所述药物制剂呈冻干状态。
[0453]
在另一个更优选实施方式中，本发明提供了一种药物制剂，所述药物制剂包含结合至adm的抗adm抗体或抗adm抗体片段或结合至adm的抗adm非ig支架以用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，根据前述实施方式，其中所述药物制剂施用至有需要的患者。
[0454]
在本发明的另一个实施方式中，根据本发明的药物制剂是施用至患者以用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的治疗用药物制剂，其中所述患者在开始用所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点处于休克不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始进行所述治疗的时间点进入icu不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，和/或患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)，如上文所定义，前提是所述患者需要这种治疗。
[0455]
在另一个更优选实施方式中，本发明提供了一种药物制剂，所述药物制剂包含结合至adm的抗adm抗体或抗adm抗体片段或结合至adm的抗adm非ig支架以用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，根据前述实施方式，其中所述药物制剂施用至有需要的患者。
[0456]
在本发明的另一个实施方式中，根据本发明的药物制剂是施用至患者以用于治疗休克、特别是脓毒性休克患者的治疗用药物制剂，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者进入icu之后10小时、优选8.4小时(0.35天)内和/或在所述患者接受器官支持之前或接受器官支持不超过10小时、优选8.4小时(0.35天)内施用，如上文所定义，前提是所述患者需要这种治疗。
[0457]
在一个实施方式中，根据本发明的adm抗体或adm抗体片段或adm非ig支架是非中和性adm抗体或非中和性adm抗体片段或非中和性adm非ig支架。
[0458]
如本文所用，所述抗体形式选自fv片段、scfv片段、fab片段、scfab片段、(fab)2片段和scfv-fc融合蛋白。
[0459]
在本发明的实施方式中，根据前述实施方式中任一个的adm抗体或adm抗体片段或非ig支架用于治疗有需要的患者，其中所述抗体或片段可以以至少0.5mg/kg体重，特别是至少1.0mg/kg体重，更特别是1.0至20.0mg/kg体重，例如2.0至10mg/kg体重、2.0至8.0mg/kg体重或2.0至5.0mg/kg体重的剂量施用。
[0460]
在本发明的优选实施方式中，使用根据前述实施方式中任一个所述的adm抗体或adm抗体片段或非ig支架中的任一种治疗或预防的休克症状与病毒感染相关，其中所述病毒选自肝dna病毒科、腺病毒科、疱疹病毒科、流感病毒、沙粒病毒科、丝状病毒科、披膜病毒科、诺如病毒、黄病毒科、逆转录病毒科、麻疹病毒、呼肠孤病毒科、肠病毒科、小核糖核酸病毒科、杯状病毒科等。
[0461]
在本发明的优选实施方式中，使用根据前述实施方式中任一个所述的adm抗体或adm抗体片段或非ig支架中的任一种治疗或预防的休克症状与原发性疾病的药物治疗相关，如化学治疗、生物制剂治疗(例如抗体或其片段)、抗生素或引起上述疾患症状中的任一种的任何药物。
[0462]
本发明的其它优选实施方式涉及治疗(例如，治疗、治愈、减轻、改善、缓解等)或预防根据上述实施方式中任一个所定义的症状的方法，所述方法包括向有需要的受试者施用根据前述实施方式中任一个所述的adm抗体或adm抗体片段或非ig支架。所述受试者优选为人。
[0463]
所述adm抗体或adm抗体片段或非ig支架的施用可以通过本领域已知的任何手段，包括：口服、静脉内、皮下、动脉内、肌肉内、心内、脊髓内、胸腔内、腹膜内、心室内、舌下、经皮和/或通过吸入。施用可以是全身的，例如静脉内，或是局部的。
[0464]
如本文所用，药物、化合物或药物组合物的“有效剂量”或“有效量”是足以实现有益或期望结果的量。对于预防用途，有益或期望结果包括如消除或降低风险，减轻严重程度或延迟疾病发作等结果，包括疾病的生物化学、组织学和/或行为学症状、其并发症和在疾病发展过程中出现的中间病理表型。对于治疗用途，有益或期望结果包括例如以下的临床结果：降低疼痛强度、持续时间或头痛发作频率，以及减轻由头痛引起的一种或多种症状(生物化学、组织学和/或行为学)，包括其并发症和在疾病发展过程中出现的中间病理表型，提高患有所述疾病者的生活质量，减少治疗所述疾病所需的其它药剂的剂量，增强另一种药剂的作用，和/或延迟患者的疾病进展。有效剂量可以在一次或多次施用中施用。为了本发明的目的，药物、化合物或药物组合物的有效剂量是足以直接或间接地实现预防性或治疗性治疗的量。如在临床情形下所理解，药物、化合物或药物组合物的有效剂量可能或可能不在连同另一种药物、化合物或药物组合物的情况下实现。因此，可以在施用一种或多种治疗剂的情况下考虑“有效剂量”，并且如果与一种或多种其它剂联用，则可以考虑以有效量给与单一药剂，从而可能实现或实现期望的结果。
[0465]
以下实施方式是本发明的主题：
[0466]
1.一种用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述患者：
[0467]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点患有休克、特别是脓毒性休克不超过10小时，和/或
[0468]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm
非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过10小时，和/或
[0469]
·
在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点完全没有接受器官支持或接受器官支持不超过10小时，并且
[0470]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0471]
2.根据实施方式1所述的用于治疗的结合至adm的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或结合至肾上腺髓质素的抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点患有休克、特别是脓毒性休克不超过9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.24天)、5小时、优选4小时、优选3小时。
[0472]
3.根据实施方式1或2中任一项所述的用于治疗的结合至adm的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或结合至肾上腺髓质素的抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点进入icu不超过9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.24天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时。
[0473]
4.根据实施方式1至3中任一项所述的用于治疗的结合至adm的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或结合至肾上腺髓质素的抗adm非ig支架，其中所述患者在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点接受器官支持不超过9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.24天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时。
[0474]
5.一种用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在以下情况下施用：
[0475]
·
在所述患者发生休克之后10小时内，和/或
[0476]
·
在所述患者进入icu之后10小时内，和/或
[0477]
·
在所述患者接受器官支持之前或在器官支持不超过10小时内，并且
[0478]
其中所述抗体或片段或支架结合至adm的n端部分(aa 1-21)：yrqsmnnfqglrsfgcrfgtc(seq id no.4)。
[0479]
6.根据实施方式5所述的用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者发生休克之后9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.25天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。
[0480]
7.根据实施方式5或6所述的用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在所述患者进入icu之后9小
时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.25天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。
[0481]
8.根据实施方式5至7中任一项所述的用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架在开始用所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架进行治疗的时间点距所述患者接受器官支持之后9小时、优选8.4小时、优选8.26小时(0.344天)、优选8小时、优选7小时、优选6小时、优选5.76小时(0.25天)、优选5.75小时(0.25天)、优选5小时、优选4小时、优选3小时内施用。
[0482]
9.根据实施方式1至8中任一项所述的用于治疗的结合至adm的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或结合至肾上腺髓质素的抗adm非ig支架，其中所述患者患有选自以下的休克：由于低血容量引起的休克、心源性休克、阻塞性休克和分布性休克，特别是心源性休克、脓毒性休克、由于covid-19引起的休克、由于烧伤引起的休克和外伤性休克。
[0483]
10.根据实施方式9所述的用于治疗的结合至adm的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或结合至肾上腺髓质素的抗adm非ig支架，其中所述患者患有脓毒性休克。
[0484]
11.根据实施方式1至10中任一项所述的用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中取自所述患者的体液样品表现出bioadm水平》70pg/ml，并且其中所述体液选自全血、血浆或血清。
[0485]
12.根据实施方式1至11中任一项所述的用于治疗患有休克、特别是脓毒性休克的患者的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中取自所述患者的体液样品表现出dpp3水平《50ng/ml，并且其中所述体液选自全血、血浆或血清。
[0486]
13.根据实施方式1至12中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或抗体片段或非ig支架是单特异性的。
[0487]
14.根据实施方式1至13中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中通过使用biacore 2000系统进行无标记物表面等离子体共振，所述抗体或片段或支架表现出对adm的结合亲和力为至少10-7
m。
[0488]
15.根据实施方式14所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中通过使用biacore 2000系统进行无标记物表面等离子体共振，所述抗体或片段或支架表现出对adm的结合亲和力在1
×
10-9
至3
×
10-9
之间。
[0489]
16.根据实施方式13至15中任一项所述的用于治疗或预防患者休克的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗adm抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架是igg1抗体。
[0490]
17.根据实施方式1至16中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段或支架不是adm结合蛋白-1(补体因子h)。
[0491]
18.根据前述实施方式中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或
抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段或支架识别并结合至adm的n端末端(aa 1)。
[0492]
19.根据前述实施方式中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段或支架是使adm在血清、血液、血浆中的半衰期(t1/2半保留时间)提高至少10％、优选至少50％、更优选》50％、最优选》100％的adm稳定化抗体或片段或支架。
[0493]
20.根据前述实施方式中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中在表达人重组adm受体的cho-k1细胞中，使用hadm 22-52作为参考拮抗剂，所述抗体或片段或支架阻断不超过80％、优选不超过50％的adm生物活性。
[0494]
21.根据前述项中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述受试者经历化学治疗、血管加压剂、用生物制剂、抗生素治疗或用抗病毒化合物治疗。
[0495]
22.根据前述项中任一项所述的用于治疗的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗肾上腺髓质素抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗体或片段是结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中重链包含以下序列：
[0496]
cdr1：seq id no:5
[0497]
gytfsryw
[0498]
cdr2：seq id no:6
[0499]
ilpgsgst
[0500]
cdr3：seq id no:7
[0501]
tegyeydgfdy
[0502]
并且其中轻链包含以下序列：
[0503]
cdr1：seq id no:8
[0504]
qsivysngnty
[0505]
cdr2：
[0506]
rvs
[0507]
cdr3：seq id no:9
[0508]
fqgshipyt。
[0509]
23.根据实施方式22所述的用于治疗的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述抗体或片段包含选自以下的序列作为vh区：
[0510]
seq id no:10(am-vh-c)
[0511]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatgytfsrywiewvkqrpghglewigeilpgsgstnynekfkgkatitadtssntaymqlssltsedsavyyctegyeydgfdywgqgttltvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0512]
seq id no:11(am-vh1)
[0513]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiswvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgcl
vkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0514]
seq id no:12(am-vh2-e40)
[0515]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewmgrilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0516]
seq id no:13(am-vh3-t26-e55)
[0517]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiswvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0518]
seq id no:14(am-vh4-t26-e40-e55)
[0519]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatgytfsrywiewvrqapgqglewmgeilpgsgstnyaqkfqgrvtitadeststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkrvepkhhhhhh
[0520]
并且包含选自以下序列的序列作为vl区：
[0521]
seq id no:15(am-vl-c)
[0522]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrssqsivysngntylewylqkpgqspklliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0523]
seq id no:16(am-vl1)
[0524]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylnwfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0525]
seq id no:17(am-vl2-e40)
[0526]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewfqqrpgqsprrliyrvsnrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0527]
24.根据实施方式22或23所述的用于治疗的结合至adm或其抗体片段的人单克隆抗体或片段，其中所述抗体或片段包含以下序列或与它具有》95％同一性的序列作为重链：
[0528]
seq id no:22
[0529]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasgytfsrywiewvrqapgqglewigeilpgsgstnynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyyctegyeydgfdywgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnhkpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0530]
并且包含以下序列或与它具有》95％同一性的序列作为轻链：
[0531]
seq id no:23
[0532]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrssqsivysngntylewylqrpgqsprlliyrvsnrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfqgshipytfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec。
[0533]
25.根据实施方式1至24所述的用于治疗或预防患者休克的抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架，其中所述抗肾上腺髓质素(adm)抗体或抗adm抗体片段或抗adm非ig支架结合至adm的n端部分(氨基酸1-10)：yrqsmnnfqg(seq id no.25)。
[0534]
26.一种药物制剂，所述药物制剂用于治疗或预防疾患症状或用于根据实施方式1至25中任一项所述的治疗。
附图说明
[0535]
图1示出了在休克诊断后0至10小时(图1a)和休克后10至12.2小时(图1b)施用治疗时，与安慰剂相比，患者在阿德珠单抗治疗下的死亡率随时间的变化。hr[95％ci]和对数秩p值如下：休克诊断后0-10小时组：hr＝0.439[0.174-1.11]，对数秩p＝0.072；休克诊断后10-12.2小时组：hr＝0.711[0.326-1.55]，对数秩p＝0.387。
[0536]
图2示出了休克诊断后10小时内施用阿德珠单抗治疗(图2a)时与休克诊断后超过10小时施用治疗(图2b)相比的sofa评分变化。在紧临给药前和接下来几日确定sofa评分。对各患者计算各时间点的sofa评分与给药/安慰剂前sofa评分之间的差异，并在图中表示所得值的平均值。在所述分析中，仅包括具有所有sofa分量的记录值的患者。“sofa ”评分通过如下处理缺失数据来定义：对于出院患者，相应时间点的sofa设置为0，对于死亡患者，sofa设置为24。
[0537]
图3示出了在进入icu后0至0.344天(8.3小时)(图3a)和进入icu后0.344天至29天(图3b)之间施用治疗时，与安慰剂相比，患者在阿德珠单抗治疗下的28天死亡率随时间的变化。hr[95％ci]和对数秩p值如下：到治疗为止icu停留0-0.34天组/28天死亡率：hr＝0.263[0.077-0.898]，对数秩p＝0.022；到治疗为止icu停留0.34-29天组/28天死亡率：hr＝0.734[0.358-1.5]，对数秩p＝0.399。
[0538]
图4示出了在进入icu后0至0.344天(8.3小时)(图4a)和进入icu后0.344天至29天(图4b)之间施用治疗时，与安慰剂相比，患者在阿德珠单抗治疗下的90天死亡率随时间的变化。到治疗为止icu停留0-0.34天组/90天死亡率：hr＝0.364[0.137-0.97]，对数秩p＝0.035；到治疗为止icu停留0.34-29天组/90天死亡率：hr＝0.826[0.469-1.45]，对数秩p＝0.51。
[0539]
图5示出了进入icu后0.344天内施用阿德珠单抗治疗(图5a)时与进入icu后超过0.344天施用治疗(图5b)相比的sofa评分变化。在紧临给药前和接下来几日确定sofa评分。对各患者计算各时间点的sofa评分与给药/安慰剂前sofa评分之间的差异，并在图中表示所得值的平均值。在所述分析中，仅包括具有所有sofa分量的记录值的患者。“sofa ”评分通过如下处理缺失数据来定义：对于出院患者，相应时间点的sofa设置为0，对于死亡患者，sofa设置为24。
[0540]
图6示出了当在进入icu后0.344天施用阿德珠单抗治疗(图6a)时，与进入icu后超
过0.344天施用治疗(图6b)相比，开始治疗后第7天的平均流体平衡。在icu的各24小时时间段记录流体平衡(流体输入减流体输出)。对每个患者计算直到阿德珠单抗/安慰剂输注后7天的平均流体平衡。不考虑例如由于从icu出院或死亡而缺失流体平衡的日子。中位数 iqr显示为条形图。
[0541]
图7示出了当在休克诊断后10小时内施用阿德珠单抗治疗(图7a)时，与休克诊断后超过10小时施用治疗(图7b)相比，在治疗开始后第7天的平均流体平衡。对每个患者计算直到阿德珠单抗/安慰剂输注后7天的平均流体平衡。不考虑例如由于从icu出院或死亡而缺失流体平衡的日子。中位数 iqr显示为条形图。
[0542]
图8示出了脓毒性休克患者在进入icu当天和次日的dpp3浓度。
[0543]
图9示出了脓毒性休克患者的dpp3浓度的个别轨迹。x轴表示进入icu后的天数(其中第1天是入院当天)。
实施例
[0544]
抗体的产生及其亲和力常数的测定
[0545]
产生了若干种人抗体和鼠抗体，并确定其亲合力常数(参见表1)。
[0546]
用于免疫接种的肽/缀合物：
[0547]
合成了用于免疫接种的肽，参见表1，(jpt技术公司，柏林，德国)，其中额外的n端半胱氨酸(如果所选adm序列内不存在半胱氨酸)残基用于使所述肽与牛血清白蛋白(bsa)缀合。通过使用sulfolink偶联凝胶(perbio科技公司,波恩,德国)将肽共价连接到bsa。根据perbio的手册进行偶联程序。
[0548]
根据以下方法生成了鼠抗体：
[0549]
将balb/c小鼠在第0天和第14天用100μg肽-bsa缀合物(乳化在100μl完全弗氏佐剂中)并且在第21天和第28天用50μg(在100μl不完全弗氏佐剂中)进行免疫接种。在进行融合实验之前三天，动物接受了作为一次腹膜内注射和一次静脉内注射给与的溶解在100μl盐水中的50μg缀合物。
[0550]
在37℃下用1ml 50％聚乙二醇使经免疫接种小鼠的脾细胞和骨髓瘤细胞系sp2/0的细胞融合30秒。洗涤后，将细胞接种在96孔细胞培养板中。通过在hat培养基(补充有20％胎牛血清和hat补充剂的rpmi 1640培养基)中生长来选择杂交克隆。两周后，将hat培养基更换为ht培养基进行三次传代，然后返回正常细胞培养基。
[0551]
融合之后三周，针对抗原特异性igg抗体对细胞培养物上清液进行初步筛检。将阳性测试微培养物转移到24孔板中进行繁殖。重新测试之后，使用限制稀释技术克隆和重新克隆所选培养物并确定同种型(另见lane,r.d.1985.《免疫学方法杂志》81:223-228；ziegler等人,1996.《激素与代谢研究》28:11-15)。
[0552]
小鼠单克隆抗体产生：
[0553]
通过标准抗体产生方法(marx等人,1997.《单克隆抗体产生》,atla 25,121)产生抗体，并通过蛋白a进行纯化。基于sds凝胶电泳分析，抗体纯度为》95％。
[0554]
人抗体：
[0555]
根据以下程序，通过噬菌体呈现来产生人抗体：
[0556]
使用人天然抗体基因文库hal7/8分离针对adm肽的重组单链f可变域(scfv)。筛检
抗体基因文库，所用淘选策略包括使用含有通过两个不同的间隔物连接至adm肽序列的生物素标签的肽。使用非特异性结合抗原和链霉亲和素结合抗原的淘选轮的混合来最小化非特异性结合剂的背景。来自第三轮淘选的洗脱噬菌体已用于产生表达单克隆scfv的大肠杆菌菌株。这些克隆菌株的培养上清液已直接用于抗原elisa测试(另见hust等人,2011.《生物技术杂志》152,159-170；sch
ü
tte等人,2009.plos one 4,e6625)。
[0557]
已经基于针对抗原的阳性elisa信号并针对链霉亲和素包被的微量滴定板的阴性选择了阳性克隆。为了进一步表征，已经将scfv开放阅读框克隆到表达质粒pope107中(hust等人,2011.《生物技术杂志》152,159-170)，通过固定金属离子亲和色谱法从培养物上清液中捕获，并通过尺寸排阻色谱法进行纯化。
[0558]
亲合力常数：
[0559]
为了确定抗体对adm的亲和力，使用biacore 2000系统(通用医疗欧洲有限公司，弗莱堡，德国)，通过无标记物表面等离子体共振确定adm与固定抗体的结合动力学。使用高密度共价偶联至cm5传感器表面的抗小鼠fc抗体，根据制造商的说明书(小鼠抗体捕获试剂盒；通用医疗)进行抗体的可逆固定(lorenz等人,2011.《抗微生物剂和化疗》55(1):165-173)。
[0560]
产生了分别针对以下描绘的人和鼠adm的adm区域的单克隆抗体。下表代表了用于进一步实验的一部分所获得抗体。选择是基于靶标区域：
[0561]
表1：
[0562][0563]
通过酶消化产生抗体片段：
[0564]
通过对鼠全长抗体nt-m进行酶消化生成了fab和f(ab)2片段。使用a)基于胃蛋白
酶的f(ab)2制备试剂盒(pierce 44988)和b)基于木瓜蛋白酶的fab制备试剂盒(pierce 44985)消化抗体nt-m。根据供应商提供的说明书来进行片段化程序。在f(ab)2片段化的情况下，消化在37℃进行8小时。相应地，fab片段化消化进行16小时。
[0565]
fab产生和纯化程序：
[0566]
通过用0.5ml消化缓冲液洗涤树脂并且以5000
×
g将柱离心1分钟使固定的木瓜蛋白酶平衡。之后丢弃缓冲液。通过除去储存溶液并用消化缓冲液对它进行洗涤，之后每次以1000
×
g离心2分钟来准备脱盐柱。将0.5ml制备的igg样品添加到含有平衡的固定的木瓜蛋白酶的离心柱管中。消化反应的温育时间在台式摇床上在37℃进行16小时。以5000
×
g将柱离心1分钟以分离消化物与固定的木瓜蛋白酶。然后，用0.5ml pbs洗涤树脂，并以5000
×
g离心1分钟。将洗涤级分添加到消化的抗体中，总样品体积为1.0ml。在室温下用pbs和igg洗脱缓冲液使nab蛋白a柱平衡。将柱离心1分钟以除去存储溶液(包含0.02％叠氮化钠)，并通过添加2ml pbs使其平衡，再次离心1分钟并丢弃流经液。将样品施加到柱上并通过倒置重新悬浮。在室温下随翻转混合孵育10分钟。将柱离心1分钟，保留含fab片段的流经液。(参考文献：coulter和harris 1983.《免疫学方法杂志》59,199-203.；lindner等人,2010.《癌症研究》70,277-87；kaufmann等人,2010.pnas.107,18950-5.；chen等人,2010.pnas.107,14727-32；uysal等人,2009《实验医学杂志》206,449-62；thomas等人,2009.《实验医学杂志》206,1913-27；kong等人,2009《细胞生物学杂志》185,1275-840)。
[0567]
产生和纯化f(ab')2片段的程序：
[0568]
通过用0.5ml消化缓冲液洗涤树脂并且以5000
×
g将柱离心1分钟使固定的胃蛋白酶平衡。之后丢弃缓冲液。通过除去储存溶液并用消化缓冲液对它进行洗涤，之后每次以1000
×
g离心2分钟来准备脱盐柱。将0.5ml制备的igg样品添加到含有平衡的固定的胃蛋白酶的离心柱管中。消化反应的温育时间在台式摇床上在37℃进行16小时。以5000
×
g将柱离心1分钟以分离消化物与固定的木瓜蛋白酶。然后，用0.5ml pbs洗涤树脂，并以5000
×
g离心1分钟。将洗涤级分添加到消化的抗体中，总样品体积为1.0ml。在室温下用pbs和igg洗脱缓冲液使nab蛋白a柱平衡。将柱离心1分钟以除去存储溶液(包含0.02％叠氮化钠)，并通过添加2ml pbs使其平衡，再次离心1分钟并丢弃流经液。将样品施加到柱上并通过倒置重新悬浮。在室温下随翻转混合孵育10分钟。将柱离心1分钟，保留含fab片段的流经液。(参考文献：mariani等人,1991.《分子免疫学》28:69-77；beale 1987.《实验与比较免疫学》11:287-96；ellerson等人,1972.《欧洲生化学会联合会快报》24(3):318-22；kerbel和elliot 1983.《免疫学方法》93:113-147；kulkarni等人,1985.《癌症免疫学与免疫疗法》19:211-4；lamoyi1986.《免疫学方法》121:652-663；parham等人,1982.《免疫学方法杂志》53:133-73；raychaudhuri等人,1985.《分子免疫学》22(9):1009-19；rousseaux等人,1980.《分子免疫学》17:469-82；rousseaux等人,1983.《免疫学方法杂志》64:141-6；wilson等人,1991.《免疫学方法杂志》138:111-9)。
[0569]
nt-h抗体片段人源化：
[0570]
通过cdr移植方法将抗体片段人源化(jones等人,1986.《自然》321,522-525)。
[0571]
执行以下步骤以获得人源化序列：
[0572]-总rna提取：使用qiagen试剂盒从nt-h杂交瘤提取总rna。
[0573]-第一轮rt-pcr：使用onestep rt-pcr试剂盒(目录号210210)。用对
重链和轻链特异的引物组进行rt-pcr。对于各rna样品，使用覆盖可变区前导序列的简并正向引物混合物建立了12个单独的重链和11个轻链rt-pcr反应。反向引物位于重链和轻链的恒定区中。没有将限制位点工程改造到引物中。
[0574]-反应设置：onestep rt-pcr缓冲液5.0μl，dntp混合物(含有10mm各dntp)0.8μl，引物组0.5μl，onestep rt-pcr酶混合物0.8μl，模板rna 2.0μl，不含rna酶的水加到20.0μl，总体积20.0μl。pcr条件：反转录：50℃，30分钟；初始pcr激活：95℃，15分钟。循环：20个循环，94℃，25秒；54℃，30秒；72℃，30秒；最终延伸：72℃，10分钟。第二轮半巢式pcr：在第二轮pcr中进一步扩增来自第一轮反应的rt-pcr产物。使用对抗体可变区特异的半巢式引物组建立了12个单独的重链和11个轻链rt-pcr反应。
[0575]-反应设置：2
×
pcr混合液10μl；引物组2μl；第一轮pcr产物8μl；总体积20μl；杂交瘤抗体克隆报告pcr条件：在95℃初始变性5分钟；25个循环，95℃，25秒，57℃，30秒，68℃，30秒；最终延伸为68℃10分钟。
[0576]-pcr完成后，在琼脂糖凝胶上运作pcr反应样品以观察扩增的dna片段。在对通过巢式rt-pcr扩增的超过15个克隆的dna片段进行测序后，克隆了若干个小鼠抗体重链和轻链并看起来是正确的。蛋白质序列比对和cdr分析鉴定了一个重链和一个轻链。由于可变重链中第26、40和55位上的氨基酸和可变轻链中第40位上的氨基酸对结合特性至关重要，因此可以使它们恢复为鼠源的。下面描绘了所得候选物。(padlan 1991.《分子免疫学》28,489-498；harris 和bajorath.1995.《蛋白质科学》4,306-310)。
[0577]
抗体片段序列(seq id no.:10至17)的注释：粗体加下划线是从n端至c端的按数字顺序的cdr 1、2、3；斜体的是恒定区；铰链区以粗体加下划线的字母突出显示，c端的组氨酸标签以粗体加斜体字母突出显示。
[0578]
seq id no.:10(am-vh-c)
[0579]
qvqlqqsgaelmkpgasvkisckatiewvkqrpghglewigenynekfkgkatitadtssnynekfkgkatitadtss
[0580]
seq id no.:11(am-vh1)
[0581]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasiswvrqapgqglewmgrnyaqkfqgrvtitadenyaqkfqgrvtitade
[0582]
seq id no.:12(am-vh2-e40)
[0583]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasiewvrqapgqglewmgrnyaqkfqgrvtitade
[0584]
seq id no.:13(am-vh3-t26-e55)
[0585]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatiswvrqapgqglewmgenyaqkfqgrvtitadenyaqkfqgrvtitade
[0586]
seq id no.:14(am-vh4-t26-e40-e55)
[0587]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckatiewvrqapgqglewmgenyaqkfqgrvtitadenyaqkfqgrvtitade
[0588]
seq id no.:15(am-vl-c)
[0589]
dvllsqtplslpvslgdqatiscrsslewylqkpgqspklliynrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedlgvyycfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0590]
seq id no.:16(am-vl1)
[0591]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrsslnwfqqrpgqsprrliynrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0592]
seq id no.:17(am-vl2-e40)
[0593]
dvvmtqsplslpvtlgqpasiscrsslewfqqrpgqsprrliynrdsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfgqgtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0594]
seq id no.:22(阿德珠单抗重链)
[0595]
qvqlvqsgaevkkpgssvkvsckasiewvrqapgqglewigenynqkfqgrvtitadtststaymelsslrsedtavyycwgqgttvtvssastkgpsvfplapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvswnsgaltsgvhtfpavlqssglyslssvvtvpssslgtqtyicnvnh
kpsntkvdkkvepkscdkthtcppcpapellggpsvflfppkpkdtlmisrtpevtcvvvdvshedpevkfnwyvdgvevhnaktkpreeqynstyrvvsvltvlhqdwlngkeykckvsnkalpapiektiskakgqprepqvytlppsrdeltknqvsltclvkgfypsdiavewesngqpennykttppvldsdgsfflyskltvdksrwqqgnvfscsvmhealhnhytqkslslspgk
[0596]
seq id no.:23(阿德珠单抗轻链)
[0597]
dvvltqsplslpvtlgqpasiscrsslewylqrpgqsprlliynrfsgvpdrfsgsgsgtdftlkisrveaedvgvyycfgggtkleikrtvaapsvfifppsdeqlksgtasvvcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvteqdskdstyslsstltlskadyekhkvyacevthqglsspvtksfnrgec
[0598]
seq id no.:24(人adm的aa 1-14)
[0599]
yrqsmnnfqglrsf
[0600]
seq id no.:25(人adm的aa 1-10)
[0601]
yrqsmnnfqg
[0602]
实施例2
[0603]
方法
[0604]
设计
[0605]
adrenoss-2试验是一项旨在研究阿德珠单抗在患有早期脓毒性休克且具有升高的bio-adm水平的患者中的安全性、耐受性、功效和药代动力学的双盲、安慰剂对照、随机、多中心、概念验证、生物标志物指导和剂量探索性ii期试验。该试验在比利时、法国、德国和荷兰的三十家拥有内科、外科和/或综合icu的医院进行。geven等人早些时候已经报告了有关试验设置的更多细节(geven c,blet a,kox m,hartmann o,scigalla p,zimmermann j,marx g,laterre pf,mebazaa a,pickkers p,(2019)一项旨在研究阿德珠单抗在患有脓毒性休克且具有升高的肾上腺髓质素浓度的患者中的安全性、耐受性和功效的双盲、安慰剂对照、随机、多中心、概念验证和剂量探索性ii期临床试验(adrenoss-2)(a double-blind,placebo-controlled,randomised,multicentre,proof-of-concept and dose-finding phase ii clinical trial to investigate the safety,tolerability and efficacy of adrecizumab in patients with septic shock and elevated adrenomedullin concentration(adrenoss-2)).《英国医学杂志网路版》0:e024475)。
[0606]
伦理考虑
[0607]
由相应的独立伦理委员会(iec)批准的试验程序和知情同意书(icf)过程遵循国际标准和各参与国的国家要求。
[0608]
参与者
[0609]
在进入icu并开始血管加压剂治疗后，对诊断为早期脓毒性休克(《12小时)且升高的bio-adm值(》70pg/ml)满足纳入和排除标准的男性和女性患者(》18岁)进行筛检。geven等人先前公开了纳入和排除标准列表(geven c,blet a,kox m,hartmann o,scigalla p,zimmermann j,marx g,laterre pf,mebazaa a,pickkers p,(2019)一项旨在研究阿德珠单抗在患有脓毒性休克且具有升高的肾上腺髓质素浓度的患者中的安全性、耐受性和功效的双盲、安慰剂对照、随机、多中心、概念验证和剂量探索性ii期临床试验(adrenoss-2).《英国医学杂志网路版》0:e024475)。
[0610]
[0611][0612]
在患者或其法定代表提供书面icf(取决于iec授权的当地程序)之后并且当血浆bio-adm浓度》70pg/ml(bio-adm，sphingotec有限公司，亨尼希斯多夫，德国)时，临床协调中心(ccc)确认了患者的资格。以假名方式获取所有试验相关数据。
[0613]
干预
[0614]
以1:1:2比率将患者随机分配到治疗组a(阿德珠单抗2mg/kg)、治疗组b(阿德珠单抗4mg/kg)或安慰剂组。患者在血管加压剂治疗开始后12小时内接受了分配的试验药物的单次静脉内输注(持续时间：约1小时)。geven等人[2]已经公开了应用方案的详细描述。
[0615]
结果测量
[0616]
除其他以外，记录了7天死亡率、28天死亡率和90天死亡率，以及sofa评分相对于纳入时sofa评分的每日变化(sofa＝序贯器官衰竭评估)。另一个终点是阿德珠单抗/安慰剂输注后长达7天的平均流体平衡。
[0617]
特别关注从休克诊断到治疗的时间和从进入icu到治疗的时间分别对结果测量的影响。
[0618]
统计和数据分析
[0619]
本实施例中的分析包括对合并的阿德珠单抗给药与安慰剂进行比较。符合方案(pp)分析包括根据方案接受试验药物且仅有微小偏差并满足所有主要入组标准的所有患
者。通过排除循环二肽基肽酶3(dpp3)浓度高于50ng/ml的患者对患者群体进行进一步富集。
[0620]
视情况通过患者数量、算术平均值、标准偏差(sd)或四分位间距中位数分析连续数据，并使用克鲁斯凯-沃利斯检验进行治疗组和安慰剂之间的探索性比较。按类别汇总分类变量，给出数字和百分比，并使用列联表的chi2检验进行比较。将两个治疗组(2mg/kg和4mg/kg)合并以进行功效分析。选择对数秩检验来显示治疗组之间的死亡率差异，并使用普兰-梅尔图进行说明。通过cox比例风险模型估计未调整和调整的风险比(hr)。设算由于死亡或从icu出院而缺失的sofa评分(将它们分别设为24或0，如例如de grooth等人所提出(de grooth hj,geenen il,girbes ar,vincent jl,parienti jj,oudemans-van straaten hm,(2017)随机对照试验中的sofa和死亡率终点：系统性综述和元回归分析(sofa and mortality endpoints in randomized controlled trials:a systematic review and meta-regression analysis).《重症监护》21:38))。所有报告的p值都是双侧的。p值低于0.05被视为显著。使用sas版本9.3和r版本3.4.3(http://www.r-project.org)进行统计分析。
[0621]
患者和研究治疗
[0622]
第一名患者在2017年12月8日被随机分组。最后一名患者在2019年9月25日入组。总共筛检了459名患者。在这些当中，158名不符合条件，因此未随机分组(n＝91，bio-adm《70pg/ml；n＝67不符合纳入/排除标准)。将四个国家的总共301名患者随机分到安慰剂(n＝152)、2mg/kg(n＝72)或4mg/kg阿德珠单抗(n＝77)，从而确定了意向治疗(itt)人群。对于符合方案分析(pp)，排除了n＝7名患者。最后，排除了n＝50名给药前dpp3水平》50ng/ml的患者，因此分析了n＝244的总患者群体。dpp3血浆浓度升高会触发在机制上与adm途径不同，因此不能通过阿德珠单抗解决的不利途径。
[0623]
结果
[0624]
缩减从药物受益最大的患者群体的一个重要方面是确定与患者的特定临床状况相关的治疗窗口。这在急剧变化且危及生命的病症如脓毒症、脓毒性休克或其它急性循环系统障碍中尤其重要。我们研究了阿德珠单抗的功效随脓毒性休克疾病进展变化的函数。在操作上，疾病进展转化为器官支持需求变化、从脓毒性休克发作开始的时间、从进入icu开始的时间。
[0625]
为了评估上述问题，我们研究了adrenoss-2临床试验的亚群体。
[0626]
为了研究休克诊断和开始用阿德珠单抗治疗之间的时间长度的影响，在休克诊断和开始治疗之间的时间长度的中位数，即8.4小时处将人群分成两组，并对两组进行比较。当在诊断出休克后0至10小时之间施用治疗时，与安慰剂相比，用阿德珠单抗治疗的28天死亡率较低(hr 0.439(0.174-1.11))(图1a)。当休克诊断和治疗之间的时间在10和12.2小时之间时，阿德珠单抗治疗与安慰剂相比的死亡率差异不太明显(hr 0.711(0.326-1.55))(图1b)。
[0627]
图2示出了当在休克诊断后8.4小时内施用阿德珠单抗治疗(图2a)时，与休克诊断后8.4小时后进行治疗(图2b)相比的sofa评分变化，这支持了本发明抗体的令人惊讶的有益效果。
[0628]
为了研究患者进入icu和开始用阿德珠单抗治疗之间的时间长度的影响，在患者
进入icu和开始治疗之间的时间长度的中位数，即0.344天(8.3小时)处将人群分为两组，并对两组进行比较。当在进入icu后0至0.344天(8.3小时)施用治疗时，与安慰剂相比，用阿德珠单抗治疗的28天死亡率显著较低(hr 0.263(0.077-0.898)，对数秩p值0.022)(图3a)。当进入icu和治疗之间的时间在0.344天和29天之间时，阿德珠单抗治疗与安慰剂相比的死亡率差异不太明显(hr 0.734(0.358-1.50))(图3b)。进入icu后不超过0.344天(8.3小时)接受治疗的患者组在整个90天观察期内保持超比例有益治疗效果：当在进入icu后0至0.344天(8.3小时)之间施用治疗时，与安慰剂相比，用阿德珠单抗治疗的90天死亡率显著较低(hr 0.364(0.137-0.970)，对数秩p值0.035)(图4a)。当进入icu和治疗之间的时间在0.344天至29天之间时，阿德珠单抗治疗与安慰剂相比的死亡率差异不太明显(hr 0.826(0.469-1.45))(图4b)。
[0629]
图5示出了进入icu后0.344天施用阿德珠单抗治疗(图5a)时与进入icu后超过0.344天进行治疗(图5b)相比的sofa评分变化。当在进入icu后0.344天内施用阿德珠单抗治疗时，sofa评分迅速可持续地降低，这支持了本发明抗体的令人惊讶的有益效果。
[0630]
图6示出了当在进入icu后0.344天内施用阿德珠单抗治疗(图6a)时，与进入icu后超过0.344天施用治疗(图6b)相比，开始治疗后第7天的平均流体平衡。在icu的各24小时时间段记录流体平衡(流体输入减流体输出)。对每个患者计算直到阿德珠单抗/安慰剂输注后7天的平均流体平衡。不考虑例如由于从icu出院或死亡而缺失流体平衡的日子。当在进入icu后0.344天内施用阿德珠单抗治疗时，流体平衡显著降低了70.2％，但在进入icu后更晚时间施用治疗时，流体平衡并未降低，这支持了本发明抗体的令人惊讶的有益效果。
[0631]
图7示出了当在休克诊断后8.4小时内施用阿德珠单抗治疗(图8a)时，与休克诊断后超过8.4小时施用治疗(图8b)相比，开始治疗后第7天的平均流体平衡。在icu的各24小时时间段记录流体平衡(流体输入减流体输出)。对每个患者计算直到阿德珠单抗/安慰剂输注后7天的平均流体平衡。不考虑例如由于从icu出院或死亡而缺失流体平衡的日子。当在休克诊断后10小时内施用阿德珠单抗治疗时，流体平衡降低了58.2％，但在休克诊断后更晚时间施用治疗时，流体平衡降低程度小得多(30.4％)，这支持了本发明抗体的令人惊讶的有益效果。
[0632]
在休克诊断或进入icu后早期接受阿德珠单抗或安慰剂输注的患者在阿德珠单抗或安慰剂输注开始时表现出比后来接受治疗的患者更严重的临床状况，如更高的apache ii评分和其他严重度相关变量所示。这在意料之中，因为标准护理治疗措施通常会导致患者临床状况短期改善，但不会持续改善。
[0633]
接受阿德珠单抗的患者与接受安慰剂的患者的比较没有揭示关于其基线特性的相关差异，因此观察到的阿德珠单抗的有益治疗效果没有被其它因素混淆。
[0634]
越早开始治疗，阿德珠单抗的有益治疗效果越明显。在示例性分析中，根据从进入icu到开始治疗的时间将患者排序后，将人群分为三组。针对此群体的第一四分位数、第二四分位数以及第三四分位数与第四四分位数的组合分析了28天死亡率。第1四分位数涵盖进入icu后0-0.24天的时间范围，第2四分位数涵盖进入icu后0.25-0.34天的时间范围，第3/4四分位数涵盖进入icu后》0.35天的时间范围。死亡率降低在第1四分位数中最显著(85％)，第2四分位数中显然可检测但不太显著(53％)，在第3/4四分位数中最不显著但仍明显(23％)(表2)。
[0635]
表2：阿德珠单抗引起的死亡率降低取决于从进入icu到开始治疗的时间。根据从进入icu到开始治疗的时间将患者排序，并分为三组(第1四分位数、第2四分位数和第3 4四分位数)。示出了28天死亡率数据。
[0636][0637]
实施例3
[0638]
根据adrenoss-1试验，选择进入icu时bio-adm浓度高于70pg/ml且dpp3浓度低于50ng/ml的脓毒性休克患者，并进行进一步分析(n＝7)，次日表现出dpp3增至70ng/ml以上。中位数浓度从41.0ng/ml增至129.7ng/ml(见图8)和表3。
[0639][0640]
表3：脓毒性休克患者在进入icu当天和次日的dpp3浓度。
[0641]
这在图9的个别患者的过程中进一步举例说明。
[0642]
数据表明，在进入icu时用阿德珠单抗治疗的脓毒性休克患者可能出现dpp3血浆水平的病理性升高。这转而会导致休克和死亡，如文献(blet等人,《重症监护》.2021年2月15日；25(1):61)所述。因此，这支持了早期而非晚期开始用阿德珠单抗治疗脓毒性休克患者，以避免致命性发展如dpp3增高以及随后休克和死亡的构思。
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