一种XNA分子钳-多重荧光PCR法基因突变检测方法与流程

技术特征：
1.一种xna分子钳-多重荧光pcr法基因突变检测方法，其特征在于，包括以下步骤：制备待测样品；提取所述待测样品中的dna和rna，并将所述rna逆转处理，得到crna，再将所述crna和所述dna混合后进行多重荧光pcr扩散，得到荧光样品；通过荧光pcr扩增仪检测所述荧光样品，并显示所述荧光样品的ct值判定检测结果。2.如权利要求1所述的一种xna分子钳-多重荧光pcr法基因突变检测方法，其特征在于，所述制备待测样品的具体方式：将各个来源于无肺病病史健康人群唾液与粪便样本均接种于培养基中，37℃静置厌氧培养20-40h；分别取各个所述培养基中的培养液4ml进行离心，5500rpm，10min，离心后的菌体用ph为6.8的无菌生理盐水洗涤，洗涤后再次进行离心，5500rpm，10min，得到无菌纯水悬浮菌体；将400ul的所述无菌纯水悬浮菌体，沸水浴10min，10000rpm离心15min，收集上清液。3.如权利要求1所述的一种xna分子钳-多重荧光pcr法基因突变检测方法，其特征在于，所述提取所述待测样品中的dna和rna，并将所述rna逆转处理，得到crna，再将所述crna和所述dna混合后进行多重荧光pcr扩散，得到荧光样品的具体方式：提取所述待测样品中的dna和rna，往提取到的所述rna加热入逆转录反应液，所述rna与所述逆转录反应液中的逆转录酶混合，得到crna；将所述dna和所述crna分别与混合酶混合，并对混合的所述dna和所述crna进行多重荧光pcr扩散，得到所述荧光样品。4.如权利要求1所述的一种xna分子钳-多重荧光pcr法基因突变检测方法，其特征在于，所述pcr扩增的反应条件为94℃预变性3min，94℃变性10s，55℃退火30s，72℃延伸90s，整个体系做28个循环，72℃后延伸5min。5.如权利要求1所述的一种xna分子钳-多重荧光pcr法基因突变检测方法，其特征在于，所述荧光pcr扩增仪包括壳体、扩增仪本体、调温板和放置组件，所述扩增仪本体与所述壳体固定连接，且位于所述壳体内，所述调温板设置于所述壳体内，所述放置组件设置于所述调温板远离所述扩增仪本体一侧。6.如权利要求5所述的一种xna分子钳-多重荧光pcr法基因突变检测方法，其特征在于，所述放置组件包括放置板、顶杆、固定杆和滑块，所述顶杆设置于所述壳体靠近所述扩增仪本体一侧，所述放置板与所述壳体滑动连接，且位于所述壳体内，所述壳体具有卡槽，所述放置板具有滑槽，所述固定杆设置于所述滑槽内，所述滑块与所述固定杆固定连接，并贯穿所述放置板。7.如权利要求6所述的一种xna分子钳-多重荧光pcr法基因突变检测方法，其特征在于，
所述固定杆包括滑杆和第一弹簧，所述滑杆与所述放置板滑动连接，且位于所述滑槽内，所述第一弹簧与所述滑杆固定连接，并与所述放置板固定连接，且位于所述滑杆和所述放置板之间。

技术总结
本发明涉及微生物技术领域，具体涉及一种XNA分子钳-多重荧光PCR法基因突变检测方法；包括制备待测样品；提取所述待测样品中的DNA和RNA，并将所述RNA逆转处理，得到cRNA，再将所述cRNA和所述DNA混合后进行多重荧光PCR扩散，得到荧光样品；通过荧光PCR扩增仪检测所述荧光样品，并显示所述荧光样品的ct值判定检测结果，该方法引入多重荧光PCR扩散技术，通过采用特异性引物和探针技术，三色荧光通道检测模式，建立了实时PCR体系，可以同时检测多种融合基因和多种突变基因，具备特异性好，准确率高，快速廉价，解决现有试剂盒对基因突变状态进行检测耗时长的问题。检测耗时长的问题。检测耗时长的问题。


技术研发人员：李建平 周涛 高智勇 何奕辉 张爱国
受保护的技术使用者：南京帝基生物科技有限公司
技术研发日：2022.07.18
技术公布日：2022/10/18