用于预防或治疗雷特氏综合征的乳酸菌组合物的制作方法

1.本公开涉及一种使用包含乳酸菌的组合物用于预防或治疗雷特氏综合征(rett syndrome，rtt)的方法；更具体地，本公开涉及植物乳酸杆菌植物亚种ps128(lactobacillus plantarum subsp.plantarum ps128)用于预防或治疗有其需要的个体的雷特氏综合征的用途。


背景技术：

2.雷特氏综合征是一种罕见的神经系统遗传疾病，最早于婴儿期发现，且几乎都是在女婴中观察到此病症。全世界发生率为每10,000名女婴中会有1名，在男婴中则更为罕见。雷特氏综合征通常在孩童6至18个月时发现，尽管在此之前雷特氏综合征患者的发育正常，但他们开始错过发展的里程碑或丧失所获得的能力。雷特氏综合征在早期阶段首先是丧失语言能力和出现自闭症行为，接着逐渐导致严重的发育障碍。在婴儿晚期或1至4岁之间的儿童时期，雷特氏综合征的特征是出现重复的手部动作，如扭手、拍手、敲击、搓手和咬手等，是最容易发现的诊断标准之一。其他心理动作呈现包括共济失调(ataxic)的步态不稳、过度换气或呼吸暂停，以及可能在一半以上的患者中发生的癫痫。接下来，雷特氏综合征患者会经历运动功能恶化，并以渐进性的运动功能障碍为特征，例如肌肉张力增加、肌肉消瘦、磨牙症、便秘和脊柱侧弯。雷特氏综合征呈现的失能范围广泛，包括轻度至重度。雷特氏综合征的病程和严重程度取决于在甲基cpg结合蛋白2(mecp2)基因上发现突变的位置、类型和严重程度以及x染色体不活化。
3.雷特氏综合征最主要和最不利的方面是失用症(apraxia)或运动障碍，即无法或难以控制身体进行运动。结果，包括眼神和语言在内的各种身体运动都受到影响，使雷特氏综合征患者很难自理日常活动。此外，由于失用症或运动障碍以及他们无法说话，可能很难对雷特氏综合征患者的智力进行准确评估。大多数用于智力评估的传统测试方法都涉及到手和/或语言的使用，这对雷特氏综合征患者可能是无法做到的。
4.尽管最近对雷特氏综合征的发病机制和治疗策略进行了研究，但雷特氏综合征的治疗目前仍仅是姑息(palliative)治疗，患有雷特氏综合征的个体的心理动作或神经症状的任何减轻都将对患者及其家庭有益。目前，除了其他物理和职能疗法外，雷特氏综合征患者还接受针对癫痫、逆流、呼吸和情绪等症状的治疗。
5.因此，仍然需要一种安全有效的方法来预防或治疗与雷特氏综合征有关的心理动作或神经系统症状。


技术实现要素：

6.鉴于前述内容，本公开提供一种预防或治疗有其需要的个体的雷特氏综合征的方法，包括向该个体给与包含有效量的植物乳酸杆菌植物亚种ps128及其载体的组合物。在一个实施方案中，ps128的有效量为至少1
×
109菌落形成单位(colony-forming unit，cfu)、至少1
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10
10
cfu或至少1
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10
11
cfu，包括1
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109cfu、2
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109cfu、3
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109cfu、4
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109cfu、5
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109cfu、6
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109cfu、7
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109cfu、8
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109cfu、9
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109cfu、1
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cfu、2
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cfu、3
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cfu、4
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cfu、5
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cfu、6
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cfu、7
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cfu、8
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cfu、9
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cfu、1
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cfu、2
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cfu、3
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cfu、4
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cfu、5
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cfu、6
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cfu、7
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cfu、8
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cfu和9
×
10
11
cfu，但不限于此。
7.在本公开的一个实施方案中，该组合物向个体给药至少1周、至少2周、至少3周、至少4周、至少5周或至少6周。在另一个实施方案中，该组合物向个体给药至少1个月、至少2个月、至少3个月、至少4个月、至少5个月或至少6个月。
8.在本公开的一个实施方案中，用于预防或治疗雷特氏综合征的方法包括在认知、视知觉、精细运动、接受性语言、表达性语言、语言年龄、非语言年龄和整体精神年龄中的至少一者的改善。在另一个实施方案中，以马伦早期学习量表(mullen scales of early learning)评估认知状态。
9.在本公开的另一个实施方案中，该预防或治疗雷特氏综合征的方法包括肌张力障碍的改善。在另一个实施方案中，以法恩马斯登评定量表(fahn-marsden rating scale)评估肌张力障碍的改善。在另一个实施方案中，用于预防或治疗雷特氏综合征的方法包括改善年龄小于18岁的个体的肌张力障碍。
10.在本公开的一个实施方案中，提供一种预防或治疗有其需要的个体的雷特氏综合征的方法，该方法包括给与包含有效量的植物乳酸杆菌植物亚种ps128及其载体的组合物，以减少与雷特氏综合征相关的一种或多种症状。在本公开的一个实施方案中，与雷特氏综合征相关的症状包括但不限于：行为异常，包括重复的手部动作，例如扭手、拍手、敲击、搓手和咬手；心理动作呈现，包括共济失调的步态不稳、过度换气或呼吸暂停发作和癫痫；以及运动能力恶化或渐进性运动障碍，例如肌肉张力增加、肌肉消瘦、磨牙症、便秘和脊柱侧弯。
11.在本公开的一个实施方案中，该组合物包含植物乳酸杆菌植物亚种ps128作为用于预防或治疗有其需要的个体的雷特氏综合征的唯一活性成分。
12.在本公开的一个实施方案中，该组合物以口服向个体给药。
13.在本公开的一个实施方案中，该方法还包括向个体施用额外的疗法。在进一步的实施方案中，额外的疗法选自由针对癫痫发作的疗法、逆流疗法、呼吸或情绪疗法、物理疗法和职能疗法所组成的组。
14.在本公开的一个实施方案中，该组合物是进一步包含药学上可接受的载体的医药组合物。在本公开的另一个实施方案中，药学上可接受的载体可以是生理上可接受的赋形剂或稀释剂。在本公开的又一实施方案中，生理上可接受的赋形剂或稀释剂的示例包括，但不限于：乳糖、淀粉、糊精、环糊精、羧甲基淀粉钠、羧化淀粉丙酸酯、微晶纤维素、羧甲基纤维素、麦芽糖糊精和硬脂酸镁。
15.在本公开的一个实施方案中，提供包含有效量的植物乳酸杆菌植物亚种ps128及其载体的组合物，用于预防或治疗有其需要的个体中的雷特氏综合征。
附图说明
16.图1显示肌张力障碍评估的最终评估与基线之间的差异，该评估是针对益生菌组和安慰剂组的18岁以下的雷特氏综合征受试者并使用法恩马斯登评定量表进行的评估。
具体实施方式
17.以下实施例用于举例说明本公开。根据本公开的说明书，本技术领域技术人员可以想到本公开的其他优点。本公开也可以如不同的实施例中所描述的实现或应用。在不背离本公开精神和范围下，可以修饰和/或改变实施本公开的实施例，以用于不同方面和应用。
18.本文中使用的所有术语，包括描述性或技术性术语，应被解释为对本技术领域技术人员具有显而易见的含义。然而，根据本技术领域技术人员的意图、先前案例或新技术的出现，这些术语可以具有不同的含义。另外，在本公开中可以任意选择一些术语，在这种情况下，所选择的术语的含义将在本公开的实施方式中详细描述。因此，须基于术语的含义以及整个说明书中的描述来定义本文中使用的术语。
19.此外，当一个部分“包括”或“包含”成分或步骤时，除非有与之相反的特定描述，否则该部分可以进一步包括其他成分或其他步骤，而不排除其他成分或步骤。
20.还应注意的是，如在本说明书中所使用的，单数形式“一个”、“一种”和“该”除非明确地和无疑义地限于一个指示物，否则包括多个指示物。除非上下文另外明确指出，否则术语“或”与术语“和/或”可互换使用。
[0021]“有效量”一词是指导致减少、抑制或预防个体的行为障碍、异常或症状所需的活性成分的量。如本技术领域技术人员所理解的，根据给药途径、赋形剂的使用以及与其他治疗方法共同使用的可能性，有效量将有所变化。
[0022]
如本文所使用，术语“个体”可与“受试者”互换，并且包括可能发生神经发育障碍的单个生物体，包括但不限于动物，尤其是脊椎动物，例如哺乳动物，特别是人类。
[0023]
如本文所使用，术语“状况”、“病症”或“症状”是指患有雷特氏综合征的个体所呈现的心理动作或神经症状。
[0024]
术语“需要治疗的个体”是指呈现或患有与雷特氏综合征有关的一种或多种症状的人。合适的合格人员或医师能够使用标准行为测试程序或指南来识别需要治疗的此类个体。相同的行为测试程序或指南也可用于决定个体的疾病或症状是否有所改善，或决定要向需要治疗的个体给药的乳酸菌的最有效剂量。
[0025]
如本文所使用，术语“改善”是指在诊断为雷特氏综合征的个体中，预防或减少其所呈现的一种或多种症状或异常的严重性或频率，改善可以由接受治疗的个体本身或另一个人观察得到。
[0026]
使用不同的实施例来说明本公开。以下实施例不应视为对本公开内容范围的限制。
[0027]
实施例
[0028]
本公开检验植物乳酸杆菌植物亚种ps128治疗雷特氏综合征的效果。
[0029]
实施例1：补充ps128对雷特氏综合征受试者的认知能力改善
[0030]
在本实施例中，进行了一项前瞻性的随机、双盲、使用安慰剂对照组的试验，入选标准为年龄在1至50岁之间，被诊断患有雷特氏综合征和mecp2突变的受试者。排除标准是在加入试验前四周食用抗生素、酸奶或益生菌产品。在研究期间，参与者必须避免食用酸奶或益生菌产品，但允许他们继续常规药物治疗。但是，在研究期间经处方指示使用抗生素的人被排除在外。
[0031]
共有36名年龄为1至35岁的雷特氏综合征和mecp2突变的受试者参加这项研究。根据2次的分层块状排列随机分派(random permuted blocks within strata)，将他们随机分配为接受安慰剂或ps128，ps128组和安慰剂组的比例为1：1。医师、研究人员和受试者对组分配不知情。安慰剂使用与ps128完全相同的胶囊、包装、标签和给药时间表，以隐藏所使用的补充剂类别。
[0032]
植物乳酸杆菌植物亚种ps128经分离，并以dsmz登录号dsm 28632(bened biomedical co.,ltd.)保藏。ps128产品以包含乳白色粉末的胶囊的最终形式提供。益生菌胶囊重425
±
25mg，每粒ps128胶囊含有3
×
10
10
cfu，并以微晶纤维素为载体。安慰剂胶囊仅包含微晶纤维素。所有胶囊的味道和外观均相同，保存于冷藏温度(4至8℃)中。每天间隔12小时，分别向治疗组和安慰剂组的参与者口服给药1粒胶囊ps128或安慰剂。
[0033]
36名患者中的1名无法完成研究，而35名患者完成了研究。安慰剂组有17例，益生菌ps128组则有18例。两组患者的年龄或突变类型无差异。下表1显示基线时受试者的人口统计学信息和临床特征。
[0034]
表1、基线人口统计学信息和临床特征
[0035][0036]
[0037]1rss：雷特氏严重度得分(rett severity score)
[0038]2rsbq：雷特氏综合征行为问卷(rett syndrome behaviour questionnaire)
[0039]3adams：焦虑、抑郁和情绪量表(anxiety,depression and mood scale)
[0040]4ssi：社交互动筛查(screen for social interaction)
[0041]
*
安慰剂组中的百分比
[0042]
**
ps128组中的百分比
[0043]
安慰剂组和益生菌组之间的基因型差异使用卡方/费舍尔精确检定法进行分析，以t检验评估年龄之间的差异。雷特氏综合征严重度量表(rsss)用于评估临床严重程度，rsss由先前研究中所述的七个参数组成(chin wong l、hung pl、jan ty、lee wt。雷特氏综合征个体中的刻板举动的变化：台湾的全域性横断面研究。autism research:official journal of the international society for autism research,2017,10:1204-1214)。由父母完成的焦虑、抑郁和情绪量表(adams)和社交互动筛查(ssi)用于记录当前与自闭症相关的行为。adams用于审视智力低下者的焦虑、抑郁和情绪障碍。已经确定了30到60个月大的患者的ssi总分和百分位得分的可靠性和有效性。进行早期的社会交流量表(escs)来测量指称性(protodeclarative)和祈使性(protoimperative)联合注意力行为。为了进行胃肠道评估，在基线和研究结束时测量粪便特征和便秘。
[0044]
为了评估参与者的认知状态，采用了马伦早期学习量表(msel)和文兰适应行为量表(vabs)，在研究开始(基线)和研究结束时取得测量值。专门研究儿童心理学的检测员担任msel的评分人员。msel包含5个子量表：视知觉、表达性语言、接受性语言、大肌肉动作、和精细动作。它是针对0到68个月大的孩子的全面性标准参照发育测试。由于此研究招募的女孩年龄超出本测试的预定年龄范围，因此，其表现均以等同的年龄报告。非语言心智年龄是对视知觉和精细动作量表的等同年龄进行平均，语言心智年龄为接受性语言量表和表达性语言量表的平均等同年龄。使用父母完成的vabs测量每日适应功能。使用回归分析以决定两次访视之间的治疗效果。使用多变量分析控制潜在干扰因子的影响。统计显著性定义为p值《0.05。
[0045]
结果发现，以多变量回归分析模型进行估计，以基线心理年龄和年龄进行调整后，与安慰剂组相比，益生菌组在4个月后随访时的整体心理年龄显著增加了0.77个月(如下表2所示)。与安慰剂组相比，益生菌组随访时的语言和非语言年龄也有所增加(分别为p＝0.47和p＝0.13)。
[0046]
针对msel个别子量表数值进行分析，以基线和年龄进行调整后，与安慰剂组相比，益生菌组随访时的视知觉(p＝0.069)、精细动作(p＝0.36)、表达语言(p＝0.75)和接受语言(p＝0.67)也有所增加。
[0047]
表2、马伦早期学习量表(msel)的整体心智年龄回归分析
[0048][0049]
*
se：标准差
[0050]
**
ci：信赖区间
[0051]
实施例2：补充ps128对受试者的肌张力障碍明显改善
[0052]
本研究也评估实施例1中受试者的肌张力障碍。两名小儿神经科医生使用法恩马斯登肌张力障碍评定量表和肌张力障碍统一评定量表对肌张力障碍进行评估，分数越高表示肌张力障碍越严重。在研究开始时的基线和研究结束时取得测量值。使用回归分析决定两次访视之间的治疗效果，并使用多变量分析控制潜在干扰因子的影响。统计显著性定义为p值《0.05。
[0053]
以多变量回归分析模型估计与4个月后随访时针对法恩马斯登肌张力障碍评定量表(f-m)评分之间的相关性，以基线分数和年龄进行调整后，与安慰剂组相比，益生菌组的法恩马斯登肌张力障碍评定量表(fm)明显降低了8.78分(如下表3所示)。
[0054]
表3、法恩马斯登肌张力障碍评定量表回归分析
[0055][0056]
实施例3：补充ps128对受试者的肌张力障碍和认知能力显著改善
[0057]
进行为期16周的前瞻性双盲随机对照研究，以确定益生菌植物乳酸杆菌(ps128)对雷特氏综合征的核心临床特征的影响。招募具有雷特氏综合征临床诊断的患者，排除标准为研究前4周或研究期间服用益生菌或益生菌相关产品的人、在研究前4周服用抗生素的人、对研究的任何方面服从性差的人、以及对ps128有不良反应的人。
[0058]
共有34位年龄在1.8至35.8岁之间的mecp2突变患者完成了为期4个月的试验。根据2次的分层块状排列随机分派，将这些受试者以1：1的比例随机分配为接受安慰剂或ps128治疗。医师、研究人员和受试者对组别分配不知情。
[0059]
使用法恩马斯登肌张力障碍评定量表和肌张力障碍统一评定量表评估肌张力障碍状态。使用马伦早期学习量表(msel)、文兰适应行为量表(vabs)和早期社会交流量表(escs)获得认知数据。使用雷特氏综合征严重度量表评估ps128对临床严重程度的影响。粪便特征通过修改后的布里斯托尔粪便图表(bristol stool chart)进行评估。统计分析方
法使用的是独立的t检验，用于分析每个参数的最终评估值和基线评估值之间的差异。
[0060]
在研究结束时，发现所有受试者都对益生菌ps128耐受良好。补充益生菌后，如图1所示，在具有mecp2突变且年龄低于18岁的受试者中，肌张力障碍有统计学上的显著改善(p＝0.027)。
[0061]
此外，对于以msel进行的认知能力评估，在安慰剂组中观察到退化，特别是在视知觉、精细动作和表达性语言方面。然而，在益生菌组中未观察到这种退化。相对地，与安慰剂组相比，益生菌组在视知觉、接受性语言、精细动作和表达性语言方面得分有进步。下面的表4和表5显示在安慰剂组和益生菌组之间，使用独立t检验在年龄＜18岁和≧18岁的雷特氏综合征患者中所进行的每个参数的最终评估和基线之间的差异。
[0062]
表4、使用独立t检验年龄18岁以下的雷特氏综合征患者的每个参数的最终评估和基线之间的差异
[0063][0064]
表5、使用独立t检验年龄18岁以上的雷特氏综合征患者的每个参数的最终评估和基线之间的差异
[0065][0066]
上述对具体实施例的描述仅是为了说明本公开的原理和功能，并不用于限制本公开的范围。本技术领域技术人员应理解，根据本公开原理的所有修饰和改变均应落入所附的权利要求范围内。说明书和实施例旨在作为示例，本公开的实际范围应由所附的权利要求书所示。