用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物的制作方法

1.本发明属于医药领域，涉及一种药物，尤其涉及一种用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物。


背景技术：

2.糖尿病和肥胖已成为世界性的流行病。肥胖已知是2型糖尿病最强的风险因素，且是心血管疾病的强风险因素。约60％糖尿病患者患有肥胖症(体重指数bmi≥30kg/m2)，且伴胰岛素抵抗。
3.二甲双胍(1，1-dimethylbiguanide)用于治疗非胰岛素依赖性糖尿病，为治疗2型糖尿病的一线药物，特别是针对超重的患者。二甲双胍作用机制多样。二甲双胍为ampk激活剂。ampk是生理学上控制碳水化合物和脂质代谢的重要的酶，二甲双胍激活该酶，由此使高血糖水平正常化，改善脂质状态，使排卵期月经失调正常化，并治疗脂肪肝；并且二甲双胍可有效地治疗或预防p53基因缺失的癌症。另外，有报道，二甲双胍可有效地作为pgc-1α激活剂预防严重的副作用如肌痛、肌细胞损伤和横纹肌溶解症。二甲双胍是一种能减肥的降糖药。其能增加胰岛素的敏感性，减少脂肪的合成。
4.伊美格列明((r)-n2，n2，6-trimethyl-3，6-dihydro-1，3，5-triazine-2，4-diamine)为一种治疗2型糖尿病的药物，其具有和二甲双胍类似的化学结构(见表2)。twymeeg(imeglimin hydrochloride)盐酸伊美格列明口服片剂，是一种以线粒体生物能量学(mitochondrial bioenergetics)为靶点的药物，可改善胰岛素分泌紊乱和胰岛素敏感性。盐酸伊美格列明具有独特的双重作用机制，有潜力在当前治疗模式的各个阶段治疗2型糖尿病，既可以作为单药疗法，也可以作为其他降糖疗法的补充。
5.由于二甲双胍和伊美格列明在药学上可以以游离碱的形式使用，但该形式的稳定性低，因此二甲双胍和伊美格列明以药学上可接受的酸加成盐的形式给药。二甲双胍盐酸盐的通常的剂量是一天内随餐给药500mg或750mg片剂2至3次。
6.由于二甲双胍盐酸盐具有快的药物消除速率，这样的给药方法会造成血液中药物水平的剧烈变化，且这样的血液中药物水平的变化可能导致副作用和对药物的抗性。使用二甲双胍盐酸盐，常常出现包括厌食、恶心、呕吐和偶发性腹泻等胃肠道副作用。此外，二甲双胍盐酸盐是高度水溶性药物，大部分药物在上部胃肠道吸收而几乎不透过下部胃肠道，可能造成由剧烈的释放现象导致的血糖过低。因此，设计可以控制释放24小时的控释片剂是优选的给药形式，但在制备用于控释的特殊制剂的制备技术中存在许多难题。
7.已对除二甲双胍盐酸盐以外的加成盐进行了研究。us3957853公开了二甲双胍乙酰水杨酸盐，us4028402公开了新的双胍化合物加成盐，us4080472公开了二甲双胍的氯贝酸(clofibric acid)盐的制备和与糖尿病相关的疾病的治疗，us6031004描述了通过二甲双胍的延胡索酸盐、琥珀酸盐和马来酸盐(maleinic acid)制备的药物化合物及其应用，us8076377描述了二甲双胍苹果酸盐等、其制备方法及其药物化合物，us13841970描述了二甲双胍与天冬氨酸、谷氨酸或其同系物的盐，de2357864和de1967138公开了二甲双胍的烟
酸盐，cn1962661公开了叶酸二甲双胍及其制备方法，wo2009038396公开了二甲双胍丙二酸盐，us8058312描述了二甲双胍与乙酸的盐。
8.三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶(acly)是一种胞质同源四聚体酶，在三磷酸腺苷(atp)的作用下，acly可以催化柠檬酸和辅酶a转化为乙酰辅酶a和草酰乙酸酯。由于acly是产生胞浆乙酰辅酶a的主要酶，而胞浆乙酰辅酶a是胆固醇和脂肪酸从头合成所需的前体，因此抑制acly有可能达到减少乙酰辅酶a的生成从而降低胆固醇以及甘油三酯水平的目的。acly不仅与脂代谢紧密相关，它还参与了葡萄糖的代谢。acly可通过靶向下游效应器来影响葡萄糖的代谢。葡萄糖的糖酵解过程可以提供生物所需的能量，特别是在癌细胞中，它十分依赖糖酵解过程来获取能量，表现为葡萄糖的摄取增加以及糖酵解活跃。葡萄糖的分解代谢升高会导致糖酵解最终产物丙酮酸的过量产生，丙酮酸有两个去向：一是被乳酸脱氢酶转化为乳酸，二是进入线粒体后引起线粒体中柠檬酸浓度的上升，柠檬酸被载体运输到细胞质中，被acly裂解生成乙酰辅酶a。acly是长链脂肪酸合成的上游酶，可为脂肪酸的合成提供所需的乙酰辅酶a。由此可见，acly将糖酵解的分解代谢途径和脂肪酸的生物合成两个过程很好地联系起来，中间产物柠檬酸既是糖酵解代谢产物的抑制剂，也是乙酰辅酶a从头合成脂肪酸的前提。因此，acly的活性会影响葡萄糖的酵解产生atp和脂质合成两大过程。
9.最早发现的acly抑制剂是(-)-羟基柠檬酸(表1，化合物acly-02)，是羟基柠檬酸(hca)的其中一种立体异构体。(-)-羟基柠檬酸和藤黄内酯((-)-羟基柠檬酸内酯(表1，化合物acly-03))是从藤黄果皮中分离出来的。在此基础上，合成了一些具有抑制acly作用的(-)-羟基柠檬酸衍生物。这些(-)-羟基柠檬酸衍生物其生物学特性的表现归因于在哺乳动物胆固醇生物合成途径中位于hmg-coa还原酶上游的acly的特异性抑制。许多研究表明这些化合物具有减少脂肪生成和抑制脂肪酸合成的能力。(-)-羟基柠檬酸的异构体( )-别羟基柠檬酸(( )-allohydroxycitric acid，(1s，2r)-1，2-dihydroxypropane-1，2，3-tricarboxylic acid)(表1，化合物acly-21)和藤黄内酯的异构体木槿内酯(hibiscus lactone，(2s，3r)-3-hydroxy-5-oxooxolane-2，3-dicarboxylic acid)(表1，化合物acly-22)是从锦葵科木槿属植物中分离出来的，研究表明，( )-别羟基柠檬酸和木槿内酯是一种淀粉酶和葡萄糖苷酶抑制剂。同时，糖尿病患者的抵抗力相对较差，同时高血糖利于细菌的生长繁殖，容易发生细菌感染。细菌分泌的毒素会影响胰岛素的分泌，加重糖尿病，甚至引起并发症，因而也特别留意，避免伤口感染的发生。如果足部外伤，经久不愈，易导致“糖尿病足”，(-)-羟基柠檬酸和藤黄内酯((-)-羟基柠檬酸内酯)及其异构体具有良好的抗菌活性。
10.目前已经上市或在研的三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶(acly)抑制剂及其类似物(表1)，大部分都具有羧酸结构。羧酸类药物会引起肠胃不适的副作用，如消化不良、胃与十二指肠出血、胃溃疡和胃炎。羧酸类不易溶于水或胃液，会长时间停留在胃肠道中，可能损伤胃粘膜细胞，进一步加重肠胃不适的副作用。羧酸类不易溶于水或胃液，也会影响药物的吸收利用。


技术实现要素：

11.为了解决背景技术中存在的上述技术问题，本发明提供了一种可产生独特的协同
效应并可提高药效的用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物。
12.为了实现上述目的，本发明采用如下技术方案：
13.一种用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物，其特征在于：所述用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物是药物组合物或药物化合物；
14.所述用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物是药物化合物时，所述药物化合物是物质c；
15.所述用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物是药物组合物时，所述药物组合物至少是以下三种物质中的任意两种物质的组合：物质a、物质b、物质c；
16.所述物质a是二甲双胍、二甲双胍衍生物以及二甲双胍类似物中的一种或多种的组合；
17.所述物质b是acly抑制剂和/或acly抑制剂类似物；
18.所述物质c是由物质a以及物质b制备而成的化合物。
19.上述药物组合物是物质a与物质b组合时，所述物质a与物质b的质量比为1：10～200：1；
20.所述药物组合物是物质a与物质c组合时，所述物质a与物质c的质量比为1：10～200：1；
21.所述药物组合物是物质b与物质c组合时，所述物质c与物质b的质量比为1：10～200：1；
22.所述药物组合物是物质a、物质b以及物质c组合时，所述物质a、物质c以及物质b的质量比为1：10：100～200：10：1。
23.上述药物组合物是物质a与物质b组合时，所述物质a与物质b的质量比为1：5～10：1；
24.所述药物组合物是物质a与物质c组合时，所述物质a与物质c的质量比为1：5～10：1；
25.所述药物组合物是物质b与物质c组合时，所述物质c与物质b的质量比为1：5～10：1；
26.所述药物组合物是物质a、物质b以及物质c组合时，所述物质a、物质c以及物质b的质量比为1：5：5～5：5：1。
27.上述物质b是如下结构式或如下结构式在药学上可接受的盐；
[0028][0029]
r1为氢或羟基；
[0030]
r2为氢、羧基或羧甲基；
[0031]
r3、r4、r5和r6各自独立的为氢、甲基、羟基或卤素；
[0032]
或r3的羟基与羧基形成内酯；
[0033]
或r3的羟基与r1的羟基脱水形成醚；
[0034]
p和q是各自独立的为0、1、2、3、4或5。
[0035]
上述r3和r4不能同时为氢，q为0，p为0或5。
[0036]
上述所述物质a是：二甲双胍、伊美格列明，或其在药学上接受的盐。
[0037]
上述物质c是由物质a以及物质b制备而成的化合物时，所述物质c是酸-碱加成盐，所述酸-碱加成盐的化学式是：
[0038]
(x
m
)m(xu
n-)n[0039]
其中，
[0040]
xu
n-是用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的酸-碱加成盐的阴离子部分；
[0041]
x
m
是用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的酸-碱加成盐的阳离子部分；
[0042]
m和n分别是1、2或3；
[0043]
m和n的比值为1：2～6：1。
[0044]
上述酸-碱加成盐中：
[0045]
xu
n-是和/或其药学上可接受的盐所提供的阴离子；
[0046]
x
m
是二甲双胍和/或伊美格列明所提供的阳离子；
[0047]
m是1；
[0048]
m和n的比值为1：1～3：1。
[0049]
上述是贝派地酸、(-)-羟基柠檬酸及其异构体( )-别羟基柠檬酸、藤黄内酯及其异构体木槿内酯中的一种或多种的组合。
[0050]
上述用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物还包括药学上可接受的赋形剂、载体或稀释剂。
[0051]
一种基于如前所述的用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物在预防、缓解或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病时的应用。
[0052]
一种基于如前所述的用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物在预防、缓解或治疗糖尿病、糖尿病并发症、肥胖、炎症、血脂异常、糖尿病合并血脂异常、他汀类非耐受患者的血脂异常、代谢综合征、前驱糖尿病、脂肪肝、非酒精性脂肪性肝病和非酒精性脂肪肝炎、冠心病、多囊卵巢综合征时的应用。
[0053]
一种基于如前所述的应用，其特征在于：所述糖尿病并发症是糖尿病肾病、糖尿病性视网膜病变、大血管并发症或感染性疾病。
[0054]
本发明的优点是：
[0055]
本发明提供了一种用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物，用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物是药物组合物或药物化合物；用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物是药物化合物时，药物化合物是物质c；用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物是药物组合物时，药物组合物至少是以下三种物质中的任意两种物质的组合：物质a、物质b、物质c；物质a是二甲双胍、二甲双胍衍生物以及二甲双胍类似物中的一种或多种的组合；物质b是acly抑制剂和/或acly抑制剂类似物；物质c是由物质a以及物质b制备而成的化合物。本发明是二甲双胍或/和其衍生物或/和类似物和具有acly抑制药理活性的有机酸联合使用后，所产生的独特的协同效应。本发明的化合物可用来治疗多种疾病或功能障碍，如糖尿病、糖尿病并发症、血脂异常、他汀类非耐受
患者的血脂异常、高血脂、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、糖尿病合并血脂异常、肥胖、代谢综合症、前驱糖尿病，心脏疾病、神经退行性疾病，炎症、癌症以及各种肝脏疾病或功能障碍，如脂肪肝、非酒精脂肪肝，非酒精性脂肪性肝炎或胆汁淤积性肝病。
附图说明
[0056]
图1为化合物5-1((-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍)的ms esi

谱图。
[0057]
图2为化合物5-1((-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍)的ms esi-谱图。
[0058]
图3为化合物5-1((-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍)的1h nmr谱图。
[0059]
图4为化合物5-1((-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍)的
13
c nmr谱图。
[0060]
图5显示了模型一血糖浓度的示例性数据。
[0061]
图6显示了模型二血糖浓度的示例性数据。
[0062]
图7显示了模型二总胆固醇的示例性数据。
[0063]
图8显示了模型二甘油三酯的示例性数据。
具体实施方式
[0064]
定义
[0065]
除非另外定义，否则本文中所用的全部技术与科学术语均具有如本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同含义。
[0066]
如本文所用，术语“含有”或“包括(包含)”可以是开放式、半封闭式和封闭式的。换言之，所述术语也包括“基本上由
…
构成”、或“由
…
构成”。
[0067]
应当理解，本发明所述的化合物可以被任意数量的取代基或官能部分取代。本说明书中，可选择其基团和取代基来得到稳定的官能部分和化合物。
[0068]
如本文所用，术语“治疗、减轻或预防疾病或障碍”是指在疾病或障碍发生之前或之后改善这种状况。与同等的未治疗对照组相比，经各种标准技术测量，这种减轻或预防程度为至少5％、10％、20％、40％、50％、60％、80％、90％、95％或100％。
[0069]
如本文所用，术语“药学上可接受的盐”是指目前公开的化合物的药学上可接受的酸加成盐或药学上可接受的碱加成盐，其可以在给药时没有产生任何不良生物效应，也不会与含有其药物组合物的任何其它组分发生任何有害的相互作用。
[0070]
本发明所涵盖的部分化合物具有特殊的空间构型并有立体异构现象。本发明涵盖所有这类的化合物所可能涉及的空间构型以及相关的异构体，包括顺式和反式，r和s对映体，非对映异构体，d构型同分异构体，l构型同分异构体，外消旋混合物以及其它相关的混合物。有时，会由取代基(比如烷基等)引入额外的不对称碳原子；本发明同样涵盖这类由于取代基引起的异构体以及相关的混合物。
[0071]
本发明涵盖的同分异构体构成的混合物，其中的同分异构体比例可在多种范围内变化。例如，如果本发明涵盖的混合物中包含有两种异构体，则被本发明涵盖的该两种同分异构体的比例可以为：50：50、60：40、70：30、80：20、90：10、95：5、96：4、97：3、98：2、99：1、或者100：0。在遵循该领域已得到公认的常规技术和规则的基础上，在更复杂的异构体混合物中，本发明也将涵盖其对应的类似异构体比例。
[0072]
本发明同时涵盖立体异构体(如，顺式和反式异构体)和目前已知的所有光学异构
体化合物(如，r和s对映体)，以及外消旋、非对映的和其他类似的同分异构体的混合物。
[0073]
本发现涉及到化合物，在其制备、分离和纯化后，在所得组分中含量不低于95％(高纯度)，该化合物将接着用于本发明所述的后续制剂。在某些具体实例中，本发明所涉及化合物的纯度将大于99％。
[0074]
本发明同样涉及相关化合物的溶剂化物和多晶型物。本发明的化合物的溶剂化物包括,例如，水合物。
[0075]
本发明同时涵盖药学上可接受的酸加成盐，药学上可接受的酸加成盐是指能够保留游离碱的生物有效性而无其它副作用的，与无机酸或有机酸所形成的盐。无机酸盐包括但不限于盐酸盐、氢溴酸盐、硫酸盐、硝酸盐、磷酸盐等；有机酸盐包括但不限于甲酸盐、乙酸盐、2,2-二氯乙酸盐、三氟乙酸盐、丙酸盐、己酸盐、辛酸盐、癸酸盐、十一碳烯酸盐、乙醇酸盐、葡糖酸盐、乳酸盐、癸二酸盐、己二酸盐、戊二酸盐、丙二酸盐、草酸盐、马来酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、酒石酸盐、柠檬酸盐、棕榈酸盐、硬脂酸盐、油酸盐、肉桂酸盐、月桂酸盐、苹果酸盐、谷氨酸盐、焦谷氨酸盐、天冬氨酸盐、苯甲酸盐、甲磺酸盐、苯磺酸盐、对甲苯磺酸盐、海藻酸盐、抗坏血酸盐、水杨酸盐、4-氨基水杨酸盐、萘二磺酸盐等。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
[0076]
本发明同时涵盖药学上可接受的碱加成盐，药学上可接受的碱加成盐是指能够保持游离酸的生物有效性而无其它副作用的、与无机碱或有机碱所形成的盐。衍生自无机碱的盐包括但不限于钠盐、钾盐、锂盐、铵盐、钙盐、镁盐、铁盐、锌盐、铜盐、锰盐、铝盐等。优选的无机盐为铵盐、钠盐、钾盐、钙盐及镁盐。衍生自有机碱的盐包括但不限于以下的盐：伯胺类、仲胺类及叔胺类，被取代的胺类，包括天然的被取代胺类、环状胺类及碱性离子交换树脂，例如氨、异丙胺、三甲胺、二乙胺、三乙胺、三丙胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、二甲基乙醇胺、2-二甲氨基乙醇、2-二乙氨基乙醇、二环己胺、赖氨酸、精氨酸、组氨酸、咖啡因、普鲁卡因、胆碱、甜菜碱、乙二胺、葡萄糖胺、甲基葡萄糖胺、可可碱、嘌呤、哌嗪、哌啶、n-乙基哌啶、聚胺树脂等。优选的有机碱包括异丙胺、二乙胺、乙醇胺、三甲胺、二环己基胺、胆碱及咖啡因。这些盐可通过本专业已知的方法制备。
[0077]
可用的制剂包括适用于口服、舌下、口腔、肠胃外(如皮下、肌内或静脉内)、直肠、局部(包括透皮、鼻内和吸入)给药的制剂。特定患者最合适的给药方式将取决于所治疗的疾病或障碍的性质和严重程度，或所采用的治疗的性质和活性化合物的性质。
[0078]
本发明提供多种二甲双胍或/和其衍生物或/和类似物及具有acly抑制药理活性的有机酸及其类似物组成的新型药物，同时涉及该类化合物在治疗或预防各种疾病或功能障碍方面的应用。同时，本发明的一个值得注意的特征是二甲双胍或/和其衍生物或/和类似物和具有acly抑制药理活性的有机酸及其异构体联合使用后，所产生的独特的协同效应。
[0079]
本发明最大的发明点在于：
[0080]
本发明提供了一种用于预防或治疗代谢疾病或代谢功能障碍疾病的药物，该药物是药物组合物或药物化合物，当该药物是药物化合物时，药物化合物是物质c；当该药物是药物组合物时，药物组合物至少是以下三种物质中的任意两种物质的组合：物质a、物质b、物质c；物质a是二甲双胍、二甲双胍衍生物以及二甲双胍类似物中的一种或多种的组合；物质b是acly抑制剂和/或acly抑制剂类似物；物质c是由物质a以及物质b制备而成的化合物。
[0081]
本发明进一步所采用的二甲双胍和具有acly抑制药理活性的有机酸及其异构体的新型盐，以及包含该新型盐的药物化合物。同时也涉及该新型盐及其相关化合物的制备方法以及该新型盐及其相关化合物在治疗和/或预防各种疾病或功能障碍方面的应用。和二甲双胍成盐的有机酸包括(-)-羟基柠檬酸((-)-hydroxycitric acid)、藤黄内酯(garcinia lactone)、( )-别羟基柠檬酸(( )-allohydroxycitric acid)、木槿内酯(hibiscus lactone)、贝派地酸(bempedoic acid)及其他列于表1的有机酸。
[0082]
本发明进一步提供了伊美格列明和具有acly抑制药理活性的有机酸的新型盐，以及包含该新型盐的药物化合物。同时也涉及该新型盐及其相关化合物的制备方法以及该新型盐及其相关化合物在治疗和/或预防各种疾病或功能障碍方面的应用。和伊美格列明成盐的有机酸包括(-)-羟基柠檬酸((-)-hydroxycitric acid)、藤黄内酯(garcinia lactone)、( )-别羟基柠檬酸(( )-allohydroxycitric acid)、木槿内酯(hibiscus lactone)、贝派地酸(bempedoic acid)及其他列于表1的有机酸。
[0083]
本发明的一个主要特点是新型盐的两个部分所引发的独特的协同效应，即，通过互补机制，具有药理活性的阳离子和具有药理活性的阴离子将会协同作用于同一目标适应症或功能障碍，从而提高药效。
[0084]
可利用本发明所公开的化合物、药物组合物、药物化合物和治疗方法治疗和/或预防的疾病和功能障碍包括糖尿病、糖尿病并发症、血脂异常、他汀类非耐受患者的血脂异常、高血脂、高胆固醇血症、高甘油三酯血症、糖尿病合并血脂异常、肥胖、代谢综合症、前驱糖尿病，心脏疾病、神经退行性疾病以及各种肝脏疾病或功能障碍，如脂肪肝、非酒精性脂肪肝、非酒精性脂肪性肝炎或胆汁淤积性肝病。
[0085]
二甲双胍或/和其衍生物或/和类似物和具有acly抑制药理活性的有机酸或/和其异构体组成的药物化合物或药物组合物。
[0086]
本发明提供了由多种二甲双胍或伊美格列明及具有acly抑制药理活性的有机酸或/和其异构体组成的新型药物化合物或药物组合物，还涉及该类化合物在治疗多种疾病或功能障碍方面的应用。本发明因此展现了一种独特的方法：二甲双胍或伊美格列明及具有acly抑制药理活性的有机酸或/和其异构体的协同组合及应用。
[0087]
不论是以高纯度化合物还是以天然提取物的活性成分存在，(-)-羟基柠檬酸((-)-hydroxycitric acid)、藤黄内酯(garcinia lactone)、( )-别羟基柠檬酸(( )-allohydroxycitric acid)、木槿内酯(hibiscus lactone)、贝派地酸(bempedoic acid)及其他列于表1的有机酸，被证明具有acly抑制药理活性的有机酸及其类似物，可用于治疗和/或预防的疾病和功能障碍。同时，这些有机酸具有一定的抗菌活性，可以疗和/或预防糖尿病引起的感染性疾病，特别是尿路感染。
[0088]
本发明所提及的部分具有acly抑制药理活性的有机酸类化合物及其类似物的存在形式呈单体或提取物的形式。具有acly抑制药理活性的有机酸类化合物单体及其类似物是提取得到的或人工合成的，其来源可以商购，或通过本领域现有技术能够容易地制备和得到它们。
[0089]
具有三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶(acly)抑制药理活性的示例性有机酸及其类似物如表1所示。
[0090]
表1.具有三磷酸腺苷柠檬酸裂解酶(acly)抑制药理活性的示例性有机酸及其类
似物
[0091][0092]
[0093]
[0094][0095][0096]
二甲双胍衍生物或其类似物的示例如表2所示。
[0097]
表2.二甲双胍衍生物或类似物(a型)
[0098]
[0099]
l1和l2分别表示化合键或-nh-c(nh)-。
[0100]
r7为：-nr
7ar7b
，带取代基或不带取代基的烷基，带取代基或不带取代基的杂原子烷基，带取代基或不带取代基的环烷基，带取代基或不带取代基的杂原子环烷基，带取代基或不带取代基的芳基，带取代基或不带取代基的杂原子芳基，其中，当r
7a
和r
7b
在随意位点键连在一起将会形成一个带取代基或不带取代基的杂原子环烷基。
[0101]
r8为：-nr
8ar8b
，带取代基或不带取代基的烷基，带取代基或不带取代基的杂原子烷基，带取代基或不带取代基的环烷基，带取代基或不带取代基的杂原子环烷基，带取代基或不带取代基的芳基，带取代基或不带取代基的杂原子芳基，其中，当r
8a
和r
8b
在随意位点键连在一起将会形成一个带取代基或不带取代基的杂原子环烷基。
[0102]r7a
、r
7b
、r
8a
和r
8b
分别为氢原子，-or
10
，带取代基或不带取代基的杂原子烷基，带取代基或不带取代基的环烷基，带取代基或不带取代基的杂原子环烷基，带取代基或不带取代基的芳基，带取代基或不带取代基的杂原子芳基。
[0103]
r9可以为氢原子或者未被取代的c1-c5烷基。以及，r
10
是氢原子，带取代基或不带取代基的烷基，带取代基或不带取代基的杂原子烷基，带取代基或不带取代基的杂原子烷基，带取代基或不带取代基的环烷基，带取代基或不带取代基的杂原子环烷基，带取代基或不带取代基的芳基，带取代基或不带取代基的杂原子芳基。
[0104][0105][0106]
在某些实施方案中，acly抑制剂或/和其异构体或其药学上可接受的衍生物中的一种或多种的组合，与二甲双胍、二甲双胍衍生物以及二甲双胍类似物中的一种或多种的组合重量比为约10：1至1：200(例如，约9：1至1：200，4：1至1：200，约2：1至1：200，约3：1至1：200，约1：1至1：200，约10：1至1：150，9：1至1：150，约4：1至1：150，约3：1至1：150，约2：1至1：150，约1：1至1：150，约10：1至1：100，9：1至1：100，5：1至1：100，约4：1至1：100，约3：1至1：100，约2：1至1：100，约1：1至1：100，约5：1至1：50，约4：1至1：50，约3：1至1：50，约2：1至1：50，约1：1至1：50，约5：1至1：10，约4：1至1：10，约3：1至1：10，约2：1至1：10，约1：1至1：10)。
[0107]
在某些实施方案中，acly抑制剂或/和acly抑制剂类似物与二甲双胍、二甲双胍衍
生物以及二甲双胍类似物制备的化合物中的一种或多种的组合，与二甲双胍、二甲双胍衍生物以及二甲双胍类似物中的一种或多种的组合，重量比为约5：1至1：20(例如，约4：1至1：20，约2：1至1：20，约3：1至1：20，约1：1至1：20，约5：1至1：15，约4：1至1：15，约3：1至1：15，约2：1至1：15，约1：1至1：15，约5：1至1：10，约4：1至1：10，约3：1至1：10，约2：1至1：10，约1：1至1：10，约5：1至1：5，约4：1至1：5，约3：1至1：5，约2：1至1：5，约1：1至1：5，约5：1至1：1，约4：1至1：1，约3：1至1：1，约2：1至1：1，约1：1至1：1)。
[0108]
在某些实施方案中，为受试者施用一种单位剂型，单位剂型含有约20mg至1000mg(例如，约20mg至750mg，约20mg至500mg，约20mg至300mg，约20mg至250mg，约20mg至200mg，约20mg至150mg，约20mg至100mg，约20mg至75mg，约20mg至50mg，约20mg至25mg，约50mg至1000mg，约50mg至750mg，约50mg至500mg，约50mg至300mg，约50mg至250mg，约50mg至200mg，约50mg至150mg，约50mg至100mg，约50mg至75mg，约100mg至1000mg，约100mg至750mg，约100mg至500mg，约100mg至300mg，约100mg至250mg，约100mg至200mg，约100mg至150mg，约200mg至1000mg，约200mg至750mg，约200mg至500mg，约200mg至300mg，约500mg至1000mg，约500mg至750mg)的acly抑制剂或/和其异构体或其药学上可接受的衍生物中的一种或多种的组合，和约50mg至1000mg(例如，约50mg至750mg，约50mg至500mg，约50mg至300mg，约50mg至250mg，约50mg至200mg，约50mg至150mg，约50mg至100mg，约50mg至75mg，约100mg至1000mg，约100mg至750mg，约100mg至500mg，约100mg至300mg，约100mg至250mg，约100mg至200mg，约100mg至150mg，约200mg至1000mg，约200mg至750mg，约200mg至500mg，约200mg至300mg，约500mg至1000mg，约500mg至750mg)的二甲双胍、二甲双胍衍生物以及二甲双胍类似物中的一种或多种的组合。
[0109]
在某些实施方案中，疾病或功能障碍是一种代谢紊乱，包括糖尿病、糖尿病并发症、脂质代谢异常、肥胖、代谢综合征、前驱糖尿病、脂肪肝。在某些实施方案中，疾病或功能障碍是心脏病。在某些实施方案中，疾病或功能障碍是神经退行性疾病。在某些实施方案中，疾病或功能障碍是癌症。在某些实施方案中，癌症包括乳腺癌、前列腺癌、肺癌、肝细胞癌、胰腺癌、胃癌、结直肠癌、白血病、多发性骨髓瘤、黑色素瘤和胶质母细胞瘤。在某些实施方案中，疾病或功能障碍是肌肉萎缩，包括骨骼肌萎缩。
[0110]
下面的例子是为了解释本发明的实施方式，而不是以任何方式对其进行限制。
[0111]
本发明部分实施例涉及以下化学式的新型的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐：
[0112][0113][0114]
实施例1：化合物1-1的制备
[0115][0116]
化合物1-1制备的一般流程：
[0117][0118]
室温下，将200ml naoh(40.3g，1.0mol，1当量)水溶液，搅拌滴加到400ml盐酸二甲双胍(165.6g，1.0mol，1当量)甲醇-水(4：1)溶液中，再加入800ml丙酮，搅拌30分钟。将无机盐使用滤纸过滤。滤液中搅拌滴加300ml羟基柠檬酸(69.0g，0.33mol，1当量)丙酮-水(5：1)溶液，搅拌10分钟，置于4℃冰箱冷藏过夜。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸二甲双胍(186.5g，0.31mol，95％)。ms esi

：(m/z)，130.1(m h)

；ms esi-：(m/z)，207.1(m-h)-；1h nmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)2.60(q，j＝16hz，2h)，2.95(s，18h)，4.0(s，1h)；
13
c nmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)37.8，43.1，77.1，78.9，158.7，160.3，177.4，179.5，179.7。
[0119]
实施例2：化合物1-2的制备
[0120][0121]
化合物1-2制备的一般流程：
[0122][0123]
室温下，将200ml naoh(40.1g，1.0mol，1当量)水溶液，搅拌滴加到300ml盐酸伊美格列明(191.3g，1.0mol，1当量)甲醇-水(3：1)溶液中溶液中，再加入1000ml氯仿-甲醇(1：2)溶液，搅拌30分钟。将无机盐滤纸过滤。滤液中搅拌滴加300ml羟基柠檬酸(69.1g，0.33mol，1.0当量)丙酮溶液，搅拌10分钟，置于4℃冰箱冷藏过夜。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸伊美格列明(214.5g，0.31mol，97％)。ms esi

：(m/z)，156.1(m h)

；ms esi-：(m/z)，207.1；1h nmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)0.94(d，9h)，1.64(m，3h)，2.64(q，j＝16hz，2h)，2.98(s，18h)，4.1(s，1h)；
13
c nmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)21.3，37.2，39.9，68.3，76.7，78.8，157.5，159.2，177.3，179.5，179.7。
[0124]
实施例3：化合物2-1的制备
[0125][0126]
化合物2-1制备的一般流程：
[0127][0128]
室温下，将盐酸二甲双胍(165.9g，1.0mol，1当量)和naoh(39.8g，1.0mol，1当量)在900ml丙酮和100ml水的混合溶液中，搅拌30分钟，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴加藤黄内酯(95.1g，0.5mol，1当量)的丙酮-水(4：1)溶液300ml，并在室温下搅拌。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得藤黄内酯二甲双胍(206.1g，0.46mol，92％)。ms esi

：(m/z)，130.1(m h)

；ms esi-：(m/z)，189.1(m-h)-；1h nmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)2.64(d，j＝16.4hz，1h)，2.98(s，12h)，3.14(d，j＝16.4hz，1h)，4.8(s，1h)；
13
c nmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)42.1，42.6，81.7，89.1，158.5，160.6，174.7，177.5，179.6。
[0129]
实施例4：化合物2-2的制备
[0130][0131]
化合物2-2制备的一般流程：
[0132][0133]
室温下，将盐酸伊美格列明(191.3g，1.0mol，1当量)和naoh(40.5g，1.0mol，1当量)在200ml氯仿和800ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴加
藤黄内酯(94.7g，0.5mol，1当量)的氯仿-甲醇(1：4)溶液300ml，并在室温下搅拌。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得藤黄内酯伊美格列明(230.1g，0.46mol，92％)。ms esi

：(m/z)，156.1(m h)

；ms esi-：(m/z)，189.1(m-h)-；1h nmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)0.94(d，6h)，1.63(m，2h)，2.65(d，j＝16.3hz，1h)，2.98(s，12h)，3.05(d，j＝16.3hz，1h)，4.8(s，h)；
13
c nmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)21.5，42.1，42.6，69.3，81.7，89.2，158.3，160.4，174.5，177.1，179.3。
[0134]
实施例5：化合物3-1的制备
[0135][0136]
化合物3-1制备的一般流程：
[0137][0138]
室温下，将盐酸二甲双胍(165.3g，1.0mol，1当量)和naoh(40.1g，1.0mol，1当量)在1000ml丙酮和100ml水的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴加木槿内酯(95.2g，0.5mol，1当量)的丙酮溶液300ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得木槿内酯二甲双胍(210.1g，0.47mol，94％)。ms esi

：(m/z)，130.1(m h)

；ms esi-：(m/z)，189.1(m-h)-。1h nmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)2.51(d，j＝17.1hz，1h)，2.97(s，12h)，3.20(d，j＝17.1hz，1h)，5.12(s，1h)；
13
c nmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)42.1，42.5，81.4，89.1，158.5，160.2，174.1，177.3，179.2。
[0139]
实施例6：化合物3-2的制备
[0140][0141]
化合物3-2制备的一般流程：
[0142][0143]
室温下，将将盐酸伊美格列明(191.1g，1.0mol，1当量)和naoh(40.3g，1.0mol，1当量)在400ml氯仿和800ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴加木槿内酯(95.2g，0.5mol，1当量)的甲醇溶液300ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得木槿内酯伊美格列明(230.5g，0.46mol，93％)。ms esi

：(m/z)，156.1(m h)

；ms esi-：(m/z)，189.1(m-h)-。1h nmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)0.93(d，6h)，1.63(m，2h)，2.60(d，j＝17.5hz 1h)，2.95(s，12h)，3.27(d，j＝17.5hz，1h)，5.12(s，1h)；
13
c nmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)21.4，42.2，42.9，69.4，81.4，89.1，158.5，160.3，174.5，177.3，179.1。
[0144]
实施例7：化合物4-1的制备
[0145][0146]
化合物4-1制备的一般流程：
[0147][0148]
室温下，将盐酸二甲双胍(165.1g，1.0mol，1当量)和naoh(40.1g，1.0mol，1当量)在100ml氯仿和1000ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴贝派地酸(172.2g，0.5mol，当量)的丙酮溶液300ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得贝派地酸二甲双胍(277.1g，0.46mol，92％)。ms esi

：(m/z)，130.1(m h)

，ms esi-：(m/z)，343.1(m-h)-；1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ(ppm)1.00(s，12h)，1.28-1.20(m，10h)，1.37-1.28(m，6h)，1.48-1.37(m，4h)，2.92(s，12h)，3.34(m，1h)，8.49-5.31(br，10h)；
13
cnmr(101mhz，dmso-d6)：δ(ppm)24.6，25.1，25.7，29.9，37.0，37.2，40.9，41.5，69.4，158.3，160.0，180.1。
[0149]
实施例8：化合物4-2的制备
[0150][0151]
化合物4-2制备的一般流程：
[0152][0153]
室温下，将盐酸伊美格列明(191.2g，1.0mol，1当量)和naoh(39.7g，1.0mol，1当量)在100ml氯仿和900ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴贝派地酸(171.5g，0.5mol，1当量)的甲醇溶液300ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得贝派地酸伊美格列明(305g，0.47mol，93％)。ms esi

：(m/z)，156.1(m h)

，ms esi-：(m/z)，343.1(m-h)-；1hnmr(400mhz，dmso-d6)：δ(ppm)0.94(d，6h)，1.17(s，12h)，1.34-1.21(m，10h)，1.47-1.34(m，6h)，1.58-1.47(m，4h)，1.68(m，2h)，2.94(s，12h)，3.65-3.49(m，1h)，8.30-5.47(br，10h)；
13
cnmr(101mhz，dmso-d6)：δ(ppm)21.5，24.7，25.0，25.2，29.7，37.0，37.4，40.5，42.1，69.3，71.7，158.5，160.1，180.4。
[0154]
实施例9：化合物5-1的制备
[0155][0156]
化合物5-1制备的一般流程：
[0157][0158]
室温下，向300ml(-)-羟基柠檬酸(103.2g，0.5mol，1当量)丙酮溶液中，边搅拌，边
滴加100ml 0.28克/毫升的koh(28.0g，0.5mol，1当量)水溶液。将盐酸二甲双胍(165.2g，1.0mol，1当量)和naoh(40.1g，1.0mol，1当量)在1000ml丙酮中搅拌，滴加甲醇400ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加制备的400ml(-)-羟基柠檬酸一钾丙酮水溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍(227.1g，0.45mol，90％)。ms esi

：(m/z)，130.1(m h)

，ms esi-：(m/z)，207.1(m-h)-，如图1以及图2；1hnmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)2.64(q，j＝16hz，2h)，2.98(s，12h)，4.1(s，1h)，如图3；
13
cnmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)37.4，42.6，76.7，78.1，158.5，160.6，177.3，179.5，179.6，如图4。
[0159]
实施例10：化合物5-2的制备
[0160][0161]
化合物5-2制备的一般流程：
[0162][0163]
室温下，向300ml(-)-羟基柠檬酸(101.2g，0.5mol，1当量)丙酮溶液中，边搅拌，边滴加100ml 0.28克/毫升的koh(28.0g，0.5mol，1当量)水溶液。将盐酸伊美格列明(192.1g，1.0mol，1当量)和naoh(40.3g，1.0mol，1.0当量)在1000ml丙酮中搅拌，滴加甲醇373ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加制备的400ml羟基柠檬酸一钾丙酮：水(3：1)溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明(241.1g，0.43mol，86％)。ms esi

：(m/z)，156.1(m h)

；ms esi-：(m/z)，207.1；1hnmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)0.94(d，6h)，1.69(m，2h)，2.64(q，j＝16hz，2h)，2.98(s，12h)，4.1(s，1h)；
13
cnmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)21.5，37.4，43.6，69.3，76.7，78.1，158.5，160.6，177.3，179.5，179.6。
[0164]
实施例11：化合物6-1的制备
[0165][0166]
化合物6-1制备的一般流程：
[0167][0168]
室温下，向1000ml( )-别羟基柠檬酸(206.3g，1.0mol，1当量)75％乙醇溶液中，
[0169]
边搅拌，边加入ca(oh)2(74.2g，1.0mol，1当量)。将盐酸二甲双胍(165.2g，
1.0mol，1当量)和naoh(41.2g，1.0mol，1当量)在500ml丙酮中搅拌，滴加甲醇400ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加制备的( )-别羟基柠檬酸钙75％乙醇溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍(349.2g，0.93mol，93％)。ms esi

：
[0170]
(m/z)，130.1(m h)

，ms esi-：(m/z)，207.1(m-h)-；1hnmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)2.62(q，j＝16.0hz，2h)，2.93(s，6h)，4.11(s，1h)；
13
cnmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)37.4，43.1，76.9，78.5，158.5，160.2，177.3，179.6，179.7。
[0171]
实施例12：化合物6-2的制备
[0172][0173]
化合物6-2制备的一般流程：
[0174][0175]
室温下，向1000ml( )-别羟基柠檬酸(203.1g，1.0mol，1当量)75％乙醇溶液中，边搅拌，边加ca(oh)2(74g，1.0mol，1当量)。将盐酸伊美格列明(192.1g，1.0mol，1当量)和naoh(40.1g，1.0mol，1.0当量)在500ml丙酮中搅拌，滴加甲醇320ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加制备的( )-别羟基柠檬酸钙75％乙醇溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明(348.9g，0.87mol，87％)。ms esi

：(m/z)，156.1(m h)

，ms esi-：(m/z)，207.1；1hnmr(400mhz，d2o)：δ(ppm)0.94(d，3h)，1.69(m，1h)，2.64(q，j＝16hz，2h)，2.97(s，6h)，4.3(s，1h)；
13
cnmr(101mhz，d2o)：δ(ppm)21.5，37.8，43.1，69.3，77.0，78.7，158.6，160.3，177.4，179.7，179.8。
[0176]
实施例13：化合物1-1的制备(本实施例与实施例1的制备方法不同)
[0177]
室温下，将盐酸二甲双胍(16.5g，0.1mol，1当量)和naoh(4.1g，0.1mol，1当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇40ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加20ml羟基柠檬酸(6.8g，0.033mol，1当量)丙酮溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸二甲双胍(18.1g，0.030mol，91％)。
[0178]
实施例14：化合物1-2的制备(本实施例与实施例2的制备方法不同)
[0179]
室温下，将盐酸伊美格列明(19.2g，0.1mol，1当量)和naoh(4.0g，0.1mol，1.0当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇37ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加20ml羟基柠檬酸(6.8g，0.033mol，1当量)丙酮溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸伊美格列明(19.6g，0.029mol，88％)。
[0180]
实施例15：化合物2-1的制备(本实施例与实施例3的制备方法不同)
[0181]
室温下，将盐酸二甲双胍(16.3g，0.1mol，1当量)和naoh(4.1g，0.1mol，1当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇30ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加20ml藤黄内酯(9.5g，0.05mol，1当量)丙酮溶液，搅拌10分钟。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得藤黄内酯二甲双胍(21.0g，0.047mol，94％)。
[0182]
实施例16：化合物2-2的制备(本实施例与实施例4的制备方法不同)
[0183]
室温下，将盐酸伊美格列明(19.2g，0.1mol，1当量)和naoh(4.1g，0.1mol，1当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇38ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加20ml藤黄内酯(9.5g，0.05mol，1当量)丙酮溶液，搅拌10分钟。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得藤黄内酯伊美格列明(24.5g，0.049mol，98％)。
[0184]
实施例17：化合物3-1的制备(本实施例与实施例5的制备方法不同)
[0185]
室温下，将盐酸二甲双胍(16.2g，0.1mol，1当量)和naoh(3.9g，0.1mol，1当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇30ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加木槿内酯(9.5g，0.05mol，1当量)丙酮溶液30ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得木槿内酯二甲双胍(20.7g，0.046mol，91％)。
[0186]
实施例18：化合物3-2的制备(本实施例与实施例6的制备方法不同)
[0187]
室温下，将盐酸伊美格列明(19.2g，0.1mol，1当量)和naoh(4.1g，0.1mol，1当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇38ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加20ml木槿内酯(9.5g，0.05mol，1当量)丙酮溶液，搅拌10分钟。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得木槿内酯伊美格列明(23.1g，0.046mol，93％)。
[0188]
实施例19：化合物4-1的制备(本实施例与实施例7的制备方法不同)
[0189]
室温下，将盐酸二甲双胍(16.4g，0.1mol，1当量)和naoh(4.0g，0.1mol，1当量)在50ml氯仿和50ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴贝派地酸(17.2g，0.05mol，1当量)的丙酮溶液30ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得贝派地酸二甲双胍(28.3g，0.047mol，94％)。
[0190]
实施例20：化合物4-2的制备(本实施例与实施例8的制备方法不同)
[0191]
室温下，将盐酸伊美格列明(19.2g，0.1mol，1当量)和naoh(4.0g，0.1mol，1当量)在50ml氯仿和50ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴贝派地酸(17.0g，0.05mol，1当量)的丙酮溶液30ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得贝派地酸伊美格列明(30.1g，0.047mol，93％)。
[0192]
实施例21：羟基柠檬酸：二甲双胍：伊美格列明＝3：1：2的化合物制备
[0193]
室温下，将盐酸二甲双胍(5.3g，0.033mol，1当量)、盐酸伊美格列明(12.8g，0.066mol，1当量)和naoh(4.1g，0.1mol，1当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇45ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加20ml羟基柠檬酸(6.8g，0.033mol，1当量)丙酮溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体为羟基柠檬酸：二甲双胍：伊美格列明＝3：1：2的化合物(19.4g，91％)。
[0194]
实施例22：藤黄内酯：二甲双胍：伊美格列明＝2：1：1的化合物制备
[0195]
室温下，将将盐酸二甲双胍(8.3g，0.05mol，1当量)、盐酸伊美格列明(9.5g，0.05mol，1当量)和naoh(4.1g，0.1mol，1当量)在100ml丙酮中搅拌，滴加甲醇45ml，随后过滤无机盐。向滤液中滴加20ml藤黄内酯(9.5g，0.05mol，1当量)丙酮溶液，搅拌10分钟。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得藤黄内酯：二甲双胍：伊美格列明＝2：1：1的化合物(21.9g，92％)。
[0196]
实施例23：化合物1-1的制备(本实施例与实施例1的制备方法不同)
[0197]
室温下，将10mlnaoh(4.0g，0.1mol，1当量)水溶液，搅拌滴加到20ml盐酸二甲双胍
(16.6g，0.1mol，1当量)水溶液中，再加入150ml二氯甲烷，搅拌30分钟。使用分液漏斗，弃去水层。二氯甲烷层中搅拌滴加50ml羟基柠檬酸(6.9g，0.033mol，1当量)二氯甲烷溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸二甲双胍(18.1g，0.030mol，91％)。
[0198]
实施例24：化合物1-2的制备(本实施例与实施例2的制备方法不同)
[0199]
室温下，将10mlnaoh(4.1g，0.1mol，1当量)水溶液，搅拌滴加到20ml盐酸伊美格列明(19.2g，0.1mol，1当量)水溶液中，再加入150ml二氯甲烷，搅拌30分钟。使用分液漏斗，弃去水层。二氯甲烷层中搅拌滴加50ml羟基柠檬酸(6.9g，0.033mol，1当量)二氯甲烷溶液，搅拌10分钟。过滤、干燥得到白色晶体(-)-羟基柠檬酸伊美格列明(19.6g，0.029mol，88％)。
[0200]
实施例25：化合物2-1的制备(本实施例与实施例3的制备方法不同)
[0201]
室温下，将10mlnaoh(4.0g，0.1mol，1当量)水溶液，搅拌滴加到20ml盐酸二甲双胍(16.6g，0.1mol，1当量)水溶液中，再加入150ml二氯甲烷，搅拌30分钟。使用分液漏斗，弃去水层。二氯甲烷层中搅拌滴加50ml藤黄内酯(9.5g，0.05mol，1当量)二氯甲烷溶液，搅拌10分钟。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得藤黄内酯二甲双胍(21.0g，0.047mol，94％)。
[0202]
实施例26：化合物2-2的制备(本实施例与实施例4的制备方法不同)
[0203]
室温下，将盐酸伊美格列明(19.2g，0.1mol，1当量)和naoh(4.0g，0.1mol，1当量)在50ml氯仿和50ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴加藤黄内酯(9.5g，0.05mol，1当量)的氯仿-甲醇(2：1)溶液30ml，并在室温下搅拌。过滤，将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得藤黄内酯伊美格列明(24.5g，0.49mol，98％)。
[0204]
实施例27：化合物3-1的制备(本实施例与实施例5的制备方法不同)
[0205]
室温下，将盐酸二甲双胍(16.6g，0.1mol，1当量)和naoh(4.0g，0.1mol，1当量)在50ml氯仿和50ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴加木槿内酯(9.5g，0.05mol，1当量)的丙酮溶液30ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得木槿内酯二甲双胍(20.6g，0.046mol，92％)。
[0206]
实施例28：化合物3-2的制备(本实施例与实施例6的制备方法不同)
[0207]
室温下，将将盐酸伊美格列明(19.2g，0.1mol，1当量)和naoh(4.0g，0.1mol，1当量)在60ml氯仿和50ml甲醇的混合溶液中搅拌，并随后将所得无机盐过滤。向滤液中滴加木槿内酯(9.5g，0.05mol，1当量)的丙酮溶液30ml，并在室温下搅拌。将所得晶体过滤并在热空气中干燥，由此获得木槿内酯伊美格列明(23.6g，0.047mol，93％)。
[0208]
实施例29：二甲双胍羧酸盐与盐酸盐和伊美格列明羧酸盐与盐酸盐熔点的比较
[0209]
测量实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐的熔点。
[0210]
表3.二甲双胍羧酸盐与盐酸盐和伊美格列明羧酸盐与盐酸盐熔点测定
[0211]
[0212][0213]
实施例30：二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐和盐酸盐的核磁共振分析
[0214]
(1h-nmr，
13
c-nmr)在400mhz下，测量实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐的1h、
13
c-核磁共振谱。且各自信号的数据显示在下表4中。在本文中，将氘取代的水(d2o)或氘取代的二甲亚砜(dmso-d6)用作核磁共振分析中的溶剂。
[0215]
表4.二甲双胍羧酸盐与盐酸盐和伊美格列明羧酸盐与盐酸盐核磁共振测定
[0216]
[0217]
[0218]
[0219][0220]
实施例31：二甲双胍和伊美格列明的羧酸盐及盐酸盐溶解度测试
[0221]
测量实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐的饱和溶解度和饱和ph。
[0222]
将实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐在水中的溶解度比较：
[0223]
将水浴温度设定为25℃，100mlerlenmeyer烧瓶中加入10ml水，向其中分别加入5.0g实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐。将erlenmeyer烧瓶固定在水浴的支架上，随后在25℃下将该装置以每分钟搅拌30次的速度进行操作。每隔24小时取出样品并进行过滤，随后使用紫外光谱仪(λ＝240nm)通过定量分析计算它们的浓度。上述的实验过程持续进行3天，待紫外光谱仪定量分析计算的浓度达到稳定，得到在25℃下的饱和溶解度，ph计测试饱和溶液的ph值，如下表5中所示。
[0224]
表5.二甲双胍羧酸盐与盐酸盐和伊美格列明羧酸盐与盐酸盐饱和溶解度和饱和ph测定
[0225]
[0226][0227]
如表5所示，表明二甲双胍羧酸盐溶解度低于盐酸盐的溶解度，伊美格列明羧酸盐溶解度低于盐酸盐的溶解度。因此，由于在制备二甲双胍或伊美格列明控释片剂中通过使用更少的聚合物赋形剂能够实现期望的释放速率，因此甲双胍或伊美格列明羧酸盐较盐酸盐在制剂方面具有益处。
[0228]
实施例32：二甲双胍和伊美格列明的羧酸盐及盐酸盐引湿性的测试
[0229]
实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐的引湿性进行比较：
[0230]
参考《药物引湿性指导原则》(中国药典2020年版四部9103)进行试验：
[0231]
实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐在40℃下分别干燥24小时后进行称量，干燥直到各物质重量达到恒定量。将氯化铵饱和溶液充入干燥器底部，并将内部湿度设置为80％，将干燥器所在空间的温度保持在25℃。分别精确取100mg实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐，并且它们的重量与容器一同进行测量。将实施例1-12中分别合成的二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐、二甲双胍和伊美格列明盐酸盐与容器一同置于干燥器中，并在24小时、54小时、84小时和120小时时，与容器一同取出，称量它们的重量，通过增加的重量计算吸收的水分。
[0232]
计算方式为：
[0233]
取干燥的具塞玻璃称量瓶(外径为50mm，高为15mm)于前一天置于25℃的恒温干燥器(下部放置氯化铵饱和溶液，设定温度为25℃，相对湿度为80％)内，精密称重(m1)。取干燥供试品100mg，置上述称量瓶中并平铺于称量瓶内，供试品厚度约为1mm，精密称重(m2)。将称量瓶敞口，并与瓶盖同置于上述恒温恒湿条件下24小时、54小时、84小时和120小时时，盖好称量瓶盖子，精密称重(m3)。
[0234]
增重百分率＝(m
3-m2)/(m
2-m1)
×
100％
[0235]
引湿性示于下表6中。
[0236]
表6.二甲双胍羧酸盐与盐酸盐和伊美格列明羧酸盐与盐酸盐引湿性(％)测定
[0237][0238]
如表6所示，二甲双胍和伊美格列明羧酸盐的引湿性低于二甲双胍和伊美格列明盐酸盐的引湿性。由于二甲双胍和伊美格列明盐酸盐具有高引湿性，容易形成聚集体，二甲双胍和伊美格列明羧酸盐能够大大降低其在制剂前改变的可能性。相较于二甲双胍和伊美格列明的盐酸盐，二甲双胍和伊美格列明的羧酸盐的更利于保存和制剂。
[0239]
实施例33：二甲双胍和伊美格列明的羧酸盐质谱仪的定性分析
[0240]
使用质谱仪(q-exactive plus hrms(thermo scientific，ma，usa))分析实施例1-12中分别合成的化学式1的化合物，且分析数据如下：
[0241]
(-)-羟基柠檬酸二甲双胍：ms esi

，具有m/z＝130.1[m h]

(其是对应于二甲双胍游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝207.1[m-h]-(其是对应于(-)-羟基柠檬酸游离酸质量的分子量)。
[0242]
(-)-羟基柠檬酸伊美格列明：ms esi

，具有m/z＝156.1[m h]

(其是对应于伊美格列明游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝207.2[m-h]-(其是对应于(-)-羟基柠檬酸游离酸质量的分子量)。
[0243]
藤黄内酯二甲双胍：ms esi

，具有m/z＝130.1[m h]

(其是对应于二甲双胍游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝189.1[m-h]-(其是对应于藤黄内酯游离酸质量的分子量)。
[0244]
藤黄内酯伊美格列明：ms esi

，具有m/z＝156.1[m h]

(其是对应于伊美格列明游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝189.1[m-h]-(其是对应于藤黄内酯游离酸质量的分子量)。
[0245]
(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍：ms esi

，具有m/z＝130.1[m h]

(其是对应于二甲
双胍游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝207.1[m-h]-(其是对应于(-)-羟基柠檬酸游离酸质量的分子量)。
[0246]
(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明：ms esi

，具有m/z＝156.1[m h]

(其是对应于伊美格列明游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝207.2[m-h]-(其是对应于(-)-羟基柠檬酸游离酸质量的分子量)。
[0247]
( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍：ms esi

，具有m/z＝130.1[m h]

(其是对应于二甲双胍游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝207.1[m-h]-(其是对应于(-)-羟基柠檬酸游离酸质量的分子量)。
[0248]
( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明：ms esi

，具有m/z＝156.1[m h]

(其是对应于伊美格列明游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝207.2[m-h]-(其是对应于(-)-羟基柠檬酸游离酸质量的分子量)。
[0249]
木槿内酯二甲双胍：ms esi

，具有m/z＝130.1[m h]

(其是对应于二甲双胍游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝189.1[m-h]-(其是对应于木槿内酯游离酸质量的分子量)。
[0250]
木槿内酯伊美格列明：ms esi

，具有m/z＝156.1[m h]

(其是对应于伊美格列明游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝189.1[m-h]-(其是对应于木槿内酯游离酸质量的分子量)。
[0251]
贝派地酸二甲双胍：ms esi

，具有m/z＝130.1[m h]

(其是对应于二甲双胍游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝343.1[m-h]-(其是对应于贝派地酸游离酸质量的分子量)。
[0252]
贝派地酸伊美格列明：ms esi

，具有m/z＝156.1[m h]

(其是对应于伊美格列明游离碱质量的分子量)；ms esi-，具有m/z＝343.1[m-h]-(其是对应于贝派地酸游离酸质量的分子量)。
[0253]
实施例34：二甲双胍和伊美格列明的羧酸盐化合物的hplc测定
[0254]
化学式1的化合物结构式，确定合成化合物的理论摩尔数与面积比，通过hplc的面积对比分析羧酸盐中二甲双胍或伊美格列明游离碱的量和盐酸盐中二甲双胍或伊美格列明游离碱的量。将盐酸二甲双胍和盐酸伊美格列明分别配置为浓度1.0mol/l、2.0mol/l和3.0mol/l的溶液，将实施例1-12中制备的化合物别配置为浓度1.0mol/l的溶液，通过hplc测定，比较制备的化合物与相应盐酸盐的峰面积。结果说明，(-)-羟基柠檬酸二甲双胍具有1：3的组成，(-)-羟基柠檬酸伊美格列明具有1：3的组成，藤黄内酯二甲双胍具有1：2的组成，藤黄内酯伊美格列明具有1：2的组成，木槿内酯二甲双胍具有1：2的组成，木槿内酯伊美格列明具有1：2的组成，贝派地酸二甲双胍具有1：2的组成，贝派地酸伊美格列明具有1：2的组成。
[0255]
表7.二甲双胍和伊美格列明的羧酸盐化合物的hplc测定
[0256][0257]
实施例35：体外抗菌试验
[0258]
试验用真菌和细菌：
[0259]
花药黑粉菌(microbotryumviolaceum)、壳针孢叶枯病菌(septoriatritici)、大肠杆菌(escherichiacoli)、巨大芽孢杆菌(bacillusmegaterium)。
[0260]
实验用药：
[0261]
阳性对照药：青霉素(penicillin)、链霉素(streptomycin)、酮康唑(ketoconazole)；
[0262]
阴性对照品：丙酮(acetone)；
[0263]
化合物：(-)-羟基柠檬酸二甲双胍、(-)-羟基柠檬酸伊美格列明、藤黄内酯二甲双胍、藤黄内酯伊美格列明、木槿内酯二甲双胍、木槿内酯伊美格列明、贝派地酸二甲双胍、贝派地酸伊美格列明、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍、(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明、( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍和( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明由实施例1-12制备。
[0264]
实验方法：
[0265]
配制药物溶液：将青霉素、链霉素、酮康唑、盐酸二甲双胍、盐酸伊美格列明、(-)-羟基柠檬酸二甲双胍、(-)-羟基柠檬酸伊美格列明、藤黄内酯二甲双胍、藤黄内酯伊美格列明、木槿内酯二甲双胍、木槿内酯伊美格列明、贝派地酸二甲双胍、贝派地酸伊美格列明、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍、(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明、( )-别羟基柠檬酸钙二
甲双胍和( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明分别用丙酮配制成浓度为2mg/ml的溶液，单次测试用量25μl。
[0266]
将上述2种真菌和2种细菌按无菌操作的要求分别用7ml灭菌水配制成菌液，各用喷雾器取4ml菌液，分别均匀喷洒于各自培养皿的培养基表面，再在每个培养皿内分别放置直径约1cm灭菌滤纸两块，覆盖于培养基表面，然后分别取上述配制的药液25μl滴于滤纸上，盖上培养基盖子进行培养。各培养皿盖子上均注明相应培养基种类、菌种、化合物名称、接种时间。花药黑粉菌室温培养96小时天，壳针孢叶枯病菌24℃培养96小时，大肠杆菌37℃培养24小时，巨大芽孢杆菌37℃培养24小时。按时观察结果，测量抑菌圈的大小(半径)，平行试验3次，结果见表8。
[0267]
表8.琼脂扩散实验活性筛选(mm)
[0268][0269][0270]
由表8可见，相较于盐酸二甲双胍和盐酸伊美格列明，本发明实施例合成的二甲双胍和伊美格列明羧酸盐，具有一定的抗菌活性。尤其是(-)-羟基柠檬酸二甲双胍、(-)-羟基柠檬酸伊美格列明、藤黄内酯二甲双胍、藤黄内酯伊美格列明。藤黄内酯二甲双胍和藤黄内酯伊美格列明对大肠杆菌均有显著的抑制作用；(-)-羟基柠檬酸二甲双胍对巨大芽孢杆菌
有抑制作用。因此，本发明化合物相较于降低血糖药物盐酸二甲双胍和盐酸伊美格列明，具有一定的预防微生物感染的活性。可用于制备预防和治疗由糖尿病引起感染的药物，尤其是预防和治疗由糖尿病引起尿路感染的药物。
[0271]
实施例36：大鼠体内药代动力学评价
[0272]
在sprague-dawley大鼠中测定了(-)-羟基柠檬酸二甲双胍(通过在实施例1中化合物1-1制备程序制备)的单一剂量口服药代动力学参数和(-)-羟基柠檬酸单一剂量口服药代动力学参数、盐酸二甲双胍的单一剂量口服药代动力学参数；测定了(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍(通过在实施例9中化合物5-1制备程序制备)的单一剂量口服药代动力学参数和(-)-羟基柠檬酸一钾单一剂量口服药代动力学参数、盐酸二甲双胍的单一剂量口服药代动力学参数。18只雄性sd大鼠，7-8周龄，体重约200g，分成6组，每组3只(大鼠编号：(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组为1-3；(-)-羟基柠檬酸一钾组为4-6；盐酸二甲双胍组一为7-9；(-)-羟基柠檬酸二甲双胍组为10-12；(-)-羟基柠檬酸组为13-15；盐酸二甲双胍组二为16-18。单次口服灌胃给予100mg/kg剂量的(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍于(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组，单次口服灌胃先给予49mg/kg剂量的(-)-羟基柠檬酸一钾于(-)-羟基柠檬酸一钾组，给予65mg/kg剂量的盐酸二甲双胍于盐酸二甲双胍组一，检测其在大鼠中的药代动力学。单次口服灌胃给予100mg/kg剂量的(-)-羟基柠檬酸二甲双胍于(-)-羟基柠檬酸二甲双胍组，单次口服灌胃先给予35mg/kg剂量的(-)-羟基柠檬酸于(-)-羟基柠檬酸组，给予83mg/kg剂量的盐酸二甲双胍于盐酸二甲双胍组二，检测其在大鼠中的药代动力学。
[0273]
1-3号sd大鼠分别经口强饲给予作为在1.0％羧甲基纤维素中的水溶液的(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍，4-6号sd大鼠分别经口强饲先给予作为在1.0％羧甲基纤维素中的水溶液的(-)-羟基柠檬酸一钾，7-9号sd大鼠分别经口强饲给予作为在1.0％羧甲基纤维素中的水溶液的盐酸二甲双胍。10-12号sd大鼠分别经口强饲给予作为在1.0％羧甲基纤维素中的水溶液的(-)-羟基柠檬酸二甲双胍，13-15号sd大鼠分别经口强饲先给予作为在1.0％羧甲基纤维素中的水溶液的(-)-羟基柠檬酸，16-18号sd大鼠分别经口强饲给予在1.0％羧甲基纤维素中的水溶液的盐酸二甲双胍。
[0274]
大鼠采用标准饲料饲养，给予水。试验前10小时开始禁食，自由饮水。药物用1.0％羧甲基纤维素溶解。眼眶采血，采血的时间点为给药后0.25、0.5、1.2、2.0、4.0、8.0、12和24hr。眼眶采集120ul血样于试管。试管内有10ul1％肝素盐溶液，使用前，试管于60℃烘干过夜。在随后一个时间点血样采集完成之后，大鼠二氧化碳窒息处死。
[0275]
血样采集后，立即温和地颠倒试管至少5次，保证混合充分后放置于冰上。血样在4℃，5000rpm离心10分钟。用移液器吸出25ul血浆到干净的塑料离心管中，表明化合物的名称和时间点。血浆在进行分析前保存在-70℃。
[0276]
结果如表9所示：化合物(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍和(-)-羟基柠檬酸一钾加盐酸二甲双胍在大鼠中的药代动力学数据；化合物(-)-羟基柠檬酸二甲双胍和(-)-羟基柠檬酸加盐酸二甲双胍在大鼠中的药代动力学数据。采用das非房室模型计算药代动力学参数。
[0277]
表9.化合物1-1和化合物5-1在大鼠中的药代动力学数据
[0278][0279][0280]
*表9中所示的经计算的药代动力学参数为分别得自各组3只大鼠的平均值
[0281]
由表9可见，二甲双胍的羧酸盐及其羧酸金属盐，在大鼠体内具有更好的生物利用度和药代动力学性质。
[0282]
实施例37.二甲双胍、伊美格列明、以及其与acly抑制剂的组合在小鼠胰岛β细胞损伤模型体内的药效研究
[0283]
目的：评价本发明二甲双胍和伊美格列明与acly抑制剂化合物对小鼠胰岛β细胞损伤模型的药效。
[0284]
测试体系：雄性icr小鼠，小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司，购买时5周龄，适应性饲养一周。
[0285]
测试分组：组1-1，盐酸二甲双胍组；组1-2，盐酸伊美格列明组；组1-3，(-)-羟基柠檬酸钙组；组1-4，(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组；组1-5，(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组；组1-6，( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍组；组1-7，( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组；组1-8，藤黄内酯二甲双胍组；组1-9，藤黄内酯伊美格列明组；组1-10，木槿内酯二甲双胍组；组1-11，木槿内酯伊美格列明组；组1-12，模型对照组；组1-13，正常对照组；如下表：
[0286]
表10.小鼠测试分组
[0287][0288][0289]
测试方法：
[0290]
1)8只小鼠腹腔注射等剂量溶剂并且饲喂正常鼠饲料作为正常对照组(组1-13)；
[0291]
2)130只小鼠禁食12小时后，150mg/kg剂量一次性腹腔注射链脲霉素(streptozocin，stz)，72小时后选取血糖值为15-28mmol/l的小鼠无差异分组纳入实验，随机分为12组(组1-1到组1-12)，每组8只；
[0292]
3)每组小鼠每日灌胃给予相应的药物或溶剂：
[0293]
盐酸二甲双胍组每日灌胃给予盐酸二甲双胍200mg/kg、盐酸伊美格列明组每日灌胃给予盐酸伊美格列明200mg/kg、(-)-羟基柠檬酸钙组每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸钙200mg/kg、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍(实施例9，化合物5-1)200mg/kg、(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明(实施例10，化合物5-2)200mg/kg、( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍组每日灌胃给予( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍(实施例11，化合物6-1)200mg/kg、( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组每日灌胃给予( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明(实施例12，化合物6-2)200mg/kg、藤黄内酯二甲双胍组每日灌胃给予藤黄内酯二甲双胍(实施例3，化合物2-1)200mg/kg、藤黄内酯伊美格列明组每日灌胃给予藤黄内酯伊美格列明(实施例4，化合物2-2)200mg/kg、木槿内酯二甲双胍组每日灌胃给予木槿内酯二甲双胍(实施例5，化合物3-1)200mg/kg、木槿内酯伊美格列明组每日灌胃给予木槿内酯伊美格列明(实施例6，化合物3-2)200mg/kg、模型对照组每日灌胃给予1％羧甲基纤维素钠溶液、正常对照组每日灌胃给予1％羧甲基纤维素钠溶液。
[0294]
4)给药第14天，将所有小鼠禁食6小时后自由饮食1小时，进行末次给药，末次给药0.3小时后剪尾测定血糖值。采用血糖仪(accu-chek active，roche)检测各组小鼠血糖浓度，采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。
[0295]
5)血糖测试试验完成之后，二氧化碳窒息处死小鼠并收集胰腺、肝脏、肾脏和脂肪进行组织病理学分析。
[0296]
测试结果：表11和图5表示每天灌胃给药两周后，小鼠的血糖值。图5中，#p《0.05组1-1vs.组1-8，or组1-8vs.组1-10；##p《0.01组1-4vs.组1-6，or组1-5vs.组1-7，or组1-9vs.组1-11。
[0297]
表11.各组小鼠平均血糖值(n＝8)
[0298][0299]
#
p《0.05组1-1vs.组1-8，or组1-8vs.组1-10；
##
p《0.01组1-4vs.组1-6，or组1-5vs.组1-7，or组1-9vs.组1-11。
[0300]
测试结果讨论：
[0301]
第14天餐后血糖，( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍组(组1-6)显著低于(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组1-4)(p《0.01)、( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组(组1-7)显著低于(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组1-5)(p《0.01)、木槿内酯伊美格列明组(组1-11)显著低于藤黄内酯伊美格列明组(组1-9)(p《0.01)、木槿内酯二甲双胍组(组1-10)显著低于藤黄内酯二甲双胍组(组1-8)(p《0.05)。这些测试结果提示，在降餐后血糖作用上，( )-别羟基柠檬酸的双胍类盐优于(-)-羟基柠檬酸的双胍类盐，木槿内酯的双胍类盐优于藤黄内酯的双胍类盐。
[0302]
第14天餐后血糖，( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍组(组1-6)和木槿内酯二甲双胍组(组1-10)显著低于盐酸二甲双胍组(组1-1)(p《0.01)，藤黄内酯二甲双胍组(组1-8)显著
低于盐酸二甲双胍组(组1-1)(p《0.05)。这些测试结果提示，在降餐后血糖作用上，( )-别羟基柠檬酸钙二甲双胍、木槿内酯二甲双胍和藤黄内酯二甲双胍优于盐酸二甲双胍。
[0303]
第14天餐后血糖，( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组(组1-7)和木槿内酯伊美格列明组(组1-11)显著低于盐酸伊美格列明组(组1-2)(p《0.01)。这些测试结果提示，在降餐后血糖作用上，( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明和木槿内酯伊美格列明组优于盐酸伊美格列明。
[0304]
第14天血糖，(-)-羟基柠檬酸钙组(组1-3)和模型对照组(组1-12)无统计学差别。这些测试结果提示，在降血糖作用上，单独使用(-)-羟基柠檬酸、藤黄内酯无显著降低血糖作用。
[0305]
实施例37：二甲双胍羧酸盐与盐酸盐和伊美格列明羧酸盐与盐酸盐对高脂饮食联合链脲霉素诱导糖尿病小鼠模型体内的药效研究
[0306]
实验内容：二甲双胍羧酸盐与盐酸盐和伊美格列明羧酸盐与盐酸盐对高脂饮食联合链脲霉素诱导糖尿病小鼠模型体内的药效比较测试。
[0307]
目的：评价本发明二甲双胍羧酸盐和伊美格列明羧酸盐的降血糖和降高脂血症作用。
[0308]
测试体系：雄性nih小鼠，小鼠购于北京维通利华实验动物技术有限公司，购买时4周龄，适应性饲养一周。
[0309]
测试分组：组2-1，盐酸二甲双胍组；组2-2，盐酸伊美格列明组；组2-3，(-)-羟基柠檬酸一钾；组2-4，(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组；组2-5，(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组；组2-6，藤黄内酯组；组2-7，藤黄内酯二甲双胍组；组2-8，藤黄内酯伊美格列明组；组2-9，贝派地酸组；组2-10，贝派地酸二甲双胍组；组2-11，( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组；组2-12，木槿内酯二甲双胍组；组2-13，模型对照组；组2-14，正常对照组；测试分组如下表：
[0310]
表12.小鼠测试分组
[0311]
[0312][0313]
测试方法：
[0314]
1)9只小鼠腹腔注射等剂量溶剂(生理盐水)并且饲喂正常鼠饲料作为正常对照组(组2-14)；
[0315]
2)160只小鼠腹腔注射链脲霉素(streptozocin，stz)50mg/kg并且给予高脂饮食(脂肪热量含量40％)一周，建立ii型糖尿病小鼠模型。从小鼠静脉取少量血进行血糖测试，选择并分离其中108只空腹血糖大于15.0mmol/l小鼠模型中被纳入实验，随机分为13组(组2-1到组2-13)(每组9只)；
[0316]
3)组2-1到组2-13每组小鼠每日灌胃给予相应的药物或溶剂：盐酸二甲双胍组每日灌胃给予盐酸二甲双胍300mg/kg、盐酸伊美格列明组每日灌胃给予盐酸伊美格列明300mg/kg、(-)-羟基柠檬酸一钾每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾300mg/kg、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍(实施例9，化合物5-1)300mg/kg、(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明(实施例10，化合物5-2)300mg/kg、藤黄内酯组每日灌胃给予藤黄内酯300mg/kg、藤黄内酯二甲双胍组每日灌胃给予藤黄内酯二甲双胍(实施例3，化合物2-1)300mg/kg、藤黄内酯伊美格列明组每日灌胃给予藤黄内酯伊美格列明(实施例4，化合物2-2)300mg/kg、贝派地酸组每日灌胃给予贝派地酸50mg/kg、贝派地酸二甲双胍组每日灌胃给予贝派地酸二甲双胍(实施例7，化合物4-1)50mg/kg 盐酸二甲双胍250mg/kg、( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组每日灌胃给予( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明(实施例12，化合物6-2)300mg/kg、木槿内酯二甲双胍组每日灌胃给予木槿内酯二甲双胍(实施例5，化合物3-1)300mg/kg、模型对照组每日灌胃给予1％羧甲基纤维素钠溶液。持续3周，给药期间一直给予高脂饮食。正常对照组(组2-14)每日灌胃给予等量1％羧甲基纤维素钠溶液。研究期间，持续监测进食进水量和体重变化，测试血糖、总胆固醇(tc)和甘油三酯(tg)水平。给药第5天及第20天小鼠称量。
[0317]
4)第21天，先禁食3小时，期间自由饮水，然后进行末次给药，末次给药1小时后剪尾测定血糖值采用血糖仪(accu-chek active，roche)检测各组小鼠血糖浓度。采用spss16.0软件进行统计分析，数据以平均值和标准偏差表示，前后数据采用t检验分析，p＜0.05认为有统计学意义。
[0318]
5)血糖测试试验完成之后，收集各组小鼠血液样本用于血清总胆固醇和甘油三酯的检测。
[0319]
6)二氧化碳窒息处死小鼠并收集胰腺、肝脏、肾脏和脂肪进行组织病理学分析，收集小鼠膀胱尿液进行细菌培养。
[0320]
测试结果：实验结果显示在表13和图6、图7以及图8。图6中，#p《0.05组2-1vs.组2-4，or组2-2vs.组2-5，or组2-1vs.组2-10，or组2-2vs.组2-11；##p《0.01组2-1vs.组2-7，or组2-2vs.组2-8，or组2-1vs.组2-12。图7中，*##p《0.01组2-11vs.组2-5，or组2-12vs.组2-7。图8中，##*p《0.01组2-11vs.组2-5，or组2-12vs.组2-7。
[0321]
表13.第21天各组小鼠平均血糖、总胆固醇、甘油三酯及尿液细菌培养
[0322]
[0323][0324]
*
组2-2中一只小鼠因灌胃操作失误而死亡；
#
p《0.05组2-1vs.组2-4，or组2-2vs.组2-5，or组2-1vs.组2-10，or组2-2vs.组2-11；
##
p《0.01组2-1vs.组2-7，or组2-2vs.组2-8，or组2-1vs.组2-12；
*##
p《0.01组2-11vs.组2-5，or组2-12vs.组2-7；
##*
p《0.01组2-11vs.组2-5，or组2-12vs.组2-7
[0325]
测试结果讨论：
[0326]
第21天血糖，(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组2-4)和贝派地酸二甲双胍组(组2-10)显著低于盐酸二甲双胍二组(组2-1)(p《0.05)，藤黄内酯二甲双胍组(组2-7)和木槿内酯二甲双胍组(组2-11)显著低于盐酸二甲双胍二组(组2-1)(p《0.01)。这些测试结果提示，在降血糖作用上，(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍、藤黄内酯二甲双胍、木槿内酯二甲双胍和贝派地酸二甲双胍组合优于盐酸二甲双胍。
[0327]
第21天血糖，(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)和( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组(组2-11)显著低于盐酸伊美格列明组(组2-2)(p《0.05)，藤黄内酯伊美格列明组(组2-8)显著低于盐酸伊美格列明组(组2-2)(p《0.01)。这些测试结果提示，在降血糖作用上，(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明、藤黄内酯伊美格列明和( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明优于盐酸伊美格列明。
[0328]
第21天血糖，木槿内酯二甲双胍组(组2-12)和藤黄内酯二甲双胍组(组2-7)无统计学差别，( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组(组2-11)和(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)无统计学差别。这些测试结果提示，在降空腹血糖作用上，藤黄内酯及其同分异构体木槿内酯的双胍类盐无明显差别，在降空腹血糖作用上，(-)-羟基柠檬酸及其同分异构体( )-别羟基柠檬酸的双胍类盐无明显差别。
[0329]
第21天血糖，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3)、藤黄内酯组(组2-6)、贝派地酸组(组2-9)和模型对照组(组1-13)无统计学差别。这些测试结果提示，在降血糖作用上，单独使用(-)-羟基柠檬酸、藤黄内酯或贝派地酸，无明显降低血糖作用。
[0330]
第21天总胆固醇，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3)、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍
组(组2-4)、(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)、藤黄内酯组(组2-6)、藤黄内酯二甲双胍组(组2-7)、藤黄内酯伊美格列明组(组2-8)、贝派地酸组(组2-9)和贝派地酸二甲双胍组(组2-10)显著低于模型对照组(组2-13)。这些测试结果提示，(-)-羟基柠檬酸、藤黄内酯和贝派地酸及其二甲双胍或伊美格列明的羧酸盐或组合物具有降总胆固醇作用。
[0331]
第21天总胆固醇，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3，每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾300mg/kg)、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组2-4，每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍300mg/kg，相当于每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾145mg/kg)和(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5，每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明300mg/kg，相当于每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾132mg/kg)无统计学差别，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3)、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组2-4)和(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)第21天总胆固醇显著低于盐酸二甲双胍组(组2-1)和盐酸伊美格列明组(组2-2)(p《0.01)。这些测试结果提示，在降总胆固醇作用上，(-)-羟基柠檬酸或藤黄内酯与二甲双胍或伊美格列明的羧酸盐具有良好的协同作用。
[0332]
第21天甘油三酯，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3)、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组2-4)、(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)、藤黄内酯组(组2-6)、藤黄内酯二甲双胍组(组2-7)、藤黄内酯伊美格列明组(组2-8)、贝派地酸组(组2-9)和贝派地酸二甲双胍组(组2-10)显著低于模型对照组(组2-13)。这些测试结果提示，(-)-羟基柠檬酸、藤黄内酯和贝派地酸及其二甲双胍或伊美格列明的羧酸盐或组合物具有降甘油三酯作用。
[0333]
第21天甘油三酯，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3，每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾300mg/kg)、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组2-4，每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍300mg/kg，相当于每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾145mg/kg)和(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5，每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明300mg/kg，相当于每日灌胃给予(-)-羟基柠檬酸一钾132mg/kg)无统计学差别，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3)、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组2-4)和(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)第21天甘油三酯显著低于盐酸二甲双胍组(组2-1)和盐酸伊美格列明组(组2-2)(p《0.01)。这些测试结果提示，在降甘油三酯作用上，(-)-羟基柠檬酸或藤黄内酯与二甲双胍或伊美格列明的羧酸盐具有良好的协同作用。
[0334]
第21天甘油三酯，(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)显著低于( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组(组2-11)(p《0.01)，藤黄内酯二甲双胍组(组2-7)显著低于木槿内酯二甲双胍组(组2-12)(p《0.01)。这些测试结果提示，在降甘油三酯作用上，(-)-羟基柠檬酸或藤黄内酯与二甲双胍或伊美格列明的羧酸盐明显优于( )-别羟基柠檬酸或木槿内酯与二甲双胍或伊美格列明的羧酸盐。
[0335]
各组小鼠尿液细菌培养结果显示，(-)-羟基柠檬酸一钾组(组2-3)、(-)-羟基柠檬酸一钾二甲双胍组(组2-4)、(-)-羟基柠檬酸一钾伊美格列明组(组2-5)、藤黄内酯组(组2-6)、藤黄内酯二甲双胍组(组2-7)、藤黄内酯伊美格列明组(组2-8)、( )-别羟基柠檬酸钙伊美格列明组(组2-11)和木槿内酯二甲双胍组(组2-12)细菌培养阳性占比为0。这些测试结果提示，使用(-)-羟基柠檬酸、( )-别羟基柠檬酸、木槿内酯或藤黄内酯与二甲双胍或伊美格列明的盐或组合物，具有一定预防和治疗糖尿病引起尿路感染的作用。
[0336]
实施例38：含有盐酸二甲双胍和贝派地酸的组合产品的复方片剂的制备
[0337]
在本实施例中，示例性提供了本发明的组合产品(盐酸二甲双胍和贝派地酸)的片剂的制备方法。
[0338]
单个片剂含有下述成分：盐酸二甲双胍250mg，贝派地酸50mg，预胶化淀粉30mg，微晶纤维素30mg，羧甲淀粉钠10mg，硬脂酸镁5mg，5％聚维酮k-30适量，共计1000片。
[0339]
制备方法包括以下步骤：
[0340]
(1)将250g盐酸二甲双胍和50g贝派地酸，过100目筛后按等量递增法混合均匀备用；
[0341]
(2)将预胶化淀粉30g，微晶纤维素30g，羧甲淀粉钠10g，分别过100目筛后备用；
[0342]
(3)将过筛的预胶化淀粉、微晶纤维素、羧甲淀粉钠混匀后再与混好的原料药等量递增法混合均匀；
[0343]
(4)加入适量10g 5％聚维酮k-30，24目筛制粒，20目筛整粒，40-45℃干燥；
[0344]
(5)干颗粒加入5g硬脂酸镁混匀，含量测定后压片。