苹果酸酶1在制备防治肺动脉高压的药物中的应用

1.本发明属于生物医药技术领域，具体涉及苹果酸酶1在制备防治肺动脉高压的药物中的应用。


背景技术：

2.肺动脉高压(pulmonary hypertension，ph)是指由多种病因和发病机制导致的肺血管结构和/或功能改变，肺血管阻力进行性增加，平均肺动脉压(mpap)≥25mmhg的临床病理生理综合征。若不能有效控制，ph可进一步发展成右心衰竭甚至死亡。ph主要病理改变包括肺血管重塑、肺动脉远端肌化、血管闭塞和复杂丛状病变。其中，肺血管重塑被认为是ph疾病发生、发展的关键。参与肺血管重塑的机制，主要涉及以下3条经典途径，包括内皮素途径、一氧化氮途径以及前列环素途径。尽管针对上述途径的靶向药物在临床应用中取得了不错的治疗效果，但它们仅改善患者的临床症状，并不能有效地缓解或者逆转肺血管重塑及ph疾病进展。越来越多的研究表明，代谢重编程在肺血管重塑及ph进展中发挥关键作用，靶向关键的代谢通路/代谢酶可改善ph进展。因此从代谢重编程和关键代谢酶入手，对寻找ph新的治疗靶点具有重要意义。
3.苹果酸酶作为三羧酸(tricarboxylic acid，tca)循环的关键酶，可催化苹果酸氧化脱羧为丙酮酸，并伴随nadph的生成。在哺乳动物细胞中，已鉴定出三种苹果酸酶亚型，由三个同源基因编码，根据其在细胞内分布和辅酶特异性分别命名为：胞质nadp依赖的me(me1)、线粒体nad(p)依赖的me(me2)和线粒体nadp依赖的me(me3)。这些酶在自然界中广泛存在，其中me1和me2是主要的亚型。me1由于其定位于细胞质并且调节丙酮酸的生成，因此可将糖酵解途径和三羧酸循环相联系；同时，me1通过生成nadph可使脂肪酸从头合成途径与谷氨酰胺代谢途径相互关联。研究表明，me1在多种肿瘤中高表达，通过促进葡萄糖摄取和乳酸堆积，导致有氧糖酵解，从而增强肿瘤细胞的增殖和侵袭能力。在肥厚性心脏病中，发现抑制me1可促进碳水化合物氧化，减少乳酸的积累，增加谷胱甘肽含量，从而平衡细胞内氧化还原状态，改善病理性肥厚心脏的功能。然而，苹果酸酶在ph疾病发生发展中的作用仍然未知。


技术实现要素：

4.本发明的目的在于提供苹果酸酶1抑制剂在制备防治肺动脉高压的药物中的应用。苹果酸酶1可以作为检测和治疗肺动脉高压的靶点，苹果酸酶1抑制剂可以作为防治肺动脉高压的活性物质，增加苹果酸酶1和苹果酸酶1抑制剂的用途。
5.本发明提供了苹果酸酶1在制备检测和/或治疗肺动脉高压的标志物中的应用。
6.优选的，所述苹果酸酶1的蛋白水平和/或酶活性在肺组织中增加。
7.本发明还提供了敲除或敲低编码苹果酸酶1的基因在制备防治肺动脉高压的药物中的应用。
8.本发明还提供了苹果酸酶1抑制剂在制备防治肺动脉高压的药物中的应用。
9.优选的，所述肺动脉高压包括由低氧和/或su5416/缺氧诱导的肺动脉高压。
10.本发明还提供了苹果酸酶1抑制剂在制备改善肺循环阻力和/或重塑肺血管的药物中的应用。
11.本发明还提供了苹果酸酶1抑制剂在制备降低右心室收缩压(rvsp)、降低右心室肥厚指数(rvhi)、升高paat/et、升高tapse和降低肺动脉中层厚度中一项或多项的药物中的应用。
12.优选的，所述苹果酸酶1抑制剂包括小分子抑制剂me1*。
13.本发明还提供了一种防治肺动脉高压的药物，所述药物的活性成分包括苹果酸酶1抑制剂。
14.优选的，所述苹果酸酶1抑制剂包括小分子抑制剂me1*。
15.有益效果：
16.本发明提供了苹果酸酶1在制备检测和/或治疗肺动脉高压的标志物中的应用，所述苹果酸酶1的蛋白水平和/或酶活性在肺组织中显著增加，因而，可以作为检测或治疗肺动脉高压的标志物。
17.同时，本发明还提供了苹果酸酶1抑制剂在制备防治肺动脉高压的药物中的应用，所述苹果酸酶1抑制剂可以通过降低右心室收缩压和右心室肥厚指数，改善肺动脉高压患者的肺循环阻力和右心室受累/右心衰竭，因而苹果酸酶1抑制剂可以作为治疗肺动脉高压的治疗靶点，增加苹果酸酶1和苹果酸酶1抑制剂的医药用途。
附图说明
18.为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例中所需要使用的附图作简单地介绍。
19.图1为me1蛋白水平和酶活性在ph患者肺组织中增加，其中a为ph患者(n＝4)和健康供体(n＝4)肺组织苹果酸酶的代表性蛋白免疫印迹和相对定量分析；b为ph患者(n＝4)和健康供体(n＝4)肺组织切片me1免疫组织化学代表性图像和定量分析；c为ph患者(n＝4)和健康供体(n＝4)肺组织中me1酶活性，以上数据表示为中位数
±
四分位间距；统计方法为mann-whitney u检验；*p《0.05；n.s.：无显著差异；标尺＝50μm；
20.图2为慢性低氧和su5416/低氧(suhx)诱导的ph小鼠模型的构建与评估，其中a为慢性低氧诱导的ph小鼠模型示意图；b为右心室收缩压(rvsp)随低氧刺激时间增加的变化；c为右心室肥厚指数百分比(rvhi％)随低氧刺激时间增加的变化；d为慢性低氧诱导小鼠ph过程中，小鼠肺组织切片α-sma(红色)免疫组织化学代表性图像，肺动脉中层厚度百分比的变化，包括肺动脉直径0-50μm和50-100μm，e为suhx诱导的ph小鼠模型构建示意图，f.rvsp随suhx刺激时间增加的变化，g.rvhi％随suhx刺激时间增加的变化，h.suhx诱导小鼠ph过程中，小鼠肺组织切片α-sma(红色)免疫组织化学代表性图像；肺动脉中层厚度百分比变化，包括肺动脉直径0-50μm和50-100μm，以上数据表示为平均值
±
标准误；每组n＝8只小鼠；单因素方差分析；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001和****p《0.0001；n.s.：无显著差异；标尺＝25μm；
21.图3为me1蛋白水平和酶活性在ph小鼠肺组织中增加，其中a为慢性低氧暴露下小鼠肺组织me1的代表性蛋白免疫印迹和相对定量分析；b为慢性低氧暴露下小鼠肺组织me1
酶活性；c为suhx暴露下小鼠肺组织me1的代表性蛋白免疫印迹和相对定量分析；d为suhx暴露下小鼠肺组织me1酶活性，以上数据表示为中位数
±
四分位间距；每组n＝8只小鼠；统计方法为单因素方差分析；*p《0.05，**p《0.01，***p《0.001和****p《0.0001；n.s.：无显著差异；
22.图4为me1全身性敲除小鼠的全身性敲除策略，图中e表示外显子；
23.图5为me1全身性敲除小鼠构建成功，其中a为新生野生型(me1 / )和全身性敲除(me1-/-)小鼠基因型鉴定的典型图；b为me1 / 和me1-/-小鼠肺组织me1代表性蛋白免疫印迹；
24.图6为me1全身性敲除缓解慢性低氧或suhx诱导的小鼠ph，其中a为慢性低氧(hx)或suhx诱导的me1 / 和me1-/-小鼠ph的模式图；b为rvsp的变化；c为rvhi％的变化；d为肺动脉加速时间与射血时间比(paat/et)的代表性超声心动图及统计图；e为三尖瓣环收缩期位移(tapse)的代表性超声心动图及统计图；f为暴露于常氧(nor)、hx或suhx小鼠肺组织切片，α-sma免疫组织化学代表性图像；肺动脉中层厚度百分比变化，包括肺动脉直径0-50μm或50-100μm，所有数据均表示为平均值
±
标准误；常氧组n＝8只小鼠，hx或suhx组n＝12只小鼠；双因素方差分析；***p《0.001和****p《0.0001与常氧暴露的me1 / 小鼠比较；##p《0.01，###p《0.001和####p《0.0001与hx或suhx暴露的me1-/-小鼠比较；标尺＝25μm；
25.图7为预防性给予me1*治疗suhx诱导的ph小鼠，其中a为评估me1*(剂量分别为1、10、100、200和500mg/kg)对常氧小鼠肺组织me1酶活性的抑制效率；b为me1*预防性治疗suhx诱导的ph小鼠示意图，数据表示为平均值
±
标准误；每组n＝3只小鼠；单因素方差分析；**p《0.01；n.s.：无统计学意义；
26.图8为me1*预防性治疗suhx诱导的小鼠ph的疗效评估，其中a为me1*或vehicle预防性治疗常氧或suhx小鼠rvsp的变化；b为me1*或vehicle预防性治疗常氧或suhx小鼠rvhi％的变化；c为暴露于常氧或suhx后小鼠肺组织切片中α-sma(红色)的免疫组织化学代表性图像，肺动脉中层厚度百分比变化，肺动脉直径0-50μm或50-100μm；d为me1*或vehicle预防性治疗常氧或suhx小鼠paat/et的代表性超声心动图和统计；e为me1*或vehicle预防性治疗常氧或suhx小鼠tapse的代表性超声心动图和统计，所有数据均表示为平均值
±
标准误；常氧组n＝6只小鼠，suhx组n＝10只小鼠；双因素方差分析；**p《0.01，***p《0.001和****p《0.0001(与常氧暴露vehicle组相比)；#p《0.05，##p《0.01，###p《0.001和####p《0.0001(与suhx暴露的me1*组相比)；标尺＝25μm；
27.图9为me1*预防性治疗suhx诱导的ph小鼠的安全性评价，其中a为me1*治疗后对小鼠体重影响的评估；b为小鼠肺、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和小肠的代表性he染色图像，数据表示为平均值；常氧组n＝6只小鼠，suhx组n＝10只小鼠；单因素方差分析；标尺＝50μm。
具体实施方式
28.本发明提供了苹果酸酶1(malic enzyme 1，me1)在制备检测和/或治疗肺动脉高压的标志物中的应用。本发明所述苹果酸酶1在肺动脉高压肺组织样本中高表达，蛋白水平和酶活性增加，可以将所述苹果酸酶1作为检测肺动脉高压的标志物以及治疗肺动脉高压的靶点。
29.本发明还提供了敲除或敲低编码苹果酸酶1的基因在制备防治肺动脉高压的药物
中的应用。本发明所述敲除优选为全身性敲除。本发明所述药物优选包括诊疗制剂。本发明通过敲除苹果酸酶1的编码基因me1可以使肺动脉高压患者或模型动物的肺循环阻力和右心室受累/右心衰竭的情况得到显著改善，进而达到防治肺动脉高压的目的。
30.本发明还提供了苹果酸酶1抑制剂在制备防治肺动脉高压的药物中的应用。在本发明中，以下内容均属于本发明的保护范围：苹果酸酶1抑制剂在制备改善肺循环阻力和/或重塑肺血管的药物中的应用；苹果酸酶1抑制剂在制备降低右心室收缩压(rvsp)、降低右心室肥厚指数(rvhi)、升高paat/et、升高tapse和降低肺动脉中层厚度中一项或多项的药物中的应用。本发明所述苹果酸酶1抑制剂优选包括小分子抑制剂me1*，所述小分子抑制剂me1*的化学结构优选如式ⅰ所示，cas号为522649-59-8。本发明所述药物优选包括诊疗制剂。
[0031][0032]
本发明所述肺动脉高压优选包括由低氧和su5416/缺氧诱导(su5416联合低氧诱导)的肺动脉高压。本发明所述苹果酸酶1抑制剂可以有效降低右心室收缩压(rvsp)和右心室肥厚指数(rvhi)、升高paat/et和tapse，降低肺动脉中层厚度，进而改善肺循环阻力、改善右心室受累和/或右心衰竭，达到重塑肺血管和延缓肺动脉高压的技术效果，所述苹果酸酶1抑制剂可以用于制备治疗肺动脉高压药物。
[0033]
本发明还提供了一种防治肺动脉高压的药物，所述药物的活性成分包括苹果酸酶1抑制剂。本发明所述苹果酸酶1抑制剂优选包括小分子抑制剂me1*。本发明所述药物优选还包括药学上可接受的辅料。本发明对所述辅料没有特殊限定，采用本领域中常规辅料即可。本发明所述药物的使用方式优选为腹腔注射。
[0034]
为了进一步说明本发明，下面结合附图和实施例对本发明提供的技术方案进行详细地描述，但不能将它们理解为对本发明保护范围的限定。
[0035]
实施例1
[0036]
me1高表达于ph患者和ph小鼠肺组织。
[0037]
1.1收集人肺组织样本
[0038]
实验组肺组织(n＝4)来自于接受肺移植的晚期ph患者，对照组肺组织(n＝4)来自于健康捐赠者因肺移植过程中肺大小不匹配而切除的部分。该研究获得了所有参与者的知情同意。使用的人肺组织已获得北京协和医学院伦理委员会(批准号：2018043)和阜外医院(批准号：2017-877)的批准。
[0039]
1.2收集暴露于单纯低氧0、1、2、3和4周的c57bl/6j小鼠肺组织
[0040]
将体重为25-30g的8-10周龄雄性spf级c57bl/6j小鼠饲养在低氧仓(仓内氧气浓
度维持在10％)，连续饲养0周(n＝8)、1周(n＝8)、2周(n＝8)、3周(n＝8)和4周(n＝8)后收集小鼠肺组织，并评估右心室收缩压(rvsp)、右心室肥厚指数(rvhi)以及分析肺血管中膜厚度。
[0041]
1.3收集暴露于suhx 0、1、2和3周的c57bl/6j小鼠肺组织
[0042]
将体重为25-30g的8-10周龄雄性spf级c57bl/6j小鼠饲养在低氧仓(仓内氧气浓度维持在10％)，同时予以每周一次su541620mg/kg皮下注射，连续饲养0周(n＝8)、1周(n＝8)、2周(n＝8)和3周(n＝8)后收集小鼠肺组织，并评估右心室收缩压(rvsp)、右心室肥厚指数(rvhi)以及分析肺血管中膜厚度。
[0043]
1.4rvsp和rvhi的测定
[0044]
rvsp可用于评估小鼠肺动脉压力，rvhi可反映小鼠因肺循环阻力过大导致右心室受累、右心室肥厚情况。具体操作步骤如下：(1)2％戊巴比妥钠(经腹腔注射50mg/kg)麻醉小鼠后将其固定于手术板上。(2)打开power lab，连接好压力换能器。(3)用手术剪剪开小鼠胸前壁皮肤，清晰暴露胸骨柄位置。(4)将22号针头通过闭胸沿胸骨柄与左肋缘交点45
°
插入右心室(rv)，并通过波形判断针尖在心腔内的位置，通过chart程序保存稳定的rvsp波形和记录rvsp测定值。(5)处死小鼠，获取心脏，去除心脏多余结缔组织和心耳，剪开右心室游离壁，分别称重右心室和左心室及室间隔(left ventricular septum，lv s)，计算右心室肥厚指数＝rv/lv s。
[0045]
1.5肺血管中膜厚度评估
[0046]
肺血管中膜厚度用于分析肺血管形态变化，本发明用肺血管平滑肌细胞表面标记，即α-平滑肌肌动蛋白(α-sma)一抗，通过免疫组织化学染色，然后计算肺血管中膜厚度百分比，从而评估肺动脉高压小鼠肺血管重塑情况。收集左肺组织，10％中性福尔马林室温固定至少24小时，全自动组织脱水机脱水后，在石蜡包埋冷热台一体机中进行石蜡包埋，肺组织石蜡切片厚度为4-5μm。切片脱蜡、抗原修复(柠檬酸缓冲液ph＝6.0)后，在4℃下用抗α-sma一抗孵育过夜，然后用辣根过氧化物酶结合的二抗孵育。用苏木精复染细胞核后，自来水冲洗并用0.5％盐酸乙醇分化，自来水浸泡15min，进行常规脱水、透明、甘油明胶封片，拍照。统计分析：测量直径为0-50μm和50-100μm的肺血管厚度。每只小鼠评估直径0-50μm血管至少20根和直径50-100μm血管至少15根，肺血管中膜厚度百分比计算公式如下：(外周长/2п-内周长/2п)/(外周长/2п)
×
100。
[0047]
1.6苹果酸酶蛋白水平检测
[0048]
具体操作步骤如下：(1)加入含有ripa、磷酸酶抑制剂的组织裂解液后，充分剪碎肺组织，彻底匀浆至看不见组织，冰上裂解30分钟，然后4℃下13,000rpm离心15分钟，取上清则为总蛋白；(2)bca法测定蛋白浓度；(3)煮蛋白：100℃金属浴5分钟；(4)制胶、电泳(每孔上样蛋白为20μg)和转膜；(5)转膜完成后，5％专用脱脂牛奶室温封闭1小时，然后用1
×
tbst短暂清洗；(6)一抗4℃过夜孵育后，然后回收一抗，1
×
tbst洗3次，每次5-10分钟。(7)室温孵育二抗1小时，然后回收二抗，1
×
tbst洗3次，每次5-10分钟；(8)使用tanon自动化学发光/荧光图像分析系统收集蛋白信号，通过image-pro plus软件分析wb条带灰度值，以计算目标蛋白的相对水平。
[0049]
1.7苹果酸酶活性检测
[0050]
组织蛋白上清或线粒体提取物用于检测me1酶活性，具体操作步骤如下：(1)配液：
cellular epigenetic state by inhibiting hdac3-ncor complex[j].nature metabolism,2021.制备获得；
[0061]
me1-/-小鼠基因型鉴定步骤如下：
[0062]
(1)小鼠剪趾或剪尾；
[0063]
(2)加入50μl genotyping i液(碱性，naoh)，95℃金属浴1小时；
[0064]
(3)加入50μl genotyping ii液(酸性，tris-hcl)终止反应，然后涡旋30-60秒，5000转每分，10分钟后4℃离心；
[0065]
(4)配置聚合酶链反应(pcr)体系，所使用基因型鉴定引物序列如表1：
[0066]
表1基因型鉴定的引物序列
[0067][0068]
(5)配dna胶：用1
×
tae液溶解琼脂糖，琼脂糖终浓度1.5％，微波炉p100加热约3-4分钟进行溶解，晾至不烫手后加入gelstain染料(10000
×
)，轻轻摇匀后导入胶板中，静置等待dna胶凝固；
[0069]
(6)上样：上样孔在负极(黑色)，加入1
×
tae液，至刚好没过dna胶，加入样品和marker(100bp dnaladder)10μl；
[0070]
电泳：由负极(黑色)向正极(红色)，120v，30分钟。
[0071]
2.2suhx诱导的ph小鼠模型构建
[0072]
将体重为25-30g的8-10周龄雄性spf级me1 / 和me1-/-随机分为suhx模型组，小鼠饲养在低氧仓(仓内氧气浓度维持在10％)，同时予以每周一次su541620mg/kg皮下注射，连续饲养3周后收集肺组织，并评估rvsp、rvhi以及肺血管中膜厚度。具体分组情况如下：
①
suhx me1 / 组：n＝12只小鼠；
②
suhx me1-/-组：n＝12只小鼠。
[0073]
2.3小鼠rvsp、rvhi测定以及肺血管中膜厚度评估方法同实施例1。
[0074]
2.4小鼠超声心动图检测
[0075]
使用vevo 2100超声成像平台进行超声心动图检查，以评估肺动脉高压小鼠的右心血流动力学变化。具体操作步骤如下：(1)对小鼠进行脱毛处理，充分暴露胸前壁皮肤。(2)将小鼠置于37℃恒温加热板，以3.0％异氟烷经鼻、经口吸入麻醉小鼠麻醉好后以1.5％异氟烷持续吸入。(3)将小鼠四肢涂抹少量耦合剂并固定四肢后，连续记录小鼠体温、心率、呼吸率和心电图动态变化，确保小鼠呈静息状态。(4)安置超声探头，加适量耦合剂后进行操作，在短轴位置进行肺动脉射血加速时间(paat)、肺动脉射血时间(paet)、速度时间积分等指标测量，然后保存频谱和加彩超声。(5)调整至四腔心位置，沿着游离右室壁找到三尖瓣环位置，测量三尖瓣环收缩期位移(tapse)。(6)测量相应指标，进行统计分析。
[0076]
2.5结果分析
[0077]
me1全身性敲除小鼠构建成功如图4和图5所示：其中图4为me1全身性基因敲除策略，图4中的e表示外显子，如e4代表第4个外显子；图5中的a图为新生野生型(me1 / )和全
身性基因敲除(me1-/-)小鼠基因型鉴定的典型图，若3f3r有两条带而5f3r有一条带，说明为野生型(me1 / )小鼠；若3f3r无条带而5f3r有一条带，说明是全身性基因敲除(me1-/-)小鼠；b图为me1 / 和me1-/-小鼠肺组织me1代表性蛋白免疫印迹；由a图和b图可证明本技术中的全身性基因敲除(me1-/-)小鼠构建成功，me1被成功敲除了。
[0078]
将me1 / 和me1-/-小鼠暴露于慢性低氧或suhx构建ph小鼠模型如图6中a图：发现与野生型小鼠相比，暴露于慢性低氧或suhx的me1-/-小鼠表现出rvsp和rvhi的明显降低如图6中b图和c图，提示在敲除me1基因的情况下，ph小鼠的肺循环阻力和右心室受累/右心衰竭的情况得到了显著改善。
[0079]
同样的，小鼠超声心动图结果提示，在慢性低氧或suhx诱导ph后，me1-/-小鼠paat/et和tapse均明显高于me1 / 小鼠如图6中d图和e图，表明在敲除me1基因的情况下，ph小鼠肺血管阻力和右心收缩功能明显改善。
[0080]
同时，在慢性低氧或suhx暴露的me1-/-小鼠肺动脉中膜厚度百分比明显降低，表明抑制me1改善了ph小鼠的肺血管重塑和ph小鼠疾病进展，如图6中f。实施例2中的以上结果表明me1参与了ph疾病的发生发展，me1可作为ph的潜在治疗靶点。
[0081]
实施例3
[0082]
me1酶活性抑制剂(me1*)治疗suhx诱导的ph小鼠的疗效评估及安全性评价
[0083]
3.1me1*体内治疗的剂量探索
[0084]
本发明利用常氧小鼠，予以小鼠腹腔注射me1*，单次注射剂量分别为1、10、100、200和500mg/kg，以探索me1*对小鼠肺组织中me1酶活性的抑制效果。
[0085]
3.2me1*预防性治疗suhx诱导的ph小鼠
[0086]
我们将体重为25-30g的8-10周龄雄性spf级c57bl/6j小鼠随机分为如下4组：
[0087]
(1)常氧 vehicle对照组：6只小鼠，常氧环境饲养3周；从第2周起每天腹腔注射一次vehicle(100mg/kg)，共注射14次。
[0088]
(2)常氧 me1*治疗组：6只小鼠，常氧环境饲养3周；从第2周起每天腹腔注射一次me1*(100mg/kg)，共注射14次。
[0089]
(3)suhx建模 vehicle对照组：10只小鼠，suhx处理3周(suhx建模方法同前所述)；从第2周起每天腹腔注射一次vehicle(100mg/kg)，共注射14次。
[0090]
(4)suhx建模 me1*治疗组：10只小鼠，suhx处理3周；从第2周起每天腹腔注射一次me1*(100mg/kg)，共注射14次。
[0091]
3.3小鼠rvsp、rvhi、超声心动图测定以及肺血管中膜厚度评估方法实施例1。
[0092]
3.4结果分析
[0093]
在me1*体内治疗的剂量探索实验中，本发明中数据显示，当me1*剂量大于或等于100mg/kg时，小鼠肺组织中me1酶活性被明显抑制，如图7中的a图；
[0094]
同时，考虑suhx刺激1周后，本发明才观察到小鼠肺组织中me1蛋白水平和酶活性逐渐升高如图3中c图和d图；因此，本发明选择从第2周开始每天腹腔注射1次100mg/kg的me1*或vehicle，预防性治疗suhx诱导的ph小鼠，如图7中b图；
[0095]
与vehicle治疗相比，经me1*治疗后的小鼠ph疾病进展明显减缓，表现为改善的rvsp、rvhi％、paat/et、tapse以及肺血管中膜厚度百分比，提示ph小鼠的肺血管阻力、右心功能和肺血管重塑得到明显缓解，如图8，其中，a图为me1*或vehicle预防性治疗常氧或
suhx小鼠rvsp的变化，b图为me1*或vehicle预防性治疗常氧或suhx小鼠rvhi％的变化，经me1*治疗后的小鼠的rvsp和rvhi(％)较vehicle治疗明显降低；c图为暴露于常氧或suhx后小鼠肺组织切片中α-sma(红色)的免疫组织化学代表性图像，肺动脉中层厚度百分比变化，肺动脉直径0-50μm或50-100μm，经me1*治疗后的小鼠的肺动脉中层厚度较vehicle治疗显著降低；d图me1*或vehicle预防性治疗常氧或suhx小鼠paat/et的代表性超声心动图和统计，经me1*治疗后的小鼠的pa at/et较vehicle治疗显著升高；e图为me1*或vehicle预防性治疗常氧或suhx小鼠tapse的代表性超声心动图和统计，经me1*治疗后的小鼠的tapse较vehicle治疗显著升高；所有数据均表示为平均值
±
标准误；常氧组n＝6只小鼠，suhx组n＝10只小鼠；双因素方差分析；**p《0.01，***p《0.001和****p《0.0001(与常氧暴露vehicle组相比)；#p《0.05，##p《0.01，###p《0.001和####p《0.0001(与suhx暴露的me1*组相比)；标尺＝25μm。
[0096]
通过每周对小鼠进行称重，发现相比vehicle组小鼠，经me1*治疗后的小鼠体重并未观察到明显减轻，如图9中a图。同时治疗结束后，本发明还收集了小鼠多个组织器官包括肺、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和小肠，进行he染色未见明显的组织器官损伤，如图9中b图，其中a图为me1*治疗后对小鼠体重影响的评估，b图为小鼠肺、心脏、肝脏、脾脏、肾脏和小肠的代表性he染色图像，数据表示为平均值；常氧组n＝6只小鼠，suhx组n＝10只小鼠；单因素方差分析；标尺＝50μm。
[0097]
由以上实施例可知，me1*可安全、有效延缓suhx诱导的小鼠肺动脉高压和肺血管重塑，提示me1*可用于制备ph的治疗药物。
[0098]
尽管上述实施例对本发明做出了详尽的描述，但它仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部实施例，人们还可以根据本实施例在不经创造性前提下获得其他实施例，这些实施例都属于本发明保护范围。