快速检测百香果黄瓜花叶病毒的试剂盒及方法

技术特征：
1.快速检测百香果黄瓜花叶病毒的试剂盒，包括cmv引物，所述cmv引物的序列为：cmv-f 5
′‑
cggtattgaacgctgcgttattcacgctgg-3
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，cmv-r 5
′‑
ctaggataaccttgaattgctccatccacgc-3
′
。2.根据权利要求1所述的快速检测百香果黄瓜花叶病毒的试剂盒，其特征在于，还包括cmv探针，所述cmv探针的序列不与特异性引物识别位点重叠，长度为46-52nt，序列避免回文序列、内部二级结构和连续的重复碱基；所述cmv探针共有四个修饰位点：距离5
′
端的≥35nt的中部位置标记一个dspacer thf，作为核酸外切酶的识别位点；thf位点的上游标记一个荧光基团，下游标记一个淬灭基团，两个基团的间距为2-4nt；thf距离3
′
末端≥15nt，并且3
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末端标记一个修饰基团。3.根据权利要求2所述的快速检测百香果黄瓜花叶病毒的试剂盒，其特征在于，所述修饰基团选自胺基、磷酸基团或c3-spacer。4.根据权利要求2或3所述的快速检测百香果黄瓜花叶病毒的试剂盒，其特征在于，所述cmv探针的序列为tacctgggatgtgcccacccgaac[fam-dt]c[thf][bhq1-dt]tcgacattgtattt[c3-spacer]。5.快速检测百香果黄瓜花叶病毒的方法，包括：1)向反应管中加入上游引物、下游引物、探针、rnase-free水、核酸模板和缓冲液；上游引物的序列为：5
′‑
cggtattgaacgctgcgttattcacgctgg-3
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，下游引物的序列为：5
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ctaggataaccttgaattgctccatccacgc-3
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，探针序列为：tacctgggatgtgcccacccgaac[fam-dt]c[thf][bhq1-dt]tcgacattgtattt[c3-spacer]；2)混匀后，将反应液甩至管子底部，然后立即将反应管放入恒温设备中，恒温42℃，反应时间30min；3)将反应后的产物至于荧光检测仪中，在阴性对照呈现无荧光，阳性对照呈现荧光的情况下，若样品呈现荧光，说明此样品存在cmv病毒的感染；若样品无荧光，说明此样品不存在cmv病毒的感染。6.根据权利要求5所述的快速检测百香果黄瓜花叶病毒的方法，其特征在于，步骤1)中通过以下方法获取核酸模板：取5-10g百香果新鲜的嫩叶置于1.5ml的离心管中，加入15-25μl rnase free水，用研磨棒将其研磨至匀浆状，吸取2μl至新的离心管中并稀释至50μl作为核酸模板使用。7.根据权利要求5所述的快速检测百香果黄瓜花叶病毒的方法，其特征在于，步骤1)每10μl反应体系中，加入0.4μl上游引物、0.4μl下游引物、0.24μl探针、2.08μl rnase-free水、0.5μl核酸模板和6.38μl缓冲液。8.根据权利要求5所述的快速检测百香果黄瓜花叶病毒的方法，其特征在于，步骤1)中引物和探针浓度分别为10μm和5μm。9.根据权利要求5-8任意一项所述的快速检测百香果黄瓜花叶病毒的方法，其特征在于，步骤3)中阴性对照的模板为rnase-free水，阳性对照的模板为cmv质粒。

技术总结
本发明提供了快速检测百香果黄瓜花叶病毒的试剂盒及方法，试剂盒包括CMV引物，所述CMV引物的序列为：CMV-F：5


技术研发人员：李康 王玉慧 郭志宇 李名扬 王瑞
受保护的技术使用者：海南大学
技术研发日：2022.03.30
技术公布日：2022/8/25