4-（4-氨基苯氧基）吡啶-2-胺衍生物及其用途的制作方法

4-(4-氨基苯氧基)吡啶-2-胺衍生物及其用途
技术领域
1.本发明属于医药技术领域，具体涉及4-(4-氨基苯氧基)吡啶-2-胺衍生物及其用途。


背景技术：

2.细胞程序性坏死(necroptosis/programmed necrosis)是近年来发现的一种不同于凋亡的、新的caspase非依赖性的细胞程序性死亡方式。它受死亡信号调控，呈现坏死样结构特点。与凋亡相比，细胞程序性坏死不形成凋亡小体，染色质不凝聚；与坏死相比，细胞程序性坏死是受多种基因调控的受控细胞死亡方式。体外培养体系中加入caspase抑制剂z-vad-fmk后，采用tnf可诱导细胞发生程序性坏死，细胞呈现坏死的形态特征为细胞肿胀、破裂、释放细胞内容物，继而引起炎症和免疫应答。除tnf外，tlr3和tlr4的配体，某些细菌、病毒感染等均可引起细胞发生细胞程序性坏死。
3.受体相互作用蛋白激酶1(ripk1)与受体相互作用蛋白激酶3(ripk3)形成坏死小体(necrosome)。ripk3会进一步招募mlkl，被磷酸化的mlkl会自我寡聚化然后迁移到细胞膜，对细胞膜进行“打孔”，导致细胞内容物外泄和电离平衡破坏，最终导致细胞坏死的发生。由于细胞内容物的释放，坏死性细胞凋亡会引起体内大量炎症细胞浸润从而诱发严重的炎症反应。坏死性细胞凋亡作为新的一类细胞程序性死亡方式，在缺血性损伤、急性肾损伤、神经退行性疾病、恶性肿瘤、病毒感染和免疫性疾病等多种疾病的病理生理过程中起重要作用。鉴定并发现坏死性细胞凋亡的小分子抑制剂对于坏死性细胞凋亡相关疾病的临床治疗具有十分重要的意义。
4.因此，进一步研究ripk3的更高效的抑制剂，将进一步推进对坏死性细胞凋亡相关疾病的临床治疗研究，具有非常重要的价值和应用前景。


技术实现要素：

5.本发明的目的在于提供一种4-(4-氨基苯氧基)吡啶-2-胺衍生物，作为ripk3的高效抑制剂。
6.本发明提供了一种式i所示化合物，或其异构体，或其药学上可接受的盐：
7.8.其中，r1选自选自
9.r2、r4分别独立地选自氢，羟基，甲氧基，c
1-3
烷基，卤素；
10.r3选自其中，ra、ra’分别独立选自氢，c
1-6
烷基、环烷基；
11.r5为有1～3个取代基的c
5-10
芳基或氮杂芳基；所述取代基分别独立选自c
1-3
烷基，甲氧基，三氟甲基，硝基或卤素；
12.r6为氢，c
1-6
烷基，c
3-6
环烷基或被1个羟基取代的c
2-6
烷基；
13.x为氮、氧、硫。
14.进一步地，r2、r4分别独立地选自氢，c
1-3
烷基，氟、氯、溴。
15.进一步地，r3选自—cora、—conrara’；其中，ra、为c
1-5
烷基或c
3-6
环烷基，ra’为氢或c
1-5
烷基。
16.进一步地，r5为对三氟甲基苯基、对甲氧基苯基或对氟苯基。
17.进一步地，r6为氢、c
1-3
烷基或被1个羟基取代的c
2-4
烷基。
18.更进一步地，所述化合物为：
19.[0020][0021]
本发明还提供了上述化合物、或其异构体、或其药学上可接受的盐在制备受体相互作用蛋白激酶3抑制剂中的用途。
[0022]
本发明还提供了上述化合物、或其异构体、或其药学上可接受的盐在制备治疗炎症、免疫性疾病、神经退行性疾病和/或肿瘤的药物中的用途。
[0023]
进一步地，上述药物是治疗细胞程序性坏死相关的炎症、免疫性疾病、神经退行性疾病和/或肿瘤的药物。
[0024]
本发明还提供了一种药物，它是由上述化合物、或其立体异构体、或其药学上可接受的盐，加上药学上可接受的辅料制备而成的制剂。
[0025]
实验结果表明，对ripk3具有优异的抑制效果，可作为ripk3的抑制剂，抑制细胞程序性坏死，治疗细胞程序性坏死相关的炎症，和/或免疫性疾病，和/或神经退行性疾病，和/或肿瘤，具有重要的临床价值。
[0026]
本发明中提供的化合物和衍生物可以根据iupac(国际纯粹与应用化学联合会)或cas(化学文摘服务社，columbus，oh)命名系统命名。
[0027]
关于本发明的使用术语的定义：除非另有说明，本文中基团或者术语提供的初始定义适用于整篇说明书的该基团或者术语；对于本文没有具体定义的术语，应该根据公开内容和上下文，给出本领域技术人员能够给予它们的含义。
[0028]“取代”是指分子中的氢原子被其它不同的原子或分子所替换。
[0029]
碳氢基团中碳原子含量的最小值和最大值通过前缀表示，例如，前缀c
a-b
烷基表明任何含“a”至“b”个碳原子的烷基。因此，例如，“c
1-4
烷基”是指包含1-4个碳原子的烷基。
[0030]“烷基”是指具有指定数目的成员原子的饱和烃链。例如，c
1-6
烷基是指具有1至6个成员原子，例如1至4个成员原子的烷基基团。烷基基团可以是直链或支链的。代表性的支链烷基基团具有一个、两个或三个支链。烷基基团可任选地被一个或多个如本文所定义的取代基取代。烷基包括甲基、乙基、丙基(正丙基和异丙基)、丁基(正丁基、异丁基和叔丁基)、戊基(正戊基、异戊基和新戊基)和己基。烷基基团也可以是其他基团的一部分，所述其他基团为例如c
1-6
烷氧基。
[0031]“环烷基”是指具有3至6个碳原子且没有环杂原子且具有单个环或多个环(包括稠合、桥连和螺环体系)的饱和或部分饱和的环状基团。环烷基基团的实例包括例如，金刚烷基、环丙基、环丁基、环己基、环戊基、环辛基、环戊烯基和环己烯基。
[0032]“卤素”为氟、氯或溴。
[0033]“杂芳基”指包含至少一个杂原子的芳香性不饱和环基；其中杂原子指氮原子、氧原子、硫原子；
[0034]“三氟甲基”指：—cf3；
[0035]“羟基”指：—oh
[0036]“对三氟甲基苯基”指：
[0037]“对甲氧基苯基”指：
[0038]“对氟苯基”指：
[0039]“立体异构体”包括对映异构体和非对映异构体。
[0040]
术语“药学上可接受的”是指某载体、运载物、稀释剂、辅料，和/或所形成的盐通常
[0041]
在化学上或物理上与构成某药物剂型的其它成分相兼容，并在生理上与受体相兼容。
[0042]
术语“盐”和“可药用的盐”是指上述化合物或其立体异构体，与无机和/或有机酸
和碱形成的酸式和/或碱式盐，也包括两性离子盐(内盐)，还包括季铵盐，例如烷基铵盐。这些盐可以是在化合物的最后分离和纯化中直接得到。也可以是通过将上述化合物，或其立体异构体，与一定数量的酸或碱适当(例如等当量)进行混合而得到。这些盐可能在溶液中形成沉淀而以过滤方法收集，或在溶剂蒸发后回收而得到，或在水介质中反应后冷冻干燥制得。本发明中所述盐可以是化合物的盐酸盐、硫酸盐、枸橼酸盐、苯磺酸盐、氢溴酸盐、氢氟酸盐、磷酸盐、乙酸盐、丙酸盐、丁二酸盐、草酸盐、苹果酸盐、琥珀酸盐、富马酸盐、马来酸盐、酒石酸盐或三氟乙酸盐。
[0043]
在某些实施方式中，本发明的一种或多种化合物可以彼此联合使用。也可选择将本发明的化合物与任何其它的活性试剂结合使用，用于制备调控细胞功能或治疗疾病的药物或药物组合物。如果使用的是一组化合物，则可将这些化合物同时、分别或有序地对受试对象进行给药。
[0044]
显然，根据本发明的上述内容，按照本领域的普通技术知识和惯用手段，在不脱离本发明上述基本技术思想前提下，还可以做出其它多种形式的修改、替换或变更。
[0045]
以下通过实施例形式的具体实施方式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明。但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例。凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。
具体实施方式
[0046]
本发明所用原料与设备均为已知产品，通过购买市售产品所得。
[0047]
实施例1、本发明化合物a的合成
[0048]
反应式如下：
[0049][0050][0051]
中间体1
[0052]
4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-胺
[0053][0054]
向单口瓶中加入1-氟-2,3-二甲基-4-硝基苯(5g,29.56mmol)，2-氨基-4-羟基吡啶(5.2g,47.23mmol)，碳酸钾(8.6g,62.23mmol)和dmso(100ml)，搅拌下升温至75摄氏度反应14小时，自然冷却至室温，缓慢加入冰水，有棕色固体析出，过滤，滤饼用水洗至中性，烘干得5.6g棕色固体，收率：73.1％，m 1:260.0。
[0055]
中间体2
[0056]
(4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0057][0058]
向单口瓶中加入4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-胺(1.5g,19.67mmol)，三乙胺(7.95g,78.67mmol)和二氯甲烷(110ml)，搅拌下降温至0摄氏度，滴加环丙基甲酰氯(4.52g,43.27mmol)，滴加完毕后自然升温至室温反应14小时，倒入水中，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并萃取液用硫酸镁干燥，过滤，滤液减压蒸干得淡黄色固体5.9g，收率：91.8％,m 1:327.8。
[0059]
中间体3
[0060]
n-(4-(4-氨基-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0061][0062]
向单口瓶中加入n-(4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺(3g,9.17mmol)，乙醇(45ml)和水(7ml)，搅拌下升温至60摄氏度，加入氯化铵(0.49g,9.17mmol)和铁粉(2.55g,45.83mmol)，反应一小时，降至室温，过滤，滤液减压蒸干，加入二氯甲烷和碳酸钠溶液，分液，水相用二氯甲烷萃取，合并萃取液用硫酸镁干燥，过滤，滤液减压蒸干后用硅胶纯化(ea/pet＝1.1)得0.8g淡黄色固体，收率：29.6％,m 1:298.2。
[0063]
中间体4
[0064]
2-氰基-n-(4-甲氧基苯基)乙酰胺
[0065]
[0066]
向单口瓶中加入4-甲氧基苯胺(4g,32.48mmol)，2-氰基乙酸(3.32g,39.03mmol)，二氯甲烷(80ml)，二异丙基乙基胺(12.6g,97.49mmol)，室温下搅拌至溶清，加入hatu(17.3g,45.50mmol)，室温搅拌14小时，反应液减压蒸出溶剂后用硅胶纯化(ea/pet＝1.1)得2.7g黄色固体，收率：43.8％,m 1:191.1.
[0067]
中间体5
[0068]
1-(4-甲氧基苯基)-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-腈
[0069][0070]
向单口瓶中加入2-氰基-n-(4-甲氧基苯基)乙酰胺(0.5g,2.63mmol)，乙酰丙酮(0.27g,2.70mmol)，无水乙醇(10ml)，哌啶(0.09g,1.06mmol)，搅拌下升温至90摄氏度反应14小时，有白色固体析出，降至室温后抽滤，滤饼用少量乙醇淋洗，抽干，干燥得白色粉末0.62g，收率：92.8％,m 1:255.2。
[0071]
中间体6
[0072]
(e)-4-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-1-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
[0073][0074]
向单口瓶中加入1-(4-甲氧基苯基)-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-腈(1.5g,5.9mmol)，dmf(15ml),dmf-dma(0.92g,7.72mmol)，搅拌下升温至110摄氏度反应6小时，反应液减压蒸出溶剂后用乙醇重结晶得0.6g黄色固体，收率：32.9％,m 1:310.2。
[0075]
中间体7
[0076]
8-羟基-2-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-2,7-萘啶-1(2h)-酮
[0077][0078]
向单口瓶中加入80％硫酸(9ml)，(e)-4-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-1-(4-甲氧基苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈(0.3g,0.97mmol)，搅拌下升温至110摄氏度反应2小时，将反应液倒入碎冰中，有白色固体析出，过滤并用水洗至中性，干燥得63mg类白色固体，收率：23.1％,m 1:283.2。
[0079]
中间体8
[0080]
8-氯-2-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-2,7-萘啶-1(2h)-酮
[0081][0082]
向单口瓶中加入三氯氧磷(3ml)，8-氯-2-(4-甲氧基苯基)-3-甲基-2,7-萘啶-1(2h)-酮(60mg,0.21mmol)，搅拌下升温至110摄氏度反应2小时，将反应液倒入碎冰中，有白色固体析出，过滤并用水洗至中性，干燥得32mg类白色固体，收率：47.8％,m 1:301.2。
[0083]
化合物a：
[0084]
向单口瓶中加入中间体8(16mg,0.0168mmol)、中间体3(16mg,0.0168mmol)和正丁醇(3ml)，搅拌下加入对甲苯磺酸(10.5mg,0.0168mmol)，升温至110摄氏度反应2小时，减压蒸除溶剂后用反相制备色谱纯化得白色固体19mg，收率：63.3％,100％(uv214),m 1:562.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),10.77(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.35
–
7.26(m,2h),7.15
–
7.07(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),3.84(s,3h),2.86(s,1h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),1.97(s,4h),0.75(d,j＝6.3hz,4h)。
[0085]
实施例2、本发明化合物b的合成
[0086]
反应式如下：
[0087][0088]
中间体9
[0089]
2-氰基-n-(4-氟苯基)乙酰胺
[0090][0091]
以合成中间体4的方法操作得4.6g黄色固体，收率：95.8％,m 1:179.2.
[0092]
中间体10
[0093]
1-(4-氟苯基)-4,6-二甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-腈
[0094][0095]
以合成中间体5的方法操作得2.3g白色粉末，收率：85.2％,m 1:243.2.
[0096]
中间体11
[0097]
(e)-4-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-1-(4-氟苯基)-6-甲基-2-氧代-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
[0098][0099]
以合成中间体6的方法操作得0.46g黄色粉末，收率：25％,m 1:298.2.
[0100]
中间体12
[0101]
2-(4-氟苯基)-8-羟基-3-甲基-2,7-萘啶-1(2h)-酮
[0102][0103]
以合成中间体7的方法操作得140mg类白色固体，收率：88.2％,m 1:271.2.
[0104]
中间体13
[0105]
8-氯-2-(4-氟苯基)-3-甲基-2,7-萘啶-1(2h)-酮
[0106][0107]
以合成中间体8的方法操作得78mg灰白色固体，收率：52.2％,m 1:289.2.
[0108]
化合物b：
[0109]
n-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2,3-二甲基苯氧基吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0110][0111]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物3为原料制备得白色固体16mg，收率：42.1％,97.51％(uv214),m 1:550.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),10.77(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.35
–
7.26(m,2h),7.15
–
7.07(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),2.86(s,1h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),1.98
–
1.95(m,4h),0.74(d,j＝6.3hz,4h)。
[0112]
实施例3、本发明化合物c的制备
[0113]
反应式如下：
[0114][0115]
中间体14
[0116]
2-氰基-n-(4-(三氟甲基)苯基)乙酰胺
[0117][0118]
以合成中间体4的方法操作得1.94g黄色固体，收率：68.6％,m 1:229.2.中间体15
[0119]
4,6-二甲基-2-氧-1-(4-(三氟甲基)苯基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
[0120][0121]
以合成中间体5的方法操作得2.1g白色粉末，收率：82％,m 1:293.2.
[0122]
中间体16
[0123]
(e)-4-(2-(二甲基氨基)乙烯基)-6-甲基-2-氧-1-((4-(三氟甲基)苯基)-1,2-二氢吡啶-3-甲腈
[0124][0125]
以合成中间体6的方法操作得0.46g黄色粉末，收率：46.1％,m 1:348.2.
[0126]
中间体17
[0127]
8-羟基-3-甲基-2-(4-(三氟甲基)苯基)-2,7-萘啶-1(2h)-酮
[0128][0129]
以合成中间体7的方法操作得141mg类白色固体，收率：95.6％,m 1:321.2.
[0130]
中间体18
[0131]
8-氯-3-甲基-2-(4-(三氟甲基)苯基)-2,7-萘啶-1(2h)-酮
[0132][0133]
以合成中间体8的方法操作得103mg灰白色固体，收率：75％,m 1:339.2.
[0134]
化合物c：
[0135]
n-(4-(2,3-二甲基-4-((6-甲基-8-氧代-7-(4-(三氟甲基)苯基))-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0136][0137]
按照实施列1中的方法，以化合物18和化合物3为反应物制备得白色固体13mg，收率：24.4％,97.58％(uv254),m 1:600.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.49(s,1h),10.78(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.61(s,1h),7.44
–
7.36(m,2h),7.23
–
7.14(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),2.86(s,1h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),1.99
–
1.96(m,4h),0.75(d,j＝6.3hz,4h)。
[0138]
实施例4、本发明化合物d的制备
[0139]
反应式如下：
[0140][0141]
中间体19
[0142]
1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸甲酯
[0143][0144]
向单口瓶中加入4-氟基苯胺(0.5g,4.5mmol)，1-(甲氧羰基)环丙烷-1-羧酸(0.714g,4.95mmol)，二氯甲烷(10ml)，二异丙基乙基胺(1.75g,13.5mmol)，室温下搅拌至溶清，加入hatu(2.4g,6.3mmol)，室温搅拌14小时，反应液减压蒸出溶剂后用硅胶纯化(ea/pet＝1.1)得1.14g白色固体，收率：100％,m 1:238.2.
[0145]
中间体20
[0146]
1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-羧酸
[0147][0148]
向单口瓶中加入1-((4-氟苯基)氨基甲酰基)环丙烷-1-甲酸甲酯(0.5g,2.11mmol)，甲醇(18ml)，室温下搅拌至溶清，加入氢氧化钠(0.11g,2.74mmol)水溶液(3ml)，室温搅拌14小时，反应液减压蒸出甲醇，以1n盐酸调节ph至3，析出白色固体，过滤并用水淋洗至中性，烘干得0.34g白色固体，收率：72.3％,m 1:224.2.
[0149]
化合物d：
[0150]
n-(4-((2-(环丙烷甲酰胺基)吡啶-4-基)氧基)-2,3-二甲基苯基)-n-(4-氟苯基)环丙烷-1,1-二甲酰胺
[0151][0152]
向单口瓶中加入中间体3(20mg,0.067mmol)，中间体20(16mg,0.067mmol)，二氯甲烷(4ml)，二异丙基乙基胺(27mg,0.202mmol)，室温下搅拌至溶清，加入hatu(36mg,0.094mmol)，室温搅拌14小时，反应液减压蒸出溶剂后用反相制备色谱系统纯化得4mg白色固体，收率：11.8％,96.41％(uv214),m 1:503.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.83(s,1h),10.79(s,1h),10.61(s,1h),8.71(s,1h),8.28
–
8.07(m,2h),7.72(dd,j＝8.4,5.4hz,2h),7.30(t,j＝8.8hz,2h),6.96(d,j＝8.9hz,1h),6.59(dd,j＝5.7,2.4hz,1h),2.30(s,3h),2.07(s,3h),2.01
–
1.90(m,1h),1.67
–
1.51(m,4h)，0.76(d,j＝6.1hz,4h)。
[0153]
实施例5、本发明化合物e的制备
[0154]
反应式如下：
[0155][0156]
中间体21
[0157]
4-(4-氟苯基)-3-氧代丁酸乙酯
[0158][0159]
向单口瓶中加入丙二酸环(亚)异丙酯(2g,13.88mmol)，二氯甲烷(40ml)，三乙胺(2.8g,27.72mmol)，室温下搅拌至溶清，降温至0摄氏度，滴加4-氟苯乙酰氯(2.63g,15.24mmol)，自然升至室温搅拌2小时，倒入水中，以二氯甲烷萃取，合并萃取液加入1n的盐
酸搅拌，分液，有机相水洗至中性，加入无水硫酸镁干燥，过滤，滤液减压蒸出溶剂后加入乙醇(50ml)和对甲苯磺酸(0.48g,2.78mmol)，搅拌升温至回流反应2小时，减压蒸出溶剂，残余物用二氯甲烷溶解，饱和碳酸氢钠溶液洗涤，再用水洗至中性，有机相用硫酸镁干燥，过滤，滤液减压蒸出溶剂后用硅胶纯化(ea/pet＝1/3)得1.8g淡黄色油状物，收率：57.9％,m 1:225.2.
[0160]
中间体22
[0161]
5-(4-氟苯基)-4-氧-1,4-二氢吡啶-3-羧酸乙酯
[0162][0163]
向单口瓶中加入4-(4-氟苯基)-3-氧代丁酸乙酯(1g,4.46mmol)，二甲苯(15ml)，n,n-二甲基甲酰胺二甲基缩醛(1.17g,9.81mmol)，搅拌下升温至回流反应6小时，减压蒸除溶剂后加入乙醇(20ml)和乙酸铵(0.69g,8.93mmol)，搅拌下升温至60摄氏度反应14小时，减压蒸出溶剂后加入乙酸乙酯和水，分液，有机相水洗至中性用硫酸镁干燥，过滤，滤液减压蒸出溶剂后用硅胶纯化(ea/pet＝1/1)得0.48g白色固体，收率：41.4％,m 1:262.1.
[0164]
中间体23
[0165]
5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸
[0166][0167]
向单口瓶中加入5-(4-氟苯基)-4-氧-1,4-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(0.1g,0.383mmol)，甲醇(12ml)，室温下搅拌至溶清，加入氢氧化钠(0.034g,0.842mmol)水溶液(2ml)，50摄氏度搅拌4小时，反应液减压蒸出甲醇，以1n盐酸调节ph至3，析出白色固体，过滤并用水淋洗至中性，烘干得0.063g白色固体，收率：70.8％,m 1:234.2。
[0168]
化合物e：
[0169]
n-(4-((2-(环丙烷甲酰胺基)吡啶-4-基)氧基)-2,3-二甲基苯基)-5-(4-氟苯基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酰胺
[0170][0171]
向单口瓶中加入化合物3(52mg,0.172mmol)，中间体23(40mg,0.172mmol)，n,n-二甲基甲酰胺(2ml)，二异丙基乙基胺(67mg,0.515mmol)，室温下搅拌至溶清，加入hatu(98mg,0.257mmol)，室温搅拌14小时后用反相制备色谱系统纯化得37mg白色固体，收率：
42.1％,97.66％(uv214),m 1:513.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.84(s,1h),10.79(s,1h),8.63(d,j＝1.6hz,1h),8.18(dd,j＝13.2,7.3hz,2h),8.09(d,j＝1.7hz,1h),7.76
–
7.67(m,2h),7.58(d,j＝2.4hz,1h),7.34
–
7.23(m,2h),6.97(d,j＝8.9hz,1h),6.59(dd,j＝5.7,2.4hz,1h),2.90(s,1h),2.30(s,3h),2.07(s,3h),2.01
–
1.94(m,1h),0.81
–
0.70(m,4h)。
[0172]
实施例6、本发明化合物f的制备
[0173]
反应式如下：
[0174][0175]
中间体24
[0176]
5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸
[0177][0178]
向单口瓶中加入5-(4-氟苯基)-4-氧-1,4-二氢吡啶-3-羧酸乙酯(0.2g,0.766mmol)，n,n-二甲基甲酰胺(4ml)，室温下搅拌至溶清，加入氢化钠(62mg,1.531mmol，60％)，室温搅拌1小时，加入碘甲烷(0.218g,1.531mmol)搅拌14小时，反应液直接用反相制备色谱系统纯化得110mg白色固体，收率：58.1％,m 1:248.2。
[0179]
化合物f：
[0180]
n-(4-((2-(环丙烷甲酰胺基)吡啶-4-基)氧基)-2,3-二甲基苯基)-5-(4-氟苯基)-1-甲基-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酰胺
[0181][0182]
向单口瓶中加入化合物3(61mg,0.202mmol)，中间体24(50mg,0.202mmol)，n,n-二甲基甲酰胺(2ml)，二异丙基乙基胺(79mg,0.607mmol)，室温下搅拌至溶清，加入hatu(116mg,0.303mmol)，室温搅拌14小时后用反相制备色谱系统纯化得46mg白色固体，收率：43.2％,97.19％(uv214),m 1:527.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.83(s,1h),10.79(s,1h),8.69(s,1h),8.28
–
8.08(m,3h),7.73(dd,j＝8.4,5.4hz,2h),7.58(s,1h),7.30(t,j＝
8.8hz,2h),6.98(d,j＝8.9hz,1h),6.59(dd,j＝5.7,2.4hz,1h),3.93(s,3h),2.30(s,3h),2.07(s,3h),2.01
–
1.90(m,1h),0.76(d,j＝6.1hz,4h)。
[0183]
实施例7、本发明化合物g的制备
[0184]
反应式如下：
[0185][0186]
化合物g：
[0187]
n-(4-(4-(3-(2-(4-(4-氟苯基)乙酰基)硫脲基)-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0188][0189]
向单口瓶中加入硫氰酸钾(49mg,0.5mmol)，丙酮(2ml)，搅拌下滴加4-氟苯乙酰氯(86mg,0.5mmol)的丙酮(2ml)溶液，搅拌升温50摄氏度反应2小时后滴加中间体3(148mg,0.5mmol)的丙酮(4ml)溶液，50摄氏度反应7小时，减压蒸除丙酮后用反相制备色谱系统纯化得13mg类白色固体，收率：5.3％,97.69％(uv214),m 1:493.1。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.94(s,1h),10.97(s,1h),10.68(s,1h),8.74(s,1h),8.25
–
8.07(m,2h),7.73(dd,j＝8.4,5.4hz,2h),7.31(t,j＝8.8hz,2h),6.94(d,j＝8.9hz,1h),6.61(dd,j＝5.7,2.4hz,1h),3.91(s,2h),2.30(s,3h),2.07(s,3h),2.01
–
1.90(m,1h),0.76(d,j＝6.1hz,4h)。
[0190]
实施例8、本发明化合物b2的合成
[0191]
反应式如下：
[0192]
[0193]
中间体25
[0194]
n-(4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)乙酰胺
[0195][0196]
以合成中间体2的方法操作得3.8g黄色固体，收率：93.6％,m 1:302.2.
[0197]
中间体26
[0198]
n-(4-(4-氨基-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)乙酰胺
[0199][0200]
以合成中间体3的方法操作得2.9g白色粉末，收率：86.6％,m 1:272.2.
[0201]
化合物b2：
[0202]
n-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2,3-二甲基苯氧基吡啶-2-基)乙酰胺
[0203][0204]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物26为原料制备得白色固体13mg，收率：37.8％,98.01％(uv214),m 1:524.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),10.77(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.29
–
7.22(m,2h),7.18
–
7.00(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),2.01(s,3h),1.98(s,3h).
[0205]
实施例9、本发明化合物b3的合成
[0206]
反应式如下：
[0207][0208]
中间体27
[0209]
n-(4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)异丁酰胺
[0210][0211]
以合成中间体2的方法操作得3.8g黄色固体，收率：94.5％,m 1:330.2.
[0212]
中间体28
[0213]
n-(4-(4-氨基-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)异丁酰胺
[0214][0215]
以合成中间体3的方法操作得2.9g白色粉末，收率：81.7％,m 1:300.2.
[0216]
化合物b3：
[0217]
n-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2,3-二甲基苯氧基吡啶-2-基)异丁酰胺
[0218]
[0219]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物26为原料制备得白色固体13mg，收率：41.1％,97.02％(uv214),m 1:552.3。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),10.77(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.29
–
7.22(m,2h),7.18
–
7.00(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),2.20(s,3h),2.05(s,4h),2.01(s,3h),1.09(s,6h).
[0220]
实施例10、本发明化合物b4的合成
[0221]
反应式如下：
[0222][0223]
中间体29
[0224]
1-(4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)-3-甲基脲
[0225][0226]
向单口中加入4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-胺(0.5g,1.93mmol)，二氯甲烷(10ml),三乙胺(0.59g,5.79mmol)，搅拌下加入对硝基苯基氯甲酸酯(0.47g,2.31mmol)，室温下搅拌14小时，减压蒸除溶剂，加入甲苯(10ml),三乙胺(0.59g,5.79mmol)，甲胺盐酸盐(0.39g,5.79mmol)，搅拌下升温至80摄氏度密闭反应14小时，减压蒸除溶剂后，残余物用中压反相制备色谱纯化得0.18g白色固体
[0227]
收率：29.5％,m 1:317.2.
[0228]
中间体30
[0229]
1-(4-(4-氨基-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)-3-甲基脲
[0230]
[0231]
以合成中间体3的方法操作得0.11g白色粉末，收率：64.2％,m 1:287.2.
[0232]
化合物b4：
[0233]
1-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)-3-甲基脲
[0234][0235]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物30为原料制备得白色固体9mg，收率：20.8％,96.4％(uv214),m 1:539.3。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.51(s,1h),10.77(s,1h),8.22(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.29
–
7.22(m,2h),7.18
–
7.00(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),2.67(s,3h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),2.01(s,3h).
[0236]
实施例11、本发明化合物b5的合成
[0237]
反应式如下：
[0238][0239]
中间体31
[0240]
1-环丙基-3-(4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)脲
[0241][0242]
以合成中间体29的方法操作得0.21g白色固体，收率：21.6％,m 1:343.2.
[0243]
中间体32
[0244]
1-(4-(4-氨基-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)-3-环丙基脲
[0245][0246]
以合成中间体3的方法操作得0.15g白色粉末，收率：71.4％,m 1:313.2.
[0247]
化合物b5：
[0248]
1-环丙基-3-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)脲
[0249][0250]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物26为原料制备得白色固体14mg，收率：33.7％,95.71％(uv214),m 1:565.3。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),10.77(s,1h),8.31(d,j＝8.9hz,1h),8.19(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.29
–
7.22(m,2h),7.18
–
7.00(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),2.82(m,1h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),2.01(s,3h),0.77(d,j＝6.8hz,4h).
[0251]
实施例12、本发明化合物b6的合成
[0252]
反应式如下：
[0253][0254]
中间体33
[0255]
3-(4-(2,3-二甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)-1,1-二甲基脲
[0256][0257]
以合成中间体29的方法操作得0.18g白色固体，收率：27.9％,m 1:331.2.
[0258]
中间体34
[0259]
3-(4-(4-氨基-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)-1,1-二甲基脲
[0260][0261]
以合成中间体3的方法操作得0.11g白色粉末，收率：75.7％,m 1:301.2.
[0262]
化合物b6：
[0263]
3-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2,3-二甲基苯氧基)吡啶-2-基)-1,1-二甲基脲
[0264][0265]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物34为原料制备得白色固体15mg，收率：31.6％,97.04％(uv214),m 1:553.3。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.58(s,1h),10.79(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.63(s,1h),7.31
–
7.25(m,2h),7.21
–
7.04(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.79(d,j＝5.4hz,1h),6.59(s,2h),3.26(s,6h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),2.01(s,3h).
[0266]
实施例13、本发明化合物b7的合成
[0267]
反应式如下：
甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0283][0284]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物37为原料制备得白色固体9mg，收率：32.3％,97.21％(uv214),m 1:554.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),10.77(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.35
–
7.26(m,2h),7.15
–
7.07(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.76(m,1h),6.59(m,2h),2.86(s,1h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),1.97(m,1h),0.75(d,j＝6.3hz,4h).
[0285]
实施例14、本发明化合物b8的合成
[0286]
反应式如下：
[0287][0288]
中间体38
[0289]
5-(2-氟-3-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2-胺
[0290][0291]
以合成中间体1的方法操作得1.7g黄色固体，收率：79.2％,m 1:246.1.
[0292]
中间体39
[0293]
n-(4-(3-甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0294][0295]
以合成中间体2的方法操作得1.4g白色粉末，收率：82.7％,m 1:314.2.
[0296]
中间体40
[0297]
n-(4-(4-氨基-3-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0298][0299]
以合成中间体3的方法操作得0.82g白色粉末，收率：53.8％,m 1:284.2.
[0300]
化合物b8：
[0301]
n-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-3-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0302][0303]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物40为原料制备得白色固体21mg，收率：37.1％,96.02％(uv214),m 1:536.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.46(s,1h),10.77(s,1h),8.23(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.35
–
7.26(m,2h),7.15
–
7.07(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.76(s,1h),6.62(s,1h),6.59(s,2h),2.85(s,1h),2.21(s,3h),2.05(s,3h),1.97(m,1h),0.74(d,j＝6.3hz,4h).
[0304]
实施例15、本发明化合物b9的合成
[0305]
反应式如下：
[0306][0307]
中间体41
[0308]
4-(2-甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-胺
[0309][0310]
以合成中间体1的方法操作得1.42g黄色固体，收率：71.4％,m 1:246.1.
[0311]
中间体42
[0312]
n-(4-(2-甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0313][0314]
以合成中间体2的方法操作得1.27g白色粉末，收率：88.9％,m 1:314.2.
[0315]
中间体43
[0316]
n-(4-(4-氨基-2-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0317][0318]
以合成中间体3的方法操作得0.51g白色粉末，收率：51.7％,m 1:284.2.
[0319]
化合物b9：
[0320]
n-(4-(4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0321][0322]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物43为原料制备得白色固体17mg，收率：34.15％,97.82％(uv214),m 1:536.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.46(s,1h),10.77(s,1h),8.22(d,j＝8.9hz,1h),8.15(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.35
–
7.26(m,2h),7.15
–
7.07(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.82(s,1h),6.62(s,1h),6.59(s,2h),2.85(s,1h),2.21(s,3h),1.96(m,4h),0.74(d,j＝6.3hz,4h).
[0323]
实施例16、本发明化合物b10的合成
[0324]
反应式如下：
[0325][0326]
中间体44
[0327]
4-(2-氟-3-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2-胺
[0328][0329]
以合成中间体1的方法操作得1.36g黄色固体，收率：67.4％,m 1:264.1.
[0330]
中间体45
[0331]
n-(4-(3-氟-2-甲基-4-硝基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0332][0333]
以合成中间体2的方法操作得1.12g白色粉末，收率：83.4％,m 1:332.1.
[0334]
中间体46
[0335]
n-(4-(4-氨基-3-氟-2-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0336][0337]
以合成中间体3的方法操作得0.65g白色粉末，收率：41.3％,m 1:302.2.
[0338]
化合物b10：
[0339]
n-(4-(3-氟-4-((7-(4-氟苯基)-6-甲基-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-2-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0340][0341]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物46为原料制备得白色固体11mg，收率：25.1％,95.61％(uv214),m 1:554.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.47(s,1h),10.78(s,1h),8.23(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.61(s,1h),7.35
–
7.24(m,2h),7.15
–
7.06(m,2h),6.95(m,1h),6.76(m,1h),6.59(m,2h),2.86(s,1h),2.20(s,3h),1.95(m,4h),0.75(d,j＝6.3hz,4h).
[0342]
实施例17、本发明化合物b11的合成
[0343]
反应式如下：
[0344][0345]
中间体47
[0346]
6-(2-氯-3-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2-胺
[0347][0348]
以合成中间体1的方法操作得1.32g黄色固体，收率：68.5％,m 1:280.1.
[0349]
中间体48
[0350]
n-(4-(2-氯-3-甲基-4-硝基苯基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0351][0352]
以合成中间体2的方法操作得1.24g白色粉末，收率：89.2％,m 1:348.1.
[0353]
中间体49
[0354]
n-(4-(4-氨基-2-氯-3-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0355][0356]
以合成中间体3的方法操作得0.78g白色粉末，收率：42.1％,m 1:318.1.
[0357]
化合物b11：
[0358]
n-(4-(2-氯-4-((7-(4-氟苯基)-6-8-氧代-7,8-二氢-2,7-萘啶-1-基)氨基)-3-甲基苯氧基)吡啶-2-基)环丙烷甲酰胺
[0359][0360]
以实施列1中的方法以化合物13和化合物49为原料制备得白色固体7mg，收率：28.3％,97.69％(uv214),m 1:570.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ11.42(s,1h),10.77(s,1h),8.24(d,j＝8.9hz,1h),8.17(d,j＝5.4hz,1h),7.60(s,1h),7.35
–
7.26(m,2h),7.15
–
7.07(m,2h),6.95(d,j＝8.8hz,1h),6.78(s,1h),6.48(m,2h),2.86(s,1h),2.20(s,3h),2.05(s,3h),1.97(m,1h),0.76(d,j＝6.3hz,4h).
[0361]
实施例18、本发明化合物f2的合成
[0362]
反应式如下：
[0363][0364]
中间体50
[0365]
5-(4-氟苯基)-1-(2-羟乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-羧酸
[0366][0367]
以合成中间体24的方法操作得0.32g白色固体，收率：41.2％,m 1:278.1.
[0368]
化合物f2：
[0369]
n-(4-((2-(环丙烷甲酰胺基)吡啶-4-基)氧基)-2,3-二甲基苯基)-5-(4-氟苯基)-1-(2-羟乙基)-4-氧代-1,4-二氢吡啶-3-甲酰胺
[0370][0371]
以实施列6中的方法以化合物3和化合物50为原料制备得白色固体11mg，收率：21.7％,95.01％(uv214),m 1:557.2。1h nmr(400mhz,dmso-d6)δ12.83(s,1h),10.79(s,1h),8.69(s,1h),8.28
–
8.08(m,3h),7.73(dd,j＝8.4,5.4hz,2h),7.56(s,1h),7.30(t,j＝8.8hz,2h),6.98(d,j＝8.9hz,1h),6.59(dd,j＝5.7,2.4hz,1h),4.91(s,1h),3.77(m,2h),3.51(m,2h),2.30(s,3h),2.07(s,3h),2.01
–
1.90(m,1h),0.76(d,j＝6.1hz,4h).
[0372]
以下通过实验例说明本发明化合物的有益效果：
[0373]
实验例1、本发明化合物保护细胞程序性坏死实验
[0374]
1)实验材料
[0375]
dmem培养基购自gibco公司，青、链霉素购自hyclone公司，tnfα购自peprotech公司，smac mimetic和z-vad-fmk购自selleck公司，cck8购自medchem express公司。
[0376]
2)实验方法
[0377]
ht-29细胞(结肠癌细胞)采用dmem 10％fbs 青/链霉素培养基培养。实验时，收集处于对数生长期的ht-29细胞，以每孔特定数目(贴壁细胞一般为8
×
103cells/well)接种于96孔板中，在37℃、5％co2的细胞培养箱中培养过夜。次日，用培养基稀释待测化合物到相应浓度并加入到96孔板相应孔中，每个样品3个复孔，同时设置溶剂对照组和只含培养基的空白对照组，将加药后的细胞用tnfα/smac mimetic/z-vad-fmk联合诱导24h，再每孔加入10μl cck8溶液，并在细胞培养箱中孵育1-3h，随后用酶标仪在495nm波长下检测吸光度，并根据以下公式计算药物对细胞的坏死保护率：细胞坏死保护率＝[(x-c0)/(c-c0)]
×
100％
[0378]
其中，c、c0和x分别代表溶剂对照组、空白对照组和药物处理组的平均吸光度值。最后，使用graphpad prism 5.0软件拟合细胞生存率曲线并计算出待测化合物抑制细胞程序性坏死的ec
50
值。
[0379]
实验结果
[0380]
结果如表2所示，其中， 代表ec
50
《0.1μm， 代表1μm》ec
50
≧0.1μm， 代表ec
50
≧1μm。
[0381]
表2本发明化合物对ripk3激酶抑制活性和抑制细胞程序性坏死活性
[0382]
化合物编号ht-29(ec
50
)a
b c d e f g b2 b3 b4 b5 b6 b7 b8 b9 b10 b11 f2
[0383]
综上，本发明提供了一种新的化合物，对ripk3具有优异的抑制效果，可作为ripk3的抑制剂，抑制细胞程序性坏死，治疗细胞程序性坏死相关的炎症，和/或免疫性疾病，和/或神经退行性疾病，和/或肿瘤，具有重要的临床价值。