新的角膜组织及其制备方法与流程

技术特征：
1.一种制备透明且弯曲的基质细胞组织的方法，所述基质细胞组织具有至少50μm的最小厚度，所述方法包括：i)将基质细胞包封或截留在水凝胶中，其中，所述水凝胶包含细胞粘附基序；ii)将所述水凝胶转移到弯曲表面上；以及iii)在合适的细胞培养条件下将所述水凝胶保持在所述弯曲表面上至少24小时，以产生具有至少0.5的最小可见光透射率值的弯曲的基质细胞组织，其中所述弯曲表面具有约0.04至约0.5mm-1
的曲率。2.根据权利要求1所述的方法，其中，所述细胞粘附基序是细胞外基质蛋白序列或它们的片段或变体。3.根据权利要求2所述的方法，其中，细胞外基质蛋白选自由以下组成的组中：纤连蛋白、胶原蛋白、光蛋白聚糖、核心蛋白聚糖、层粘连蛋白、玻连蛋白、纤维蛋白原、弹性蛋白、二聚糖、肝素、肌腱蛋白和骨桥蛋白。4.根据权利要求3所述的方法，其中，所述细胞粘附基序为：a)纤连蛋白片段，包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：rgd(seq id no：1)、rgds(seq id no：5)、phsrn(seq id no：6)、ldvp(seq id no：7)、wqpprari(seq id no：8)、igd(seq id no：9)、redv(seq id no：10)和idap(seq id no：11)或它们的变体；b)胶原蛋白片段，包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：kttks(seq id no：2)、gtpgpqgiagqrgvv(seq id no：12)、groger(seq id no：13)、glkgen(seq id no：14)、gfoger(seq id no：15)和mnyysns(seq id no：16)或它们的变体；或c)光蛋白聚糖片段，包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：evtln(seq id no：17)、eldlsynklk(seq id no：18)和yealrvanevtln(seq id no：3)；或d)层粘连蛋白片段，包含选自以下的氨基酸序列或由其组成：yigsr(seq id no：19)，ikvav(seq id no：20)、ccrrikvavwlc(seq id no：21)和rgd。5.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述水凝胶具有约0.25至约0.50g/cm3的总凝胶密度。6.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述水凝胶具有约70％至约90％的凝胶水合度。7.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述水凝胶具有约0.5至约35
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106pa的凝胶刚度。8.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述水凝胶具有约0.1-12.0mm的厚度。9.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述水凝胶具有约0.07至约0.3g/cm3的胶原蛋白密度。10.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述水凝胶为薄层或盘的形式。11.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述细胞培养条件包括将所述水凝胶保留在细胞培养基中的所述弯曲表面上。12.根据权利要求11所述的方法，其中，所述细胞培养基是杜尔贝科改良伊格尔培养基(dmem)、ham’s f12或dmem-f12。13.根据权利要求11或12所述的方法，其中，所述细胞培养基是无血清的。
14.根据权利要求11至13中任一项所述的方法，其中，所述细胞培养基包含维甲酸。15.根据权利要求11至14中任一项所述的方法，其中，所述细胞培养基包含溶液中的kttks脂肽。16.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述弯曲表面是聚苯乙烯、聚乙烯、聚对苯二甲酸乙二醇酯、聚乳酸、聚碳酸酯、丙烯腈-丁二烯-苯乙烯、琼脂糖、水凝胶或玻璃表面，可选地其中所述玻璃表面是硼硅酸盐玻璃表面。17.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，在合适的细胞培养条件下将所述水凝胶保持在所述弯曲表面上至少4天。18.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述基质细胞是角膜基质细胞。19.根据权利要求18所述的方法，其中，所述角膜基质细胞是角膜成纤维细胞。20.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述基质细胞是人的。21.根据权利要求2至20中任一项所述的方法，其中，所述基质细胞来自第一物种，并且所述细胞外基质蛋白序列来自第二物种。22.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，包含细胞粘附基序的所述水凝胶是通过将所述水凝胶挤出到所述弯曲表面上产生的，可选地其中使用3d生物打印产生所述水凝胶。23.根据前述权利要求中任一项所述的方法，其中，所述基质细胞组织随后被脱细胞。24.一种基质细胞组织，通过根据权利要求21或22所述的方法可获得或获得。25.一种脱细胞的组织，通过根据权利要求23所述的方法可获得或获得。26.一种基质细胞组织，具有至少50μm的最小厚度、至少0.5的最小可见光透射率值以及约0.04至约0.5mm-1
的曲率，其中，所述组织包含：a)来自第一物种的基质细胞，以及b)痕量的：(i)来自第二物种的细胞外基质蛋白序列或它们的片段或变体；或(ii)合成的细胞外基质蛋白序列或它们的片段或变体。27.根据权利要求26所述的基质细胞组织，其中，所述第一物种是人，并且所述第二物种是非人。28.根据权利要求26或27所述的基质细胞组织，其中，基质细胞是角膜基质细胞。29.根据权利要求28所述的基质细胞组织，其中，所述角膜基质细胞是角膜成纤维细胞。30.一种脱细胞的组织，具有至少50μm的最小厚度、至少0.5的最小可见光透射率值以及约0.04至约0.5mm-1
的曲率，其中，所述组织包含：a)来自第一物种的细胞外基质蛋白序列，以及b)痕量的：(i)来自第二物种的细胞外基质蛋白序列或它们的片段或变体；或(ii)合成的细胞外基质蛋白序列或它们的片段或变体。31.根据权利要求30所述的脱细胞的组织，其中，所述第一物种是人并且所述第二物种是非人。32.根据权利要求26至31中任一项所述的组织，其中，所述组织具有约0.1至12.0mm的
厚度。33.根据权利要求26至32中任一项所述的组织，其中，来自第二物种的细胞外基质蛋白序列或合成的细胞外基质蛋白是胶原蛋白。34.根据权利要求24至33中任一项所述的组织，用于在疗法中使用。35.根据权利要求24至33中任一项所述的组织，用于在角膜移植术中使用。

技术总结
本发明涉及用于制备透明且弯曲的基质细胞组织及其脱细胞形式的新方法。还提供了新的组织。组织。组织。


技术研发人员：切
受保护的技术使用者：3D细胞生物有限公司
技术研发日：2021.01.29
技术公布日：2022/8/12