一种高效制备交链孢酚的方法

技术特征：
1.一种高效制备交链孢酚的方法，其特征在于该方法具体包括如下步骤:(1)将互隔交链孢菌接种在pda培养基上，20-40℃黑暗条件下活化培养3-10d；(2)用无菌牙签从步骤(1)得到的pda培养基菌丝边缘上取小块接种于新的培养基进行培养，培养的条件为：
①
pda或pdb培养基，培养基初始ph 4-7，在20-40℃黑暗条件下培养5-10d；或者是：
②
大米或玉米培养基在20-40℃黑暗条件下培养20-40d；(3)将步骤(2)得到的培养基转移到锥形瓶中，加入乙腈，在旋转涡旋仪以100-500rpm/min的速度涡旋1-5min，然后超声0.5-3h，重复此步骤2-5次，收集提取液；(4)将步骤(3)得到的提取液用纱布过滤到旋蒸瓶中，旋转蒸发仪30-60℃下旋蒸，直至液体全部蒸干；(5)将蒸干后的固体用纯水复溶转移到分液漏斗中，加入乙酸乙酯，乙酸乙酯与水的比例为1：0.5-3，v/v，剧烈摇晃20-100次左右，静置等待液体分层，收集上层溶液，重复此步骤2-5次，将萃取后收集的液体再次旋蒸浓缩至干，得到固体物质；(6)将步骤(5)收集的固体物质经甲醇或乙腈溶解后过0.22μm滤膜，使用中压制备液相仪，依次进行两次中压制备，获得淡黄色固体；(7)将(6)获得的淡黄色固体通过甲醇、乙腈或丙酮进行重结晶，吸去上清液，重复0-10次，直到上清液澄清透明得到结晶后的交链孢酚。2.根据权利要求1所述的高效制备交链孢酚的方法，其中两次中压制备的条件为：一次制备条件：unitary c
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制备色谱柱，10mm
×
250mm，5μm或其它等效柱；流动相a为0.1-1％的甲酸-水或者0.1-1％的乙酸-水(v/v)，b为甲醇或乙腈，流速为5-30ml/min，检测波长为256nm，进样量为1ml，收集10～25min馏分液，将馏分液30-60℃旋蒸浓缩至干，再次复溶后进行二次制备；二次制备条件：unitary c
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制备色谱柱，10mm
×
250mm，5μm或其它等效柱；流动相a为0.1-1％的甲酸-水或者0.1-1％的乙酸-水，b为甲醇或乙腈，流速为5-30ml/min，检测波长为256nm，进样量为1ml，收集10～25min馏分液，30-60℃水浴旋蒸后置于冷冻真空干燥机干燥，获得淡黄色固体。3.根据权利要求1或2任一项所述的高效制备交链孢酚的方法，其特征在于该方法包括如下步骤：(1)将互隔交链孢菌接种在pda培养基上，28℃黑暗条件下活化培养5d；(2)用无菌牙签从步骤(1)得到的pda培养基菌丝边缘上取小块接种于新的培养基进行培养，培养的条件为：pda培养基，培养基初始ph 6.4，在28℃黑暗条件下培养8d；(3)将步骤(2)得到的培养基转移到锥形瓶中，加入乙腈，在旋转涡旋仪以200rpm/min的速度涡旋2min，然后超声1h，重复此步骤3次，收集提取液；(4)将步骤(3)得到的提取液用纱布过滤到旋蒸瓶中，旋转蒸发仪50℃下旋蒸，直至液体全部蒸干；(5)将蒸干后的固体用纯水复溶转移到分液漏斗中，加入等体积的乙酸乙酯，剧烈摇晃，静置等待液体分层，收集上层溶液，重复此步骤2-5次，将萃取后收集的液体再次旋蒸浓
缩至干，得到固体物质；(6)将步骤(5)收集的固体物质经甲醇或乙腈溶解后过0.22μm滤膜，使用中压制备液相仪，依次进行两次中压制备，获得淡黄色固体；一次制备条件：unitary c
18
制备色谱柱，10mm
×
250mm，5μm；流动相a为0.1％(v/v)的甲酸-水，b为甲醇，流速为20ml/min，检测波长为256nm，进样量为1ml，收集15～17.5min馏分液，将馏分液50℃旋蒸浓缩至干，再次复溶后进行二次制备；二次制备条件：unitary c
18
制备色谱柱，10mm
×
250mm，5μm；流动相a为0.1％(v/v)的甲酸-水，b为甲醇，流速为20ml/min，检测波长为256nm，进样量为1ml，收集18.4～19.7min馏分液，50℃水浴旋蒸后置于冷冻真空干燥机干燥，获得淡黄色固体；(7)将(6)获得的淡黄色固体通过甲醇、乙腈或丙酮进行重结晶，吸去上清液，重复2-5次，直到上清液澄清透明得到结晶后的交链孢酚。

技术总结
本发明提供了一种高效制备交链孢酚的方法，该方法包括如下步骤：将互隔交链孢菌接种在PDA培养基上，黑暗条件下活化；取小块接种于新的培养基进行培养；在旋转涡旋仪上涡旋，收集提取液；提取液过滤、蒸干；乙酸乙酯提取、蒸干；两次中压制备；重结晶。本发明的高效制备交链孢酚的方法，简化了提取净化步骤，保护色谱柱，极大的提高了制备效率的同时显著降低成本。通过本发明的方法制备得到的交链孢酚产量高、纯度高，可作为标准品应用于食品中交链孢酚的检测、防控及其毒理学研究。防控及其毒理学研究。防控及其毒理学研究。


技术研发人员：韩铮 孟佳佳 赵志辉 郭文博 聂冬霞 曹浩杰
受保护的技术使用者：上海市农业科学院
技术研发日：2022.04.18
技术公布日：2022/8/9