一种便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶的制作方法

1.本实用新型涉及贴壁细胞培养设备技术领域，尤其涉及一种便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶。


背景技术：

2.贴壁细胞的生长必须有可以贴附的支持物表面，细胞依靠自身分泌的或培养基中提供的贴附因子才能在该表面上生长、繁殖。目前广泛使用的贴壁细胞培养瓶其培养面均为二维平面，培养空间有限，细胞扩增数量存在一定的限制性；再者，在对贴壁细胞的培养过程中，需要观察记录细胞的生长速度并估计细胞培养瓶内的细胞数量，目前常用的细胞计数方法为将贴壁细胞消化并悬浮后才能进行计数，其操作繁琐，且消化过程会对细胞生长造成一定影响，其可能存在计数不准确的问题。


技术实现要素：

3.本实用新型的目的是针对现有技术中的不足，提供一种便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶，其通过设置波形板的三维结构，有效增加了细胞培养空间及单瓶细胞培养数量以降低细胞培养成本，通过设置进液口和出液口可自动进行换液操作，提高细胞培养效率；还可嵌入深色观察板和/或取样网格，以实现实时观察细胞的生长情况并进行贴壁细胞的计数。
4.为实现上述目的，本实用新型采用如下技术方案：
5.本实用新型提供一种便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶，包括可相互盖合的瓶身和瓶盖，所述瓶盖具有斜颈，所述瓶身具有梯形部和矩形部，所述瓶身的下板面上设置波形底板，所述波形底板的轴向中心线垂直于所述瓶盖，所述瓶盖的斜颈的底部侧面朝下设置进液口，所述瓶身的瓶底朝外设置出液口，所述瓶身的瓶底内侧设置出液通道。
6.为了进一步优化上述技术方案，本实用新型采取的技术措施还包括：
7.进一步地，所述瓶盖的上表面设置通气孔，所述通气孔采用本领域常规形式。
8.进一步地，所述进液口和出液口均设置密封塞；其中，所述进液口通过管路连接培养液存放箱和输送泵连通，所述出液口通过管路与废液箱连通。
9.进一步地，所述波形底板的波谷处的标高大于所述下板面顶部的标高，所述出液通道的底部标高小于所述波谷处的标高，所述出液口靠近所述出液通道的底部设置(尽量贴近底部但不影响其结构强度)。优选，所述波形底板的波谷处的标高比下板面顶部的标高高0.5～1 mm，更优选1mm；所述波形底板的波峰处的标高比下板面顶部的标高高1～5mm，更优选4 mm；所述波峰处与所述波谷处之间的距离为1～7mm，更优选5mm。
10.进一步地，所述出液通道的底部标高低于所述下板面底部的标高，所述梯形部的下板面底部外侧设置第一夹层腔，所述矩形部的下板面底部外侧设置第二夹层腔，所述第一夹层腔和第二夹层腔的底部标高均与所述出液通道的底部标高相同。优选，所述出液通道的底部标高比所述下板面底部的标高矮2～5mm，更优选4mm；所述第一夹层腔和第二夹层
腔的厚度为2～5mm，更优选4mm。
11.进一步地，所述瓶身、波形底板、第一夹层腔、第二夹层腔均为透明结构，且为一体成型结构，所述瓶身的下板面的厚度为上板面厚度的1.2～1.5倍。
12.进一步地，所述第一夹层腔内可插入深色观察板，以实时采用肉眼观察细胞的生长速度。优选，上述深色观察板的截面形状为矩形，其长度等于瓶身梯形部的长底边的长度，其宽度等于或略小于瓶身梯形部的宽度。
13.进一步地，所述第二夹层腔内可插入取样网格，所述取样网格上设置计数区。优选，所述取样网格的截面为与瓶身矩形部相匹配的矩形，但其宽度略大于所述瓶身矩形部的宽度，所述取样网格上整体绘制浅色网格线，其上设置方形计数区，所述方形计数区为深色网格线。
14.进一步地，所述计数区包括第一计数区和第二计数区，所述第一计数区用于所述波形底板处的细胞计数，所述第二计数区用于所述出液通道处的细胞计数。
15.进一步地，所述第一计数区的数量为4～10个，所述第二计数区的数量为1～3个，所述第二计数区的尺寸小于所述第一计数区。优选，所述第一计数区为边长1.2～1.6mm的正方框，等分为16个边长为0.3～0.4mm的单元网格；所述第二计数区为边长0.6～0.8mm的正方框，等分为4个边长为0.3～0.4mm的单元网格。
16.进一步地，所述瓶盖外侧固定标签夹层腔，所述标签夹层腔内可插入具有细胞培养信息的标签纸。
17.进一步地，所述瓶身的梯形部在靠近所述斜颈处的内侧壁上设置倾斜向下的导流板，所述导流板上均匀布置至少2个导流孔。优选，所述导流板的斜率大于所述瓶盖的斜颈斜率；所述导流孔为梯形导流孔。
18.本实用新型采用以上技术方案，与现有技术相比，具有如下技术效果：
19.本实用新型所述的便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶，其在瓶身的下板面上设置波形底板，以增加细胞的培养空间和细胞的培养数量，一定程度上降低了细胞的培养成本；其在斜颈处设置朝下的进液口和在瓶底设置朝外的出液口以实现细胞的自动换液操作，进液口的朝向及导流板的辅助降低了液体的下降速度且有利于液体在波形板的均匀分布，从而减少了其冲击对贴壁细胞的影响，提高细胞培养效率；还在瓶身的下板面底部设置可分别插入深色观察板和取样网格的夹层腔，以实时观察细胞的生长速度并对贴壁细胞进行准确计数，其简化了细胞的计数流程，提高了实验的效率。
附图说明
20.此处所说明的附图用来提供对本实用新型的进一步理解，构成本实用新型的一部分，本实用新型的示意性实施例及其说明用于解释本实用新型，并不构成对本实用新型的不当限定。在附图中：
21.图1为本实用新型一较佳实施例中便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶的结构示意图。
22.图2为本实用新型一较佳实施例中多功能培养瓶的取样网格的示意图。
23.图3为本实用新型一较佳实施例中多功能培养瓶的导流板的结构示意图。
24.其中，图中的附图标记为：1-瓶身；2-瓶盖；3-波形底板；4-进液口；5-第一夹层腔；6‑ꢀ
第二夹层腔；7-标签夹层腔；8-出液通道；9-出液口；10-取样网格；11-第一计数区；12-第二计数区；13-导流板；14-导流孔。
具体实施方式
25.下面将结合本实用新型实施例中的附图，对本实用新型实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述，显然，所描述的实施例仅仅是本实用新型一部分实施例，而不是全部的实施例。基于本实用新型中的实施例，本领域普通技术人员在没有作出创造性劳动的前提下所获得的所有其他实施例，都属于本实用新型保护的范围。除非另有定义或说明，本实用新型中所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。除非另有定义或说明，下述实施例中的各部件及其连接方式均采用本领域常规方式。
26.在本实用新型中提及“实施例”意味着，结合实施例描述的特定特征、结构或特性可以包含在本实用新型的至少一个实施例中。在说明书中的各个位置出现该短语并不一定均是指相同的实施例，也不是与其它实施例互斥的独立的或备选的实施例。本领域普通技术人员显式地和隐式地理解的是，本实用新型所描述的实施例在不冲突的情况下，可以与其它实施例相结合。下面结合附图和具体实施例对本实用新型作进一步说明，但不作为本实用新型的限定。
27.实施例1
28.本实施例为一较佳结构的便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶，如图1所示，上述多功能培养瓶，包括可相互盖合的瓶身1和瓶盖2，瓶盖2具有斜颈以利于首次将培养液和细胞注入培养瓶中，且瓶盖2的上表面设置常规形式的通气孔，瓶身1具有梯形部和矩形部。上述瓶身1的下板面上设置波形底板3，波形底板3的轴向中心线垂直于瓶盖2，其波形形状及朝向设置可对培养液进行较好的引流，上述瓶盖2的斜颈的底部侧面朝下设置进液口4，瓶身1的瓶底朝外设置出液口9，瓶身1的瓶底内侧设置出液通道8，上述进液口4和出液口9 均设置密封塞，在使用时进液口4通过管路连接培养液存放箱和输送泵连通，出液口9通过管路与废液箱连通。进液口4和出液通道8、出液口9的相对设置有利于进行培养液的整体范围上的自动连续更换。
29.在一较佳实施例中，上述波形底板3的波谷处的标高大于下板面顶部的标高，出液通道 8的底部标高小于波谷处的标高，出液口9靠近出液通道8的底部设置，具体地，波形底板的波谷处的标高比下板面顶部的标高高1mm，波形底板的波峰处的标高比下板面顶部的标高高4mm，波峰处与波谷处之间的距离为5mm。在一更佳的实施例中，上述出液通道8的底部标高低于下板面底部的标高，瓶身1梯形部的下板面底部外侧设置第一夹层腔5，瓶身1 矩形部的下板面底部外侧设置第二夹层腔6，第一夹层腔5和第二夹层腔6的底部标高均与出液通道8的底部标高相同，具体地，出液通道的底部标高比下板面底部的标高矮4mm，第一夹层腔和第二夹层腔的厚度为4mm。上述尺寸的限定使得整体培养瓶可水平放置至操作台面上，有效保证细胞的顺利贴壁，且具有一定高度落差的波形底板3和出液通道8使得换液更加顺畅稳定，以利于贴壁细胞的培养。
30.在一较佳实施例中，上述瓶身1、波形底板3、第一夹层腔5、第二夹层腔6均为透明结构，且为一体成型结构，瓶身1的下板面的厚度为上板面的厚度的1.3倍以利于支撑培养液的重量，整体的透明结构有利于光线透过，使其计数时在显微镜下观察更清晰。
31.在一较佳实施例中，上述第一夹层腔5内可插入深色观察板以实时采用肉眼观察细胞的生长速度，上述深色观察板的截面形状为矩形，其长度等于瓶身梯形部的长底边的长度，其宽度等于或略小于瓶身梯形部的宽度，以利于深色观察板的取放；上述第二夹层腔6内可插入如图2所示的取样网格10，取样网格10上设置计数区，取样网格的截面为与瓶身1矩形部相匹配的矩形，但其宽度略大于所述瓶身矩形部的宽度，以利于取样网格10的取放；上述取样网格10上整体绘制浅色网格线，其上设置方形计数区，上述方形计数区为深色网格线，以在采用显微镜观察时快速找到计数区，利于对细胞进行计数。
32.在一较佳实施例中，如图2所示，上述计数区包括第一计数区11和第二计数区12，第一计数区11用于波形底板3处的细胞计数，第二计数区12用于出液通道8处的细胞计数；第一计数区11的数量为6个，第二计数区12的数量为1个，上述第二计数区12的尺寸小于第一计数区11的尺寸，具体为：第一计数区11为边长1.6mm的正方框，等分为16个边长为0.4mm的单元网格，第二计数区12为边长0.8mm的正方框，等分为4个边长为0.4mm 的单元网格，上述第一计数区11一排设置2个，各排之间错开设置，以使得计数区域既包括波峰处，也包括波谷处。根据上述计数区统计的细胞数均值及整体培养面积进行细胞的计数换算。
33.在一较佳实施例中，上述瓶盖2外侧固定标签夹层腔7，标签夹层腔7内可插入具有细胞培养信息的标签纸，以利于操作者对贴壁细胞的培养种类及培养方式有足够的了解，防止出现误操作现象。
34.在一较佳实施例中，上述瓶身1的梯形部在靠近斜颈处的内侧壁上设置倾斜向下的导流板13，导流板13上均匀布置4个导流孔14，上述导流板13的斜率大于瓶盖2的斜颈斜率，导流孔14为梯形导流孔，其采用1个、2个、1个间隔分布设置，以进一步降低培养液更换时对贴壁细胞的冲击力，尽量不对的细胞生长产生影响。
35.上述一种较佳实施例中的便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶的操作流程简述如下：将瓶盖2旋开，加入一定量的培养基和贴壁细胞，将培养瓶瓶身1水平放倒、下板面朝下培养，间隔一段时间，插入深色观察卡以实时观察细胞的生长速度，并通过进液口4和出液口9定期对培养液进行自动更换，当细胞贴壁生长达到所需时间且通过深色观察卡观察到需要对细胞进行计数时，插入取样网格10，将培养瓶放在显微镜工作台上通过采用合适的目镜和物镜调至可以清晰找到相应的计数区以进行细胞计数，根据计数区统计的细胞数均值及整体培养面积以计算贴壁细胞的总数。
36.由上述实施例可知，本实用新型所述的便于对贴壁细胞计数的多功能培养瓶设置的波形底板，可增加细胞的培养空间和细胞的培养数量，降低了细胞的培养成本；其相对设置的进液口和出液口可实现细胞的自动平稳换液操作，使得换液过程尽量不影响贴壁细胞的生长，提高细胞培养效率；还可设置分别插入深色观察板和取样网格的夹层腔，以实时观察细胞的生长速度并对贴壁细胞进行准确计数。
37.以上所述实施例的各技术特征可以进行任意的组合，为使描述简洁，未对上述实施例中的各个技术特征所有可能的组合都进行描述，然而，只要这些技术特征的组合不存在矛盾，都应当认为是本说明书记载的范围。
38.以上所述实施例仅表达了本实用新型的几种实施方式，其描述较为具体和详细，但并不能因此而理解为对实用新型专利范围的限制。应当指出的是，对于本领域的普通技术人员来说，在不脱离本实用新型构思的前提下，还可以做出若干变形和改进，这些都属于
本实用新型的保护范围。因此，本实用新型专利的保护范围应以所附权利要求为准。