具有STAT3反义寡核苷酸的细胞外囊泡的制作方法

技术特征：
1.一种包含反义寡核苷酸(aso)的细胞外囊泡，所述反义寡核苷酸(aso)为拮抗剂并且包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与stat3转录物(seq id no:1或seq id no:3)内的核酸序列互补。2.如权利要求1所述的细胞外囊泡，其中所述aso不是taagctgataattcaactca(seq id no:5)。3.如权利要求1或2所述的细胞外囊泡，所述细胞外囊泡靶向巨噬细胞。4.如权利要求1至3中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与对应于seq id no:1的stat3转录物的核苷酸1至56982、对应于seq id no:1的stat3转录物的核苷酸57003至75171、对应于seq id no:3的stat3转录物的核苷酸1至1287或对应于seq id no:3的stat3转录物的核苷酸1306至2787内的核酸序列互补。5.如权利要求4所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与所述stat3转录物内的所述核酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％互补。6.如权利要求1至5中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso能够降低人细胞(例如，hek293细胞)中的stat3蛋白表达，其中所述人细胞表达所述stat3蛋白。7.如权利要求6所述的细胞外囊泡，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的stat3蛋白表达相比，所述stat3蛋白表达降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。8.如权利要求4至7中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso能够降低人细胞(例如，hek293细胞)中的stat3 mrna的水平，其中所述人细胞表达所述stat3 mrna。9.如权利要求8所述的细胞外囊泡，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的所述stat3 mrna的水平相比，stat3 mrna的所述水平降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。10.如权利要求1至9中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso是间隙聚体、混合聚体或全聚体。11.如权利要求1至10中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含一种或多种核苷类似物。12.如权利要求11所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括2'-o-烷基-rna；2'-o-甲基rna(2'-ome)；2'-烷氧基-rna；2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)；2'-氨基-dna；2'-氟-rna；2'-氟-dna；阿拉伯核酸(ana)；2'-氟-ana；或双环核苷类似物。13.如权利要求11或12所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或多者是糖修饰的核苷。14.如权利要求13所述的细胞外囊泡，其中所述糖修饰的核苷是增强亲和力的2'糖修饰的核苷。15.如权利要求11至14中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括包含双环糖的核苷。16.如权利要求11至14中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述核苷类似物中的一者或
多者包括lna。17.如权利要求11至16中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述核苷酸类似物中的一者或多者选自由以下组成的组：限制性乙基核苷(cet)、2',4'-限制性2'-o-甲氧基乙基(cmoe)、α-l-lna、β-d-lna、2'-o,4'-c-亚乙基-桥联核酸(ena)、氨基-lna、氧基-lna、硫代-lna以及它们的任何组合。18.如权利要求1至17中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含一个或多个5'-甲基-胞嘧啶核碱基。19.如权利要求10至18中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与所述stat3转录物的(i)5'非翻译区(utr)；(ii)编码区；或(iii)3'utr内的核酸序列互补。20.如权利要求1至19中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso中的所述连续核苷酸序列与包含(i)seq id no:3的核苷酸151
–
745；(ii)seq id no:3的核苷酸642-1331；(iii)seq id no:3的核苷酸1031-1704；(iv)seq id no:3的核苷酸1521
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2335；(v)seq id no:3的2062
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2776；(vi)seq id no:3的核苷酸251
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645；(vii)seq id no:3的核苷酸742-1231；(viii)seq id no:3的核苷酸1131-1604；(ix)seq id no:3的核苷酸1621
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2235；(x)seq id no:3的2162
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2676；(xi)seq id no:3的核苷酸301-595；(xii)seq id no:3的核苷酸792-1181；(xiii)seq id no:3的核苷酸1181-1554；(xiv)seq id no:3的核苷酸1671-2185；(xv)seq id no:3的2212-2626；(xvi)seq id no:3的核苷酸341-555；(xvii)seq id no:3的核苷酸832-1141；(xviii)seq id no:3的核苷酸1221-1514；(xix)seq id no:3的核苷酸1711-2145；或(xx)seq id no:3的2252-2586的核酸序列互补。21.如权利要求1至20中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与(i)seq id no:3的核苷酸351-545；(ii)seq id no:3的核苷酸842-1131；(iii)seq id no:3的核苷酸1231-1504；(iv)seq id no:3的核苷酸1721-2135；或(v)seq id no:3的2262-2576内的核酸序列互补。22.如权利要求1至21中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列包含与选自图1中的序列的序列互补的核苷酸序列。23.如权利要求10至22中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列与所述stat3转录物内的核苷酸序列完全互补。24.如权利要求13至23中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso包含选自seq id no:100-199的核苷酸序列，具有一个或两个错配。25.如权利要求1至24中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso具有选自由图1中的设计组成的组的设计，其中大写字母是糖修饰的核苷，并且小写字母是dna。26.如权利要求1至25中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述aso的长度是14至20个核苷酸。27.如权利要求10至26中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述连续核苷酸序列包含一个或多个经修饰的核苷间键联。28.如权利要求27所述的细胞外囊泡，其中所述一个或多个经修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯键联。29.如权利要求27或28所述的细胞外囊泡，其中至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的核苷间键联经修饰。
30.如权利要求29所述的细胞外囊泡，其中所述aso中的所述核苷间键联中的每一者是硫代磷酸酯键联。31.如权利要求1至30中任一项所述的细胞外囊泡，所述细胞外囊泡还包含锚定部分。32.如权利要求31所述的细胞外囊泡，其中所述stat3拮抗剂连接至所述锚定部分。33.如权利要求1至32中任一项所述的细胞外囊泡，所述细胞外囊泡还包含外源靶向部分。34.如权利要求33所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含肽、抗体或其抗原结合片段、化学化合物或它们的任何组合。35.如权利要求33或34所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含肽。36.如权利要求33至35中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含微蛋白、设计的锚蛋白重复蛋白(darpin)、抗运载蛋白、adnectin、适体、肽模拟物分子、受体的天然配体、骆驼科动物纳米抗体或它们的任何组合。37.如权利要求33至36中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分包含全长抗体、单结构域抗体、仅重链抗体(vhh)、单链抗体、仅鲨鱼重链抗体(vnar)、scfv、fv、fab、fab'、f(ab')2或它们的任何组合。38.如权利要求37所述的细胞外囊泡，其中所述抗体是单链抗体。39.如权利要求33至36中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分使外泌体靶向肝脏、心脏、肺、脑、肾脏、中枢神经系统、周围神经系统、肌肉、骨或它们的任何组合。40.如权利要求33至39中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分使所述外泌体靶向肿瘤细胞、树突细胞、t细胞、b细胞、巨噬细胞、神经元、肝细胞、造血干细胞或它们的任何组合。41.如权利要求33至40中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述外源靶向部分结合至cd33或其片段。42.如权利要求33至41中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述ev包含将所述外源靶向部分连接至所述ev的支架部分。43.如权利要求31至42中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分是支架x。44.如权利要求31至42中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分是支架y。45.如权利要求43所述的细胞外囊泡，其中所述支架x是能够将所述stat3拮抗剂锚定在所述ev的腔表面上和/或所述ev的外表面上的支架蛋白。46.如权利要求43或45所述的细胞外囊泡，其中所述支架x选自由以下组成的组：前列腺素f2受体负调控因子(ptgfrn蛋白)；basigin(bsg蛋白)；免疫球蛋白超家族成员2(igsf2蛋白)；免疫球蛋白超家族成员3(igsf3蛋白)；免疫球蛋白超家族成员8(igsf8蛋白)；整联蛋白β-1(itgb1蛋白)；整联蛋白α-4(itga4蛋白)；4f2细胞表面抗原重链(slc3a2蛋白)；一类atp转运蛋白(atp1a1、atp1a2、atp1a3、atp1a4、atp1b3、atp2b1、atp2b2、atp2b3、atp2b4蛋白)；它们的功能片段；以及它们的任何组合。47.如权利要求31至46中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分是ptgfrn蛋白或其功能片段。
48.如权利要求31至47中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分包含如seq id no:302中列出的氨基酸序列。49.如权利要求31至48中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分和/或所述支架部分包含与seq id no:301至少50％、至少60％、至少70％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或约100％同一的氨基酸序列。50.如权利要求44所述的细胞外囊泡，其中所述支架y是能够将所述stat3拮抗剂锚定在所述ev的腔表面上和/或所述ev的外表面上的支架蛋白。51.如权利要求44或50所述的细胞外囊泡，其中所述支架y选自由以下组成的组：富含肉豆蔻酰化丙氨酸的蛋白激酶c底物(marcks蛋白)、富含肉豆蔻酰化丙氨酸的蛋白激酶c底物样1(marcksl1蛋白)、脑酸溶性蛋白1(basp1蛋白)、它们的功能片段以及它们的任何组合。52.如权利要求44、50和51中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y是basp1蛋白或其功能片段。53.如权利要求44和50至52中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y包含n末端结构域(nd)和效应结构域(ed)，其中所述nd和/或所述ed与所述ev的所述腔表面缔合。54.如权利要求53所述的细胞外囊泡，其中所述nd通过肉豆蔻酰化与所述外泌体的所述腔表面缔合。55.如权利要求53或54所述的细胞外囊泡，其中所述ed通过离子相互作用与所述外泌体的所述腔表面缔合。56.如权利要求53至55中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述ed包含(i)碱性氨基酸或(ii)按顺序的两个或更多个碱性氨基酸，其中所述碱性氨基酸选自由以下组成的组：lys、arg、his以及它们的任何组合。57.如权利要求56所述的细胞外囊泡，其中所述碱性氨基酸是(lys)n，其中n是介于1与10之间的整数。58.如权利要求53至57中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述ed包含lys(k)、kk、kkk、kkkk(seq id no:405)、kkkkk(seq id no:406)、arg(r)、rr、rrr、rrrr(seq id no:407)、rrrrr(seq id no:408)、kr、rk、kkr、krk、rkk、krr、rrk、(k/r)(k/r)(k/r)(k/r)(seq id no:409)、(k/r)(k/r)(k/r)(k/r)(k/r)(seq id no:410)或它们的任何组合。59.如权利要求53至58中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含如g:x2:x3:x4:x5:x6中列出的氨基酸序列，其中g表示gly；其中“:”表示肽键，其中所述x2至所述x6中的每一者独立地是氨基酸，并且其中所述x6包含碱性氨基酸。60.如权利要求59所述的细胞外囊泡，其中：(i)所述x2选自由以下组成的组：pro、gly、ala和ser；(ii)所述x4选自由以下组成的组：pro、gly、ala、ser、val、ile、leu、phe、trp、tyr、gln和met；(iii)所述x5选自由以下组成的组：pro、gly、ala和ser；(iv)所述x6选自由以下组成的组：lys、arg和his；或(v)(i)-(iv)的任何组合。61.如权利要求53至60中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含g:x2:x3:x4:x5:
x6的氨基酸序列，其中(i)g代表gly；(ii)“:”表示肽键；(iii)所述x2是选自由以下组成的组的氨基酸：pro、gly、ala和ser；(iv)所述x3是氨基酸；(v)所述x4是选自由以下组成的组的氨基酸：pro、gly、ala、ser、val、ile、leu、phe、trp、tyr、gln和met；(vi)所述x5是选自由以下组成的组的氨基酸：pro、gly、ala和ser；并且(vii)所述x6是选自由以下组成的组的氨基酸：lys、arg和his。62.如权利要求59至61中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述x3选自由以下组成的组：asn、gln、ser、thr、asp、glu、lys、his和arg。63.如权利要求53至62中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd和所述ed通过接头连接。64.如权利要求63所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含一个或多个氨基酸。65.如权利要求53至64中任一项所述的方法，其中所述nd包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：(i)ggklskk(seq id no:411)、(ii)gaklskk(seq id no:412)、(iii)ggkqskk(seq id no:413)、(iv)ggklakk(seq id no:414)、(v)ggklsk(seq id no:415)或(vi)它们的任何组合。66.如权利要求65所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含选自由以下组成的组的氨基酸序列：(i)ggklskkk(seq id no:438)、(ii)ggklskks(seq id no:439)、(iii)gaklskkk(seq id no:440)、(iv)gaklskks(seq id no:441)、(v)ggkqskkk(seq id no:442)、(vi)ggkqskks(seq id no:443)、(vii)ggklakkk(seq id no:444)、(viii)ggklakks(seq id no:445)和(ix)它们的任何组合。67.如权利要求53至66中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述nd包含氨基酸序列ggklskk(seq id no:411)。68.如权利要求43和50至67中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y的长度是至少约8、至少约9、至少约10、至少约11、至少约12、至少约13、至少约14、至少约15、至少约16、至少约17、至少约18、至少约19、至少约20、至少约21、至少约22、至少约23、至少约24、至少约25、至少约30、至少约35、至少约40、至少约45、至少约50、至少约55、至少约60、至少约65、至少约70、至少约75、至少约80、至少约85、至少约90、至少约95、至少约100、至少约105、至少约110、至少约120、至少约130、至少约140、至少约150、至少约160、至少约170、至少约180、至少约190或至少约200个氨基酸。69.如权利要求44和50至68所述的细胞外囊泡，其中所述支架y包含(i)ggklskkkkgynvn(seq id no:446)、(ii)gaklskkkkgynvn(seq id no:447)、(iii)ggkqskkkkgynvn(seq id no:448)、(iv)ggklakkkkgynvn(seq id no:449)、(v)ggklskkkkgysgg(seq id no:450)、(vi)ggklskkkkgsggs(seq id no:451)、(vii)ggklskkkksggsg(seq id no:452)、(viii)ggklskkksggsgg(seq id no:453)、(ix)ggklskksggsggs(seq id no:454)、(x)ggklsksggsggsv(seq id no:455)或(xi)gakkskkrfsfkks(seq id no:456)。
70.如权利要求44和50至69所述的细胞外囊泡，其中所述支架y由以下组成：(i)ggklskkkkgynvn(seq id no:446)、(ii)gaklskkkkgynvn(seq id no:447)、(iii)ggkqskkkkgynvn(seq id no:448)、(iv)ggklakkkkgynvn(seq id no:449)、(v)ggklskkkkgysgg(seq id no:450)、(vi)ggklskkkkgsggs(seq id no:451)、(vii)ggklskkkksggsg(seq id no:452)、(viii)ggklskkksggsgg(seq id no:453)、(ix)ggklskksggsggs(seq id no:454)、(x)ggklsksggsggsv(seq id no:455)或(xi)gakkskkrfsfkks(seq id no:456)。71.如权利要求44和50至70所述的细胞外囊泡，其中所述支架y在n末端不包含met。72.如权利要求44和50至71中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述支架y在所述支架蛋白的n末端包含肉豆蔻酰化氨基酸残基。73.如权利要求72所述的细胞外囊泡，其中所述支架y的n末端的所述氨基酸残基是gly。74.如权利要求31至73中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述stat3 aso与所述ev的所述外表面上的所述锚定部分和/或所述支架部分连接。75.如权利要求31至74中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述stat3 aso与所述ev的所述腔表面上的所述锚定部分和/或所述支架部分连接。76.如权利要求31至75中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分包含固醇、gm1、脂质、维生素、小分子、肽或它们的组合。77.权利要求31至75中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分包含胆固醇。78.如权利要求31至75中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述锚定部分包含磷脂、溶血磷脂、脂肪酸、维生素(例如，维生素d和/或维生素e)或它们的任何组合。79.如权利要求31至78中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述stat3 aso通过接头与所述锚定部分和/或所述支架部分连接。80.如权利要求1至79中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述stat3 aso通过接头与所述ev连接。81.如权利要求79或80所述的细胞外囊泡，其中所述接头是多肽。82.如权利要求79或80所述的细胞外囊泡，其中所述接头是非多肽部分。83.如权利要求79或权利要求80所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含乙二醇。84.如权利要求79或权利要求80所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含heg、teg、peg或它们的任何组合。85.如权利要求79或80所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含丙烯酸亚磷酰胺(例如，acrydite
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)、腺苷酸化、叠氮化物(nhs酯)、地高辛(nhs酯)、胆固醇-teg、i-linker
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、氨基修饰剂(例如，氨基修饰剂c6、氨基修饰剂c12、氨基修饰剂c6 dt或uni-link
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氨基修饰剂)、炔烃、5'己炔基、5-辛二炔基du、生物素化(例如，生物素、生物素(叠氮化物)、生物素dt、生物素-teg、双重生物素、pc生物素或脱硫生物素)、硫醇修饰(硫醇修饰剂c3 s-s、二硫醇或硫醇修饰剂c6 s-s)或它们的任何组合。86.如权利要求79至85中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述接头是可裂解接头。87.如权利要求86所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。
88.如权利要求76至87中任一项所述的细胞外囊泡，其中所述接头包含(i)马来酰亚胺部分和(ii)缬氨酸-丙氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯或缬氨酸-瓜氨酸-氨基甲酸对氨基苄酯。89.如权利要求1至88中任一项所述的胞外囊泡，其中所述ev是外泌体。90.一种反义寡核苷酸(aso)，所述反义寡核苷酸(aso)包含长度为10至30个核苷酸的连续核苷酸序列，所述连续核苷酸序列与对应于seq id no:1的stat3转录物的核苷酸1至56982、对应于seq id no:1的stat3转录物的核苷酸57003至75171、对应于seq id no:3的stat3转录物的核苷酸1至1287或对应于seq id no:3的stat3转录物的核苷酸1306至2787内的核酸序列互补。91.如权利要求90所述的aso，其中其所述连续核苷酸序列与所述stat3转录物内的所述核酸序列至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％互补。92.如权利要求90或91所述的aso，所述aso能够降低人细胞(例如，hek293细胞)中的stat3蛋白表达，其中所述人细胞表达所述stat3蛋白。93.如权利要求92所述的aso，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的stat3蛋白表达相比，所述stat3蛋白表达降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。94.如权利要求90至93中任一项所述的aso，所述aso能够降低人细胞(例如，hek293细胞)中的stat3 mrna的水平，其中所述人细胞表达所述stat3 mrna。95.如权利要求94所述的aso，其中与未暴露于所述aso的人细胞中的所述stat3 mrna的水平相比，stat3 mrna的所述水平降低至少约30％、至少约35％、至少约40％、至少约45％、至少约50％、至少约55％、至少约60％、至少约65％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％或约100％。96.如权利要求90至95中任一项所述的aso，所述aso是间隙聚体、混合聚体或全聚体。97.如权利要求90至95中任一项所述的aso，所述aso包含一种或多种核苷类似物。98.如权利要求97所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括2'-o-烷基-rna；2'-o-甲基rna(2'-ome)；2'-烷氧基-rna；2'-o-甲氧基乙基-rna(2'-moe)；2'-氨基-dna；2'-氟-rna；2'-氟-dna；阿拉伯核酸(ana)；2'-氟-ana；或双环核苷类似物(lna)。99.如权利要求97或98所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者是糖修饰的核苷。100.如权利要求99所述的aso，其中所述糖修饰的核苷是增强亲和力的2'糖修饰的核苷。101.如权利要求97至100中任一项所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括包含双环糖的核苷。102.如权利要求97至100中任一项所述的aso，其中所述核苷类似物中的一者或多者包括lna。103.如权利要求102所述的aso，其中所述lna选自由以下组成的组：限制性乙基核苷(cet)、2',4'-限制性2'-o-甲氧基乙基(cmoe)、α-l-lna、β-d-lna、2'-o,4'-c-亚乙基-桥联核酸(ena)、氨基-lna、氧基-lna、硫代-lna以及它们的任何组合。104.如权利要求90至103中任一项所述的aso，所述aso包含一个或多个5'-甲基-胞嘧
啶核碱基。105.如权利要求90至104中任一项所述的aso，其中所述aso包含seq id no:100至seq id no:199中的任一个。106.如权利要求90至105中任一项所述的aso，其中所述aso具有选自由图1中的设计组成的组的设计，其中大写字母是糖修饰的核苷，并且小写字母是dna。107.如权利要求90至106中任一项所述的aso，其中所述aso的长度是14至20个核苷酸。108.如权利要求90至107中任一项所述的aso，其中所述连续核苷酸序列包含一个或多个经修饰的核苷间键联。109.如权利要求108所述的aso，其中所述一个或多个经修饰的核苷间键联是硫代磷酸酯键联。110.如权利要求108或109所述的aso，其中至少75％、至少80％、至少85％、至少90％、至少95％或100％的核苷间键联经修饰。111.如权利要求110所述的aso，其中所述aso中的所述核苷间键联中的每一者是硫代磷酸酯键联。112.一种缀合物，所述缀合物包含权利要求90至111中任一项所述的aso，其中所述aso与至少一个非核苷酸或非多核苷酸部分共价连接。113.如权利要求112所述的缀合物，其中所述非核苷酸或非多核苷酸部分包含蛋白质、脂肪酸链、糖残基、糖蛋白、聚合物或它们的任何组合。114.一种细胞外囊泡，所述细胞外囊泡包含权利要求90至111中任一项所述的aso或权利要求112或113所述的缀合物。115.一种药物组合物，所述药物组合物包含权利要求1至89和114中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求90至111中任一项所述的aso或权利要求112或113所述的缀合物，以及药学上可接受的稀释剂、载体、盐或佐剂。116.如权利要求115所述的药物组合物，其中所述药学上可接受的盐包括钠盐、钾盐、铵盐或它们的任何组合。117.如权利要求115或116所述的药物组合物，所述药物组合物还包含至少一种另外的治疗剂。118.如权利要求117所述的药物组合物，其中所述另外的治疗剂是stat3拮抗剂。119.如权利要求118所述的药物组合物，其中所述stat3拮抗剂是化学化合物、sirna、shrna、反义寡核苷酸、蛋白质或它们的任何组合。120.如权利要求118或119所述的药物组合物，其中所述stat3拮抗剂是抗stat3抗体或其片段。121.一种药盒，所述药盒包括权利要求1至89和114中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求90至111中任一项所述的aso、或权利要求112或113所述的缀合物或权利要求115至120中任一项所述的药物组合物以及使用说明书。122.一种诊断试剂盒，所述诊断试剂盒包括权利要求1至90和114中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求90至111中任一项所述的aso、或权利要求112或113所述的缀合物或权利要求115至120中任一项所述的药物组合物以及使用说明书。123.一种抑制或降低细胞中的stat3蛋白表达的方法，所述方法包括向表达stat3蛋白
的所述细胞施用权利要求1至89和114中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求90至111中任一项所述的aso、或权利要求112或113所述的缀合物或权利要求115至120中任一项所述的药物组合物，其中所述细胞中的所述stat3蛋白表达在所述施用后受到抑制或降低。124.如权利要求123所述的方法，其中在所述施用后，所述aso抑制或降低所述细胞中stat3或mrna的表达。125.如权利要求124所述的方法，其中与未暴露于所述aso的细胞中stat3 mrna的水平相比，在所述施用后，stat3 mrna的水平降低至少约20％、至少约30％、至少约40％、至少约50％、至少约60％、至少约70％、至少约80％、至少约90％或约100％。126.如权利要求123至125中任一项所述的方法，其中与未暴露于所述aso的细胞中stat3蛋白的表达相比，在所述施用后，stat3或蛋白的所述表达降低至少约60％、至少约70％、至少约75％、至少约80％、至少约85％、至少约90％、至少约95％、至少约96％、至少约97％、至少约98％、至少约99％或约100％。127.一种治疗有需要的受试者的癌症的方法，所述方法包括向所述受试者施用有效量的权利要求1至89和114中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求90至111中任一项所述的aso、或权利要求112或114所述的缀合物或权利要求115至120中任一项所述的药物组合物。128.权利要求1至89和114中任一项所述的细胞外囊泡、权利要求90至111中任一项所述的aso、或权利要求112或113所述的缀合物或权利要求115至120中任一项所述的药物组合物在制造用于治疗有需要的受试者的癌症的药物中的用途。129.如权利要求1至90和114中任一项所述的细胞外囊泡、如权利要求90至111中任一项所述的aso、或如权利要求112或113所述的缀合物或如权利要求115至120中任一项所述的药物组合物，它们用于治疗有需要的受试者的癌症。130.如权利要求122至127中任一项所述的方法、如权利要求128所述的用途或如权利要求129所述使用的组合物，其中所述细胞外囊泡、所述aso、所述缀合物或所述药物组合物心内、经口、胃肠外、鞘内、脑室内、经肺、局部或心室内施用。131.如权利要求127所述的方法、如权利要求128所述的用途或如权利要求136所述使用的组合物，其中所述癌症选自由以下组成的组：纤维肉瘤、粘液肉瘤、脂肪肉瘤、软骨肉瘤、成骨肉瘤、脊索瘤、血管肉瘤、内皮肉瘤、淋巴管肉瘤、淋巴管内皮肉瘤、滑膜瘤、间皮瘤、尤文氏瘤、平滑肌肉瘤、横纹肌肉瘤、结肠癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、前列腺癌、鳞状细胞癌、头颈部鳞状细胞癌、结肠直肠癌、淋巴瘤、白血病、肝癌、成胶质细胞瘤、黑素瘤、骨髓瘤基底细胞癌、腺癌、汗腺癌、皮脂腺癌、乳头状癌、乳头状腺癌、囊腺癌、髓样癌、支气管癌、肾细胞癌、肝癌、胆管癌、绒毛膜癌、精原细胞瘤、胚胎性癌、维尔姆斯氏肿瘤、宫颈癌、睾丸癌、肺癌、小细胞肺癌、膀胱癌、上皮癌、胶质瘤、成胶质细胞瘤、星形细胞瘤、成神经管细胞瘤、颅咽管瘤、室管膜瘤、松果体瘤、成血管细胞瘤、听神经瘤、少突胶质细胞瘤、脑膜瘤、黑素瘤、成神经细胞瘤、成视网膜细胞瘤、急性骨髓性白血病、肝细胞癌以及它们的任何组合。

技术总结
本公开涉及经修饰的细胞外囊泡，例如外泌体，所述经修饰的细胞外囊泡包含能够降低和/或抑制STAT3mRNA和/或STAT3蛋白的表达的反义寡核苷酸(ASO)。还公开了能够与经修饰的细胞外囊泡一起使用的ASO。本文还提供了使用所述外泌体和ASO治疗和/或预防疾病如癌症的方法。外泌体和ASO治疗和/或预防疾病如癌症的方法。


技术研发人员：亚当
受保护的技术使用者：科迪亚克生物科学公司
技术研发日：2020.08.14
技术公布日：2022/7/10