创建关于患者的厌食信号路径功能性的检验结果的方法与流程

1.本发明涉及一种创建关于患者或受试者的厌食信号路径功能性的检验结果的方法。依据这样的检验结果，可以推导出关于患者有可能受基因影响罹患肥胖症的结论。


背景技术：

2.据当前研究而得知世界上三分之一的人超重或肥胖。可能危害健康的超重被称为肥胖症。肥胖症逐渐成为一种慢性病，随之而来的是生活质量受限和高的并发症风险。患病者不仅身体受损，通常也遭受大众歧视。
3.肥胖症起因是多种多样的。除了在不健康的饮食方式范围内摄入过多能量外，肥胖症的出现也可能由基因引起或至少受其影响。根据疾病和相关健康问题的国际分类，肥胖症归属于内分泌、营养和代谢性疾病。
4.用于确定肥胖症的一个粗略指标是身体质量指数(bmi)。bmi指称体重公斤数除以身高米数的平方。如果bmi高于30kg/m2，则世卫组织称之为肥胖症。此外，bmi允许分为不同的肥胖症级。因此，bmi在30至34.9之间是指i级肥胖症，bmi在35至39.9之间是指ii级肥胖症，bmi在40以上是指iii级肥胖症或者过度肥胖症或病态肥胖症。但bmi仅是粗略参考值。借助bmi的检验结果并不足以有针对性地治疗有关患者。尤其无法依据bmi区分由能量平衡紊乱造成的超重与可能由基因引起的肥胖症。
5.因此，为了创建与患者的可能由基因引起或受基因影响的肥胖症相关的临床可靠的检验结果而尝试根据患者身体物质获得有说服力的指标。但这在实践中尤其在所获特征值的期望值标定方面被证明是困难的。


技术实现要素：

6.本发明的任务是至少部分考虑上述问题。特别是，本发明的任务是提出一种改进的、创建关于可能由遗传引起的肥胖症的有说服力且可一致再现的检验结果的方法。
7.上述任务通过权利要求书完成。特别是，上述任务通过根据权利要求1的方法完成。本发明的其它优点来自从属权利要求、说明书和图。
8.根据本发明的第一方面，提供一种创建关于患者的厌食信号路径功能性的fas检验结果的方法，其包括以下步骤：
[0009]-将患者置于标准化准备状态以做好标准化采样准备，
[0010]-提供取自已处于标准化准备状态的患者的标准化的取样基质，并且
[0011]-从标准化取样基质确定至少一个fas指标，
[0012]-依据所确定的至少一个fas指标创建fas检验结果。
[0013]
fas在此被理解为厌食信号路径功能性的缩写。因此，fas检验结果是指厌食信号路径功能性的检验结果。即，fas检验结果可以是指厌食信号路径功能性的评估。相应地，fas指标是指用于评估或诊断厌食信号路径功能性的指标。因此借助fas指标可以创建fas检验结果。根据厌食信号路径功能性，患者可能在不同时刻获得期望的饱腹感，它有助于其
控制饮食。当厌食信号路径受到干扰时，这可能导致患者无饱腹感或仅有减弱的饱腹感，由此与厌食信号路径未受干扰或厌食信号路径符合期望地工作的人相比更容易受到肥胖症威胁。
[0014]
在本发明范围内已经认识到，关于厌食信号路径功能性的检验结果以可靠方式允许直接推断出肥胖症、特别是遗传性肥胖症。还认识到，对于能可靠使用的fas检验结果有重大意义的是患者在采样期间处于标准化的准备状态。就是说，根据本发明，仅采用来自以下患者的取样基质，其在采样期间处于预定的准备状态。通过这些措施，可以根据需要创建关于可能由基因决定的肥胖症的有说服力且可一致再现的fas检验结果。
[0015]“创建fas检验结果”可以是指如下检验结果，在这里，患者的与其厌食信号路径功能性相关的医学相关的生理或心理现象、情况、变化和/或状态被查明。“提供标准化取样基质”是指提供至少一个标准化取样基质。患者在此也可以是指受试者。
[0016]
尤其以非侵入方式执行创建fas检验结果的方法。即，该方法不是直接在人体上进行。为了做好标准化采样准备，可以执行关于患者感染和/或炎症疾病的非侵入式检验诊断，在这里，患者依据检验结果被允许标准化采血。在本发明范围内的试验中表明，在患者感染和/或患上炎症疾病的情况下，取样基质可能不可用。因此通过上述的准备措施可以防止不必要的和/或不可用的fas检验结果。由此可节省为此所需的时间和相应成本。
[0017]
在本发明方法的范围内，优选从标准化取样基质中获取多个不同的fas指标。特别是从取样基质中取得至少一个第一fas指标和至少一个第二fas指标，其中，所述至少一个第二fas指标不同于所述至少一个第一fas指标。然后，可以依据具有所述至少一个第一fas指标和至少一个第二fas指标的指标谱来创建fas检验结果。
[0018]
通过综合考量多个不同的fas指标，可以明显增加信息量或获得fas检验结果的相应高精度。因此，指标谱是指不同fas指标的集群。因此根据本发明，多个不同的fas指标被共同考量。
[0019]
依靠实验室化学，通常难以依据单独指标获得可靠的诊断，因为通常证明方法的技术证明极限相当靠近正常范围的下限并且一般“向下”只提供少量余地用于评估明确的病理学状况。根据本发明，现在从指标谱的总体考量中推导出比依据单独认知总和所能得到的更好的或更精确的结果。
[0020]
依据指标谱，在知晓预定症状和基本诊断的情况下(例如借助成像、临床症状或基因学)能够从更多次分析中鉴别出表征各项诊断的模式。它们随后可以针对未详细知晓全面诊断情况的患者被用来预测诊断结果、进一步变化过程或者例如也用来对某些用药治疗作出反应。该模式并非仅包含在常规的实验室评估范围内非典型的实验室结果。
[0021]
该至少一个第一fas指标与该至少一个第二fas指标尤其在其类型方面彼此不同。即，该至少一个第一fas指标与至少一个第二fas指标不仅在数值和/或范围方面彼此不同。“指标谱具有至少一个第一fas指标和至少一个第二fas指标”是指各自fas指标原则上可以具有无限数量的不同fas指标。故指标谱也可以具有三个或更多的彼此不同的fas指标。
[0022]
在fas检验结果范围内，可以确定“msh缺失”或α-msh缺失和/或“msh过量”，其随后可表明对使用例如α-msh类似物的治疗的反应。两种情况都说明厌食信号路径紊乱。msh缺失可通过现有的α-msh激动剂例如合成肽激素来治疗，其再激活因α-msh缺乏而中断的信号级联。借助本方法，此时不仅可确定是否出现msh缺失或msh过量，还可对其进行定量确定。
[0023]
根据该方法的本发明改进方案而可能的是，患者可以在规定时段内进行光隔断、特别是日光隔断，以做好采样准备。本发明范围内的试验中表明，日光隔断对所需的标准化特别有帮助。通过此做法，可以产生相应有说服力的fas指标，这又对所需的fas检验结果产生积极影响。
[0024]
在根据本发明的方法中，光隔断优选进行至少10小时，特别是至少20小时。在本发明范围内的大量试验中表明，10小时的最短持续时间、优选20小时的最短持续时间尤其有利地影响待确定的至少一个fas指标。
[0025]
此外在本发明的方法中可能的是，将患者置入标准化准备状态以做好标准化采血准备，其中，标准化取样基质是血浆样。在使用血浆样情况下已经获得特别有说服力的结果。尽管如此，其它取样基质也可被用于本方法。因此也可以使用例如呈全血样、血清样、体液样和/或尿样形式的血液样，其均为液体或干燥形式。当使用干燥取样基质时，如上所述，用合适的提取剂从干燥取样基质中提取被分析物，其中，可以在有或没有有机溶剂组分的情况下进行再水合。如果使用干血，则作为补充可以将被分析物酶裂解成肽片段。
[0026]
根据本发明的另一变型设计中，患者可在规定时段内经受禁食期以做好采样准备。这也在本发明范围内的试验中被证明尤为有效地用于将患者置于用于获得所需fas指标的标准化准备状态。在本发明方法中，禁食期优选进行至少6小时，特别是在12小时至36小时的时间窗内。在实验中该时段被证明足以获得用于fas检验结果的预期结果。
[0027]
在根据本发明的方法中可能的是，该至少一个fas指标依据关于取样基质内至少一种被分析物的至少一个测量值来确定。在考虑至少一种被分析物的情况下可以提供特别有说服力的fas指标。特别是，可以依据关于取样基质内的多种不同被分析物的多个测量值来确定多个fas指标。在此可以确定多个fas指标，其中，至少一个第一fas指标基于取样基质内的第一被分析物的至少一个测量值被确定和/或至少一个第二fas指标基于取样基质内的第二被分析物的至少一个测量值被确定，其中，第一和第二被分析物尤其位于调节回路或合成链内的不同位点处。这种做法的优点在于，调节回路的或相应的信号级联的功能可在不同位点被测量和证明。在此，各个被分析物彼此相关。即，当一种被分析物(值)高或低时，另一种被分析物(值)也必然相应高或低。由此可确保期望结果。不仅可从液态取样基质中、也可从干燥的取样基质中取出的被分析物能利用免疫沉淀(ip)或固相提取(spe)从取样基质来提取。被分析物可以通过选择各自合适的抗体或根据物理化学性能使用c18材料在反相条件下被结合到柱材料上并被隔离。通过用含水溶剂冲洗被分析物和随后由有机溶剂洗提，可以获得干净的提取物。所提取的被分析物可以随后通过蒸发掉有机溶剂而被浓缩并在含水溶液中还原。所提取的被分析物可以借助反相色谱法在线上lc-ms/ms方法中与取样基质其它组成分开。所提取的被分析物也可被化学改变、尤其是衍生。同样可行的是诸如免疫亲和色谱(iac)和亲水作用色谱(hilic)等方法。质谱仪分析可以在多分析方法中以mrm模式(多反应监视)进行，在此，带有两价或三价电荷的被分析物离子特定传质在质谱仪的碰撞池内被碎片化并可以探测碎片离子。通过掺入利用稳定同位素标记的内标物，可以借助外部校准执行被分析物定量确定。
[0028]
可能进一步有利的是，在本发明的方法中，被分析物通过色谱法或通过免疫沉淀从取样基质中提取并通过随后的质谱分析来确定。质谱法和免疫沉淀在本方法中被证明是有利的。与免疫测定法相比，优点例如在于可以例如通过复用法同时测量多种被分析物。另
一方面，可以排除例如经常发生在免疫分析中的交叉反应。
[0029]
在根据本发明的方法中可能的是，被分析物可能是msh、尤其是α-msh。神经α-msh在下丘脑和垂体前叶内由蛋白质阿片促黑素细胞皮质素原(pomc)形成。下丘脑α-msh在体重控制中扮演重要角色，因为结合外周信号，身体脂含量和胃部充实度造成α-msh释放，其通过中枢黑皮素受体促成饱腹感。pomc基因突变可能导致缺乏蛋白质和进而α-msh。由于信号链中断，故无法产生饱腹信号。这可能导致失控的剧烈提升的营养摄入和进而极度超重。在本发明范围内的试验中可以表明饱腹牵涉到尤其在体液或脑脊髓液内的α-msh浓度升高。这种中枢α-msh信号传输的缺点是迄今仅基于基础基因缺陷来诊断。其一，因为脑水取出牵涉到高成本和高风险，其次，在已证明基因缺陷情况下所述诊断结果视为可靠并在合适的临床症状学中在极度超重情况下不必被进一步确认。因此在极度超重的迄今考虑中，α-msh的证明无关紧要。虽然α-msh中枢分泌缺乏以及mc4受体缺陷明确与早期表现的极度肥胖症结伴出现，但迄今几乎没有与食欲控制机制调理的可能临床作用相关的数据。但在本发明范围内的试验中现已发现，对于在外周脂肪组织中分泌的瘦素蛋白至黑皮素受体之间的信号级联受到干扰的极度超重的人，在下丘脑中的减弱的α-msh作用是超重原因之一。所有这些干扰的共同特征是α-msh中枢分泌减弱或mc4受体缺陷。因此，可依据α-msh浓度或通过确定呈α-msh形式的被分析物来创建特别有说服力的fas检验结果。
[0030]
此外，在根据本发明的改进方案中，该至少一个fas指标可以具有在标准化取样基质中的clip浓度。clip浓度是指促肾上腺皮质激素样中叶肽(clip)的浓度。由于clip的量可以相对于α-msh浓度是等摩尔的，因此，所形成的clip的量允许间接查明α-msh浓度。因此无需直接测量α-msh浓度。通过测知α-msh浓度，又可以获得与期望的检验结果相关的前述优点。依据clip浓度，也可以直接作出与期望的fas检验结果相关的说明。
[0031]
另外可能的是，在本发明方法中，至少一个fas指标具有该标定取样基质内的至少一种肽类激素的浓度。通过确定相关肽类激素或至少一种肽类激素的浓度或比例，可以作出关于fas检验结果的诊断说明。与以上关于clip浓度所述相似地，可以通过测量相关的肽类激素来间接查明血中待确定的α-msh浓度。该至少一种肽类激素的浓度优选通过复用法来确定。在此情况下可能进一步有利的是，在本发明方法中，该至少一个fas指标分别具有取样基质内的各不同肽类激素的浓度。由此可获得fas检验结果的高精度。
附图说明
[0032]
改进本发明的其它措施来自以下对如图示意所示的本发明各不同实施例的描述。来自权利要求书、说明书或图的所有特征和/或优点包含结构细节和空间布置在内可以不仅单独地、也在各不同组合中对本发明是重要的。图分别示意性示出：
[0033]
图1示出用于解释根据本发明的第一变型实施方式的方法的图示，
[0034]
图2示出用于解释根据本发明的第二变型实施方式的方法的图示，
[0035]
图3示出用于解释根据本发明的第三变型实施方式的方法的图示，
[0036]
图4示出用于解释根据本发明的第四变型实施方式的方法的图示。
[0037]
具有相同的功能和工作方式的零部件在图1-4中均带有相同的附图标记。
具体实施方式
[0038]
参照图1，接着解释根据第一变型实施方式的、创建关于人类患者1的厌食信号路径功能性的fas检验结果30的方法。图1所示的患者1首先被置于标准化准备状态以做好标准化采血准备。为了做好取样准备，患者经受阳光隔断约24小时。此外为了做好取样准备，患者还在同一24小时期间内经受禁食。
[0039]
然后，提供呈从处于标准化准备状态的患者1取得的血样形式的标准化取样基质10。随后，根据图1所示的例子，从标准化取样基质10中获得三个不同的fas指标11、12、13。三个fas指标11、12、13形成一个指标谱20。依据主要为阳性的指标，现在可以从根据指标谱20的概览中如此推导出一个fas检验结果30，即，大概不存在或仅存在十分不显著的厌食信号值的功能故障。或者换言之，厌食信号值看上去正常或基本正常发挥功能。由此，现在又可以推断出所考虑的肥胖症不是或几乎不是由基因引起。所示的fas指标11、12、13和fas检验结果30用“ ”和
“‑”
标示，依据预先定下的符号解读也允许恰好相反的检验结果。
[0040]
图2示出根据第二实施方式的一个例子，在此，所有fas指标11、12、13评估为阴性，即，根据预定解读表明厌食信号值的功能故障。通过考虑所属的指标谱20，现在可以推导出一个fas检验结果30，其可以指明厌食信号值的基因功能故障。
[0041]
依据图3，随后将解释根据第三实施方式的方法。图3所示的fas指标11、12分别结合针对取样基质中的相应的被分析物的测量值11n、12n来确定。确切说，与所示实施方式对应地，关于取样基质10内的第一被分析物，多个第一测量值11n被确定，而关于取样基质10内的第二被分析物，多个第二测量值12n被确定，其中，第一测量值11n被扩充成第一测量值群11n ，而第二测量值12n被扩充成第二测量值群12n 。在此，第一fas指标11依据第一测量值群11n 来确定，而第二fas指标12依据第二测量值群12n 来确定。第一被分析物和第二被分析物此时处于一个调节回路或一个合成链之内的不同位点。
[0042]
在此，第一fas指标11指示标准化取样基质10中的α-msh浓度。就是说，第一个被析物是α-msh。第二fas指标12指示标准化取样基质10中的clip浓度。在本方法的范围内，来自取样基质10的被分析物均通过色谱法来提取并通过随后的质谱分析来确定。
[0043]
根据图3所示的实施方式，将第一测量值群11n 的值与第一参考值40相比较，并将第二测量值群12 的值与第二参考值相比较。现在结合各自比较结果来推断各自fas指标11、12。仅作示例地，图3所示的参考值40、50高于或基本高于各自测量值群11n 、12n 。根据先前的解释和定义，参考值也可以替代地或附加地更低，特别是也低于各自测量值群，在此，但仍能获得目前结果。就是说，在这种情况下，即使测量值群高于或基本高于各自参考值，fas指标也将会导致有说服力的结果。因此，增大和减小的fas指标都可能导致目前的fas检验结果30。测量值群与参考值之差的大小尤其是重要的。这适用于所有相应的图或所属的实施方式。
[0044]
根据图3，可以假定一个为阳性的第一fas指标11，因为扩充的第一测量值群11n 处于关于第一参考值40的极限范围内且在局部超出。同样可以假定一个阳性的第二fas指标12，因为扩充的第二测量值群12n 也处于关于第二参考值50的极限范围内并且在局部超出。fas检验结果30因此也为阳性。即，在此情况下可以假定厌食信号路径的正常或基本正常的工作方式或功能。但依据用于解释各自测量值群11n 和12n 的设定条件，如图3所示的结果也可以解释如下，即，第一fas指标11和第二fas指标12分别被评为阴性，因为没有足够
多的测量值11n、12n高于各自参考值40、50。如上所述，重要的是依据预定设定条件总体考虑指标谱。
[0045]
在图4所示的第四实施例中，第一测量值群11n 的与预定的第一参考值40相比的定量平均第一偏差值60和第二组测量值群12n 的与预定的第二参考值50相比的定量平均第二偏差值70被确定，并且根据第一偏差值60和第二偏差值70创建fas检验结果30。关于第一测量值群11n 可以确定，其虽然相对靠近第一参考值40，但还不够近。故针对第一fas指标11确定相应阴性值。第二测量值群12n 距第二参考值50比较远，因此第二fas指标也被评为阴性。由此也得到在相应的fas检验结果30的意义上的阴性总体结果。
[0046]
除了所示实施方式外，本发明也允许其它设计原理。因此，血样可以作为液态血样或干血样来提供。作为取样基质10，还可以使用分别呈液体或干燥形式的全血样、血浆样、血清样、体液样和/或尿样。第一fas指标11、第二fas指标12或第三fas指标13可以指示在标准化取样基质10中的至少一种肽类激素的浓度或各不同肽类激素的对应浓度。第一fas指标11、第二fas指标12和/或第三fas指标13可以乘以权重系数，其中，fas检验结果30依据加权fas指标11、12、13来创建。一般，第一fas指标11也可被理解为第二fas指标12或第三fas指标13，反之亦然。还可以分别确定多个第一、第二和/或第三fas指标11、12、13。禁食期和避光期也可以明显更短暂。
[0047]
附图标记列表
[0048]1ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
患者
[0049]
10
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
取样基质
[0050]
11
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
第一fas指标
[0051]
11n
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
第一测量值
[0052]
11n
ꢀꢀꢀꢀꢀ
第一测量值群
[0053]
12
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
第二fas指标
[0054]
12n
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
第二测量值
[0055]
12n
ꢀꢀꢀꢀꢀ
第二测量值群
[0056]
13
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
第三fas指标
[0057]
20
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
指标谱
[0058]
30
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
fas检验结果
[0059]
40
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
第一参考值
[0060]
50
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
第二参考值
[0061]
60
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
平均第一偏差值
[0062]
70
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
平均第二偏差值