干血基质的标定方法和标定系统与流程

1.本发明涉及一种用于对干血基质中的至少一种被分析物进行标定的干血基质的标定方法以及标定系统。


背景技术：

2.临床相关参数的例行分析迄今一般采用呈全血、血清或血浆形式的液态血样基质进行。与此相应，几乎所有临床参数的参考区域或标准浓度都基于液态取样基质来限定。因为在液态取样基质中还存在控制和保证体内被分析物降解的所有条件和成分，故必须经常采取复杂措施例如像酶阻断和/或冷却，以禁止所述过程并进而能在实验室内确定被分析物的正确浓度。大多数的分解过程对时间要求严格且与温度相关。只有未经历进一步酶降解的代谢最终产品是例外。
3.新生儿筛查在例行高通量分析中处于特殊地位，因为在此情况下的分析以干血为取样基质。因此人们尤其依赖于干血分析，因为新生儿能提供的液态血量极其有限。新生儿筛查中的干血分析实际上与高敏专属分析结合来进行。
4.为了产生所需的干血，全血被涂到特殊的吸附性载体材料上。血压所含液体因载体材料内的色谱学作用被吸附，由此血液在短时间内被干燥。通过干燥，抑制酶分解过程。因为干血载体材料具有至少部分扁平的尺寸，故干血取样的输送可以通过简单有利的方式邮寄进行。此外，干血是非传染性的，故无需特殊说明。
5.尽管有上述优点，干血迄今未被广泛应用在临床例行分析中。即，所有基于全血作为取样基质的干血分析具有难以乃至无法获得有说服力的分析结果的波动。此外，由此无法有与由液态取样基质所创建的分析的相似性。


技术实现要素：

6.本发明的任务是至少部分考虑前述问题。尤其是，本发明的任务是提供一种改进的干血基质的标定方法以及一种改进的干血基质的标定系统。
7.前述任务通过权利要求书来完成。尤其是，前述任务通过根据权利要求1的标定方法以及根据权利要求9的标定系统来完成。本发明的其它优点来自从属权利要求、说明书和图。在此，关于标定方法所描述的特征和细节显然也与本发明的标定系统相关地适用，反之亦然，因此关于对各个发明方面的公开内容总是相互参照或可相互参照。
8.根据本发明的第一方面，提供一种干血基质的标定方法。该标定方法具有以下步骤：
[0009]-提供该干血基质，
[0010]-从干血基质的第一部分中提取至少一种被分析物以及从干血基质的第二部分中提取血红蛋白，
[0011]-定量分析所提取的至少一种被分析物以及所提取的血红蛋白，
[0012]-确定该干血基质的第一部分内的至少一种被分析物的浓度以及该干血基质的第
二部分内的血红蛋白的浓度，
[0013]-依据血红蛋白的浓度推导出干血基质的第二部分的红细胞压积，
[0014]-依据所确定的红细胞压积计算标定因子以标定该干血基质的第一部分内的至少一种被分析物的浓度。
[0015]
根据本发明的标定方法可被通用于许多临床相关的被分析物。同样，该方法可被用到非人类的其它物种，尤其用在所有脊椎动物中。借助本发明，以干血作为取样基质的分析能够供实验室市场更深入广泛所用。通过灵活和原则上时间要求不严格的干血基质处理，可明显减少迄今出现的物流成本。
[0016]
干血基质的第一部分和/或干血基质的第二部分可以分别以干血斑形式通过人工裁切或自动裁切来提供。即，从干血基质加工出尤其是裁切出至少第一干血斑用于被分析物和第二干血斑用于待分析的血红蛋白。所述至少一个第一干血斑和第二干血斑随后最好被单独准备。
[0017]
根据本发明，多种被分析物可以从至少一个第一干血斑或干血基质的第一部分中被提取出，或者可以分别从多个干血斑或干血基质的相应部分提取出对应的被分析物。
[0018]
血红蛋白优选通过含水的缓冲液被提取。在这里，定量分析最好是指定量确定和/或相应测量。即，通过定量分析所提取的至少一种被分析物以及所提取的血红蛋白，各自物质的量被确定。血红蛋白的定量分析最好以酶片段化的方式借助质谱仪进行。在本发明范围内的大量试验中已经表明，血红蛋白的酶裂解是不一定需要的并且在许多方面可能导致提取困难。即，在有利的替代提取中可以放弃血红蛋白的酶裂解。
[0019]
被分析物的和血红蛋白的定量分析可以同时或单独执行。高敏分析最好在分析范围内借助液相色谱电喷雾质谱学进行。在借助质谱仪的测量中，血红蛋白和/或血红蛋白的酶片段也可借助mrm过程(多反应监视)来检测。
[0020]
通过确定该干血基质的第一部分内的至少一种被分析物的浓度以及该干血基质的第二部分内的血红蛋白的浓度，确定干血基质的各自部分中的物质的占比。接着可以依据血红蛋白浓度来推导该干血基质的第二部分的红细胞压积。基于血红蛋白浓度的推导优选是依据血红蛋白浓度和红细胞压积之间的线性关系来进行的。为了确定所述至少一种被分析物以及血红蛋白的浓度，可以采用校准函数，可以借此将信号面积转换为浓度。红细胞压积的推导可以通过将血红蛋白浓度转变为红细胞压积来进行。
[0021]
红细胞压积可以根据如下公式来计算：
[0022][0023]
其中，chb代表血红蛋白浓度。
[0024]
血红蛋白的提取可以是指血红蛋白和/或血红蛋白片段的提取。相应地，血红蛋白浓度的确定可以是指血红蛋白的浓度的确定和/或血红蛋白片段的浓度的确定。相应地，在此也可将血红蛋白理解为血红蛋白片段。
[0025]
标定因子可被计算和/或依据如下的各种试验序列来确定，可借此靠经验创建适应的数学关系。
[0026]
根据本发明的另一个实施方式可能的是，为了定量分析该血红蛋白而定量分析血
红蛋白的至少一个肽片段，随后确定在干血基质的第二部分内的至少一个肽片段的浓度，其中，依据该至少一个肽片段的浓度推断出在干血基质的第二部分内的血红蛋白的浓度。这尤其在同时分析多种被分析物时是有利的。就是说，如果同时从干血基质中提取多种被分析物，则在血红蛋白定量分析范围内最好同时定量确定血红蛋白的特定的肽片段。
[0027]
还可能的是，在根据本发明的标定方法中，该血红蛋白或至少一个肽片段的定量分析依据在质谱仪内产生的被分析物特定的质量片段的多次选择来进行。这可以通过有利方式在使用四极质谱仪情况下在mrm过程范围内进行。被证明特别高效的是，该血红蛋白或至少一个肽片段的定量分析依据在质谱仪内产生的被分析物特定的质量片段的两次选择来进行。
[0028]
还可能的是，该血红蛋白的或至少一个肽片段的定量分析在本发明的标定方法中依据被分析物特定的质荷比信号m/z进行。在此情况下，该血红蛋白和/或所述至少一个肽片段依据质谱分析有利地不是仅按照质量来选择，而是依据质量/电荷比来选择。因此可获得很精确的分析结果。
[0029]
可能还有利的是，在本发明的标定方法中为了血红蛋白的定量分析而通过添加肽酶来酶裂解该血红蛋白。借此能产生有说服力的分析值，其形成用于与期望标定因子相关的改进的有利基础。
[0030]
根据本发明的另一变型设计而可能的是，在标定方法中依据标定因子确定该至少一种被分析物的血浆当量浓度。该至少一种被分析物的血浆当量浓度是指如下浓度，其类似于血浆取样和/或血清取样中的被分析物的常规的血浆浓度和/或血清浓度。即，所确定的标定因子可以用于标定干血取样中的被分析物浓度以及计算与原先已有的血浆浓度和/或血清浓度相似的浓度信息、即血浆当量浓度。通过被分析物浓度的相应的红细胞压积标定，基于干血基质的和基于液态取样基质的定量分析可被直接比较。
[0031]
当在标定方法中该至少一种被分析物借助提取液从干血基质中被提取时，得到本发明的另一优点。因此该被分析物可以通过简单可靠的方式从干血基质中被提取。该至少一种被分析物优选借助再水合从干血基质中提取。还被证明有利的是，该至少一种被分析物在使用有机液或部分有机液的情况下(没有水或具有例如不到10％质量百分比的少量水)从干血基质中被提取。在本发明范围内的试验还出乎意料地表明，该至少一种被分析物也能以有利的方式借助电磁辐射从干血基质中被提取。在此情况下，所提取的至少一种被分析物随后可以为了进一步使用、尤其为了随后的定量分析而被转入气相。
[0032]
根据本发明的另一方面，提供一种干血基质的标定系统。该标定系统包括以下组成部件：
[0033]-用于从该干血基质的第一部分中提取至少一种被分析物以及从该干血基质的第二部分中提取血红蛋白的提取单元，
[0034]-用于定量分析所提取的至少一种被分析物以及所提取的血红蛋白的分析单元，
[0035]-用于确定该干血基质的第一部分中的至少一种被分析物的浓度以及该干血基质的第二部分中的血红蛋白的浓度的确定单元，
[0036]-用于依据该血红蛋白的浓度推导出该干血基质的第二部分的红细胞压积的推导单元，以及
[0037]-用于依据所确定的红细胞压积计算标定因子以标定该干血基质的第一部分内的
该至少一种被分析物的浓度的计算单元。
[0038]
因此，本发明的标定系统带来与关于本发明的标定方法所明确描述的一样的优点。该标定系统还可以设计用于根据如前所详述的标定方法计算标定因子。
附图说明
[0039]
改进本发明的其它措施来自以下对如图示意性所示的本发明不同实施例的描述。所有来自权利要求书、说明书或图的特征和/或优点包含结构细节和空间布置在内可能不仅单独地、也在不同的组合中对本发明是重要的。图分别示意性示出：
[0040]
图1示出用于解释本发明的一个优选实施方式的流程图，
[0041]
图2示出用于表示根据本发明的标定系统的框图。
具体实施方式
[0042]
图1示出用于解释干血基质的标定方法的框图。根据所示实施方式，在准备步骤s1中首先提供干血基质，从其中裁切出第一干血斑用以提取被分析物以及裁切出第二干血斑用以提取血红蛋白。
[0043]
在第二步骤s2中，被分析物借助有机溶剂从第一干血斑被提取，而血红蛋白借助含水缓冲剂从第二干血斑被提取。
[0044]
接着，在测量范围内在第三步骤s3中通过对在质谱仪中产生的被分析物特定的质量片段进行两次选择来定量分析所提取的被分析物以及所提取的血红蛋白。即，分别确定各自物质的一个绝对量。为了定量分析该血红蛋白，血红蛋白的肽片段被定量分析，随后确定第二干血斑中的肽片段浓度，其中，依据该肽片段浓度推断出第二干血斑中的血红蛋白浓度。另外，为了血红蛋白的定量分析而通过添加肽酶来酶裂解该血红蛋白。
[0045]
在另一步骤s4中评估测得数据或分析结果。尤其是确定第一干血斑内的至少一种被分析物的浓度以及第二干血斑内的血红蛋白的浓度。
[0046]
在随后的第五步骤s5中，依据评估结果基于所确定的血红蛋白浓度来推导出第二干血斑的红细胞压积，以及依据红细胞压积计算标定因子以标定被分析物的浓度。在换算范围内还依据标定因子来确定所述至少一种被分析物的血浆当量浓度。
[0047]
图2示出干血基质的标定系统10，其设计用于执行如上所述的标定方法。标定系统10具有用于从该干血基质的第一部分或者说第一干血斑中提取至少一种被分析物以及从该干血基质的第二部分或者说第二干血斑中提取血红蛋白的提取单元11。标定系统还具有用于定量分析所提取的至少一种被分析物以及所提取的血红蛋白的分析单元12和用于确定该干血基质的第一部分中的至少一种被分析物的浓度以及该干血基质的第二部分中的血红蛋白的浓度的确定单元13。此外，标定系统具有用于依据该血红蛋白的浓度推导出该干血基质的第二部分的红细胞压积的推导单元14以及用于依据所确定的红细胞压积计算标定因子以标定该干血基质的第一部分内的该至少一种被分析物的浓度的计算单元15。
[0048]
本发明除了所示实施方式外还允许其它设计原理。即，本发明不应被视为局限于如图所示的实施方式。
[0049]
附图标记列表
[0050]
10
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
标定系统
[0051]
11
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
提取单元
[0052]
12
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
分析单元
[0053]
13
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
确定单元
[0054]
14
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
推导单元
[0055]
15
ꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀꢀ
计算单元