作为MCL-1抑制剂的大环磺酰基衍生物的制作方法

作为mcl-1抑制剂的大环磺酰基衍生物
技术领域
1.本发明涉及可用于在受试者中进行治疗和/或预防的药剂，包含此类化合物的药物组合物，以及它们作为mcl-1抑制剂可用于治疗或预防如癌症的疾病的用途。


背景技术：

2.细胞凋亡或程序性细胞死亡对于包括造血系统在内的许多器官的发育和稳态至关重要。细胞凋亡可以经由由死亡受体介导的外在途径启动，或者通过使用b细胞淋巴瘤(bcl-2)蛋白家族的内在途径启动。髓系细胞白血病-1(mcl-1)是细胞存活调节因子的bcl-2家族的成员，并且是内在细胞凋亡途径的关键介导因子。mcl-1是负责维持细胞存活的五种主要抗细胞凋亡bcl-2蛋白(mcl-1、bcl-2、bcl-xl、bcl-w和bfl1/a1)之一。mcl-1持续且直接阻遏促细胞凋亡bcl-2家族蛋白bak和bax的活性，并通过隔离仅bh3(bh3only)细胞凋亡敏化剂蛋白(如bim和noxa)间接阻断细胞凋亡。在各种类型的细胞应激后bak/bax的激活导致线粒体外膜上的聚集，并且这种聚集促进孔形成、线粒体外膜电位的损失以及随后的细胞色素c释放到细胞溶质中。细胞溶质细胞色素c与apaf-1结合并引发半胱天冬酶原9(procaspase 9)的募集以形成凋亡体结构(cheng等人elife[生命科学在线]2016；5:e17755)。凋亡体的组装激活执行子半胱氨酸蛋白酶3/7，然后这些效应子半胱天冬酶裂解各种细胞质和核蛋白以诱导细胞死亡(julian等人cell death and differentiation[细胞死亡和分化]2017；24,1380-1389)。
[0003]
避免细胞凋亡是癌症发展的既定标志并促进肿瘤细胞的存活，否则这些肿瘤细胞会因致癌应激、生长因子缺乏或dna损伤而被消除(hanahan和weinberg.cell[细胞]2011；1-44)。因此，不出所料，相对于正常的非转化组织对应物，mcl-1在许多实体癌症和血液癌症中高度上调。mcl-1的过表达已与几种癌症的发病机制关联，在这些癌症中的这种过表达与不良结局、复发和侵袭性疾病相关。另外，mcl-1的过表达与以下癌症的发病机制关联：前列腺癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、黑素瘤、b细胞慢性淋巴细胞白血病(cll)、急性髓系细胞白血病(aml)和急性淋巴母细胞白血病(all)。人mcl-1遗传基因座(1q21)在肿瘤中经常被扩增，并定量地增加总mcl-1蛋白水平(beroukhim等人nature[自然]2010；463(7283)899-905)。mcl-1还介导对常规癌症治疗剂的抗性，并在转录上上调以响应对bcl-2功能的抑制(yecies等人blood[血液学]2010；115(16)3304-3313)。
[0004]
bcl-2的小分子bh3抑制剂已被证明对慢性淋巴细胞白血病患者具有临床疗效，并已获得fda批准用于cll或aml患者(roberts等人nejm[新英格兰医学杂志]2016；374:311-322)。bcl-2拮抗作用的临床成功使得开发了几种mcl-1bh3模拟物，这些模拟物在恶性血液病和实体瘤的临床前模型中均显示出疗效(kotschy等人nature[自然]2016；538 477-486，merino等人sci.transl.med[科学转化医学]；2017(9))。
[0005]
除了在介导细胞存活方面的典型作用外，mcl-1还调节几种细胞过程(包括线粒体完整性和dna损伤后的非同源末端连接)(chen等人jci[临床研究杂志]2018；128(1):500-516)。mcl-1的遗传丢失显示出一系列表型，取决于发育时序(developmental timing)和组
织缺失。mcl-1敲除模型揭示mcl-1有多种作用，并且功能丧失会影响多种表型。全局mcl-1缺陷小鼠显示出胚胎致死性，并且使用条件性遗传缺失的研究已报告了线粒体功能障碍、自噬激活受损、b和t淋巴细胞减少、b和t细胞凋亡增加以及心力衰竭/心肌病的发展(wang等人genes and dev[基因和发育]2013；27 1351-1364，steimer等人blood[血液学]2009；(113)2805-2815)。
[0006]
wo 2018178226披露了mcl-1抑制剂及其使用方法。
[0007]
wo 2017182625披露了用于治疗癌症的大环mcl-1抑制剂。
[0008]
wo 2018178227披露了mcl-1抑制剂的合成。
[0009]
wo 2007008627披露了作为抗细胞凋亡mcl-1蛋白活性抑制剂的取代的苯基衍生物。
[0010]
wo 2008130970披露了7-未取代的吲哚mcl-1抑制剂。
[0011]
wo 2008131000披露了7-取代的吲哚mcl-1抑制剂。
[0012]
wo 2020063792披露了吲哚大环衍生物。
[0013]
cn 110845520披露了作为mcl-1抑制剂的大环吲哚。
[0014]
wo 2020103864披露了作为mcl-1抑制剂的大环吲哚。
[0015]
wo 2020151738披露了作为mcl-1抑制剂的大环稠合吡唑。
[0016]
wo 2020185606披露了作为mcl-1抑制剂的大环化合物。
[0017]
仍然需要可用于治疗或预防癌症(如前列腺癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、黑素瘤、b细胞慢性淋巴细胞白血病(cll)、急性髓系细胞白血病(aml)和急性淋巴母细胞白血病(all))的mcl-1抑制剂。


技术实现要素：

[0018]
本发明涉及新颖的具有式(i)的化合物：
[0019][0020]
及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0021]
x1代表
[0022][0023]
其中
‘
a’和
‘
b’指示变量x1如何附接到分子的其余部分；
[0024]
x2代表
[0025][0026]
其可以在两个方向上附接到分子的其余部分；
[0027]
r1和r2代表甲基；
[0028]
y1代表-s(＝o)
2-或-n(r
x
)-；
[0029]rx
代表氢、甲基、c
2-6
烷基、-c(＝o)-c
1-6
烷基、-s(＝o)
2-c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、-c(＝o)-c
3-6
环烷基、或-s(＝o)
2-c
3-6
环烷基；其中c
2-6
烷基、-c(＝o)-c
1-6
烷基、-s(＝o)
2-c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、-c(＝o)-c
3-6
环烷基、和-s(＝o)
2-c
3-6
环烷基任选地被选自由以下组成的组的一个、两个或三个取代基取代：卤基、c
1-4
烷基和被一个、两个或三个卤原子取代的c
1-4
烷基；
[0030]
y2代表-s-或-s(＝o)
2-；
[0031]
其条件是y1和y2中的至少一个代表-s(＝o)
2-；
[0032]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0033]
本发明还涉及药物组合物，该药物组合物包含治疗有效量的具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物、和药学上可接受的载体或赋形剂。
[0034]
另外，本发明涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于作为药物使用，并且涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于在治疗或预防癌症中使用。
[0035]
在特定的实施例中，本发明涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物，用于在治疗或预防癌症中使用。
[0036]
本发明还涉及具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物与另外的药剂的组合用于治疗或预防癌症的用途。
[0037]
此外，本发明涉及用于制备根据本发明的药物组合物的工艺，其特征在于将药学上可接受的载体与治疗有效量的具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物充分混合。
[0038]
本发明还涉及包含具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物以及另外的药剂的产品，作为用于同时、单独或相继用于治疗或预防癌症的组合制品。
[0039]
另外，本发明涉及治疗或预防受试者的细胞增殖疾病的方法，该方法包括向所述受试者施用有效量的如本文所定义的具有式(i)的化合物、其药学上可接受的盐或溶剂化物、或如本文所定义的药物组合物或组合。
具体实施方式
[0040]
如本文使用的术语
‘
卤基’或
‘
卤素’代表氟、氯、溴以及碘。
[0041]
如本文使用的前缀
‘cx-y’(其中x和y是整数)是指给定基团中碳原子的数目。因此，c
1-6
烷基基团含有从1至6个碳原子等等。
[0042]
如本文用作基团或基团的一部分的术语“c
1-4
烷基”代表具有从1至4个碳原子的直链或支链完全饱和烃基团，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基等。
[0043]
如本文用作基团或基团的一部分的术语
‘c1-6
烷基’代表具有从1至6个碳原子的直链或支链完全饱和烃基团，如甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
[0044]
如本文用作基团或基团的一部分的术语
‘c2-6
烷基’代表具有从2至6个碳原子的直链或支链完全饱和烃基团，如乙基、正丙基、异丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、正己基等。
[0045]
如本文用作基团或基团的一部分的术语
‘c3-6
环烷基’定义了具有从3至6个碳原子的完全饱和的环状烃基团，如环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
[0046]
技术人员将清楚的是，s(＝o)2或so2代表磺酰基部分。
[0047]
技术人员将清楚的是，co或c(＝o)代表羰基部分。
[0048]
通常，每当术语
‘
取代的’用于本发明时，除非另外指明或从上下文是清楚的，否则它意在指示在使用
‘
取代的’这种表述中指示的原子或基团上的一个或多个氢(特别是从1至4个氢、更特别是从1至3个氢、优选是1或2个氢、更优选是1个氢)被选自所指示组的选择项替换，其条件是未超过正常的化合价，并且该取代产生了化学上稳定的化合物(即足够稳健以经受住从反应混合物分离到有用的纯度程度的化合物)。
[0049]
取代基和/或变量的组合是可容许的，只要此类组合产生化学上稳定的化合物即可。“稳定的化合物”意在指示足够稳健以经受住从反应混合物分离到有用的纯度程度的化合物。
[0050]
技术人员将理解术语
‘
任选地取代的’意指使用
‘
任选地取代的’这种表述中指示的原子或基团可以是或可以不是取代的(这分别意指取代的或未取代的)。
[0051]
当一个部分上存在两个或更多个取代基时，在可能的情况下并且除非另外指明或从上下文是清楚的，这些取代基可以替换相同原子上的氢，或者这些取代基可以替换在该部分不同原子上的氢原子。
[0052]
技术人员将清楚的是，除非另外指明或从上下文是清楚的，否则杂环基基团上的取代基可以替换环碳原子上或环杂原子上的任何氢原子(例如，氮原子上的氢可以被取代基替换)。
[0053]
除非另外指定或从上下文是清楚的，否则芳香族环和杂环基基团可以通过任何可用的环碳原子(c连接的)或氮原子(n连接的)附接到具有式(i)的分子的其余部分。
[0054]
技术人员将清楚的是
[0055]
可替代性地代表
[0056]
技术人员将清楚的是
[0057]
可替代性地代表
[0058]
将清楚的是，具有式(i)的化合物包括具有式(i-x)和(i-y)的化合物(x2的两个方向都是)。
[0059][0060]
当任何变量在任何成分中出现多于一次时，每条定义都是独立的。
[0061]
如本文使用的术语“受试者”是指是或已经是治疗、观察或实验的对象的动物，优选是哺乳动物(例如猫、狗、灵长类动物或人)，更优选是人。
[0062]
如本文使用的术语“治疗有效量”意指活性化合物或药剂的引发组织系统或受试者(例如人)的生物或医药应答的量，该生物或医药应答正为研究者、兽医、医药医生或其他临床医生所寻求，包括所治疗的疾病或病症的症状的减轻或逆转。
[0063]
术语“组合物”旨在涵盖包含指定量的指定成分的产品，以及任何直接或间接由指定量的指定成分的组合产生的产品。
[0064]
如本文使用的术语“治疗”旨在是指其中可能减缓、中断、遏制或阻止疾病的进展的所有过程，但未必指示所有症状都全部消除。
[0065]
如本文使用的术语“(本)发明的一种或多种化合物”或“根据(本)发明的一种或多种化合物”意指包括具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0066]
如本文使用的，具有仅显示为实线并且不显示为实楔形键或虚楔形键的键的任何化学式，或另外指示为围绕一个或多个原子具有特别构型(例如r，s)的化学式，考虑每种可能的立体异构体，或两种或更多种立体异构体的混合物。
[0067]
在上文和下文中，术语“一种或多种具有式(i)的化合物”意指包括其互变异构体和其立体异构形式。
[0068]
术语“立体异构体”、“立体异构形式”或“立体化学异构形式”在上文或下文中可互
换地使用。
[0069]
本发明包括本发明的化合物呈纯立体异构体或呈两种或更多种立体异构体的混合物的所有立体异构体。
[0070]
对映异构体为彼此不可重叠的镜像的立体异构体。对映异构体对的1:1混合物是外消旋体或外消旋混合物。
[0071]
阻转异构体(atropisomer)(或限制构型异构体(atropoisomer))是具有特定空间构型的立体异构体，该特定空间构型由大空间位阻所致的围绕单键受限制的旋转所产生。具有式(i)的化合物的所有阻转异构形式旨在包括在本发明的范围内。
[0072]
特别地，本文披露的化合物由于围绕联芳基键的受限制的旋转而具有轴向手性，并且因此可以作为阻转异构体的混合物存在。当化合物是纯阻转异构体时，每个手性中心的立体化学可以由ra或sa指定。此类名称也可以用于富含一种阻转异构体的混合物。阻转异构和轴向手性以及构型分配规则的进一步描述可以在eliel,e.l.和wilen,s.h.
‘
stereochemistry of organic compounds[有机化合物的立体化学]’john wiley and sons,inc.[约翰威利父子公司]1994中找到。
[0073]
非对映异构体(或非对映立体异构体)为不是对映异构体的立体异构体，即它们并非为镜像关系。如果化合物含有双键，则这些取代基可以呈e或z构型。
[0074]
二价环状饱和或部分饱和基团上的取代基可以具有顺式构型或反式构型；例如，如果化合物含有二取代的环烷基基团，则这些取代基可以呈顺式构型或反式构型。
[0075]
因此，本发明包括对映异构体、阻转异构体、非对映异构体、外消旋体、e异构体、z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物，只要化学上可能即可。
[0076]
所有那些术语(即对映异构体、阻转异构体、非对映异构体、外消旋体、e异构体、z异构体、顺式异构体、反式异构体及其混合物)的含义为技术人员所已知。
[0077]
绝对构型是根据卡恩-英戈尔德-普雷洛格(cahn-ingold-prelog)系统指定的。不对称原子处的构型由r或s指定。绝对构型未知的已拆分的立体异构体可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由( )或(-)指定。例如，绝对构型未知的已拆分的对映异构体可以根据它们旋转平面偏振光的方向而由( )或(-)指定。光学活性(ra)-和(sa)-阻转异构体可以使用手性合成子、手性试剂或手性催化剂制备，或使用本领域熟知的常规技术(如手性hplc)来拆分。
[0078]
当鉴定具体的立体异构体时，这意指所述立体异构体基本上不含其他立体异构体，即与少于50％、优选地少于20％、更优选地少于10％、甚至更优选地少于5％、特别是少于2％并且最优选地少于1％的其他立体异构体相关联。因此，当具有式(i)的化合物例如被指定为(r)时，这意指该化合物基本上不含(s)异构体；当具有式(i)的化合物例如被指定为e时，这意指该化合物基本上不含z异构体；当具有式(i)的化合物例如被指定为顺式时，这意指该化合物基本上不含反式异构体；当具有式(i)的化合物例如被指定为ra时，这意指该化合物基本上不含sa阻转异构体。
[0079]
药学上可接受的盐，特别是药学上可接受的加成盐，包括酸加成盐和碱加成盐。此类盐可以通过常规手段，例如通过使游离酸或游离碱形式与一个或多个当量的适当的碱或酸、任选地在溶剂中或在其中该盐不可溶的介质中进行反应，之后使用标准技术(例如，在真空中，通过冷冻干燥或通过过滤)去除所述溶剂或所述介质来形成。盐还可以通过例如使
用适合的离子交换树脂将呈盐形式的本发明的化合物的反离子与另一种反离子进行交换来制备。
[0080]
如在上文或下文中所提及的药学上可接受的盐意在包含具有式(i)的化合物及其溶剂化物能够形成的有治疗活性的无毒的酸盐和碱盐形式。
[0081]
适当的酸包括例如无机酸，如氢卤酸(例如盐酸或氢溴酸)、硫酸、硝酸、磷酸以及类似酸；或有机酸，例如像乙酸、丙酸、羟基乙酸、乳酸、丙酮酸、草酸(即乙二酸)、丙二酸、琥珀酸(即丁二酸)、马来酸、富马酸、苹果酸、酒石酸、柠檬酸、甲磺酸、乙磺酸、苯磺酸、对甲苯磺酸、环己氨磺酸、水杨酸、对氨基水杨酸、双羟萘酸以及类似酸。相反地，可以通过用适当的碱处理将所述盐形式转化为游离碱形式。
[0082]
还可以通过用适当的有机和无机碱处理将含有酸性质子的具有式(i)的化合物及其溶剂化物转化为它们的无毒金属或胺盐形式。
[0083]
适当的碱盐形式包括例如铵盐，碱金属及碱土金属盐例如锂、钠、钾、铯、镁、钙盐等，与有机碱(例如伯、仲及叔脂肪族及芳香族胺，如甲胺、乙胺、丙胺、异丙胺、四种丁胺异构体、二甲胺、二乙胺、二乙醇胺、二丙胺、二异丙胺、二正丁胺、吡咯烷、哌啶、吗啉、三甲胺、三乙胺、三丙胺、奎宁环、吡啶、喹啉和异喹啉)的盐；苄星青霉素、n-甲基-d-葡糖胺、海巴明盐、以及与氨基酸(例如像精氨酸、赖氨酸等)的盐。相反地，可以通过用酸处理将该盐形式转化为游离酸形式。
[0084]
术语溶剂化物包括具有式(i)的化合物能够形成的其溶剂加成形式以及其盐。此类溶剂加成形式的实例是例如水合物、醇化物等。
[0085]
如在以下描述的工艺中制备的本发明的化合物可以合成为对映异构体的混合物形式，特别是对映异构体的外消旋混合物，这些对映异构体可以遵循本领域中已知的拆分程序相互分离。分离具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐、n-氧化物和溶剂化物的对映异构形式的方式涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构形式还可以来源于适当起始材料的相应的纯立体化学异构形式，条件是反应立体定向地发生。优选地，如果一种具体的立体异构体是所希望的，则所述化合物将通过立体定向制备方法来合成。这些方法将有利地采用对映异构体纯的起始材料。
[0086]
如本文使用的术语“对映异构体纯的”意指产物含有至少按重量计80％的一种对映异构体和按重量计20％或更少的另一种对映异构体。优选地该产物含有至少按重量计90％的一种对映异构体和按重量计10％或更少的另一种对映异构体。在最优选的实施例中，术语“对映异构体纯的”意指组合物含有至少按重量计99％的一种对映异构体和1％或更少的另一种对映异构体。
[0087]
本发明还包括本发明的同位素标记的化合物，这些同位素标记的化合物与本文列举的那些相同，但是事实上一个或多个原子被原子质量或质量数不同于自然中通常发现(或自然中发现的最多的那一个)的原子质量或质量数的原子所替换。
[0088]
如本文所指定的任何具体的原子或元素的所有同位素和同位素混合物都被认为是在本发明的化合物的范围之内，不论是天然存在的或是合成产生的，不论具有天然丰度或呈同位素富集的形式。可以并入到本发明的化合物中的示例性同位素包括氢、碳、氮、氧、磷、硫、氟、氯和碘的同位素，如2h、3h、
11
c、
13
c、
14
c、
13
n、
15
o、
17
o、
18
o、
32
p、
33
p、
35
s、
18
f、
36
cl、
122
i、
123
i、
125
i、
131
i、
75
br、
76
br、
77
br和
82
br。优选地，同位素选自2h、3h、
11
c和
18
f的组。更优选地，同
位素是2h。特别地，氘化的化合物旨在包括在本发明的范围内。
[0089]
本发明的某些同位素标记的化合物(例如，用3h和
14
c标记的那些)例如在底物组织分布测定中可以是有用的。氚化(3h)和碳-l4(
14
c)同位素是有用的，因为它们易于制备和检测。此外，用更重同位素(如氘)(即，2h)取代可以提供由于更大的代谢稳定性而产生的某些治疗优点(例如，增加的体内半衰期或降低的剂量需求)并且因此在一些环境下可以是优选的。正电子发射同位素(诸如
15
o、
13
n、
11
c和
18
f)对于正电子发射断层术(pet)研究是有用的。癌症中的pet成像在帮助定位和鉴定肿瘤、对疾病分阶段并确定适合的治疗方法中有效用。人癌细胞过表达许多受体或蛋白质，这些受体或蛋白质是潜在的疾病特异性分子靶标。以高亲和力和特异性结合肿瘤细胞上的此类受体或蛋白质的放射标记的示踪剂具有诊断成像和靶向放射性核素治疗的巨大潜力(charron，carlie l.等人，tetrahedron lett.[四面体通讯]2016,57(37),4119-4127)。另外，靶特异性pet放射性示踪剂可以用作生物标志物来检查和评估病理学，例如通过测量靶标表达和治疗应答(austin r.等人，cancer letters[癌症通讯](2016)，doi:10.1016/j.canlet.2016.05.008)。
[0090]
本发明特别涉及如本文所定义的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0091]
x1代表
[0092][0093]
其中
‘
a’和
‘
b’指示变量x1如何附接到分子的其余部分；
[0094]
x2代表
[0095][0096]
其可以在两个方向上附接到分子的其余部分；
[0097]
r1和r2代表甲基；
[0098]
y1代表-s(＝o)
2-或-n(r
x
)-；
[0099]rx
代表氢、甲基、c
2-6
烷基、-c(＝o)-c
1-6
烷基、-s(＝o)
2-c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、-c(＝o)-c
3-6
环烷基、或-s(＝o)
2-c
3-6
环烷基；其中c
2-6
烷基、-c(＝o)-c
1-6
烷基、-s(＝o)
2-c
1-6
烷基、c
3-6
环烷基、-c(＝o)-c
3-6
环烷基、和-s(＝o)
2-c
3-6
环烷基任选地被选自由以下组成的组的一个、两个或三个取代基取代：卤基、c
1-4
烷基和被一个、两个或三个卤原子取代的c
1-4
烷基；
[0100]
y2代表-s-或-s(＝o)
2-；
[0101]
其条件是y1和y2中的至少一个代表-s(＝o)
2-；
[0102]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0103]
本发明特别涉及如本文所定义的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构
形式，其中
[0104]
x1代表
[0105][0106]
其中
‘
a’和
‘
b’指示变量x1如何附接到分子的其余部分；
[0107]
x2代表
[0108][0109]
其可以在两个方向上附接到分子的其余部分；
[0110]
r1和r2代表甲基；
[0111]
y1代表-s(＝o)
2-或-n(r
x
)-；
[0112]rx
代表氢；
[0113]
y2代表-s-或-s(＝o)
2-；
[0114]
其条件是y1和y2中的至少一个代表-s(＝o)
2-；
[0115]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0116]
本发明特别涉及如本文所定义的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0117]
x1代表
[0118][0119]
其中
‘
a’和
‘
b’指示变量x1如何附接到分子的其余部分；
[0120]
x2代表
[0121][0122]
其可以在两个方向上附接到分子的其余部分；
[0123]
r1和r2代表甲基；
[0124]
y1代表-s(＝o)
2-或-n(r
x
)-；
[0125]rx
代表甲基；
[0126]
y2代表-s-或-s(＝o)
2-；
[0127]
其条件是y1和y2中的至少一个代表-s(＝o)
2-；
[0128]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0129]
本发明特别涉及如本文所定义的具有式(i)的化合物及其互变异构体和立体异构形式，其中
[0130]
x1代表
[0131][0132]
其中
‘
a’和
‘
b’指示变量x1如何附接到分子的其余部分；
[0133]
x2代表
[0134][0135]
其可以在两个方向上附接到分子的其余部分；
[0136]
r1和r2代表甲基；
[0137]
y1代表-s(＝o)
2-或-n(r
x
)-；
[0138]rx
代表甲基；
[0139]
y2代表-s-或-s(＝o)
2-；
[0140]
其条件是y1和y2中的至少一个代表-s(＝o)
2-；
[0141]
及其药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0142]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0143]
y1代表-n(r
x
)-；并且y2代表-s(＝o)
2-。
[0144]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中y2代表-s(＝o)
2-。
[0145]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0146]
y1代表-n(r
x
)-；r
x
代表甲基；并且y2代表-s(＝o)
2-。
[0147]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中y1代表-s(＝o)
2-。
[0148]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中y1代表-s(＝o)
2-；并且y2代表-s(＝o)
2-。
[0149]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中y1代表-s(＝o)
2-；并且y2代表-s-。
[0150]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的
化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中r
x
代表甲基。
[0151]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0152]
x1代表
[0153][0154]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中
[0155]
x1代表
[0156][0157]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中具有式(i)的化合物限于具有式(i-x)的化合物：
[0158][0159]
将清楚的是，具有式(i-x)的结构中的所有变量如对于如其他实施例中任一项所提及的具有式(i)的化合物或其任何子组所定义的来定义。
[0160]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中具有式(i)的化合物限于具有式(i-xx)的化合物：
[0161][0162]
将清楚的是，具有式(i-xx)的结构中的所有变量如对于如其他实施例中任一项所提及的具有式(i)的化合物或其任何子组所定义的来定义。
[0163]
在一个实施例中，本发明涉及如其他实施例中任一项所提及的那些具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物或其任何子组，其中具有式(i)的化合物限于具有式(i-y)的化合物：
[0164][0165]
将清楚的是，具有式(i-y)的结构中的所有变量如对于如其他实施例中任一项所提及的具有式(i)的化合物或其任何子组所定义的来定义。
[0166]
在一个实施例中，本发明涉及如在通用反应方案中所定义的具有式(i)的子组。
[0167]
在一个实施例中，具有式(i)的化合物选自由以下组成的组：示例性化合物中的任一者，其互变异构体和立体异构形式，其任何药学上可接受的盐和溶剂化物。
[0168]
以上指示的实施例的所有可能组合都视为包含在本发明的范围内。
[0169]
用于制备化合物的方法
[0170]
在这一部分中，如在所有其他部分中，除非上下文另外指明，否则对式(i)的提及还包括如本文所定义的其所有其他的子组和实例。
[0171]
具有式(i)的化合物的一些典型实例的一般制备在下文以及在具体实例中进行了描述，并且通常制备自可商购的或通过有机化学领域的技术人员常用的标准合成工艺制备的起始材料。以下方案仅意在代表本发明的实例并且决不意在限制本发明。
[0172]
可替代地，还可以通过将如在以下通用方案中所述的类似反应方案与本领域技术人员常用的标准合成工艺组合来制备本发明的化合物。
[0173]
技术人员将认识到，在方案中所描述的反应中，尽管并不总是明确地显示，但是保护在终产物中所希望的反应性官能团(例如羟基、氨基、或羧基基团)可能是必要的，以避免它们参与所不希望的反应。通常，可根据标准实践使用常规保护基团。可使用本领域已知的方法在方便的后续阶段去除保护基团。
[0174]
技术人员将认识到，在方案里所描述的反应中，在惰性气氛(例如像在n2气氛)下进行反应可能是可取的或必要的。
[0175]
技术人员将清楚的是，在反应处理(指的是分离和纯化化学反应的一种或多种产物所必须的一系列操作，例如像淬灭、柱色谱法、萃取)前，冷却反应混合物可能是必要的。
[0176]
技术人员将认识到，在搅拌下加热反应混合物可增加反应产出。在一些反应中，可使用微波加热替换常规的加热以缩短总反应时间。
[0177]
技术人员将认识到，在以下方案中示出的化学反应的另一种顺序也可以产生所希望的具有式(i)的化合物。
[0178]
技术人员将认识到，在以下方案中示出的中间体和最终化合物可以根据本领域技术人员熟知的方法进一步官能化。本文所述的中间体和化合物可以按游离形式或以其盐或溶剂化物形式进行分离。本文所述的中间体和化合物可以合成为互变异构体和立体异构形式的混合物的形式，这些互变异构体和立体异构形式可以遵循本领域中已知的拆分程序相互分离。
[0179]
具有式(i)的化合物(其中x1、x2、y1、和y2如在一般范围中所定义)可以根据以下方案1来制备。在本专利申请的上下文中，p1限于甲基。
[0180][0181]
方案1
[0182]-通过使具有式(ii)的中间体与适合的碱(例如像lioh或naoh)反应，该反应在适合的溶剂(如水或水和适合的有机溶剂(如二噁烷或thf(四氢呋喃))的混合物，或meoh和thf的混合物)中、在适合的温度(如室温或60℃)下进行。
[0183]-具有式(ii)的中间体可以通过使具有式(iii)的中间体与适合的烷基化剂r2l(其中l作为适合的离去基团)(例如像烷基卤化物)反应来制备，该反应在适合的碱(例如像cs2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像dmf)中、在适合的温度(例如像室温或60℃)下进行。
[0184]-具有式(iii)的中间体可以通过使具有式(iv)的中间体与适合的脱保护剂(例如像hcl)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像meoh、thf、或其混合物)中、在适合的温度
(例如像室温)下进行。
[0185]
具有式(ii)的中间体可能具有在r1位置的保护基团，例如像四氢吡喃基。在这种情况下，使具有式(ii)的中间体与适合的脱保护剂(例如像ptsoh(对甲苯磺酸)或hcl)反应，该反应在适合的溶剂(例如像iproh(2-丙醇))中、在适合的温度(例如像室温)下进行。在下一步骤中，可以使获得的未受保护的中间体与适合的甲基化剂r1l(其中l作为适合的离去基团)(例如像甲基卤化物)反应，该反应在适合的碱(例如像cs2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像dmf(n,n-二甲基甲酰胺))中、在适合的温度(例如像室温或60℃)下进行。
[0186]
可替代地，当y1＝y2＝so2时，具有式(ii)的中间体还可以通过使具有式(ii)的中间体(其中y1＝y2＝s)与适合的氧化剂(例如像mcpba(间氯过氧苯甲酸))反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像dcm(二氯甲烷))中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0187]
具有式(iv)的中间体(其中x1如在式(i)中所定义，y2是s，并且p1是甲基)可以根据以下方案2来制备，
[0188][0189]
方案2
[0190]-通过使具有式(vi)的中间体与适合的试剂(例如像偶氮二甲酸二乙酯(dead)或偶氮二甲酸二叔丁酯(dtbad))反应，该反应在适合的膦(例如像pph3)的存在下、在适合的溶剂(例如像thf、甲苯、或其混合物)中、在适合的温度(例如像室温或70℃)下进行。
[0191]-具有式(vi)的中间体可以通过使具有式(vii)的中间体(其中y3是c＝o并且r’是me)与适合的还原剂(例如像bh3.dms(硼烷二甲基硫醚))反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温或50℃)下进行。
[0192]-可替代地，具有式(vi)的中间体可以通过使具有式(vii)的中间体(其中y3是ch2并且r’是适合的保护基团(如tbdms))与适合的脱保护剂(例如像四丁基氟化铵(tbaf))反
应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0193]-具有式(vii)的中间体可以通过使具有式(viii)的中间体(其中l是适合的离去基团(例如像甲磺酸盐(mso)或cl))与3-(乙酰硫代)萘-1-基乙酸酯反应来制备，该反应在适合的碱(例如像k2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像甲醇)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0194]-具有式(viii)的中间体可以通过使具有式(ix)的中间体与适合的活化剂(例如像甲磺酰氯(mscl)或socl2)反应来制备，该反应在适合的溶剂(如dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0195]-具有式(ix)的中间体可以通过如下来制备：
[0196]
a)当y3是c＝o，r’是me，并且p2是保护基团(如tbdms)时：使具有式(x)的中间体与适合的脱保护剂(例如像tbaf)反应，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行；或
[0197]
b)当y3是ch2，r’是保护基团(如tbdms)，并且p2是保护基团(如四氢吡喃基(thp))时：
[0198]
使具有式(x)的中间体与适合的脱保护剂(例如像mgbr2)反应，该反应在适合的溶剂(例如像et2o)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0199]-具有式(x)的中间体(其中p2是适合的保护基团(例如像叔丁基二苯基甲硅烷基(tbdps)))可以通过使具有式(xi)的中间体与具有式(xii)的中间体反应来制备，该反应在适合的碱(例如像k2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像meoh、thf、或其混合物)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。l定义为适合的离去基团(例如像mso或cl)。
[0200]
可替代地，具有式(vi)的中间体(其中x1和r
x
如在式(i)中所定义，y2是s，并且p1是甲基)可以根据以下方案3来制备，
[0201][0202]
方案3
[0203]-通过使具有式(xxxiv)的中间体(其中y3是c＝o并且r’是me)与适合的还原剂(例如像bh3.dms(硼烷二甲基硫醚))反应，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温或50℃)下进行。
[0204]-可替代地，中间体(vi)可以分两步来制备，首先通过使具有式(xxxiv)的中间体(其中y3是ch2并且r’是适合的保护基团(如tbdms))与适合的还原剂(例如像bh3.dms(硼烷二甲基硫醚))反应，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温或50℃)下进行；之后与适合的脱保护剂(例如像tbaf)反应，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0205]-具有式(xxxiv)的中间体可以通过使具有式(xiii)的中间体(其中l是适合的离去基团(例如像mso或cl))与3-(乙酰硫代)萘-1-基乙酸酯反应来制备，该反应在适合的碱(例如像k2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像甲醇)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0206]-具有式(xiii)的中间体可以通过使具有式(xiv)的中间体与适合的活化剂(例如像mscl或socl2)反应来制备，该反应在适合的溶剂(如dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0207]-具有式(xiv)的中间体可以通过使具有式(xv)的中间体与适合的脱保护剂(例如像四丁基氟化铵(tbaf))反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0208]-具有式(xv)的中间体可以通过使具有式(xvi)的中间体与具有式(xvii)的中间
体反应来制备，该反应在适合的偶合试剂(例如像o-(苯并三唑-1-基)-n,n,n
′
,n
′‑
四甲基脲鎓六氟磷酸酯(hbtu))的存在下、在适合的碱(例如像dipea)的存在下、在适合的溶剂(例如像dmf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0209]-具有式(xvi)的中间体可以通过使具有式(xi)的中间体与适合的伯胺(例如像甲胺)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像40℃)下进行。
[0210]
具有式(xvii)的中间体(其中p1如在(vii)中所定义，并且p2是适合的保护基团(例如像叔丁基二甲基甲硅烷基(tbdms)))可以根据以下方案4来制备，
[0211][0212]
方案4
[0213]
通过使具有式(xix)的中间体反应，该反应在适合的碱(例如像naoh)的存在下、在适合的溶剂(例如像meoh和水的混合物)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0214]
具有式(xix)的中间体(其中p2是保护基团(例如像thp))可以根据方案4，通过使具有式(xx)的中间体与适合的保护基团前体(例如像二氢吡喃)反应来制备，该反应在适合的酸(例如像对甲苯磺酸(ptosoh))的存在下、在适合的溶剂(例如像dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。具有式(xix)的中间体(其中p2是保护基团(例如像tbdms))可以根据方案4，通过使具有式(xx)的中间体与适合的保护基团前体(例如像叔丁基二甲基氯硅烷(tbdmscl))反应来制备，该反应在适合的碱(例如像et3n或4-二甲基氨基吡啶(dmap)，或其混合物)的存在下、在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。具有式(xx)的中间体可以通过本领域技术人员已知的方法或通过类似于wo2005018557中的教导来制备。
[0215]
具有式(xii)的中间体可以根据以下方案4来制备，
[0216]-通过使具有式(xviii)的中间体以两步程序反应，首先反应在适合的活化剂(例如像mscl)的存在下、在适合的碱(例如像et3n)的存在下、在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行；然后通过与硫代乙酸钾(acsk)反应，该反应在适合的溶剂(例如像dmf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0217]-具有式(xviii)的中间体可以通过使具有式(xix)的中间体与适合的还原剂(例如像lialh4)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像0℃)下进行。
[0218]
可替代地，具有式(iv)的中间体(其中y1定义为n(r
x
))可以根据以下方案5来制备，
[0219][0220]
方案5
[0221]-通过使具有式(xxi)的中间体与适合的醛(例如像甲醛)反应，该反应在适合的酸(例如像acoh)的存在下、在适合的还原剂(例如像nabh(oac)3)的存在下、在适合的溶剂(例如像dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0222]-具有式(xxi)的中间体可以通过使具有式(xxii)的中间体与适合的脱保护剂(例如像苯硫酚)反应来制备，该反应在适合的碱(例如像k2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像乙腈)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0223]-具有式(xxii)的中间体可以通过使具有式(xxiii)的中间体与适合的试剂(例如像偶氮二甲酸二叔丁酯(dtbad))反应来制备，该反应在适合的膦(例如像三苯基膦(pph3))的存在下、在适合的溶剂(例如像thf、甲苯、或其混合物)中、在适合的温度(例如像室温或70℃)下进行。
[0224]-具有式(xxiii)的中间体可以通过使具有式(xxiv)的中间体(其中y3是c＝o并且r’是me)与适合的还原剂(例如像bh3.dms)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温或50℃)下进行。
[0225]-可替代地，具有式(xxiii)的中间体还可以通过使具有式(xxxiii)的中间体(其中y3是ch2并且r’是适合的保护基团(如tbdms))与适合的脱保护剂(例如像tbaf)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0226]-具有式(xxiv)的中间体可以通过使具有式(xxxiii)的中间体(其中y3是c＝o和r’是me)与适合的脱保护剂(例如像tbaf)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0227]-具有式(xxxiii)的中间体可以两步程序来制备，首先通过使具有式(xxv)的中间体与适合的被保护的氮(例如像2-硝基苯基磺酰胺)反应，该反应在适合的试剂(例如像dead或dtbad)的存在下、在适合的膦(例如像pph3)的存在下、在适合的溶剂(例如像dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行；之后通过与具有式(xxvi)的中间体反应，该反应在适合的试剂(例如像dead或dtbad)的存在下、在适合的膦(例如像pph3)的存在下、在适合的溶剂(例如像dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。(ns意指硝基苯磺酰基(nosyl)或邻硝基苯磺酰基)
[0228]-可替代地，具有式(xxxiii)的中间体可以通过使具有式(xxxiii)的中间体(其中y2＝s)与适合的氧化剂(例如像mcpba)反应来转化为其氧化形式(其中y2＝so2)，该反应在适合的溶剂(例如像dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0229]
具有式(xi)的中间体(其中x1如在式(i)中所定义，并且y3/r’是c＝o/me或y3/r’是ch2/tbdms)可以根据以下方案6来制备，
[0230][0231]
方案6
[0232]-通过使具有式(xxv)的中间体与适合的活化剂(例如像mscl或socl2)反应，该反应在适合的溶剂(如dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0233]-具有式(xxv)的中间体可以通过使具有式(xxvii)的中间体与适合的脱保护剂
(例如像tfa)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像dcm)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0234]-具有式(xxvii)的中间体可以通过使具有式(xxviii)的中间体与适合的烷基化试剂(例如像mei(甲基碘))反应来制备，该反应在适合的碱(例如像cs2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像dmf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0235]-具有式(xxviii)的中间体(其中p3是适合的保护基团(例如像thp)，y3是c＝o，并且r’是me)可以通过使7-溴-6-氯-3-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1h-吲哚-2-甲酸甲酯(cas[2143010-85-7])与具有式(xxix)的中间体反应来制备，该反应在适合的催化剂(例如像[1,1
′‑
双(二-叔丁基膦基)二茂铁]二氯钯(ii)(pd(dtbpf)cl2))的存在下、在适合的碱(例如像cs2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像thf和水的混合物)中、在适合的温度(例如像100℃)下进行。
[0236]-可替代地，这样的整个合成途径可以从7-溴-6-氯-3-(3-羟丙基)-1h-吲哚-2-甲酸甲酯(cas[2245716-18-9])起始，在适合的碱(例如像三乙胺(et3n)或dmap、或其混合物)的存在下、在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下，在其被适合的保护基团试剂(例如像tbdmscl)保护之后，产生中间体(其中y3是ch2并且r’是适合的保护基团(如tbdms))。
[0237]
具有式(xxix)的中间体(其中r1如在式(i)中所定义，或可替代地，r1还可以是适合的保护基团(例如像thp)，p3是适合的保护基团(例如像tbdms)，并且b(or)2代表硼酸或适合的硼酸盐衍生物)可以根据以下方案7来制备，
[0238][0239]
方案7
[0240]-通过使具有式(xxx)的中间体与适合的硼酸盐(例如像异丙氧基硼酸频哪醇酯)反应，该反应在适合的碱(例如像buli)的存在下、在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像-78℃)下进行。
[0241]-具有式(xxx)的中间体可以通过使具有式(xxxi)的中间体与适合的保护基团前体(例如像tbdmscl)反应来制备，该反应在适合的碱(例如像et3n或dmap、或其混合物)的存在下、在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0242]-具有式(xxxi)的中间体可以通过使具有式(xxxii)的中间体与适合的还原剂(例如像libh4)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像2-甲基四氢呋喃(2-methf))中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0243]
具有式(xxvi)的中间体可以根据以下方案8来制备，
[0244][0245]
方案8
[0246]-通过使具有式(xxxv)的中间体与适合的还原剂(例如像dibalh)反应，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像0℃或室温)下进行。
[0247]-具有式(xxxv)的中间体可以通过使具有式(xxxvi)的中间体与适合的三元取代的甲硅烷基氯(例如像tbdmscl(叔丁基二甲基甲硅烷基氯)或tbdpscl(叔丁基二苯基甲硅烷基氯))反应来制备，该反应在适合的碱(例如像咪唑)的存在下、在适合的溶剂(例如像dmf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0248]-具有式(xxxvi)的中间体可以通过使具有式(xxxvii)的中间体(其中l是适合的离去基团(例如像氯化物或甲磺酸酯))与3-(乙酰硫代)萘-1-基乙酸酯反应来制备，该反应在适合的碱(例如像k2co3)的存在下、在适合的溶剂(例如像甲醇)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0249]-具有式(xxxvii)的中间体可以通过使具有式(xxxviii)的中间体与适合的试剂(例如像甲磺酰氯或亚硫酰氯)反应来制备，如果必要的话，该反应在适合的碱(例如像三乙胺)的存在下、在适合的溶剂(例如像ch2cl2)中、在适合的温度(例如像0℃或室温)下进行。
[0250]-具有式(xxxviii)的中间体可以通过使具有式(xxxix)的中间体与脱保护剂(例如像tbaf)反应来制备，该反应在适合的溶剂(例如像thf)中、在适合的温度(例如像室温)下进行。
[0251]-具有式(xxxix)的中间体可以通过使5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-1h-吡唑-3-甲酸乙酯与甲基碘反应来制备，该反应在适合的碱(例如像双(三甲基甲硅烷基)氨基钠)的存在下，在适合的溶剂(例如像thf)中，在适合的温度(例如像0℃或室温)下进行。
[0252]
将理解的是，在存在适当官能团的情况下，具有不同式的化合物或用于其制备的任何中间体可以通过一种或多种标准合成方法采用缩合、取代、氧化、还原或裂解反应来进一步衍生。具体取代方法包括常规烷基化、芳基化、杂芳基化、酰化、磺酰化、卤化、硝化、甲
酰化以及偶合程序。
[0253]
具有式(i)的化合物可以合成为限制构型异构体的外消旋混合物形式，这些限制构型异构体可以遵循本领域中已知的拆分程序相互分离。具有式(i)的限制构型异构混合物(含有基础氮原子)可以通过与适合的手性酸反应而转化为相应的非对映异构盐形式。所述非对映异构盐形式接着例如通过选择性或分步结晶而分离，并且限制构型异构体通过碱由其释放。分离具有式(i)的化合物的手性形式的替代性方式涉及使用手性固定相的液相色谱法。所述纯立体化学异构形式还可以来源于适当起始材料的相应的纯立体化学异构形式，条件是反应立体定向地发生。
[0254]
在制备本发明化合物的过程中，对中间体的远端官能团(例如伯胺或仲胺)的保护可能是必要的。对这种保护的需要将取决于远端官能团的性质和制备方法的条件而有所不同。适合的氨基保护基团(nh-pg)包括乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧基羰基(boc)、苄氧基羰基(cbz)以及9-芴基亚甲基氧基羰基(fmoc)。对这种保护的需要易于由本领域技术人员确定。关于保护基团及其用途的一般说明，参见t.w.greene和p.g.m.wuts,protective groups in organic synthesis[有机合成中的保护基团],第4版,wiley[威利出版社],hoboken,new jersey[新泽西州霍博肯],2007。
[0255]
化合物的药理学
[0256]
已经发现，本发明的化合物抑制多种mcl-1活性中的一种，如mcl-1抗细胞凋亡活性。
[0257]
mcl-1抑制剂是阻断一种或多种mcl-1功能的化合物，该mcl-1功能例如结合并阻遏促细胞凋亡效应子bak和bax或仅bh3敏化剂(如bim、noxa或puma)的能力。
[0258]
本发明的化合物可以抑制mcl-1的促存活功能。因此，本发明的化合物在治疗和/或预防，特别是治疗易受免疫系统影响的疾病(如癌症)中可以是有用的。
[0259]
在本发明的另一个实施例中，本发明的化合物表现出抗肿瘤特性，例如，通过免疫调节。
[0260]
在一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法，其中该癌症选自本文所述的那些，该方法包括向有需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0261]
在一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该癌症选自由以下组成的组：急性淋巴母细胞白血病(all)、急性髓系细胞白血病(aml)、b细胞急性淋巴母细胞白血病、b细胞慢性淋巴细胞白血病(cll)、膀胱癌、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系细胞白血病、结肠腺癌、弥漫大b细胞淋巴瘤、食道癌、滤泡性淋巴瘤、胃癌、头颈癌(包括但不限于头颈部鳞状细胞癌)、造血癌、肝细胞癌、霍奇金淋巴瘤、肝癌、肺癌(包括但不限于肺腺癌)、淋巴瘤、髓母细胞瘤、黑素瘤、意义不明的单克隆丙球蛋白病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓纤维化、骨髓增生性赘生物、卵巢癌、卵巢透明细胞癌、卵巢浆液性囊腺瘤、胰腺癌、真性红细胞增多症、前列腺癌、直肠腺癌、肾细胞癌、冒烟型多发性骨髓瘤、t细胞急性淋巴母细胞白血病、t细胞淋巴瘤和华氏巨球蛋白血症。
[0262]
在另一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法，该方法包括向有
需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该癌症优选选自由以下组成的组：急性淋巴母细胞白血病(all)、急性髓系细胞白血病(aml)、b细胞急性淋巴母细胞白血病、b细胞慢性淋巴细胞白血病(cll)、乳腺癌、慢性淋巴细胞白血病、慢性髓系细胞白血病、弥漫大b细胞淋巴瘤、滤泡性淋巴瘤、造血癌、霍奇金淋巴瘤、肺癌(包括但不限于肺腺癌)、淋巴瘤、意义不明的单克隆丙球蛋白病、多发性骨髓瘤、骨髓增生异常综合征、骨髓纤维化、骨髓增生性赘生物、冒烟型多发性骨髓瘤、t细胞急性淋巴母细胞白血病、t细胞淋巴瘤和华氏巨球蛋白血症。
[0263]
在另一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该癌症选自由以下组成的组：腺癌、良性单克隆丙球蛋白病、胆管癌(包括但不限于胆管细胞癌)、膀胱癌、乳腺癌(breast cancer)(包括但不限于乳腺腺癌、乳腺乳头状癌、乳腺癌(mammary cancer)、乳腺髓样癌)、脑癌(包括但不限于脑膜瘤)、神经胶质瘤(包括但不限于星形细胞瘤、少突胶质细胞瘤；髓母细胞瘤)、支气管癌、宫颈癌(包括但不限于宫颈腺癌)、脊索瘤、绒毛膜癌、结直肠癌(包括但不限于结肠癌、直肠癌、结直肠腺癌)、上皮癌、内皮肉瘤(包括但不限于卡波西肉瘤、多发性特发性出血性肉瘤)、子宫内膜癌(包括但不限于子宫癌、子宫肉瘤)、食道癌(包括但不限于食道腺癌、巴雷特腺癌)、尤文肉瘤、胃癌(包括但不限于胃腺癌)、胃肠道间质瘤(gist)、头颈癌(包括但不限于头颈部鳞状细胞癌)、造血癌(包括但不限于白血病如急性淋巴细胞白血病(all)(包括但不限于b细胞all、t细胞all)、急性髓细胞白血病(aml)(例如b细胞aml、t细胞aml)、慢性髓细胞白血病(cml)(例如b细胞cml、t细胞cml)和慢性淋巴细胞白血病(cll)(例如b细胞cll、t细胞cll)、淋巴瘤如霍奇金淋巴瘤(hl)(包括但不限于b细胞hl、t细胞hl)和非霍奇金淋巴瘤(nhl)(例如b细胞nhl，如弥漫性大细胞淋巴瘤(dlcl)(例如弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl))、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、套细胞淋巴瘤(mcl)、边缘区b细胞淋巴瘤(包括但不限于黏膜相关淋巴组织(malt)淋巴瘤、淋巴结边缘区b细胞淋巴瘤、脾边缘区b细胞淋巴瘤)、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤(包括但不限于华氏巨球蛋白血症)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、毛细胞白血病(hcl)、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤、t细胞nhl如前体t淋巴母细胞淋巴瘤/白血病、周围t细胞淋巴瘤(ptcl)(例如皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)(包括但不限于蕈样真菌病、塞扎里综合征)、血管免疫母细胞t细胞淋巴瘤、结外自然杀伤t细胞淋巴瘤、肠病型t细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样t细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、如上所述的一种或多种白血病/淋巴瘤的混合物、多发性骨髓瘤(mm)、重链疾病(包括但不限于，α链病、γ链病、μ链病)、免疫细胞淀粉样变性、肾癌(包括但不限于肾母细胞瘤又名维尔姆斯瘤、肾细胞癌)、肝癌(包括但不限于肝细胞癌(hcc)、恶性肝癌)、肺癌(包括但不限于支气管癌、非小细胞肺癌(nsclc)、鳞状细胞肺癌(slc)、肺腺癌、lewis肺癌、肺神经内分泌肿瘤、典型类癌、非典型类癌、小细胞肺癌(sclc)和大细胞神经内分泌癌)、骨髓增生异常综合征(mds)、骨髓增殖性病症(mpd)、真性红细胞增多症(pv)、原发性血小板增多症(et)、特发性髓系化生(amm)又称骨髓纤维化(mf)、慢性特发性骨髓纤维化、慢性髓细胞白血病(cml)、慢性中性粒细胞白血病(cnl)、嗜酸性粒细胞增多综合征(hes)、卵巢癌(包括但不限于囊腺癌、卵巢胚胎癌、卵巢腺癌)、胰腺癌(包括但不限于胰腺腺癌、导管内乳头状粘液性赘生物(ipmn)、胰岛细胞肿瘤)、前列腺癌
(包括但不限于前列腺腺癌)、皮肤癌(包括但不限于鳞状细胞癌(scc)、角化棘皮瘤(ka)、黑素瘤、基底细胞癌(bcc))和软组织肉瘤(例如恶性纤维组织细胞瘤(mfh)、脂肪肉瘤、恶性周围神经鞘瘤(mpnst)、软骨肉瘤、纤维肉瘤、粘液肉瘤)。
[0264]
在另一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该癌症选自由以下组成的组：良性单克隆丙球蛋白病、乳腺癌(breast cancer)(包括但不限于乳腺腺癌、乳腺乳头状癌、乳腺癌(mammary cancer)、乳腺髓样癌)、造血癌(包括但不限于白血病如急性淋巴细胞白血病(all)(包括但不限于b细胞all、t细胞all)、急性髓细胞白血病(aml)(例如b细胞aml、t细胞aml)、慢性髓细胞白血病(cml)(例如b细胞cml、t细胞cml)和慢性淋巴细胞白血病(cll)(例如b细胞cll、t细胞cll)、淋巴瘤如霍奇金淋巴瘤(hl)(包括但不限于b细胞hl、t细胞hl)和非霍奇金淋巴瘤(nhl)(例如b细胞nhl，如弥漫性大细胞淋巴瘤(dlcl)(例如弥漫大b细胞淋巴瘤(dlbcl))、滤泡性淋巴瘤、慢性淋巴细胞白血病/小淋巴细胞淋巴瘤(cll/sll)、套细胞淋巴瘤(mcl)、边缘区b细胞淋巴瘤(包括但不限于黏膜相关淋巴组织(malt)淋巴瘤、淋巴结边缘区b细胞淋巴瘤、脾边缘区b细胞淋巴瘤)、原发性纵隔b细胞淋巴瘤、伯基特淋巴瘤、淋巴浆细胞淋巴瘤(包括但不限于华氏巨球蛋白血症)、免疫母细胞大细胞淋巴瘤、毛细胞白血病(hcl)、前体b淋巴母细胞淋巴瘤和原发性中枢神经系统(cns)淋巴瘤、t细胞nhl如前体t淋巴母细胞淋巴瘤/白血病、周围t细胞淋巴瘤(ptcl)(例如皮肤t细胞淋巴瘤(ctcl)(包括但不限于蕈样真菌病、塞扎里综合征)、血管免疫母细胞t细胞淋巴瘤、结外自然杀伤t细胞淋巴瘤、肠病型t细胞淋巴瘤、皮下脂膜炎样t细胞淋巴瘤、间变性大细胞淋巴瘤、如上所述的一种或多种白血病/淋巴瘤的混合物、多发性骨髓瘤(mm)、重链疾病(包括但不限于，α链病、γ链病、μ链病)、免疫细胞淀粉样变性、肝癌(包括但不限于肝细胞癌(hcc)、恶性肝癌)、肺癌(包括但不限于支气管癌、非小细胞肺癌(nsclc)、鳞状细胞肺癌(slc)、肺腺癌、lewis肺癌、肺神经内分泌肿瘤、典型类癌、非典型类癌、小细胞肺癌(sclc)和大细胞神经内分泌癌)、骨髓增生异常综合征(mds)、骨髓增殖性病症(mpd)和前列腺癌(包括但不限于前列腺腺癌)。
[0265]
在另一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该癌症选自由以下组成的组：前列腺癌、肺癌、胰腺癌、乳腺癌、卵巢癌、宫颈癌、黑素瘤、b细胞慢性淋巴细胞白血病(cll)、急性髓系细胞白血病(aml)和急性淋巴母细胞白血病(all)。
[0266]
在另一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法，该方法包括向有需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，其中该癌症是多发性骨髓瘤。
[0267]
根据本发明的化合物或包含所述化合物的药物组合物还可以与免疫调节剂(如pd1/pdl1免疫检查点轴的抑制剂，例如结合和/或抑制pd-1活性或pd-l1活性的抗体(或肽)和或ctla-4)或靶向肿瘤相关抗原的工程化嵌合抗原受体t细胞(cart)组合而具有治疗性应用。
[0268]
根据本发明的化合物或包含所述化合物的药物组合物也可以与放射疗法或化学治疗剂(包括但不限于抗癌剂)或任何其他药剂组合，该药剂被施用于患有癌症的受试者以
用于治疗所述受试者的癌症或用于治疗或预防与所述受试者的癌症的治疗相关联的副作用。
[0269]
根据本发明的化合物或包含所述化合物的药物组合物还可以与刺激或增强免疫应答的其他剂(如疫苗)组合。
[0270]
在一个实施例中，本发明涉及用于治疗和/或预防癌症的方法(其中该癌症选自本文所述的那些)，该方法包括向有需要的受试者(优选人)施用治疗有效量的联合疗法或组合疗法；其中该联合疗法或组合疗法包含本发明的具有式(i)的化合物和一种或多种选自由以下组成的组的抗癌剂：(a)免疫调节剂(如pd1/pdl1免疫检查点轴的抑制剂，例如结合和/或抑制pd-1活性或pd-l1活性的抗体(或肽)和或ctla-4)；(b)靶向肿瘤相关抗原的工程化嵌合抗原受体t细胞(cart)；(c)放射疗法；(d)化学疗法；和(e)刺激或增强免疫应答的剂，如疫苗。
[0271]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于作为药物使用。
[0272]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于在抑制mcl-1活性中使用。
[0273]
如本文所用，除非另外说明，否则术语“抗癌剂”应包括“抗肿瘤细胞生长剂”和“抗赘生剂”。
[0274]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于在治疗和/或预防上文提及的疾病(优选癌症)中使用。
[0275]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于治疗和/或预防上文提及的疾病(优选癌症)。
[0276]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于治疗和/或预防，特别是用于治疗如本文所述的疾病，优选癌症(例如，多发性骨髓瘤)。
[0277]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于在治疗和/或预防，特别是治疗如本文所述的疾病，优选癌症(例如，多发性骨髓瘤)中使用。
[0278]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于治疗和/或预防，特别是用于治疗mcl-1介导的疾病或病状，优选癌症，更优选如本文所述的癌症(例如，多发性骨髓瘤)。
[0279]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于在治疗和/或预防，特别是在用于治疗mcl-1介导的疾病或病状，优选癌症，更优选如本文所述的癌症(例如，多发性骨髓瘤)中使用。
[0280]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于制造药物。
[0281]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于制造用于抑制mcl-1的药物。
[0282]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于制造用于治疗和/或预防，特别是用于治疗癌症，优选如本文所述的癌症的药物。更特别地，癌症是对mcl-1的抑制有应答的癌症(例如，多发性骨髓瘤)。
[0283]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于制造用
于治疗和/或预防，特别是用于治疗上文提及的疾病病状中的任一种的药物。
[0284]
本发明涉及具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物，用于制造用于治疗和/或预防上文提及的疾病病状中的任一种的药物。
[0285]
可以将具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物施用于受试者(优选人)，用于治疗和/或预防上文提及的疾病中的任一种。
[0286]
鉴于具有式(i)的化合物及其药学上可接受的盐和溶剂化物的效用，提供了治疗罹患上文提及的疾病中的任一种的受试者(优选哺乳动物如人)的方法；或减缓上文提及的疾病中的任一种在受试者(人)中的进展的方法；或预防受试者(优选哺乳动物如人)罹患上文提及的疾病中的任一种的方法。
[0287]
所述方法包括向受试者(如人)施用，即，全身施用或局部施用，优选地口服或静脉内施用，更优选地口服施用有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物。
[0288]
本领域技术人员将认识到，本发明的化合物的治疗有效量是足以具有治疗活性的量，并且这个量根据疾病类型、治疗性制剂中化合物的浓度以及患者的病状而特别不同。在一个实施例中，治疗有效的每日量可以是从约0.005mg/kg至100mg/kg。
[0289]
根据本发明的化合物(本文也称为活性成分)的达到治疗作用所需的量可以根据情况随例如具体化合物、施用途径、接受者的年龄和病状以及所治疗的具体病症或疾病而不同。本发明的方法还可以包括以每天一到四次摄入之间的方案施用活性成分。在本发明的这些方法中，根据本发明的化合物优选在施用前进行配制。
[0290]
本发明还提供了用于治疗和/或预防本文提及的病症(优选如本文所述的癌症)的组合物。所述组合物包含治疗有效量的具有式(i)的化合物或其药学上可接受的盐或溶剂化物，以及药学上可接受的载体或稀释剂。
[0291]
虽然活性成分(例如本发明的化合物)可以单独施用，但优选将该活性成分作为药物组合物施用。因此，本发明进一步提供了药物组合物，该药物组合物包含根据本发明的化合物以及药学上可接受的载体或稀释剂。载体或稀释剂必须在与组合物的其他成分相容的意义上是“可接受的”并且对其接受者是无害的。
[0292]
本发明的药物组合物可以通过药学领域中熟知的任何方法来制备，例如使用诸如，例如gennaro等人,remington’s pharmaceutical sciences[雷明顿药物科学](第18版,mack publishing company[马克出版公司],1990，尤其参见part 8:pharmaceutical preparations and their manufacture[部分8：药物制品及其制造]中描述的那些方法)。
[0293]
本发明的化合物可以单独或与一种或多种另外的治疗剂组合施用。组合疗法包括施用含有根据本发明的化合物和一种或多种另外的治疗剂的单一药物剂量制剂，以及施用根据本发明的化合物和每种另外的治疗剂(呈其自身单独药物剂量制剂形式)。
[0294]
因此，在一个实施例中，本发明涉及产品，该产品包含作为第一活性成分的根据本发明的化合物和作为另外的活性成分的一种或多种抗癌剂，作为用于同时、单独或相继用于治疗罹患癌症的患者的组合制品。
[0295]
一种或多种其他抗癌剂与根据本发明的化合物可以同时施用(例如以单独组合物或整体组合物的形式)或以任一顺序相继施用。在一个实施例中，两种或更多种化合物在足以确保实现有利或协同作用的时间段内且/或以足以确保实现有利或协同作用的量和/或
方式施用。将理解的是，组合的每种组分的优选施用方法和顺序以及对应的剂量和方案将取决于所施用的具体其他抗癌剂和本发明的化合物、其施用途径、所治疗的具体病状(特别是肿瘤)以及所治疗的具体宿主。
[0296]
以下实例进一步说明了本发明。
[0297]
实例
[0298]
在以下实例中说明了几种用于制备本发明的化合物的方法。除非另外指明，否则所有起始材料都从商业供应商获得并且不经进一步纯化而使用，或可替代地可由技术人员通过使用熟知的方法合成。
[0299]
[0300][0301]
如本领域技术人员所理解的，使用所示方案合成的化合物可以含有残留溶剂或微量杂质。
[0302]
技术人员将意识到，即使在下面的实验方案中没有明确提及的情况下，典型地在柱色谱法纯化之后，收集所希望的级分并蒸发溶剂。
[0303]
在没有指示立体化学的情况下，这意指它是立体异构体的混合物，除非另外指明或从上下文是清楚的。
[0304]
中间体的制备
[0305]
对于在下一反应步骤中用作粗品或用作部分纯化中间体的中间体，在一些情况下，在下一反应步骤中未提及此类中间体的摩尔量，或者在以下描述的反应方案中指示在下一反应步骤中的此中间体的可替代估计摩尔量或理论摩尔量。
[0306]
中间体1
[0307][0308]
将咪唑(258mg，1.4当量)添加至5-(((4-羟基萘-2-基)硫代)甲基)-1-甲基-1h-吡唑-3-甲酸甲酯[2245716-34-9](890mg，2.71mmol)和tbdmscl(511mg，1.25当量)在干dmf(18ml)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌48h。将反应混合物用etoac(100ml)和水(50ml)稀释。将有机层分离并用盐水(2x50ml)洗涤。将合并的水层用etoac(50ml)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤并蒸发。将残余物通过硅胶快速色谱法(40g，梯度：从庚烷100％直到庚烷/etoac 6/4)纯化以获得中间体1(1.24g，定量)。
[0309]
中间体2
[0310][0311]
在氮气气氛下，在0℃下将dibalh(在庚烷中1m，5.82ml，2.5当量)逐滴添加至中间体1(1.03g，2.33mmol)在thf(40ml)中的溶液中，并将反应混合物在0℃下搅拌30min。添加另外的dibalh(在庚烷中1m，2.32ml，1当量)并在0℃下继续搅拌10min。将反应混合物用湿thf(40ml)处理，并且搅拌几分钟后，用水(10ml，初始逐滴添加)处理。使混合物升温至室温，并且然后添加硅藻土。搅拌5min后，将混合物过滤。将固体用etoac洗涤。将滤液用mgso4处理，过滤，并蒸发以给出呈无色糊状物的中间体2(892mg，92％)，该糊状物在静置后固化并不经进一步纯化即可使用。
[0312]
中间体3
[0313][0314]
向6-氯-7-[3-(羟基甲基)-1,5-二甲基-吡唑-4-基]-3-(3-甲氧基-3-氧代-丙基)-1-甲基-吲哚-2-甲酸甲酯[2143010-99-3](1g，2.25mmol)、2-硝基苯磺酰胺(500mg，1.1当量)和三苯基膦(1181mg，2当量)在dcm(30ml)中的悬浮液中添加dtbad(1037mg，2当量)在dcm(7.5ml)中的溶液。将所得反应混合物在室温下搅拌2h。将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物通过硅胶快速柱色谱法(庚烷:etoac-1:0至4:6)纯化以给出呈黄色胶状的中间体3(1.87g，产率93％)，其仍被三苯基氧化膦污染。
[0315]
中间体4
[0316][0317]
向中间体3(1.4g，1.58mmol)、中间体2(664mg，1当量)、和三苯基膦(832mg，2当量)在dcm(24ml)中的悬浮液中添加dtbad(730mg，2当量)在dcm(7ml)中的溶液。将所得反应混合物在室温下搅拌16h。将反应混合物在减压下浓缩，并将残余物通过硅胶快速柱色谱法(庚烷:etoac-1:0至1:1)纯化以给出呈黄色胶状的中间体4(1.7g，产率79％)。
[0318]
中间体5
[0319][0320]
向在dcm(25ml，1.326g/ml，390.311mmol)中的中间体4(1.7g，1.26mmol)(在冰浴中冷却)中添加mcpba(6072.1当量)。在0℃下15min后，将反应升温至室温并搅拌过夜。将反应混合物用dcm(50ml)稀释，用饱和水性nahco3(2x50ml)和盐水(50ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤，并在减压下浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(庚烷:etoac-3:1至1:3)纯化以给出呈澄清油状物的中间体5(575mg，产率30％)。
[0321]
中间体6
[0322][0323]
在室温下向在2-me-thf(20ml)中的中间体5(600mg，0.40mmol)中缓慢添加tbaf(在thf中1m，0.5ml，1.25当量)。在室温下搅拌1.5h后，将反应混合物在减压下浓缩以给出深棕色油状物。将该残余物在dcm(20ml)和饱和水性nh4cl(20ml)之间分配，并将水层用dcm(25ml)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤并在减压下浓缩。将残余物通过硅胶快速柱色谱法(庚烷:etoac-3:1至0:1)纯化以得到呈淡黄色固体的中间体6(387mg，产率98％)。
[0324]
中间体7
[0325][0326]
在0℃下向在thf(10ml)中的中间体6(375mg，0.38mmol)中添加硼烷二甲基硫醚络合物(在thf中2m，0.955ml，5当量)。一旦添加完成，将反应混合物升温至室温并搅拌26h。添加另外的硼烷二甲基硫醚络合物(在thf中2m，0.573ml，3当量)，并将反应混合物在室温下进一步搅拌28h。再次添加另外的硼烷二甲基硫醚络合物(在thf中2m，0.955ml，5当量)，并将反应混合物在室温下进一步搅拌44h。由于反应仍未完成，添加另外的硼烷二甲基硫醚络合物(在thf中2m，0.955ml，5当量)，并将反应混合物在室温下进一步搅拌68h。将反应混合物冷却至0℃，并逐滴添加meoh(3ml)。在0℃下搅拌1h后，添加1m水性hcl(3ml)，并将反应混合物在室温下保持搅拌4h。将水层用etoac(3x30ml)萃取。将合并的有机层用盐水(40ml)洗涤，经mgso4干燥，过滤，并在减压下浓缩以给出灰白色固体，将其通过硅胶快速柱色谱法(庚烷:etoac-1:0至1:1)纯化以得到呈淡黄色固体的中间体7(280mg，产率73％)。
[0327]
中间体8
[0328][0329]
在70℃下将中间体7(270mg，0.27mmol)和dtbad(247mg，4当量)在甲苯(8ml)和thf(1ml)的混合物中的溶液用注射泵(0.1ml/min)逐滴添加至三苯基膦(282mg，4当量)在甲苯(8ml)中的溶液中。将反应混合物在减压下浓缩以给出黄色油状物，将其通过硅胶快速柱色谱法(dcm:meoh-1:0至97:0)纯化以给出呈淡黄色油状物的中间体8(414mg，产率69％)，该淡黄色油状物在静置时固化并仍被三苯基氧化膦污染。
[0330]
中间体9
[0331][0332]
向中间体8(400mg，0.18mmol)和k2co3(249mg，10当量)在无水乙腈(5ml)中的悬浮液中逐滴添加苯硫酚(0.185ml，10当量)。将反应混合物在室温下保持搅拌过夜，并且然后经硅藻土垫过滤。将滤液在减压下浓缩以给出黄色油状物，将其通过硅胶柱色谱法(dcm:meoh-1:0至95:5)纯化以给出呈淡黄色固体的中间体9(110mg，产率78％)。
[0333]
中间体10和中间体11
[0334][0335]
中间体10:sa或ra；一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定
[0336]
中间体11:ra或sa；一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定
[0337]
在室温下将甲醛(37％水性溶液，28μl，3当量)添加至中间体9(100mg，0.13mmol)和acoh(22μl，3当量)在dcm(1.5ml)中的溶液中。然后，添加nabh(oac)3(81mg，3当量)，并将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应通过添加饱和水性nahco3(2.5ml)淬灭并用水(2.5ml)和dcm(10ml)稀释。分离有机层，并将水层用dcm(2x10ml)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并蒸发至无色油状物。将限制构型异构体通过制备型sfc(固定相：chiralpak大赛璐(daice1)ic 20x250mm，流动相：co2，iproh 0.4％iprnh2)分离以给出中间体10(33mg，产率34％)和中间体11(31mg，产率32％)，两者均呈澄清油状物。
[0338]
中间体12
[0339][0340]
将7-(3-((((5-(((叔丁基二苯基甲硅烷基)氧基)甲基)-1-甲基-1h-吡唑-3-基)甲基)硫代)甲基)-1,5-二甲基-1h-吡唑-4-基)-6-氯-3-(3-甲氧基-3-氧代丙基)-1-甲基-1h-吲哚-2-甲酸甲酯[2143011-02-1](1.9g，2.34mmol)溶解在dcm(29ml)中。将混合物在0℃下冷却并缓慢添加mcpba(1.57g，3当量)。将反应混合物在0℃下搅拌10分钟，随后在室温下搅拌3h。将反应混合物倾倒进nahco3的饱和水性溶液中并搅拌10min。将混合物用dcm(3x)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并将溶剂蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(二氧化硅；dcm/etoac 100:0至80:20)纯化。合并所希望的级分，并将溶剂蒸发以得到中间体12(1.2g，产率57％)。
[0341]
中间体13
[0342][0343]
将中间体12(1.2g，1.42mmol)溶解在thf(4ml)中。将混合物冷却至0℃，并添加tbaf(371mg，1当量)。将混合物在室温下搅拌5h。将反应用nahco3的饱和水性溶液淬灭。将混合物用etoac(x3)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并将溶剂蒸发。将粗产物通过快速柱色谱法(二氧化硅；dcm/meoh从100:0至99:1)纯化。合并所希望的级分，并将溶剂蒸发以得到呈白色固体的中间体13(781mg，产率90％)。
[0344]
中间体14
[0345]
[0346]
将中间体13(780mg，1.28mmol)溶解在dcm(7ml)中，并将溶液冷却至0℃。在0℃下将亚硫酰氯(113μl，1.2当量)非常缓慢地添加至混合物中，同时搅拌。然后将反应混合物在室温下搅拌1h。将反应混合物缓慢倾倒进nahco3的饱和水性溶液中，同时搅拌。搅拌双相混合物直到鼓泡停止。将混合物用dcm(x3)萃取。将有机层蒸发以给出呈澄清油状物的中间体14，将其不经进一步纯化即可使用。
[0347]
中间体15
[0348][0349]
将3-(乙酰硫代)萘-1-基乙酸酯[2143010-96-0](38mg，1.1当量)和k2co3(44mg，2.4当量)添加至中间体14(147mg，0.13mmol)在meoh(1.3ml)中的先前脱气的溶液中。将所得混合物再一次用氮气脱气5min并在室温下搅拌1.5h。添加水和etoac，并将混合物用etoac(x3)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并将溶剂蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(二氧化硅；dcm/meoh从100:0至90:10)纯化。合并所希望的级分，并将溶剂蒸发以得到中间体15(100mg，产率99％)。
[0350]
中间体16
[0351][0352]
将中间体15(385mg，0.50mmol)溶解在干thf(10ml)中，并将该溶液冷却至0℃。逐滴添加硼烷二甲基硫醚络合物(1ml，4当量)。将反应混合物在室温下搅拌16h。添加另外的硼烷二甲基硫醚络合物(0.5ml，2当量)，并将反应混合物搅拌另外的16h。将反应通过添加meoh(4ml)和1m水性hcl(18.5ml)淬灭。将水性nahco3的饱和溶液添加至混合物中。将混合物用dcm(x3)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并将溶剂蒸发。将残余物通过快速柱色谱法(二氧化硅；dcm/meoh从100:0至97:03)纯化。合并所希望的级分，并将溶剂蒸发以得到呈白色固体的中间体16(265mg，产率71％)。
[0353]
中间体17、中间体18、和中间体19
[0354][0355]
中间体17:两种阻转异构体的混合物
[0356]
中间体18:ra或sa；一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定
[0357]
中间体19：sa或ra；一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定
[0358]
将中间体16(260mg，0.35mmol)在干thf(8ml)中的溶液和dtbad(244mg，3当量)在干甲苯(8ml)中的溶液同时逐滴添加至三苯基膦(278mg，3当量)在干甲苯(28ml)中的溶液中。将反应混合物在室温下搅拌1.5h。将溶剂蒸发，并将所得残余物用乙酸乙酯吸收，并用水和盐水洗涤。将有机层经mgso4干燥，过滤，并浓缩。将残余物通过快速柱色谱法(二氧化硅；庚烷/etoac梯度)纯化。合并所希望的级分，并将溶剂蒸发以给出呈淡黄色固体的中间体17(80mg，产率31％)。
[0359]
将中间体17通过手性色谱法(lux amylose-1150x21.2mm 5μm(菲罗门公司(phenomenex))并使用庚烷/etoh从50:50至0:100作为洗脱液)分离为其限制构型异构体。合并所希望的级分，并将溶剂蒸发以得到中间体18(22mg，27％)和中间体19(16mg，20％)。
[0360]
中间体20
[0361][0362]
将(z)-16-氯-11,21,25,61-四甲基-11h,21h,61h-10-氧杂-4,8-二硫杂-1(7,3)-吲哚杂-2(4,3),6(3,5)-二吡唑杂-9(3,1)-萘杂环十三蕃(naphthalenacyclotridecaphane)-12-甲酸甲酯[2143010-84-6](145mg，0.21mmol)溶解在dcm(4ml)中，并将溶液冷却至0℃。逐滴添加mcpba(189mg，4当量)在dcm(4ml)中的溶液。
添加完成后，将反应在0℃下搅拌10min，并且然后在室温下搅拌16h。将混合物倾倒进nahco3的饱和水性溶液中并搅拌10min。将混合物用dcm(x3)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并将溶剂蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(使用庚烷/etoac作为洗脱液)纯化。收集并浓缩所希望的级分，给出呈白色固体的中间体20(70mg，产率44％)。
[0363]
化合物的制备
[0364]
化合物1
[0365][0366]
ra或sa阻转异构体(一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定)
[0367]
向中间体10(31mg，0.04mmol)在meoh(1ml)、thf(1ml)和水(0.5ml)的混合物中的溶液中添加lioh(14.8mg，15当量)。将所得反应混合物在60℃下搅拌3h。将反应混合物在减压下浓缩以给出白色固体。将固体溶解在水(5ml)中并用1m水性hcl酸化至ph 4-5，导致形成白色沉淀。将水层用chcl3:meoh(8:2)(3x10ml)萃取。将合并的有机层经mgso4干燥并在减压下浓缩以给出白色固体，将其通过硅胶快速柱色谱法(dcm:meoh-1:0至9:1)纯化以给出呈白色固体的化合物1(26mg，产率85％)。
[0368]
lc-ms：rt(min)：1.61,mw 700.2,[mh]

701.4,[mh]-699.5(方法：5)
[0369]
sfc：rt(min)：4.53,mw700.2,[mh]

701,[mh]-699(方法：2)
[0370]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 1.59-1.81(m,3h),1.97(s,3h),2.14-2.26(m,1h),2.30-2.44(m,2h),2.85(s,2h),3.02-3.13(m,2h),3.37-3.50(m,5h),3.72(s,3h),3.77(s,3h),3.92-4.04(m,1h),4.09-4.29(m,1h),4.52-4.76(m,1h),4.88-4.97(m,1h),5.08(d,j＝15.5hz,1h),6.97(br s,1h),7.05(d,j＝8.6hz,1h),7.63-7.74(m,2h),7.87(d,j＝8.6hz,1h),7.91(s,1h),8.07(d,j＝7.9hz,1h),8.21(d,j＝8.1hz,1h)
[0371]
化合物2
[0372][0373]
sa或ra阻转异构体(一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定)
[0374]
使用与用于合成化合物1的类似程序，从中间体11获得呈白色固体的化合物2(26mg，产率85％)。
[0375]
lc-ms：rt(min)：1.61,mw 700.2,[mh]

701.4,[mh]-699.5(方法：5)
[0376]
sfc：rt(min)：4.73,mw700.2,[mh]

701,[mh]-699(方法：2)
[0377]1h nmr(400mhz,dmso-d6)δppm 1.59-1.81(m,3h),1.97(s,3h),2.14-2.26(m,1h),2.30-2.44(m,2h),2.85(s,2h),3.02-3.13(m,2h),3.37-3.50(m,5h),3.72(s,3h),3.77(s,3h),3.92-4.04(m,1h),4.09-4.29(m,1h),4.52-4.76(m,1h),4.88-4.97(m,1h),5.08(d,j＝15.5hz,1h),6.97(br s,1h),7.05(d,j＝8.6hz,1h),7.63-7.74(m,2h),7.87(d,j＝8.6hz,1h),7.91(s,1h),8.07(d,j＝7.9hz,1h),8.21(d,j＝8.1hz,1h)
[0378]
化合物3
[0379][0380]
ra或sa阻转异构体(一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定)
[0381]
将中间体18(23mg，0.03mmol)悬浮于meoh(0.9ml)和thf(0.9ml)中。将lioh(17mg，13当量)溶解在水(0.2ml)中并添加至混合物中。将反应混合物用氮气脱气并在80℃下搅拌2.5h。冷却至室温后，添加水性hcl(2m，0.35ml)，并将混合物浓缩至干燥。将水(0.9ml)添加至残余物中以得到白色悬浮液。将白色固体过滤并用水(2x0.175ml)洗涤。将该固体重新溶解于在dcm(2.61ml)中的10％meoh中，经mgso4干燥，过滤，并浓缩至干燥。将残余物通过反相柱色谱法(使用以下作为洗脱液：从59％[25mm nh4hco3]-41％[acn:meoh 1:1]至17％[25mm nh4hco3]-83％[acn:meoh 1:1])纯化。合并所希望的级分以得到呈淡棕色固体的化合物3(7mg，产率31％)。
[0382]
lc-ms：rt(min)：4.15,[mh]

704.2(方法：1)
[0383]1h nmr(300mhz,cdcl3)δ2.10(s,3h),2.30-2.44(m,2h),3.18-3.31(m,2h),3.34(s,3h),3.39-3.62(m,4h),3.69(s,3h),3.84(d,j＝15.0hz,1h),3.92(s,3h),3.95(d,j＝15.0hz,1h),),4.07(d,j＝15.0hz,1h),4.45(d,j＝15.0hz,1h),5.65(s,1h),5.93(s,1h),7.07(d,j＝8.6hz,1h),7.49-7.58(m,2h),7.61(d,j＝8.6hz,1h),7.66(s,1h),7.70-7.80(m,1h),8.26-8.39(m,1h)
[0384]
旋光度： 3.0750
°
(c 0.1333w/v，cdcl3，23℃)
[0385]
化合物4
[0386][0387]
sa或ra阻转异构体(一种阻转异构体，但绝对立体化学未确定)
[0388]
将中间体19(17mg，0.02mmol)悬浮于meoh(0.7ml)和thf(0.7ml)中。将lioh(13mg，13当量)溶解在水(0.16ml)中并添加至混合物中。将反应混合物用氮气脱气并在80℃下搅拌2.5h。冷却至室温后，添加水性hcl(2m，0.35ml)，并将混合物浓缩至干燥。将水(0.9ml)添加至残余物中以得到白色悬浮液。将白色固体过滤并用水(2x0.175ml)洗涤。将该固体重新溶解于在dcm(2.61ml)中的10％meoh中，经mgso4干燥，过滤，并浓缩至干燥。将残余物通过反相柱色谱法(使用以下作为洗脱液：从59％[25mm nh4hco3]-41％[acn:meoh 1:1]至17％[25mm nh4hco3]-83％[acn:meoh 1:1])纯化。合并所希望的级分以得到呈淡棕色固体的化合物4(6mg，产率36％)。
[0389]
lc-ms：rt(min)：4.15,[mh]

704(方法：1)
[0390]1h nmr(300mhz,cdcl3)δ2.09(s,3h),2.28-2.37(m,2h),3.14-3.28(m,2h),3.37(s,3h),3.40-3.63(m,4h),3.68(s,3h),3.83(d,j＝15.0hz,1h),3.91(s,3h),3.94(d,j＝15.0hz,1h),4.05(d,j＝15.0hz,1h),4.46(d,j＝15.0hz,1h),5.60(s,1h),5.93(s,1h),7.04(d,j＝8.5hz,1h),7.46-7.62(m,3h),7.66(s,1h),769-7.81(m,1h),8.27-8.40(m,1h)
[0391]
旋光度：-7.0750
°
(c 0.1333w/v，cdcl3，23℃)
[0392]
化合物5、化合物6、和化合物7
[0393][0394]
化合物5：(rac)
[0395]
co 6：sa或ra阻转异构体(一种阻转异构体；绝对立体化学未确定)co 7：ra或sa阻转异构体(一种阻转异构体；绝对立体化学未确定)
[0396]
将lioh(87mg，13当量)在水中的溶液添加至中间体20(120mg，0.16mmol)在thf
(4.8ml)和meoh(4.8ml)的混合物中的溶液中。将悬浮液用氮气脱气，并将反应混合物在80℃下搅拌2.5h。将反应混合物用水稀释，并使用1m水性hcl将ph调节至ph＝4-5。将水相用dcm/meoh 9:1的混合物萃取几次，并将合并的有机层经mgso4干燥，过滤，并蒸发。将残余物通过硅胶色谱法(使用dcm/meoh 4:1作为洗脱液)纯化。收集并浓缩所希望的级分以给出呈白色固体的化合物5(97mg，81％)。
[0397]
将化合物5的限制构型异构体通过制备型sfc(固定相：chiralpak大赛璐ad 20x250mm，流动相：co2，etoh-iproh(50-50) 0.4％iprnh2)分离。为去除痕量的iprnh2，将sfc后获得的两个级分中的每个溶解在ch2cl2中，并将每种溶液用水性hcl 0.5n洗涤。将每个有机层通过在extrelut nt3上过滤来干燥，并蒸发以分别给出化合物6(21mg，产率27％)和化合物7(23mg，产率30％)，两者均呈白色固体。
[0398]
化合物5
[0399]
lc-ms：rt(min)：3.90,[mh]

736(方法：2)
[0400]1h nmr(300mhz,cdcl3)δ2.11(s,3h),2.33-2.44(m,2h),3.00(s,3h),3.14(d,j＝14.1hz,1h),3.21-3.39(m,2h),3.44-3.53(m,1h),3.53-3.67(m,2h),3.74(s,3h),3.93(s,3h),4.01(d,j＝15.0hz,1h),4.31(d,j＝15.0hz,1h),4.39(d,j＝15.0hz,1h),4.71(d,j＝15.0hz,1h),6.02(s,1h),6.09(s,1h),7.02(d,j＝8.6hz,1h),7.60(d,j＝8.6hz,1h),7.70(t,j＝7.4hz,1h),7.77(t,j＝7.4hz,1h),7.98(d,j＝8.0hz,1h),8.14(s,1h),8.48(d,j＝8.0hz,1h)
[0401]
化合物6
[0402]
lc-ms：rt(min)：0.82,mw：735.0,[mh]

736,[mh]-734(方法：3)
[0403]1h nmr(400mhz,dmso-d6,27℃)δppm 2.03(s,3h),2.15-2.35(m,2h),3.06-3.12(m,4h),3.14-3.23(m,2h),3.58(s,3h),3.62-3.76(m,3h),3.80-3.89(m,4h),4.63(d,j＝15.0hz,1h),4.82-4.95(m,2h),5.75(s,1h),5.77(s,1h),6.09-6.13(m,1h),6.96(d,j＝8.6hz,1h),7.63(d,j＝8.6hz,1h),7.72-7.85(m,2h),8.16-8.21(m,2h),8.41(d,j＝8.1hz,1h)
[0404]
sfc(在最终萃取前进行)：rt(min)6.20,mw：735.16,[mh iprnh2]

795[mh]-734(方法：1)
[0405]
化合物7
[0406]
lc-ms：rt(min)：1.58,mw：735.00,[mh]

736,[mh]-734bpm2：736(方法：4)
[0407]1h nmr(400mhz,dmso-d6,27℃)δppm 2.03(s,3h),2.16-2.35(m,2h),3.05-3.13(m,4h),3.13-3.23(m,2h),3.58(s,3h),3.62-3.69(m,1h),3.72(br d,j＝14.5hz,1h),3.80-3.89(m,4h),4.64(d,j＝14.7hz,1h),4.82-4.96(m,2h),5.77(s,1h),6.11(s,1h),6.95(d,j＝8.6hz,1h),7.62(d,j＝8.8hz,1h),7.72-7.78(m,1h),7.78-7.84(m,1h),8.16-8.21(m,2h),8.41(d,j＝8.1hz,1h)
[0408]
sfc(在最终萃取前进行)：rt(min)：6.81,mw：735.16,[mh iprnh2]

795,[mh]-734(方法：1)
[0409]
分析性分析
[0410]
使用lc泵、二极管阵列(dad)或uv检测器以及如在对应的方法中所指定的柱进行高效液相色谱法(hplc)测量。如果必要的话，包括其他检测器(参见下文的方法表格)。
[0411]
将来自柱的流带至配置有大气压离子源的质谱仪(ms)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(mw)的离子在技术人员的知识内。利用适当的软件进行数据采集。
[0412]
通过其实验保留时间(r
t
)和离子描述化合物。如果未在数据表中不同地指定，那么报告的分子离子对应于[m h]

(质子化的分子)和/或[m-h]-(去质子化的分子)。在该化合物不是直接可电离的情况下，指定加合物类型(即[m nh4]

、[m hcoo]-等)。对于具有多种同位素模式的分子(br、cl)来说，报告的值是针对最低同位素质量获得的值。获得的所有结果具有通常与所使用的方法相关的实验不确定性。
[0413]
在下文中，“sqd”意指单四极检测器，“msd”意指质量选择检测器，“rt”意指室温，“beh”意指桥接的乙基硅氧烷/二氧化硅杂合物，“dad”意指二极管阵列检测器，“hss”意指高强度二氧化硅。
[0414]
lcms方法代码(以ml/min表示流量；以℃表示柱温(t)；以分钟表示运行时间)
[0415]
lc-ms方法：
[0416][0417]
sfc-ms方法：
[0418]
使用分析型超临界流体色谱法(sfc)系统来进行sfc测量，该系统由以下构成：用于递送二氧化碳(co2)和改性剂的二元泵、自动进样器、柱烘箱、配备有经得起400巴的高压流动池的二极管阵列检测器。如果配置有质谱仪(ms)，来自柱的流被引至该(ms)。设置调谐参数(例如扫描范围、停留时间等)以便获得允许鉴定化合物的标称单一同位素分子量(mw)的离子在技术人员的知识内。利用适当的软件进行数据采集。分析型sfc-ms方法(以ml/min
表示流量；以℃表示柱温(col t)；以分钟表示运行时间，以巴表示背压(bpr))。“iprnh
2”意指异丙胺，“iproh”意指2-丙醇，“etoh”意指乙醇，“min”意指分钟。
[0419]
sfc方法：
[0420][0421]
nmr
[0422]1h nmr光谱在布鲁克(bruker)avance iii 400mhz和avance neo 400mhz光谱仪上记录。cdcl3用作溶剂，除非另外说明。化学位移以相对于四甲基硅烷的ppm表示。
[0423]
药理学分析
[0424]
生物实例1
[0425]
铽标记的髓系细胞白血病1(mcl-1)均相时间分辨荧光(htrf)结合测定利用bim bh3肽(h2n-(c/cy5mal)wiaqelrrigdefn-oh)作为mcl-1的结合配偶体。
[0426]
细胞凋亡或程序性细胞死亡确保了正常组织的稳态，并且其调节异常可能导致包括癌症在内的几种人类病变。外在细胞凋亡途径是通过细胞表面受体激活而引发的，而内在细胞凋亡途径在线粒体外膜上发生并受到促细胞凋亡和抗细胞凋亡bcl-2家族蛋白(包括mcl-1)之间的结合相互作用的控制。在许多癌症中，一种或多种抗细胞凋亡bcl-2蛋白(如mcl-1)上调，并且癌细胞能以此方式来逃避细胞凋亡。因此，一种或多种bcl-2蛋白(如mcl-1)的抑制可能导致癌细胞的细胞凋亡，这提供了用于治疗所述癌症的方法。
[0427]
该测定评估了bh3结构域的抑制：通过以htrf测定形式测量cy5标记的bim bh3肽(h2n-(c/cy5mal)wiaqelrrigdefn-oh)的位移而得到mcl-1相互作用。
[0428]
测定程序
[0429]
制备以下测定和储备缓冲液用于测定：(a)储备缓冲液：10mm tris-hcl，ph＝7.5 150mm nacl，过滤，灭菌，并储存在4℃下；以及(b)1x测定缓冲液，其中将以下成分在新鲜时添加至储备缓冲液中：2mm二硫苏糖醇(dtt)，0.0025％tween-20，0.1mg/ml牛血清白蛋白(bsa)。通过使用1x测定缓冲液(b)将蛋白储备溶液稀释至25pm tb-mcl-1和8nm cy5 bim肽中来制备1x tb-mcl-1 cy5bim肽溶液。
[0430]
使用声学回声(acoustic echo)，将100nl的100x一种或多种测试化合物分配至白色384孔perkin elmer proxiplate的各个孔中，以达到1x的最终化合物浓度和1％的最终dmso浓度。将抑制剂对照和中性对照(nc，100nl的100％dmso)分别加进测定板的列23和列24中。然后向板的每个孔中分配10μl的1x tb-mcl-1 cy5bim肽溶液。将盖有盖板的板以1000rpm离心1分钟，然后以盖有盖板的状态在室温下孵育60分钟。在室温下，使用htrf光学模块在bmg pherastar fsx微板读取器上读取tr-fret信号(htrf：激发：337nm，光源：激光，发射a：665nm，发射b：620nm，积分开始：60μs，积分时间：400μs)。
[0431]
数据分析
[0432]
使用bmg pherastar fsx微板读取器测量两个发射波长(665nm和620nm)下的荧光强度并报告两个发射的相对荧光单位(rfu)，以及发射的比率(665nm/620nm)*10,000。将rfu值归一化至如下的百分比抑制：
[0433]
％抑制＝(((nc-ic)-(化合物-ic))/(nc-ic))*100
[0434]
其中ic(抑制剂对照，低信号)＝1x tb-mcl-1 cy5 bim肽 抑制剂对照或mcl-1的100％抑制的平均信号；nc(中性对照，高信号)＝1x tb-mcl-1 cy5 bim肽(只有dmso)或0％抑制的平均信号生成11点剂量应答曲线以基于以下等式来确定ic
50
值(使用gendata)：y＝底部 (顶部-底部)/(1 10^((logic
50-x)*希尔斜率(hillslope)))
[0435]
其中y＝在x抑制剂浓度存在下的％抑制；顶部＝衍生自ic(mcl-1 抑制剂对照的平均信号)的100％抑制；底部＝衍生自nc(mcl-1 dmso的平均信号)的0％抑制；希尔斜率＝希尔系数；且ic
50
＝相对于顶部/中性对照(nc)的50％抑制的化合物浓度。
[0436]
ki＝ic
50
/(1 [l]/kd)
[0437]
在该测定中[l]＝8nm且kd＝10nm
[0438]
根据如上所述的程序对本发明的代表性化合物进行测试，结果列示在下表中(n.d.意指未确定)。下表中报告的值受与所用测定和设备相关的误差范围的影响。
[0439][0440]
根据如上所述的程序对本发明的代表性化合物进行测试，结果列示在下表中。下表中报告的值在设备再次校准后获得。值受误差范围的影响，并且是具体化合物几次运行的平均值。
[0441][0442]
生物实例2
[0443]
mcl-1是细胞凋亡的调节因子，并且在逃避细胞死亡的肿瘤细胞中高度过表达。该测定评估靶向细胞凋亡途径调节因子(主要是mcl-1、bfl-1、bcl-2和bcl-2家族的其他蛋白质)的小分子化合物的细胞效力。破坏抗细胞凋亡调节因子与bh3结构域蛋白的相互作用的蛋白质-蛋白质抑制剂引发细胞凋亡。
[0444]
使用cellevent
tm
半胱天冬酶-3/7绿色readyprobes
tm
试剂(赛默飞世尔公司(thermo fisher)c10423、c10723)测量细胞凋亡途径的激活。此测定在进入细胞凋亡途径的细胞中产生绿色荧光染色。半胱天冬酶-3/7绿色试剂是一种四氨基酸肽(devd)，与未与dna结合时不发荧光的核酸结合染料缀合。半胱天冬酶-3/7绿色试剂本质上是无荧光的，因为devd肽会抑制染料与dna的结合。在凋亡细胞中激活半胱天
冬酶-3/7后，devd肽被裂解，并且游离染料可以结合dna，从而产生亮绿色荧光。半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7的激活是mcl-1或依赖于它们的细胞系中的其他细胞凋亡抑制蛋白抑制的下游。
[0445]
incucyte上的活细胞读数允许追踪半胱天冬酶激活的时间。动力学读数是有用的，因为(a)它揭示了可能与细胞凋亡诱导机制的差异相关的发病时间差异，即这更直接或间接；和(b)它允许识别由自发荧光或沉淀化合物引起的伪迹。incucyte读数还允许对细胞数量进行归一化，因为悬浮细胞难以均匀分布。
[0446]
每2h测量一次信号，持续22h。计算每个图像的半胱天冬酶掩模与汇合掩模的比率作为原始数据，并将每个孔的动力学迹线导出到genedata screener进行分析。
[0447]
在genedata screener中，从动力学迹线中提取了6h、12h和22h的值。这些值针对阴性对照(未处理的细胞)进行了归一化。对归一化数据进行标准剂量-应答分析。
[0448]
在以下三个上述时间点中的每一个处都报告了以下数据：(a)剂量-应答曲线，(b)qac50和qac50模式，和(c)最大活性。
[0449]
测定中使用的材料如下表中所列示。
[0450]
表-测定材料
[0451][0452]
将细胞维持在含有10％热灭活(hi)fbs、2mm l-谷氨酰胺和50μg/ml庆大霉素的无酚红的rpmi-1640培养基中。细胞以40万个/ml每周分裂两次。
[0453]
在第1天，含有单个孔的板中含有10mm浓度的测试化合物，每孔150nl。最终浓度范围为从100μm至10pm化合物(和无化合物对照)，并且化合物在室温下解冻1小时。通过自动分液器(multidrop)将25μl的预热培养基添加到每个孔(列1、3-22、24)中，随后在列2中添加dmso对照(0.6％dmso)。将板使用密封膜密封并在室温下摇动30min以将一种或多种测试化合物溶解在培养基中。然后将板保持在37℃、5％co2下的孵育箱中1小时。
[0454]
用4μm(在测定中最终为2μm)的cellevent
tm
半胱天冬酶-3/7绿色检测试剂制备培
养基中40000/25μl(在测定中最终为20000/50μl)的molp8细胞。一旦制备好，将细胞以20000的量添加到测试化合物板中，并且立即将板放入incucyte并使用以下设置开始成像：10x物镜，绿色通道2s曝光时间，2h间隔，22h后停止采集。
[0455]
对于incucyte中的分析，定义了基本分析协议以分别由“阶段”和“绿色”图像计算“汇合”和“半胱天冬酶”区域，如下所示：(a)汇合：分割调整1，孔填充0，调整大小-2，无过滤器(b)半胱天冬酶：顶帽分割，半径10，阈值0.3gcu，边缘分裂开启，灵敏度0，孔填充0，调整大小1，并在最小20μm2的区域上过滤。将分析仪在足够数量的阳性和阴性对照孔以及化合物处理孔上进行训练，从而验证“汇合”层是否检测到活细胞和死(浓缩)细胞。按“每个图像”计算，“半胱天冬酶面积/汇合面积”近似于半胱天冬酶3/7染色阳性细胞的比例。
[0456]
使用预定义模板在genedata screener中完成测定分析。更特别地，实验分析的测定特异性设置如下：(a)板布局：阴性对照孔除dmso外不含任何化合物，并被定义为“中性对照”，(b)迹线通道：应该有一个类型为“测量的”的迹线通道，名称为“测量的通道”。这是来自incucyte的原始数据；和(c)层：三个类型为“聚集：时间序列”的层，名称为“平均6h”、“平均12h”和“平均22h”。它们分别包含从5.5至6.5小时、从11.5至12.5和从21.5至22.5小时的测量值的平均值。
[0457]
归一化和校正：三个层中的每一个都被归一化为对照的百分比，以中性对照作为中心参考，并且刺激物对照作为比例参考。或者，如果μ
cr
是中心参考的平均值，而μ
sc
是比例参考的平均值，则归一化值计算如下：
[0458][0459]
层化合物结果：如下使用标准拟合模型，以s
inf
、ic
50
和h作为自由参数，并且s0固定为0。
[0460][0461]
在screener中计算了稳健的z’因子或“rz’因子”。在排除对照孔中的异常动力学迹线后(见下文)，对于在任何fbs浓度下以及任一时间点(6h、12h、22h)测试的molp8细胞，rz’值应为rz≥0.5。
[0462]“全局sd”在screener中计算为归一化后阳性或阴性对照的稳健标准偏差(以较大者为准)。在排除对照孔中的异常动力学迹线后(见下文)，对于在任何fbs浓度下以及任一时间点(6h、12h、22h)测试的molp8细胞，全局sd应为全局sd≤10。
[0463]
根据生物实例2中所述的程序对本发明的具有式(i)的代表性化合物进行测试，结果列示在下表中。下表中报告的值受与所用测定和设备相关的误差范围的影响。
[0464]
表：具有式(i)的代表性化合物的测量ac
50
[0465][0466]
括号中为独立运行的次数。报告了平均值。
[0467]
n.d.意指未确定
[0468]
生物实例3
[0469]
mcl-1是细胞凋亡的调节因子，并且在逃避细胞死亡的肿瘤细胞中高度过表达。该测定评估靶向细胞凋亡途径调节因子(主要是mcl-1、bfl-1、bcl-2和bcl-2家族的其他蛋白质)的小分子化合物的细胞效力。破坏抗细胞凋亡调节因子与bh3结构域蛋白的相互作用的蛋白质-蛋白质抑制剂引发细胞凋亡。
[0470]
3/7测定是发光测定，测量纯化的酶制品或贴壁或悬浮细胞的培养物中的半胱天冬酶-3和半胱天冬酶-7活性。该测定提供了促发光的半胱天冬酶-3/7底物，该底物包含四肽序列devd。此底物被裂解以释放氨基萤光素，这是用于产生光的萤光素酶的底物。以“添加-混合-测量”形式添加单一3/7试剂导致细胞裂解，随后半胱天冬酶裂解底物并生成“辉光型(glow-type)”发光信号。
[0471]
此测定使用对mcl-1抑制敏感的molp-8人多发性骨髓瘤细胞系。
[0472]
材料：
[0473]
·
珀金埃尔默(perkin elmer)envision
[0474]
·
自动分液器384和小体积分配盒
[0475]
·
离心机
[0476]
·
countess自动细胞计数仪
[0477]
·
countess计数室载玻片
[0478]
·
测定板：proxiplate-384 plus，白色384浅孔微孔板
[0479]
·
密封带：topseal a plus
[0480]
·
t175培养瓶
[0481][0482]
细胞培养基：
[0483]
molp8 rpmi-1640培养基500ml20％fbs(热灭活)120ml2mm l-谷氨酰胺6.2ml50μg/ml庆大霉素620μl
ꢀꢀ
测定培养基 rpmi-1640培养基500ml10％fbs(热灭活)57ml2mm l-谷氨酰胺5.7ml50μg/ml庆大霉素570μl
[0484]
细胞培养：
[0485]
细胞培养物维持在0.2与2.0x106个细胞/ml之间。通过收集在50ml锥形管中收获细胞。然后将细胞在500g下沉淀5min，然后去除上清液并重新悬浮在新鲜的预热培养基中。根据需要对细胞进行计数和稀释。
[0486]
caspase-glo试剂：
[0487]
通过将缓冲溶液转移到底物瓶中并混合来制备测定试剂。该溶液可在4℃下储存长达1周，信号损失可忽略不计。
[0488]
测定程序：
[0489]
化合物在测定准备板(proxiplate)中递送并储存在-20℃。测定始终包括1个包含参考化合物的参考化合物板。将板用40nl化合物点样(最终在细胞中0.5％dmso；系列稀释；30μm最高浓度，1/3稀释，10剂，一式两份)。将化合物在室温下使用，并且将4μl预热培养基添加到除列2和列23外的所有孔中。通过在培养基中添加1％dmso来制备阴性对照。通过在培养基中添加最终浓度为60μm的适当阳性对照化合物来准备阳性对照。通过在列23中添加4μl阴性对照、在列2中添加4μl阳性对照和在板中的所有孔中添加4μl细胞悬浮液来准备板。然后将带有细胞的板在37℃下孵育2小时。测定信号试剂为上述caspase-glo溶液，并且向所有孔中添加8μl。然后将板密封并在30分钟后测量。
[0490]
测试化合物的活性计算为细胞凋亡诱导的百分比变化，如下所示：
[0491]
lc＝低对照值的中位值
[0492]
＝screener中的中心参考
[0493]
＝dmso
[0494]
＝0％
[0495]
hc＝高对照值的中位值
[0496]
＝screener中的比例参考
[0497]
＝30μm的阳性对照
[0498]
＝100％细胞凋亡诱导
[0499]
％作用(ac
50
)＝100-((样品-lc)/(hc-lc))*100
[0500]
％对照＝(样品/hc)*100
[0501]
％对照最小值＝(样品-lc)/(hc-lc)*100
[0502]
表：具有式(i)的代表性化合物的测量ac
50
。在所有批次的具体化合物的所有运行中报告平均值。
[0503]
化合物molp8 caspase-glo ac
50
(nm)139012299993400414083529999629999727189