肿瘤特异性启动子及其应用

技术特征：
1.核心启动元件，其特征在于：1)、核苷酸序列如seq id no.1所示；或者：2)、在序列seq id no.1所示的核苷酸序列中有1个或几个碱基插入、缺失和/或替换突变，且仍然具有启动子功能的核酸分子。2.根据权利要求1所述的核心启动元件，其特征在于，核苷酸序列如seq id no.3、seq id no.4或seq id no.5中的任一项所示。3.含有权利要求1或2所示的核心启动元件的启动子。4.根据权利要求3所述的启动子，其特征在于：核苷酸序列如seq id no.6、seq id no.7或seq id no.8所示。5.根据权利要求3或4所述的启动子，其特征在于：还插入了至少一个e2f结合位点。6.根据权利要求5所述的启动子，其特征在于：所述的e2f结合位点的核苷酸序列如seq id no.15所示；或者，所述的e2f结合位点为在序列seq id no.15所示的核苷酸序列中有1个或几个碱基插入、缺失和/或替换突变，且仍然具有e2f结合位点功能的核酸分子。7.根据权利要求4～6任一项所述的启动子，其特征在于：所述的e2f结合位点插入在权利要求1或2所述的核心启动元件的5’端和/或3’端。8.根据权利要求7所述的启动子，其特征在于：核苷酸序列如seq id no.9、seq id no.10、seq id no.11、seq id no.12、seq id no.13或seq id no.14所示。9.权利要求1或2所述的核心启动元件或者权利要求3～8任一项所述的启动子在制备溶瘤病毒或质粒中的用途。10.根据权利要求9所述的用途，其特征在于所述的溶瘤病毒是溶瘤腺病毒。11.含有权利要求1或2所述的核心启动元件或者权利要求3～8任一项所述的启动子的重组载体。12.根据权利要求11所述的重组载体，其特征在于所述的重组载体是质粒载体或病毒载体。13.根据权利要求12所述的重组载体，其特征在于所述的病毒载体是腺病毒载体、腺病毒相关病毒或逆转录病毒。14.根据权利要求12所述的重组载体，其特征在于所述的病毒载体是溶瘤病毒。15.根据权利要求14所述的重组载体，其特征在于所述的溶瘤病毒是溶瘤腺病毒、溶瘤细小病毒、溶瘤疱疹病毒、溶瘤痘病毒、溶瘤水泡性口炎病毒、溶瘤麻疹病毒、溶瘤粘液瘤病毒、溶瘤逆转录病毒、溶瘤呼肠孤病毒、溶瘤痘苗病毒中的至少一种。16.根据权利要求15所述的重组载体，其特征在于所述的溶瘤腺病毒是血清型属于a亚属、b亚属、c亚属、d亚属、e亚属、f亚属或、g亚属的腺病毒；进一步的，所述的腺病毒为：选自a亚属的12、18、31或61型中的至少一种；或者，选自b亚属的3、7、11、14、16、21、34、35、55、66、68、76、77、78或79型中的至少一种，或者，选自c亚属的1、2、5、6、57或89型中的至少一种；或者，选自d亚属的8、9、13、15、17、19、20、22～30、32、33、36～39、46、48、49、53、54、56、
58～60、62～65、67、69～75、80～88或90～103型中的至少一种；或者，选自e亚属的4型，或者，选自f亚属的40或41型；或者，选自g亚属的52型腺病毒。17.根据权利要求11所述的重组载体，其特征在于所述的质粒载体为pdc316、pdc311、pdc312、pdc315、pdc511、pdc512、pdc515、pdc516、pshuttle、pshuttle-cmv、pctap-shuttle系列质粒、pntap-shuttle系列质粒、padtrack、padtrack-cmv、pacad5系列质粒、phbad系列质粒或者pxc1质粒中的至少一种。18.根据权利要求15所述的重组载体，其特征在于所述的溶瘤腺病毒中是由权利要求1或2所述的核心启动元件或者权利要求3～8任一项所述的启动子驱动e1a和/或e1b-19k基因的表达。19.根据权利要求15所述的重组载体，其特征在于所述的e1a为缺失了中间的24bp的e1a(delta24)，其核苷酸序列为seq id no.16所示；或者，所述的e1b 19k的核苷酸序列为seq id no.17所示。20.含有权利要求11～19任一项所述的重组载体的宿主细胞。21.根据权利要求20所述的宿主细胞，其特征在于是真核细胞。22.抗肿瘤药物，其特征在于：是由权利要求11～19任一项所述的重组载体添加药学上可接受的辅助性成分制备而成。23.制备权利要求11～19任一项所述的重组载体的方法：a)、将权利要求1或2所述的核心启动元件或者权利要求3～8任一项所述的启动子可操作地连接腺病毒增殖所必需的基因构建入穿梭质粒；b)、将步骤a)构建得到的穿梭质粒和腺病毒骨架质粒转入包装细胞，包装得到溶瘤腺病毒。24.根据权利要求23所述的方法，其特征在于：满足以下至少一项：所述的腺病毒增殖所必需的基因为e1a和/或e1b-19k；或者，所述的穿梭质粒为pdc316、pdc311、pdc312、pdc315、pdc511、pdc512、pdc515、pdc516、pshuttle、pshuttle-cmv、pctap-shuttle系列质粒、pntap-shuttle系列质粒、padtrack、padtrack-cmv、pacad5系列质粒、phbad系列质粒或者pxc1质粒的至少一种；或者，所述的腺病毒骨架质粒为pbhgloxdele13cre、pbhgfrtdele13flp、padeasy-1、padeasy-2、pbhge3i或pbhge10i种的至少一种；或者，所述的包装细胞为hek293、hek293a细胞。

技术总结
本发明属于肿瘤免疫治疗领域，具体涉及肿瘤特异性启动子及其应用。本发明所要解决的技术问题是溶瘤腺病毒肿瘤特异性增殖能力有限。本发明解决上述问题的方案是提供一种核心启动元件，既有独立的启动基因表达的功能，又可单独作为启动子使用，也可作为元件构建启动子。其核苷酸序列如SEQ ID No.1所示；或者在序列SEQ ID No.1所示的核苷酸序列中有1个或几个碱基插入、缺失和/或替换突变，且仍具有启动子功能的核酸分子。本发明修饰的肿瘤特异性启动子，具有更好的肿瘤特异性启动子功能，以此启动子构建的溶瘤腺病毒具有能够在肿瘤细胞中特异增殖，而不在正常细胞中增殖特点，是一种优秀的针对多种肿瘤的免疫治疗药物。种优秀的针对多种肿瘤的免疫治疗药物。种优秀的针对多种肿瘤的免疫治疗药物。


技术研发人员：杨莉 田要美
受保护的技术使用者：四川大学
技术研发日：2022.03.31
技术公布日：2022/7/5