一种抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法

1.本发明属于食品添加剂技术领域，具体涉及到一种抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法。


背景技术：

2.脂溶性营养素在水中溶解度低，在胃肠道粘液的通透性差，难以通过不搅动水层，因此在人体中很难吸收利用。为提高脂溶性营养素的生物利用度，就要最大限度地避免其在消化道中被破坏和降解，使之能顺利到达小肠上皮细胞，发挥其保健功效。如果采用一种载体形式将脂溶性营养素进行包埋，使其在水中的溶解性大大增强，则能够大大提高其利用效率。
3.蛋白质是一种具有极大潜在价值的一种生物材料，但蛋白质分子高度压缩，结构紧密，很难将疏水性活性物质包裹在其内部,且对负载的脂溶性功能成分的控释性能较差。从而限制了其在功能性载体领域中的应用。
4.蛋白经过蛋白酶水解过后，水解形成的多肽良好的界面活性和自组装能力，通过非共价结合的方式形成新的纳米胶束、纳米纤维、纳米管、纳米颗粒等载体可以将疏水性活性物质包裹在内，使其在营养食品和药物输送中极具潜力。同时，酶解形成的纳米颗粒在胃肠消化的过程中对酶切位点的数量会较原蛋白减少，从而使其在消化过程中更容易保持完整的形态结构，从而更好的保护包裹在内的脂溶性营养素物质，有利于人体的吸收与利用。
5.cn202110683000.6采用亚硫酸盐的静电交联作用和酶解的共同作用制备纳米颗粒，亚硫酸盐或酸式亚硫酸盐遇到强酸即分解，因此制得的粒子会随着ph的变化而变化，从而使其在胃消化过程中稳定性降低,无法很好的保护包裹在内的脂溶性营养素。cn201810009738.2采用超声的方法将姜黄素包裹在酶解形成的纳米颗粒中，这种方法只适用于一些非极性较弱的营养素，不适用于非极性强的营养素如:β-胡萝卜素、维生素e等，因此限制了其应用范围。
6.风味蛋白酶水解的是亲水性基团，导致在制备纳米颗粒的过程中能够水解掉表面的一些亲水性氨基酸，导致藏在内部具有紧密结构的内部暴露出来,使水解产物两亲性增强，常采用酶解法制备包埋脂溶性营养素纳米颗粒的酶常使用碱性蛋白酶、胰蛋白酶、胃蛋白酶等，风味蛋白酶在此方面具有很大的应用潜力。
7.针对现有技术的缺陷，本发明希望找到一种高效简单的方法，得到的纳米颗粒小、包埋效果好、稳定性及生物利用度高的产品，有效解决人体胃肠消化对脂溶性营养素的不利影响。


技术实现要素：

8.本部分的目的在于概述本发明的实施例的一些方面以及简要介绍一些较佳实施例。在本部分以及本技术的说明书摘要和发明名称中可能会做些简化或省略以避免使本部分、说明书摘要和发明名称的目的模糊，而这种简化或省略不能用于限制本发明的范围。
9.鉴于上述和/或现有技术中存在的问题，提出了本发明。
10.因此，本发明的目的是，克服现有技术中的不足，提供一种抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法。
11.为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：一种抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法，其包括如下步骤：
12.制备颗粒:用风味酶将蛋白溶液酶解,并加热灭酶同时促进自组装,制得纳米颗粒；
13.制备有机相:将脂溶性营养素和有机溶剂混合,制得脂溶性营养素溶液；
14.两相混合：使用高速搅拌仪将脂溶性营养素溶液和纳米颗粒混合；
15.除有机相：使用氮吹仪除去有机溶剂；
16.除去少量不溶物:水解物离心，离心机的转速为10000r/min，时间为20min。
17.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：制备有机相中，所述有机溶剂包括二氯甲烷、甲醇、乙酸乙酯、三氯甲烷、乙腈中的一种或多种。。
18.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：制备颗粒中，蛋白溶液中的蛋白为大豆分离蛋白、α-乳白蛋白、大米蛋白、花生分离蛋白、牛血清白蛋白、酪蛋白、玉米蛋白中的一种或几种。
19.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：制备有机相中，所述脂溶性营养素包括β-胡萝卜素、维生素-e、叶黄素、姜黄素、白藜芦醇、维生素d中的一种。
20.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：两相混合中，所述脂溶性营养素溶液与纳米颗粒按照体积1:2～9的比例进行混合。
21.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：制备颗粒中，按照重量计，蛋白质溶液的浓度为0.5～2％。
22.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：制备颗粒中，按照重量计，风味酶与底物的比值为0.05～0.2％。
23.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：两相混合中，高速搅拌仪转速为8000rpm，搅拌时间为4～8min。
24.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：制备颗粒中，按照重量计，蛋白质溶液的浓度为2％。
25.作为本发明所述的抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法一种优选方案，其中：制备颗粒中，按照重量计，风味酶与底物的比值为0.1％。
26.本发明提供了一种抗胃肠消化的风味酶酶解纳米颗粒的制作方法，有着如下优点：
27.1.所形成的纳米粒子具有良好的形状结构：球形,同时均一度高。粒子粒径在80-100nm之间，粒径小，有利于顺利进入到小肠上皮细胞中。
28.2.制备出的纳米颗粒具有理想的抗消化性，从而保护脂溶性维生素在体内消化时不被破坏，利于人体吸收。
29.3.本发明制备的水溶性脂溶性营养素纳米颗粒相对脂溶性维生素胶束分散液具
有较高的化学稳定性，在光照放置15天，脂溶性营养素保留率仍保持在50％以上。
30.4.本发明涉及的原料简单，原料成本低，制备过程简单易控，经济实用，绿色安全，适合工业连续生产。
附图说明
31.为了更清楚地说明本发明实施例的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动性的前提下，还可以根据这些附图获得其它的附图。其中：
32.图1为本发明制备流程图；。
33.图2为本发明实施6和对比例1中体外胃部消化过程中β-胡萝卜素的释放情况；
34.图3为本发明实施例6与对比例1中体外肠消化过程中β-胡萝卜素的释放情况；
35.图4为实施例6中制得纳米颗粒的透射电镜图；
36.图5为对比例1中纳米颗粒的投射电镜图。
具体实施方式
37.为使本发明的上述目的、特征和优点能够更加明显易懂，下面结合说明书实施例对本发明的具体实施方式做详细的说明。
38.在下面的描述中阐述了很多具体细节以便于充分理解本发明，但是本发明还可以采用其他不同于在此描述的其它方式来实施，本领域技术人员可以在不违背本发明内涵的情况下做类似推广，因此本发明不受下面公开的具体实施例的限制。
39.其次，此处所称的“一个实施例”或“实施例”是指可包含于本发明至少一个实现方式中的特定特征、结构或特性。在本说明书中不同地方出现的“在一个实施例中”并非均指同一个实施例，也不是单独的或选择性的与其他实施例互相排斥的实施例。
40.本发明实施例中采用的氮吹仪为美国organomation氮吹仪n-evap 112(无档位)，本发明中使用的搅拌器为予华集热式恒温加热磁力搅拌器df-101s。
41.实施例1
42.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应30min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶后的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:5。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
43.实施例2
44.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出1％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶
(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应30min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶后的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:5。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
45.实施例3
46.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出0.5％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应30min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:5。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
47.实施例4
48.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.05％(w/w),反应30in，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:2。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,
49.实施例5
50.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.2％(w/w),反应30min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:9。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
51.实施例6
52.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应60min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为6min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:5。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机
转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
53.实施例7
54.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于50℃磁力搅拌锅中加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应90min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为6min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:5。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
55.实施例8
56.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应60min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为6min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:2。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
57.实施例9
58.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应60min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为6min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:9。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
59.实施例10
60.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应60min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:9。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
61.实施例11
62.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出
2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入风味蛋白酶(sigma p6110)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应60min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜素溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为8min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:9。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
63.对比例1
64.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出2％(w/w)的蛋白溶液和0.1％(w/w)β-胡萝卜素溶液，将蛋白溶液放置于集热式恒温加热磁力搅拌器以200r/min的转速，50℃加热保持恒温10分钟后，在蛋白溶液中加入碱性蛋白酶(诺维信alcalase 2.4l fg)，酶和底物的比为0.1％(w/w),反应60min，然后85℃加热10分钟灭酶。冷却至室温后，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜溶液逐滴滴加到灭酶的酶解液中。使用高速搅拌器使叶黄素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:5。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
65.对比例2
66.使用分析天平准确称取大豆分离蛋白和β-胡萝卜素，使用水和乙酸乙酯制备出0.5％(w/w)的蛋白溶液，在高速搅拌仪8000rpm/in的搅拌条件下，将β-胡萝卜溶液逐滴滴加到大豆分离蛋白溶液中。使用高速搅拌器使β-胡萝卜素包埋到颗粒内部，转速为8000rpm/min，时间为4min，最终有机溶液和水的溶液比例为1:5。再使用氮吹仪除去乙酸乙酯,最后使用离心机转速为10000r/min，时间为20min除去少量不溶物即可。
67.实施例12
68.使用实施例1～11和对比例1、2中制得的β-胡萝卜素进行检测，测定其中的包封率并且进行体外模拟消化。
69.体外模拟消化方法如下：
70.取5mlβ-胡萝卜素纳米载体样品与等量的超纯水混合，加入10ml模拟胃液(含2g/l氯化钠l、3.2g/l胃蛋白酶和7ml/l浓盐酸)中，然后用0.5m氢氧化钠或0.5m hcl将ph值调节至2.0。消化液在37℃下缓慢搅拌1小时。在胃相消化后，立即用2.5m氢氧化钠将消化后的样品调节至ph7.0。然后以1:1的比例将20ml模拟肠溶液(含有8mg/ml胆汁盐、1mg/ml胰蛋白酶和5mm氯化钙，ph7.0在pbs缓冲液中)加入到样品溶液中，在缓慢搅拌下在37℃下进行2小时。
71.测定得到的消化后中消化液β-胡萝卜素的包封率和生物可及率，得到的结果记录在表1中。
72.表1实施例1～11和对比例1、2中制得的β-胡萝卜素的包封率和生物可及率
73.实施例包封率(％)生物可及率(％)实施例162.1
±
0.2366.1
±
0.32实施例252.3
±
0.4956.3
±
0.83实施例339.9
±
0.6545.1
±
0.54
实施例442.1
±
0.3945.6
±
0.67实施例552.1
±
0.4257.1
±
0.92实施例692.1
±
0.1995.2
±
0.44实施例782.1
±
0.3985.2
±
0.56实施例842.1
±
0.4142.3
±
0.87实施例982.1
±
0.9886.1
±
0.76实施例1062.1
±
0.4363.2
±
0.23实施例1172.1
±
0.7878.1
±
0.98对比例132.1
±
0.4933.1
±
0.93对比例210.12
±
0.3213.3
±
0.42
74.根据表1可知，实施例6中制得的β-胡萝卜素载体的包封率和和生物可及率最高，优选的实施例为实施例6。同时，根据表1可得，实施例和对比例1-2相对比，实施例的包封率和生物可及率远远高于对比例，体现了实施例的优越性。
75.根据实施例1、2、3中制得的β-胡萝卜素载体的最高最包封率和生物可及率数据可得，蛋白溶液的最佳浓度为2％(w/w)。
76.根据实施例1、4、5中制得的β-胡萝卜素载体的最高最包封率和生物可及率数据可得，酶和蛋白的最佳比例是0.1％(w/w)。
77.根据实施例1、6、7中制得的β-胡萝卜素载体的最高最包封率和生物可及率数据可得，酶解的最佳时间为60min。
78.根据实施例6、8、9中制得的β-胡萝卜素载体的最高最包封率和生物可及率数据可得，蛋白酶解液和有机相混合的最佳比例条件是1:5。
79.根据实施例6、10、11中制得的β-胡萝卜素载体的最高最包封率和生物可及率数据可得，高速分散的最佳时间是4分钟。
80.实施例13
81.使用实施例6和对比例1、2中制得的蛋白酶解液和蛋白溶液过圆二色谱测定二级结构，得到的结果记录在表2中。
82.表2实施例6和对比例1、2中制得溶液的二级结构含量
83.二级结构α-螺旋β-s折叠β-转角无规则卷曲实施例622.60％46.10％16.30％15.60％对比例117.00％52.50％14.50％14.20％对比例213.40％52.30％21.10％13.20％
84.根据表2可得，实施例6中α-螺旋和无规则卷曲的含量高于对比例1和对比例2这说明对比例6中形成的粒子结构上更加柔软和灵活，这有助于蛋白分子紧密吸附于界面上，使其具备更好的乳化性，让纳米颗粒更易包裹住β-胡萝卜素。
85.实施例14
86.使用实施例6和对比例1中制得的溶液测定游离氨基酸含量，并和spi总氨基酸含量做比较，得到的结果记录在表3中。
87.表3实施林6和对比例1中最终制得溶液的游离氨基酸含量与spi总氨基酸量
[0088][0089][0090]
根据表3可知，实施例6和对比例1中所含游离氨基酸释放的百分比差异较大，实施例6中含各个氨基酸是有游离出来，相对来说met(20.33％)、phe(16.16％)、leu(13.12％)游离出来较多。而对比例1含有较多的游离氨基酸是cys-s(23.66％)及val(15.2％)、leu(37,97％)、phe(19.65％)其余氨基酸暴露的并不是很多。
[0091]
这是由于天然大豆分离蛋白是一种球状蛋白质，通常与大多数非极性氨基酸位于内部，极性氨基酸位于外部。多肽链折叠成紧凑的球形构象构象。这些亚基又彼此结合形成复杂的四级结构。大豆蛋白分子高度压缩，结构紧密，很难将疏水性活性物质包裹在其内部,且对负载的脂溶性功能成分的控释性能较差。
[0092]
碱性蛋白酶水解的是是疏水性氨基酸的肽键,其水解的都是蛋白内部的肽键,同时其水解特异性低,并不会只水解某种特定氨基酸肽键,导致较多的疏水性氨基酸游离出来使粒子中的疏水性氨基酸较少，从而使粒子中能与β-胡萝卜素的接触部位减少，导致包封率较低。
[0093]
风味蛋白酶是内切酶和外切酶能够水解肽链上的肽键，导致在制备纳米颗粒的过程中能够水解掉表面的一些亲水性氨基酸，以及内部的疏水性氨基酸，导致藏在内部具有
紧密结构的内部暴露出来,使形成的粒子两亲性更强，从而使β-胡萝卜素更易包埋在例子内部，实施例中使用的风味蛋白酶在效果上相较碱性蛋白酶有着一定的优越性。
[0094]
实施例15
[0095]
将实施例6和对比例1的纳米颗粒进行透射电镜拍照，另外还进行体外模拟消化,胃消化取0、5、15、30、60分钟取样，肠消化取0、5、15、30、60、90120分钟取样，测β-胡萝卜素的释放率，由图2所示，经过实施例6制得的纳米颗粒在胃消化时的β-胡萝卜素释放率明显低于对比例1，证明实施例6所形成的纳米颗粒具有一定的抗消化性。由图2所示，经过实施例6制得的纳米颗粒在肠消化时的β-胡萝卜素释放速率低于对比例1，达到了理想的缓释作用。
[0096]
应说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案而非限制，尽管参照较佳实施例对本发明进行了详细说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的精神和范围，其均应涵盖在本发明的权利要求范围当中。