一种对光敏感的BV2工具细胞及其构建方法和应用

技术特征：
1.一种对光敏感的bv2工具细胞的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：(1)构建依次连接有启动子、光感基因cheta和黄色荧光标记基因的慢病毒基因载体质粒；所述启动子为cmv、ef1a、iba-1、cx3cr1、cag、tef1中的任意一种，所述黄色荧光标记基因为eyfp；(2)将步骤(1)中所述的慢病毒基因载体质粒和pdelta 8.74辅助质粒、pmd2.g质粒一起转染包装细胞，培养，裂解包装细胞，用氯仿、氯化钠和peg8000纯化，取上清液，所述上清液中含有用于感染bv2细胞的慢病毒，所述慢病毒中包括依次连接的启动子、光感基因cheta和黄色荧光标记基因；(3)用步骤(2)中所述慢病毒感染bv2细胞，得到所述对光敏感的bv2工具细胞。2.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(1)中所述的慢病毒基因载体质粒为plenti。3.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述的包装细胞为hek293、293t、aav293中的任意一种。4.根据权利要求1所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(2)中所述的纯化方法，包括如下步骤：(1)收集所述裂解包装细胞后的细胞悬液，离心弃上清，加入细胞裂解溶液重悬细胞沉淀，反复冻融裂解；(2)离心后，上清液加入氯仿，离心，收集上清；(3)向上清液中分别加入氯化钠和peg8000，孵育；(4)离心，弃上清，用缓冲液重悬沉淀；(5)将重悬液加入氯仿，离心，转移上清；(6)向上清液中分别加入氯化钠和peg8000，孵育；(7)离心，弃上清，加入缓冲液重悬沉淀；(8)加入dna酶和rna酶消化；(9)加氯仿抽提，离心，吸出上层水相，所述上层水相为浓缩和纯化的慢病毒液。5.根据权利要求4所述的构建方法，其特征在于，所述步骤(3)和所述步骤(6)中所述氯化钠的终浓度为0.5m，所述peg8000的终浓度为8％，所述8％为质量体积比。6.一种对光敏感的bv2工具细胞，其特征在于，由权利要求1-5任一项所述的构建方法制备得到。7.权利要求6所述的对光敏感的bv2工具细胞在体外研究小胶质细胞的发育、行为和功能上的应用。8.根据权利要求7所述的应用，其特征在于，所述小胶质细胞的行为包括细胞形态变化和细胞吞噬作用。

技术总结
本发明公开了一种对光敏感的BV2工具细胞及其构建方法和应用，所述构建方法通过慢病毒工具为载体，将带有光感基因ChETA和荧光基因EYFP的质粒整合在BV2细胞的基因组内，使用蓝光(450-490nm)刺激，即可特异性激活光刺激区域的BV2工具细胞，BV2工具细胞相关离子通道开放，产生去极化现象。本发明的对光敏感的BV2工具细胞可以在体外特异性的光激活，灵敏性高，在体外研究小胶质细胞的发育、行为和功能方面具有重要意义。具有重要意义。具有重要意义。


技术研发人员：吕泽中 詹阳
受保护的技术使用者：中国科学院深圳先进技术研究院
技术研发日：2020.12.08
技术公布日：2022/6/10