一种基于DNA模板的长链TNA合成方法

技术特征：
1.一种基于dna模板的长链tna合成方法，其特征在于，其具体操作步骤如下：(1)、选择特定的tna的序列；(2)、通过固相合成等方法获得tna对应的dna模板；(3)、配置tna延伸的反应体系，进行tna延伸；(4)、通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳检验所获得的tna；(5)、通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳切胶回收tna。2.根据权利要求1所述的一种基于dna模板的长链tna合成方法，其特征在于，在所述步骤(1)中，特定的tna的序列包括tna酶、tna适体或是和体内rna形成互补配对可进行基因沉默的tna。3.根据权利要求1所述的一种基于dna模板的长链tna合成方法，其特征在于，在所述步骤(2)中，通过固相合成等方法获得tna对应的dna模板具体是通过固相合成获取所需的dna模板，或使用聚合酶合成、酶切等方法获得所需的单链dna片段作为模板。4.根据权利要求1所述的一种基于dna模板的长链tna合成方法，其特征在于，在所述步骤(3)中，进行tna延伸的具体操作方法是：首先，利用获得的dna模板和引物，与水和反应缓冲液混合，后在90℃下退火至4℃，置于冰上；然后，加入mn
2
离子和kod-ridna聚合酶；最后，加入苏糖核苷三磷酸，在55℃下进行引物延伸反应，即tna转录。5.根据权利要求1所述的一种基于dna模板的长链tna合成方法，其特征在于：在所述步骤(4)中，进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验具体是：通过红外荧光扫描成像仪观察dna引物部分有cy5.5荧光基团的tna链延伸情况，检验转录是否成功。6.根据权利要求1所述的一种基于dna模板的长链tna合成方法，其特征在于：在所述步骤(5)中，通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳切胶回收tna具体是：通过变性聚丙烯酰胺凝胶电泳的方法，分离dna模板和tna，在紫外光照射下，观察并切下全长tna部分所对应的条带，通过浸泡凝胶回收得到tna分子。

技术总结
本发明公开了一种基于DNA模板的长链TNA合成方法。该方法属于非天然核酸合成技术领域，具体步骤：获得DNA模板及对应引物；配置TNA引物延伸的反应体系；特定温度下进行以DNA为模板的TNA引物延伸反应；取小部分反应产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)实验，检验引物延伸反应是否成功进行；TNA产物进行变性聚丙烯酰胺凝胶电泳实验，分离模板DNA和TNA，切胶回收TNA。相比于固相合成，本发明可以有效地合成长达300nt的TNA，大幅提高了TNA合成的长度上限，并降低了合成的成本。为较长的TNA合成提供了优良的合成方式，支持了TNA在分子生物学中的研究和应用。学中的研究和应用。学中的研究和应用。


技术研发人员：于涵洋 郭佳杰 张泽
受保护的技术使用者：南京大学
技术研发日：2022.03.30
技术公布日：2022/6/7