一种具有美白和/或抗氧化作用的组合物及其在制备面膜中的应用的制作方法

1.本发明涉及天然药物化学技术领域，具体涉及一种具有美白和/或抗氧化作用的组合物及其在制备面膜中的应用。


背景技术：

2.随着人们生活水平的提高，女性对于外在美的追求也越来越高；因为“一白遮三丑”的审美观念，以至于女性对于美白的需求也越来越多。现在的美白类产品比较多，如粉底、遮瑕膏、粉饼、定妆粉等能够起到粉饰美白的作用；但是，这些产品是治标不治本的。皮肤不够白皙，主要的内在原因在于皮肤类的黑色素含量过多；因此，抑制黑色素的生成为美白类产品的重点开发方向。
3.黑老虎果是指黑老虎的果实，其含丰富的维生素c、维生素e、氨基酸和多种微量元，是令人喜爱的野生水果。蓝莓，为杜鹃花科越橘属多年生低灌木，其果实中含有丰富的营养成分，其不仅具有良好的营养保健作用，还具有防止脑神经老化、强心、抗癌、软化血管、增强人体免疫等功能。
4.但目前，现有技术对于黑老虎果以及蓝莓果实的美白作用研究较少；尤其是现有技术更没有将黑老虎果提取物以及蓝莓果实提取物组合后的美白研究报道。


技术实现要素：

5.为了克服现有技术中存在的至少之一的技术问题，本发明首先提供了一种具有美白和/或抗氧化作用的组合物。
6.本发明所要解决的上述技术问题，通过以下技术方案予以实现：
7.一种具有美白和/或抗氧化作用的组合物，其包含黑老虎果提取物以及蓝莓果实提取物；
8.其中，黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物的重量比为3～5：1。
9.优选地，黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物的重量比为4：1。
10.发明人在研究中发现，将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组合后，其不仅具有美白作用，还具有一定的抗氧化作用。因此，以由黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组合后得到的组合物作为有效成分，可以用于制备具有美白以及抗氧化作用的面膜。
11.优选地，所述的黑老虎果提取物通过如下方法制备得到：
12.取黑老虎果干果，加入有机溶剂提取，将提取液浓缩干燥后即得所述的提取物；
13.所述的有机溶剂为丙酮。
14.优选地，所述的提取是指将黑老虎果干果放入有机溶剂中，在20～30℃下浸渍提取1～3d，过滤后得提取液。
15.最优选地，所述的提取是指将黑老虎果干果放入有机溶剂中，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液。
16.优选地，有机溶剂与黑老虎果干果的用量比为10～20ml：1g。
17.优选地，所述的蓝莓提取物通过如下方法制备得到：
18.(1)取新鲜的蓝莓果实，用有机溶剂提取，提取结束后将提取液浓缩干燥得蓝莓果实有机溶剂提取物；
19.(2)将蓝莓果实有机溶剂提取物上硅胶柱，先用体积比为80～85：20～15的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用体积比为65～70:35～30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为65～70:35～30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
20.优选地，步骤(1)中所述的有机溶剂为乙酸乙酯。
21.优选地，步骤(1)中所述的提取是指将蓝莓果实放入有机溶剂中，在20～30℃下浸渍提取1～3d。
22.最优选地，步骤(1)中所述的提取是指将蓝莓果实放入有机溶剂中，在25℃下浸渍提取2d。
23.优选地，步骤(1)中有机溶剂与新鲜的蓝莓果实的用量比为8～15ml：1g。
24.优选地，步骤(2)中，先用3～5倍柱体积的体积比为80～85：20～15的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用5～8倍柱体积的体积比为65～70:35～30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为65～70:35～30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
25.最优选地，步骤(2)中，先用4倍柱体积的体积比为84：16的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用6倍柱体积的体积比为68:32的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为68:32的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
26.发明人进一步研究表明，组合物的抗氧化作用的好坏与黑老虎果提取物以及蓝莓果实提取物的制备方法密切相关。发明人在研究中惊奇的发现：将黑老虎果用有机溶剂丙酮提取得到的黑老虎果提取物；与蓝莓果实先用有机溶剂乙酸乙酯提取，然后再在上述硅胶柱洗脱条件下制备得到的蓝莓果实提取物组合后；黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物之间可以发生协同抗氧化作用；其具有十分优异的抗氧化作用。
27.在此，发明人需要强调的是，黑老虎果、蓝莓果实的提取溶剂，以及蓝莓果实提取物制备过程中的硅胶柱洗脱条件十分关键，其决定着制备得到的黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组合后是否具有优异的抗氧化作用；研究表明：采用其它溶剂提取得到的黑老虎果提取物与采用采用其它硅胶柱洗脱条件制备得到的蓝莓果实提取物组合后得到的组合物并不具有优异的抗氧化作用，其抗氧化作用远远小于采用丙酮提取得到的黑老虎果提取物与采用本发明硅胶柱洗脱条件制备得到的蓝莓果实提取物组合后得到的组合物。
28.本发明还提供一种由上述具有美白和/或抗氧化作用的组合物在制备具备美白和/或抗氧化作用的面膜中的应用。
29.有益效果：本发明提供了一种由黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组成的全新的组合物；研究表明，将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组合后，其不仅具有美白作用，还具有一定的抗氧化作用。尤其是，将黑老虎果用有机溶剂丙酮提取得到的黑老虎果提取物；与蓝莓果实先用有机溶剂乙酸乙酯提取，然后再在上述硅胶柱洗脱条件下制备得到的蓝莓
果实提取物组合后；黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物之间可以发生协同抗氧化作用；其具有十分优异的抗氧化作用。因此，进一步地，以由黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组合后得到的组合物作为有效成分，可以用于制备具有美白以及抗氧化作用的面膜。
具体实施方式
30.以下结合具体实施例来进一步解释本发明，但实施例对本发明不做任何形式的限定。
31.实施例1 具有美白和/或抗氧化作用的组合物的制备
32.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比4：1混合而成；
33.所述的黑老虎果提取物通过如下方法制备得到：取黑老虎果干果，放入丙酮中(丙酮与黑老虎果干果的用量比为15ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液；将提取液浓缩干燥后即得所述的黑老虎果提取物；
34.所述的蓝莓果实提取物通过如下方法制备得到：
35.(1)取新鲜的蓝莓果实，放入乙酸乙酯中(乙酸乙酯与新鲜的蓝莓果实的用量比为12ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液，将提取液浓缩干燥得蓝莓果实乙酸乙酯提取物；
36.(2)将蓝莓果实乙酸乙酯提取物上硅胶柱(硅胶柱中采用200-300目的硅胶；硅胶的重量为蓝莓果实乙酸乙酯提取物重量的25倍)，先用4倍柱体积的体积比为84：16的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用6倍柱体积的体积比为68:32的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为68:32的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
37.实施例2 具有美白和/或抗氧化作用的组合物的制备
38.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比3：1混合而成；
39.所述的黑老虎果提取物通过如下方法制备得到：取黑老虎果干果，放入丙酮中(丙酮与黑老虎果干果的用量比为20ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液；将提取液浓缩干燥后即得所述的黑老虎果提取物；
40.所述的蓝莓果实提取物通过如下方法制备得到：
41.(1)取新鲜的蓝莓果实，放入乙酸乙酯中(乙酸乙酯与新鲜的蓝莓果实的用量比为15ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液，将提取液浓缩干燥得蓝莓果实乙酸乙酯提取物；
42.(2)将蓝莓果实乙酸乙酯提取物上硅胶柱(硅胶柱中采用200-300目的硅胶；硅胶的重量为蓝莓果实乙酸乙酯提取物重量的25倍)，先用3倍柱体积的体积比为85：15的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用5倍柱体积的体积比为70:30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为70:30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
43.实施例3 具有美白和/或抗氧化作用的组合物的制备
44.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比5：1混合而成；
45.所述的黑老虎果提取物通过如下方法制备得到：取黑老虎果干果，放入丙酮中(丙酮与黑老虎果干果的用量比为10ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液；将提取液
浓缩干燥后即得所述的黑老虎果提取物；
46.所述的蓝莓果实提取物通过如下方法制备得到：
47.(1)取新鲜的蓝莓果实，放入乙酸乙酯中(乙酸乙酯与新鲜的蓝莓果实的用量比为8ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液，将提取液浓缩干燥得蓝莓果实乙酸乙酯提取物；
48.(2)将蓝莓果实乙酸乙酯提取物上硅胶柱(硅胶柱中采用200-300目的硅胶；硅胶的重量为蓝莓果实乙酸乙酯提取物重量的25倍)，先用5倍柱体积的体积比为80：20的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用8倍柱体积的体积比为65:35的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为65:35的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
49.对比例1
50.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比4：1混合而成；
51.所述的黑老虎果提取物通过如下方法制备得到：取黑老虎果干果，放入体积分数为95％的乙醇中(乙醇与黑老虎果干果的用量比为15ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液；将提取液浓缩干燥后即得所述的黑老虎果提取物；
52.所述的蓝莓果实提取物的制备方法同实施例1。
53.对比例1与实施例1的区别在于，对比例1采用体积分数为95％的乙醇对黑老虎果进行提取；而实施例1则是采用丙酮对黑老虎果进行提取。
54.对比例2
55.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比4：1混合而成；
56.所述的黑老虎果提取物通过如下方法制备得到：取黑老虎果干果，放入甲醇中(甲醇与黑老虎果干果的用量比为15ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液；将提取液浓缩干燥后即得所述的黑老虎果提取物；
57.所述的蓝莓果实提取物的制备方法同实施例1。
58.对比例2与实施例1的区别在于，对比例2采用甲醇对黑老虎果进行提取；而实施例1则是采用丙酮对黑老虎果进行提取。
59.对比例3 具有美白和/或抗氧化作用的组合物的制备
60.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比4：1混合而成；
61.所述的黑老虎果提取物的制备方法同实施1；
62.所述的蓝莓果实提取物通过如下方法制备得到：取新鲜的蓝莓果实，放入乙酸乙酯中(乙酸乙酯与新鲜的蓝莓果实的用量比为12ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液，将提取液浓缩干燥得蓝莓果实乙酸乙酯提取物；即所述的蓝莓果实提取物。
63.对比例3与实施例1的区别在于，对比例3仅仅将蓝莓果实用乙酸乙酯提取制备蓝莓果实提取物；而实施例1则是将蓝莓果实用乙酸乙酯提取后，然在再通过硅胶柱层析来制备蓝莓果实提取物。
64.对比例4 具有美白和/或抗氧化作用的组合物的制备
65.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比4：1混合而成；
66.所述的黑老虎果提取物的制备方法同实施1；
67.所述的蓝莓果实提取物通过如下方法制备得到：
68.(1)取新鲜的蓝莓果实，放入乙酸乙酯中(乙酸乙酯与新鲜的蓝莓果实的用量比为12ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液，将提取液浓缩干燥得蓝莓果实乙酸乙酯提取物；
69.(2)将蓝莓果实乙酸乙酯提取物上硅胶柱(硅胶柱中采用200-300目的硅胶；硅胶的重量为蓝莓果实乙酸乙酯提取物重量的25倍)，先用4倍柱体积的体积比为95：5的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用6倍柱体积的体积比为85:15的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为85:15的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
70.对比例4与实施例1的区别在于，对比例4中蓝莓果实提取物制备过程中，大孔树脂洗脱条件与实施例1不同；对比例4先用体积比为95：5的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用体积比为85:15的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱；而实施例1则是先用体积比为84：16的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用体积比为68:32的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱。
71.对比例5 具有美白和/或抗氧化作用的组合物的制备
72.所述的组合物是将黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物按重量比4：1混合而成；
73.所述的黑老虎果提取物的制备方法同实施1；
74.所述的蓝莓果实提取物通过如下方法制备得到：
75.(1)取新鲜的蓝莓果实，放入乙酸乙酯中(乙酸乙酯与新鲜的蓝莓果实的用量比为12ml：1g)，在25℃下浸渍提取2d，过滤后得提取液，将提取液浓缩干燥得蓝莓果实乙酸乙酯提取物；
76.(2)将蓝莓果实乙酸乙酯提取物上硅胶柱(硅胶柱中采用200-300目的硅胶；硅胶的重量为蓝莓果实乙酸乙酯提取物重量的25倍)，先用4倍柱体积的体积比为70：30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用6倍柱体积的体积比为60:40的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱，收集体积比为60:40的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱下来的洗脱液，浓缩干燥后得所述的蓝莓果实提取物。
77.对比例4与实施例1的区别在于，对比例4中蓝莓果实提取物制备过程中，大孔树脂洗脱条件与实施例1不同；对比例4先用体积比为70：30的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用体积比为60:40的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱；而实施例1则是先用体积比为84：16的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱除杂；然后再用体积比为68:32的氯仿和甲醇组成的有机溶剂洗脱。
78.实验例1 美白实验测试
79.(1)采用0.2mol/l的磷酸缓冲溶液(ph为6.8)配制配置浓度为1g/l的l-多巴溶液；
80.(2)配制浓度为100u/ml的酪氨酸酶溶液；
81.(3)配制浓度为2mg/ml的待测药液；
82.(4)取40μl的l-多巴溶液、40μl的待测药液和/或40μl的酪氨酸酶溶液加入到96孔板中，接着在30℃的水浴中反应40min；反应完成后在490nm处测试吸光度a，每组实验重复3次，每组实验的吸光度取3次测试的平均值；计算酪氨酸酶抑制率；其中，待测药液是采用实施例1～3制备得到的具有美白和/或抗氧化作用的组合物；测试结果见表1；其中酪氨酸酶抑制率越高可以反应制备得到的组合物的美白效果越好。
83.其中，酪氨酸酶抑制率＝[1-(a
t1-a
t2
)/(a
c1-a
c2
)]x100％；公式中，a
t1
为加酪氨酸酶溶液和加待测药液条件下测得的吸光度；a
t2
为不加酪氨酸酶溶液(用等量的磷酸缓冲溶液替代)和加待测药液条件下测得的吸光度；a
c1
为加酪氨酸酶溶液但不加待测药液(用等量的磷酸缓冲溶液替代)条件下测得的吸光度；a
c2
为不加酪氨酸酶溶液以及不加待测药液(用等量的磷酸缓冲溶液替代)条件下测得的吸光度。
[0084]
表1.组合物对酪氨酸酶抑制活性测试结果
[0085]
待测药液酪氨酸酶抑制率实施例1制备得到的组合物94.17％实施例2制备得到的组合物86.21％实施例3制备得到的组合物83.38％
[0086]
从表1实验数据可以看出，实施例1～3制备得到的组合物，其具有较高的酪氨酸酶抑制率，其中实施例1的组合物对酪氨酸酶抑制率高达94.17％；这说明，本发明由黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组成的组合物其具有较高酪氨酸酶抑制活性以及优异的美白作用。
[0087]
实验例2 抗氧化实验测试
[0088]
将实施例1～3、对比例1～5制备得到的具有美白和/或抗氧化作用的组合物，以及按实施例1方法制备得到的黑老虎果提取物和蓝莓果实提取物分别配制成0.15mg/ml的待测样品溶液作为测试对象。
[0089]
分别取2ml的待测样品溶液，加入2ml dpph溶液，混合摇匀，避光静置30分钟后，测吸光度ai，以相应的溶剂为对照调零；取2ml待测样品溶液，加入2ml无水乙醇，混合摇匀，避光静置30分钟后，测吸光度aj，以相应的溶剂为对照调零；取2ml无水乙醇，加入2ml dpph溶液，混合摇匀，避光静置30分钟后，测吸光度a0，以相应的溶剂为对照调零。计算dpph清除率，dpph清除率的计算方法为，dpph清除率＝[1-(a
i-aj)/a0]
×
100％。其中dpph清除率越高说明抗氧化能力越强。
[0090]
表2.组合物抗氧化实验结果
[0091] dpph清除率实施例1制备得到的组合物96％实施例2制备得到的组合物89％实施例3制备得到的组合物85％对比例1制备得到的组合物52％对比例2制备得到的组合物60％对比例3制备得到的组合物62％对比例4制备得到的组合物67％对比例5制备得到的组合物63％单独采用实施例1黑老虎果提取物57％单独采用实施例1蓝莓果实提取物71％
[0092]
从表2抗氧化实验结果可以看出，在0.15mg/ml浓度下，实施例1～3制备得到的组合物的dpph清除率在85％以上，尤其是实施例1制备得到的组合物，其dpph清除率高达96％；这说明：本发明由黑老虎果提取物与蓝莓果实提取物组成的组合物其具有十分优异
的抗氧化作用。
[0093]
从表2抗氧化实验结果还可以看出，实施例1制备得到的组合物，其dpph清除率要远远高于单独采用按实施例1所述方法制备得到的黑老虎果提取物以及单独采用按实施例1所述方法制备得到的蓝莓果实提取物；这说明：按本发明所述方法制备得到的黑老虎果提取物以及蓝莓果实提取物组合后可以产生协同抗氧化作用。
[0094]
从表2抗氧化实验结果还可以看出，实施例1制备得到的组合物，其dpph清除率要远远高于对比例1和2；且对比例1和2制备得到的组合物其dpph清除率同样也小于单独采用按实施例1所述方法制备得到的蓝莓果实提取物。而对比例1和2与实施例1的区别仅仅在于，黑老虎果的提取溶剂不同；这说明：只有采用丙酮提取得到的黑老虎果提取物与按照本发明所述方法制备得到的蓝莓果实提取物组合后才能产生协同抗氧化作用；而采用其他有机溶剂提取得到的黑老虎果提取物与按照本发明所述方法制备得到的蓝莓果实提取物组合后并不能产生协同抗氧化作用。
[0095]
从表2抗氧化实验结果还可以看出，实施例1制备得到的组合物，其dpph清除率要远远高于对比例3～5；且对比例3～5制备得到的组合物其dpph清除率同样也小于单独采用按实施例1所述方法制备得到的蓝莓果实提取物。
[0096]
这说明：蓝莓果实提取物中硅胶柱的洗脱条件十分关键，只有在本发明所述的硅胶洗脱条件下制备得到的蓝莓果实提取物与采用丙酮提取得到的黑老虎果提取物组合后，才能产生协同抗氧化作用，才具有十分优异的抗氧化作用。而不采用硅胶柱制备得到的蓝莓果实提取物，或并不是在本发明所述硅胶柱洗脱条件下制备得到的蓝莓果实提取物，其与采用丙酮提取得到的黑老虎果提取物组合后并不能发挥协同抗氧化作用，从而不能发挥优异的抗氧化作用。