一种白腐真菌生物制备4,4’-二羟基二苯甲酮的方法

一种白腐真菌生物制备4,4
’‑
二羟基二苯甲酮的方法
技术领域
1.本发明涉及微生物领域，具体涉及一种白腐真菌生物制备4,4
’‑
二羟基二苯甲酮的方法。


背景技术：

2.白腐真菌是现已发现可以将难降解木质素结构完全降解的一类微生物，不仅在生态环境中发挥着重要作用，而且因其高降解性能的广谱性，也多被用来进行难降解有机污染物的降解研究。白腐真菌在处理难降解有机污染物时具备诸多优点，利用白腐真菌对环境有机污染进行生物修复的研究成为热点，其独特的降解能力使其有望成为环境污染修复治理的重要新资源，日益引起各国科学家的高度关注。4,4
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二羟基二苯甲酮是生产具备防晒作用的产品(例如化妆品，个人护理产品，产品外包装等)的重要添加剂，随着社会经济的发展，该化合物的需求也将加大。现阶段4,4
’‑
二羟基二苯甲酮的生产多是化学合成，但是化学合成具备高成本，危险性大，二次污染的弊端，因此需要一种安全无污染的合成方法。


技术实现要素：

3.针对现有技术中存在的问题，本发明的目的是提供一种白腐真菌生物制备4,4
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二羟基二苯甲酮的方法。
4.本发明的目的采用以下技术方案来实现：
5.一种白腐真菌生物制备4,4
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二羟基二苯甲酮的方法，包括以下步骤：
6.步骤1，将白腐真菌phanerochaete sordida yk-624接种至培养基进行培养；
7.步骤2，向培养基中加入双酚f进行生物制备；
8.步骤3，将培养基的菌体和培养液分离，将分离后的培养液浓缩至原液体培养基体积的1/10左右，加入等体积的有机溶剂进行萃取；
9.步骤4，对萃取后的有机相先进行浓缩处理，再进行梯度洗脱与产物跟踪；
10.步骤5，再次进一步分离纯化，即得到4,4
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二羟基二苯甲酮。
11.优选地，所述步骤1中的培养基包括固体培养基和液体培养基，将白腐真菌phanerochaete sordida yk-624先接种至固体培养基中传代培养，待菌丝体长满平板(约3天)，再接种至液体培养基中培养3天。
12.优选地，所述固体培养基为马铃薯葡萄糖琼脂培养基(pda)，马铃薯葡萄糖琼脂培养基的成分包括：淀粉4g、葡萄糖20g、琼脂15g以及加水至1l。
13.优选地，所述液体培养基为马铃薯葡萄糖液体培养基(pdb)，1l马铃薯葡萄糖液体培养基的成分包括：淀粉4g、葡萄糖20g以及加水至1l。
14.优选地，所述步骤2中，双酚f加入至培养基后的浓度为0.5mmol/l。
15.优选地，所述步骤2中，生物制备为加入双酚f后静置培养，静置培养的温度为30℃，时间为7天。
16.优选地，所述步骤3中，浓缩处理为旋蒸浓缩，浓缩至体积为400-500ml。
17.优选地，所述步骤3中，有机溶剂为乙酸乙酯，萃取的次数为2-3次。
18.优选地，所述步骤4中，浓缩处理为旋蒸浓缩，梯度洗脱使用的是硅胶柱色谱法，产物跟踪使用的是薄层色谱法。
19.优选地，所述步骤4中，梯度洗脱的洗脱液为正己烷、乙酸乙酯、甲醇的一种或多种混合物。
20.优选地，所述步骤5中，进一步分离纯化使用的色谱制备柱型号为：develosil inertsustain c30，5m，20
×
250nm。
21.本发明的有益效果为：
22.本发明提供了一种4,4
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二羟基二苯甲酮的生物制备方法。利用具备高降解性能的白腐真菌对有机污染物双酚f(4,4
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二羟基二苯基甲烷)进行生物降解，在生物降解的同时，生成的代谢产物4,4
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二羟基二苯甲酮也可以应用去其他的工业途径中。首先，该生物制备使用的是微生物，白腐真菌的生长繁殖快，受营养条件的影响小，从而减少了微生物的培养成本，进而减少生产成本；其次，白腐真菌是在对有机污染物双酚f进行降解的同时，生成了代谢产物4,4
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二羟基二苯甲酮，这不仅去除了环境污染物，还能够利用制备的化合物进行商业创收。
附图说明
23.利用附图对本发明作进一步说明，但附图中的实施例不构成对本发明的任何限制，对于本领域的普通技术人员，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据以下附图获得其它的附图。
24.图1是实施例2中纯化后的化合物的ms图；
25.图2是实施例2中纯化后的化合物在cd3od中的氢谱图的nmr图；
26.图3是4,4
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二羟基二苯甲酮标准品的nmr图。
具体实施方式
27.为了更清楚的说明本发明，对本发明的技术特征、目的和有益效果有更加清楚的理解，现对本发明的技术方案进行以下详细说明，但不能理解为对本发明的可实施范围的限定。
28.其中，4,4
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二羟基二苯甲酮(分子式：c
13h10
o3，分子量：214.22，英文命名：4,4
’‑
dihydroxybenzophenone(dhbp))结构式为：
[0029][0030]
结合以下实施例对本发明作进一步描述。
[0031]
实施例1
[0032]
一种使用白腐真菌生物降解双酚f的方法，包括以下步骤：
[0033]
(1)将白腐真菌phanerochaete sordida yk-624用pda培养基进行传代扩大培养，
4℃冰箱内保存备用；
[0034]
(2)将已经在pda培养3天的phanerochaete sordida yk-624接种至pdb培养基中，继续培养3天；
[0035]
(3)将液体培养后的白腐真菌中加入双酚f(培养液中双酚f最终浓度：0.1mmol/l)继续培养7天，开始降解实验。
[0036]
降解结果显示，在pdb培养基中，培养7天内，phanerochaete sordida yk-624对浓度为0.1mmol/l的双酚f能够达到完全降解。
[0037]
实施例2
[0038]
一种使用白腐真菌生物制备4,4
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二羟基二苯甲酮的方法，包括以下步骤：
[0039]
(1)将白腐真菌phanerochaete sordida yk-624用pda培养基进行传代扩大培养，4℃冰箱内保存备用；
[0040]
(2)将已经在pda培养3天的phanerochaete sordida yk-624接种至pdb培养基中，继续培养3天；
[0041]
(3)将液体培养后的白腐真菌中加入双酚f(培养液双酚f的最终浓度：0.5mmol/l)进行大量培养；
[0042]
(4)大量培养结束后收集培养液，减压旋蒸至400-500ml左右，使用乙酸乙酯萃取三次，将有机萃取液旋蒸浓缩；
[0043]
(5)使用硅胶柱色谱法进行梯度洗脱，并应用薄层色谱法进行产物跟踪；
[0044]
(6)将硅胶色谱分离得到的产物通过制备液相色谱进一步分离纯化，得到纯化后的化合物；
[0045]
(7)将步骤(6)得到的纯化后的化合物进行ms和nmr分析。
[0046]
分析结果如下：
[0047]
1、步骤(6)得到的纯化后的化合物ms图如图1所示，[m-h]-＝213.12，知道其化合物分子量为214，推测为4,4
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二羟基二苯甲酮。
[0048]
2、步骤(6)得到的纯化后的化合物在cd3od中的氢谱图的nmr图如图2所示，通过和4,4
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二羟基二苯甲酮标准品的nmr(图3)对比确定其化合物为4,4
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二羟基二苯甲酮标品。
[0049]
最后应当说明的是，以上实施例仅用以说明本发明的技术方案，而非对本发明保护范围的限制，尽管参照较佳实施例对本发明作了详细地说明，本领域的普通技术人员应当理解，可以对本发明的技术方案进行修改或者等同替换，而不脱离本发明技术方案的实质和范围。