一种宫颈癌早期筛查检测试剂盒及其应用的制作方法

技术特征：
1.宫颈癌基因甲基化检测位点，其特征在于，所述的基因甲基化检测位点包括pax1、magi2、sox17中的一种或多种。2.宫颈癌基因甲基化检测的pcr引物探针组合，其特征在于，包括以下1)-3)所示的核酸序列组合中的一种或或多种：1)pax1甲基化检测的pcr引物及探针，包括引物探针组合1、引物探针组合2、引物探针组合3中的一种或多种，其中所述引物探针组合1包括如seq id no.1所示的上游引物、如seq id no.2所示的下游引物、如seq id no.3所示的荧光探针，所述引物探针组合2包括如seq id no.4所示的上游引物、如seq id no.5与seq id no.6所示的下游引物、如seq id no.7所示的荧光探针，所述引物探针组合3包括如seq id no.8所示的上游引物、如seq id no.9所示的下游引物、如seq id no.10所示的荧光探针；2)magi2甲基化检测的pcr引物及探针，包括引物探针组合4、引物探针组合5、引物探针组合6中的一种或多种，其中所述引物探针组合4包括如seq id no.11所示的上游引物、如seq id no.12所示的下游引物、如seq id no.13所示的荧光探针，所述引物探针组合5包括如seq id no.14所示的上游引物、如seq id no.15所示的下游引物、如seq id no.16所示的荧光探针，所述引物探针组合6包括如seq id no.17所示的上游引物、如seq id no.18所示的下游引物、如seq id no.19所示的荧光探针；3)sox17甲基化检测的pcr引物及探针，包括引物探针组合7、引物探针组合8、引物探针组合9中的一种或多种，其中所述引物探针组合7包括如seq id no.20所示的上游引物、如seq id no.21所示的下游引物、如seq id no.22所示的荧光探针，所述引物探针组合8包括如seq id no.23所示的上游引物、如seq id no.24所示的下游引物、如seq id no.25所示的荧光探针，所述引物探针组合9包括如seq id no.26所示的上游引物、如seq id no.27所示的下游引物、如seq id no.28所示的荧光探针。3.如权利要求2所述的用于宫颈癌基因甲基化检测的pcr引物探针组合，其特征在于，还包括括检测内参基因gapdh的pcr引物及探针，所述引物包括如seq id no.29所示的上游引物、如seq id no.30所示的下游引物，所述探针包括如seq id no.31所示的荧光探针。4.如权利要求2或权利要求3所述的用于宫颈癌基因甲基化检测的pcr引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的5’端包含有荧光报告基团，所述荧光报告基团包括fam、hex、ned、rox、tet、joe、tamra、cy3、cy5中的任意一种。5.如权利要求2或权利要求3所述的用于宫颈癌基因甲基化检测的pcr引物探针组合，其特征在于，所述荧光探针的3’端包含有荧光淬灭基团，所述荧光淬灭基团包括mgb、bhq-1、bhq-2、bhq-3中的任意一种。6.一种宫颈癌早期筛查检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括如权利要求2所述的pcr引物探针组合，还包括阳性质控品以及阴性质控品。7.如权利要求6所述的宫颈癌早期筛查检测试剂盒，其特征在于，所述宫颈癌早期筛查检测试剂盒反应体系的终浓度组成包括：0.1-1μm pcr引物、0.1-1μm探针。8.如权利要求6所述的宫颈癌早期筛查检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒的pcr反应条件如下：
9.宫颈癌基因甲基化检测的检测方法，其特征在于，包括以下步骤：1)分离待测生物样品中目标基因的核酸；2)将步骤1)所得核酸经亚硫酸氢盐转化处理，得到亚硫酸氢盐转化的dna，即bis-dna；3)采用甲基化荧光定量pcr技术检测步骤2)所得bis-dna的甲基化状态。10.如权利要求1所述的宫颈癌基因甲基化检测位点、如权利要求2所述的宫颈癌基因甲基化检测的pcr引物探针组合、如权利要求6所述的宫颈癌早期筛查检测试剂盒或如权利要求9所述的宫颈癌基因甲基化检测的检测方法在制备检测宫颈癌试剂盒中的应用。

技术总结
本发明提供一种宫颈癌早期筛查检测试剂盒及其应用，通过采用亚硫酸氢盐修饰法对待测宫颈癌核酸样品进行亚硫酸氢盐转化，结合荧光定量PCR技术，综合分析文献研究结果、TCGA甲基化芯片数据库以及转录组测序表达谱，通过多重数据过滤分析，筛选宫颈癌高甲基化候选基因，针对宫颈癌高甲基化候选基因上的多个甲基化检测位点设计特异性的基因甲基化检测引物和探针，覆盖10个以上甲基化CpG位点，通过多重PCR扩增技术扩增经亚硫酸氢盐修饰的待测DNA样品，根据PCR扩增结果来确定待测样品中目标基因的甲基化情况，通过多种途径提高试剂盒的灵敏度与特异性，实现宫颈癌的早期筛查与诊断。断。断。


技术研发人员：邵琦
受保护的技术使用者：安徽达健医学科技有限公司
技术研发日：2020.11.27
技术公布日：2022/5/31