一种免扩增的核酸检测方法及其应用

技术特征：
1.一种免扩增的核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：s1：用捕获探针捕获待检核酸，形成捕获探针-待检核酸复合物；s2：将所述捕获探针-待检核酸复合物与crispr反应体系混合形成反应液，将所述反应液通入微流控芯片的微孔中进行反应；所述crispr反应体系包括cas蛋白、crispr rna和报告探针；所述微流控芯片的微孔的体积为30～100fl；s3：对步骤s2中所述报告探针产生的荧光进行显微观察，以确定核酸检测结果。2.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤s1中所述的捕获探针与磁珠结合，所述磁珠的直径为2.6～3.5μm。3.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述cas蛋白包括cas13a或cas13b中的至少一种。4.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，所述报告探针的两端标记有荧光基团和淬灭基团。5.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤s2中所述微流控芯片包括5
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106个微孔。6.根据权利要求4所述的检测方法，其特征在于，步骤s2中进行的所述反应为crispr反应：所述cas蛋白对所述报告探针进行非特异切割，使所述报告探针的荧光基团被切割为游离态，游离的荧光基团产生荧光。7.根据权利要求6所述的检测方法，其特征在于，所述crispr反应中，反应温度为32～39℃，反应时间为14～16min。8.根据权利要求1所述的检测方法，其特征在于，步骤s3中所述显微观察的方法包括：用显微镜对所述报告探针产生的荧光进行观察。9.权利要求1～8任一项所述的检测方法在非诊断目的的核酸快检中的应用。10.根据权利要求9所述的应用，其特征在于，所述核酸快检包括食品领域的病毒核酸检测或环境中的病毒核酸检测。

技术总结
本发明属于核酸检测领域，公开了一种免扩增的核酸检测方法及其应用。本发明的核酸检测方法包括：用捕获探针捕获待检核酸，形成捕获探针-待检核酸复合物；将捕获探针-待检核酸复合物与CRISPR反应体系混合形成反应液，将反应液通入微流控芯片的微孔中进行反应；对产生的荧光进行显微观察，以确定核酸检测结果。本发明将CRISPR技术与微流控技术相结合开发的核酸检测方法，不需要核酸扩增就可以实现核酸的单分子检测，简便快速，不会造成扩增核酸时引起的气溶胶污染，灵敏度高，可检测到阿摩尔级别的核酸分子，极大地扩大了使用范围。极大地扩大了使用范围。极大地扩大了使用范围。


技术研发人员：蒋兴宇 王斗
受保护的技术使用者：南方科技大学
技术研发日：2022.02.25
技术公布日：2022/5/31