CD73抑制剂及其药学应用的制作方法

cd73抑制剂及其药学应用
技术领域
1.本发明涉及抑制cd73(胞外-5'-核苷酸酶)的化合物和组合物，及其用于治疗和/或预防cd73相关或相关联的疾病、失调和病症(包括癌症相关和免疫相关失调)的用途。


背景技术：

2.胞外核苷酸酶是一组位于细胞表面的胞外酶。胞外核苷酸酶家族的成员包括胞外-核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶(e-npp)、胞外-核苷三磷酸二磷酸水解酶(e-ntpdases)、胞外-5'-核苷酸酶(e5nt，也称为cd73)和碱性磷酸酶(ap)。这些酶使各种细胞外核苷酸水解成包括腺苷的核苷。胞外核苷酸是重要信号分子，它们通过作用于其各自受体(例如，腺苷激活p1受体，其核苷酸(adp、atp)激活p2受体)来触发细胞的应答。腺苷5'-单磷酸(amp)是cd73的主要底物，其水解产物为腺苷。腺苷普遍存在于体内，是对许多生理和病理生理过程至关重要的嘌呤能细胞信号传导的重要调节因子。
3.大量数据表明，cd73在癌症发展和转移中具酶活性。cd73在许多癌细胞类型和肿瘤中被上调，表明cd73的表达与肿瘤新血管生成、侵入和转移有关。从细胞外atp到腺苷的水解级联是肿瘤微环境中重要的免疫抑制性调节途径。cd73过表达损害适应性抗肿瘤免疫应答，并促进肿瘤生长和转移。细胞外腺苷还涉及对缺氧的适应性反应的调节。已经表明，用单克隆抗体，sirna和包括ampcp(腺苷[(α,β)-亚甲基]二磷酸酯)的小分子抑制剂来降低e5nt活性以使肿瘤的生长和转移减弱(参见例如，zhou et al.,oncol.rep.17(2007):1341-1346；stagg and smyth,oncogene,29(2010):5346-5358)。在cd73缺陷小鼠中肿瘤生长也受到损害，并且已经证实这些作用主要归因于这些小鼠中腺苷产生的减少。因此，人们已经开始积极探索cd73抑制剂对癌症的治疗方面的潜在应用(参见例如，m.al-rashida et al.,eur.j.med.chem.,115(2016):484-494以及其中所引用的文献)。
[0004]
肿瘤细胞克服抗肿瘤应答，其中一部分是通过免疫抑制机制实现的。有几种这样的免疫调节机制是已知的；其中，腺苷是关键因子。腺苷可以在肿瘤微环境中由癌细胞和免疫细胞产生并被用于抑制抗肿瘤反应。三磷酸腺苷(atp)受两种细胞表面蛋白cd73和cd39催化而生成腺苷，并且该过程在代谢应激条件(如肿瘤缺氧状态)下会增强。腺苷通过在各种免疫细胞表达的四种腺苷受体(ar，分别被称为a1、a2a、a2b和a3)来发挥其免疫调节功能。腺苷生成酶(如cd73和ar)的过表达已与多种癌症类型中的肿瘤发展相关。由于ars的信号传导使肿瘤进展增加，对该信号传导的调节也就代表了用于癌症的一种很有前景的治疗方法(m.h.kazemi,et al.,j.cell.physiol.,233(2018):2032-2057以及其中所引用的文献)。
[0005]
如上所述，胞外核苷酸酶是位于细胞表面的酶，用于调节嘌呤能(或嘧啶能)信号传导途径。胞外核苷酸酶家族存在着四种不同的形式：胞外核苷酸三磷酸二磷酸水解酶(cd39)、胞外核苷酸焦磷酸酶/磷酸二酯酶、碱性磷酸酶和胞外-5'-核苷酸酶(e5nt，也称为cd73)。cd73是一种糖基磷脂酰肌醇锚定的二锌金属磷酸酶。cd73催化细胞外腺苷单磷酸(amp)去磷酸化从而生成腺苷。它与cd39协作形成胞外酶级联，从而把atp转化为腺苷。由
cd73催化的将amp转化为腺苷的过程被认为是肿瘤微环境中细胞外腺苷水平升高的主要因素(stagg,j.et al.,proc.natl.acad.sci.usa.:107(2010):1547-1552)。cd73的表达由于缺氧诱导因子-1α而直接上调，这解释了在缺氧恶性肿瘤中观察到的细胞外腺苷增加。cd73还被调节性t细胞(tregs)表达并促进treg介导的免疫抑制(stagg j,et al.,cancer res.71(2011):2892-2900)。此外，cd73受转化生长因子-β(tgf-β)、肿瘤坏死因子-α(tnf-α)、肝细胞生长因子(hgf)、白介素-6(il-6)、促分裂原活化蛋白激酶(mapk)、信号转导和转录激活因子3(stat3)、白介素-2(il-2)、视黄酸、int/无翅(wnt)、上皮间质转化和p53突变的诱导。cd73在多种肿瘤类型中被过度表达，并促进肿瘤细胞的侵入、转移和粘附。cd73还与癌症中的免疫耐受性和不良预后相关。因此cd73是研发抗癌药物中有希望的靶点。此外，cd73抑制剂在治疗由腺苷及其受体介导的其它疾病中具有潜力(y.-p.gong,et al.,expert opin.ther.pat.,28(2018):167-171)。
[0006]
腺苷途径还被认为许多人类肿瘤的主要免疫抑制组分(例如参见whiteside,t.l.,expert rev.anticancer ther.,17(2017):527-535)。腺苷和肌苷是癌症中关键的免疫检查点。腺苷和pge2通路在肿瘤微环境中的合作有助于抑制抗肿瘤免疫效应细胞。因此，用药物抑制剂或抗体靶向针对腺苷途径是癌症中有广阔前景的治疗策略。
[0007]
在临床前体内研究中，阻断胞外核苷酸酶或腺苷受体信号传导的活性已成功抑制肿瘤生长和转移。腺苷途径阻断法单独或与其他免疫疗法(包括检查点抑制剂)的联合使用现今正处于在晚期恶性肿瘤患者中进行初始i期临床试验阶段。
[0008]
cd73的小分子抑制剂已有报道。例如，adams等人(国际pct申请公开wo2017/098421)记载了取代的苯并噻二嗪衍生物(为cd73抑制剂)、其药物组合物及其在治疗癌症、癌前期综合征和与cd73抑制相关的疾病中的用途。
[0009]
debien等人(国际pct申请公开wo2017/120508；美国专利申请公开us2017/0267710)记载了通过胞外-5'-核苷酸酶调节amp转化成腺苷的化合物、含该化合物的组合物、合成该化合物的方法，以及这些化合物和组合物用于治疗和/或预防由胞外-5'-核苷酸酶介导的多种疾病的用途。
[0010]
cacatian等人(国际pct申请公开wo2015/164573)记载了嘌呤衍生物及其药物组合物，它们是cd73的抑制剂并且可用于治疗癌症。
[0011]
chen等人(国际pct申请公开wo 2018/049145)公开了作为胞外核苷酸酶抑制剂的核苷酸的制备以及这些化合物在治疗或预防癌症中的用途。
[0012]
lu等人(国际pct申请公开wo 2020/051686)公开了作为cd73抑制剂的小分子化合物。
[0013]
本文引用的所有文章和参考文献的内容通过引用整体并入本文。


技术实现要素：

[0014]
本发明涉及这样的化合物和组合物：其包含抑制胞外-5'-核苷酸酶(也称为e5nt、cd73、nt5e和5nt)活性的化合物。cd73酶活性的抑制导致细胞外腺苷水平的抑制或调节，从而调节细胞和组织的生理环境。本发明公开的化合物，至少具有以下优点中的一种：优异的生物活性、优良的药代动力学特性，其中，优良的药代动力学特性可以表现出较高的血浆药物暴露量和/或较长的体内清除半衰期。
[0015]
本发明还涉及这种化合物和组合物在治疗和/或预防全部或部分由cd73介导的疾病、失调和病症中的用途。cd73抑制剂已经应用到许多疾病，包括癌症、纤维化、神经和神经退行性疾病(例如抑郁症和帕金森病)、缺血性心脑血管疾病、免疫相关疾病和炎性相关疾病的治疗中。在具体实施方式中，本文所述的cd73抑制剂化合物和组合物可以起到抑制cd73的免疫抑制活性和/或抗炎活性的作用，并且当需要这种抑制时可用作治疗剂或预防性疗法。
[0016]
本发明提供了式i'的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
[0017][0018]
其中，w为氧、硫、氮或亚甲基；x'为选自磷酰基(-p(＝o)(or)-)、磺酰基(-s(＝o)
2-)和羰基(-c(＝o)-)的部分，其中，r为氢、形成酯的基团或者保护基团；y选自膦酸根(-po3r2)、磺酸根(-so3r)和羧酸根(-co2r)，其中，r为氢、成酯基团或者保护基；r
1'
选自羟基和氢；r
2'
为氯或氢；以及r
3'
和r
4'
独立地选自氢、烷基、烯基和炔基，其中，r
3'
和r
4'
中的至少一个具有11至30个碳原子。
[0019]
在一个实施方式中，r
3'
和r
4'
独立地选自氢、烷基、烯基和炔基，其中，r
3'
和r
4'
中的至少一个具有-c(＝o)r
5'
或者-c(＝o)or
5'
，其中r
5'
为具有11至30个碳原子的烷基、烯基或炔基；
[0020]
在另一个实施方式中，r
3'
和r
4'
独立地选自氢和环体系，所述环体系为含双环、三环、螺环、稠环或桥环的碳环体系(芳香性的或非芳香性的)或杂环体系，并且若r
3'
和r
4'
不同时为氢，则所述环体系为取代或未取代的。
[0021]
在又一实施方式中，r
3'
为氢或低级烷基(例如，c
1-6
)，且r
4'
为-c(＝o)r
5'
或者-c(＝o)or
5'
，其中r
5'
为c
11-30
烷基、c
11-30
烯基或c
11-30
炔基。
[0022]
在一些实施方式中，r
3'
为氢或低级烷基，且r
4'
为-c(＝o)r
5'
或者-c(＝o)or
5'
，其中r
5'
为环体系，所述环体系为含双环、三环、螺环、稠环或桥环的碳环体系(芳香性的或非芳香性的)或杂环体系，并且所述杂环体系为取代或未取代的。
[0023]
在另一些实施方式中，r
3'
为氢或低级烷基，且r4’
为低聚乙二醇残基或其衍生物。例如但不限于，
─
(ch2ch2o)n─r6'
，其中n等于3到10，r
6'
选自氢或低级烷基(如甲基、乙基、丙基、丁基等)。
[0024]
在又一些实施方式中，r
3'
为氢或低级烷基，且r
4'
为取代或未取代的芳基烷基、烷基芳基、或一种由芳香族烃基(芳基或杂芳基)和脂肪族烃基组成的基团。
[0025]
在一个实施方式中，本发明提供了式ii'和/或式iii'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0026][0027]
其中，w、x'、y、r
1'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0028]
在又一实施方式中，本发明提供了式iv'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0029][0030]
其中，x'、y、r
1'
、r
2'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0031]
在又一实施方式中，本发明提供了式iv'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0032][0033]
其中，x'、y、r
1'
、r
2'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0034]
在又一实施方式中，本发明提供了式ivb的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0035][0036]
其中，x'、y、r
1'
、r
2'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0037]
在又一实施方式中，本发明提供了式iv'c的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0038][0039]
其中，m'、y、r
1'
、r
2'
、r
3'
、r
4'
、r
7'
和r
8'
如上所限定。
[0040]
在又一实施方式中，本发明提供了式v'和/或式vi'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0041][0042]
其中，x'、y、r
1'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0043]
在另一实施方式中，本发明提供式v'a和/或式vi'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0044][0045]
其中r为氢、成酯基团或者保护基；并且r
1'
、r
2'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0046]
在另一实施方式中，本发明提供式vii'和/或式viii'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0047][0048]
其中r为氢、形成酯的基团或者保护基；并且r
1'
、r
2'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0049]
在另一实施方式中，本发明提供式vii'a和/或式viii'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0050][0051]
其中r为氢、成酯基团或者保护基；并且r
1'
、r
2'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0052]
在又一实施方式中，本发明提供了式ix'的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0053][0054]
其中，r为氢、形成酯的基团或者保护基；以及r
1'
、r
2'
、r
3'
和r
4'
如上所限定。
[0055]
其中：
[0056]
r为氢、成酯基团或者保护基；
[0057]r1'
为羟基或氢；
[0058]r2'
为氢或氯；以及
[0059]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为具有11至30个碳原子的烷基、烯基或炔基；或者
[0060]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为含双环、三环或多环的环体系的取代基，其中，所述环体系为稠环体系、螺环体系、桥环体系或并联环体系，并且所述环体系为碳环、脂肪族环、芳香性环、杂环或它们的组合；或者
[0061]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为-c(＝o)r
5'
、-c(＝o)or
5'
或者-c(＝o)nhr
5'
，其中r
5'
为具有11至30个碳原子的烷基、烯基或炔基或者含碳环或杂环体系的取代基，所述碳环或杂环体系含有双环、三环、螺环、稠环或桥环，所述碳环或杂环体系为芳香性的或非芳香性的且为取代的或未取代的，其中，所述环为碳环、脂肪族环、芳香性环、杂环或它们的组合；或者
[0062]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为未取代或取代的1-金刚烷基、α-萘基甲基或β-萘基甲基；或者
[0063]r3'
、r
4'
和它们所连接的氮形成5元至15元环结构，例如三元稠环结构。
[0064]
在又一实施方式中，本发明提供了式ix'a的化合物，及其药学上可接受的盐或酯：
[0065][0066]
其中：
[0067]
r为氢、成酯基团或者保护基；
[0068]r1'
为羟基或氢；
[0069]r2'
为氢或氯；以及
[0070]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为具有1至30个碳原子的烷基、烯基或炔基；或者
[0071]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为含单环、双环、三环、螺环、稠环或桥环的碳环体系或杂环体系；或者
[0072]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为-c(＝o)r
5'
、-c(＝o)or
5'
或者-c(＝o)nhr
5'
，其中r
5'
为具有1至30个碳原子的烷基、烯基或炔基或者为含碳环或杂环体系的取代基，所述碳环或杂环体系含有单环、双环、三环、螺环、稠环或桥环，所述碳环或杂环体系为芳香性的或非芳
香性的或者它们的组合，所述杂环体系为取代的或未取代的；或者
[0073]r3'
为氢或低级烷基，并且r
4'
为未取代或取代的1-金刚烷基、α-萘基甲基或β-萘基甲基；或者
[0074]r3'
、r
4'
和它们所连接的氮一起形成含单环、双环、三环、螺环、稠环或桥环的杂环体系。
[0075]
在一些实施方式中，r
3'
和r
4'
相结合与共同连接的n原子一起形成双环、三环、螺环或桥环(可选地进一步含有至少一个n原子的)c4-c10的杂环烷基。优选为c4-c10的含氮螺环烷基，具体实例如
[0076]
可替代地，r
3'
和r
4'
相结合与共同连接的n原子一起形成c4-c12的杂芳基。具体实例如吡咯基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、吲哚基、喹啉基、异喹啉基、嘌呤基、咔唑基等。
[0077]
在一些实施方式中，提供了表1a的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
[0078]
表1a：示例性化合物
[0079]
[0080]
[0081]
[0082]
[0083]
[0084]
[0085]
[0086]
[0087]
[0088][0089]
在一些实施方式中，提供了表1b的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
[0090]
表1b：示例性化合物
[0091]
[0092]
[0093]
[0094]
[0095]
[0096]
[0097]
[0098]
[0099]
[0100][0101]
在一些实施方式中，提供了表1c的化合物及其药学上可接受的盐或酯。
[0102]
表1c：示例性化合物
[0103]
[0104]
[0105]
[0106]
[0107]
[0108]
[0109]
[0110]
[0111]
[0112]
[0113]
[0114]
[0115][0116]
本发明提供了式i的化合物，以及其药学上可接受的盐或酯：
[0117][0118]
其中：
[0119]
r1和r2独立地选自氢、取代或未取代的芳基或杂芳基、取代或未取代的4-8元环的环烃基或杂环烃基；或者，
[0120]
r1、r2与其所连接的碳原子一起形成4-8元的碳环或杂环，包括取代或未取代的单环碳环、单环杂环、芳基稠环、或芳基稠环酮；以及
[0121]
m和n独立地选自0到4的整数，且m和n之和等于或大于2；其中每个r3和每个r4相同或不同，各自独立选自氢、c1到c6的烃基、芳基烷基、卤素、取代或未取代的芳基、杂芳基、4-8元环烷基、4-8元杂环烷基，优选选自氢或苯基；或者，
[0122]
m为2、3或4，n为选自0到4的整数，诸如为0、1、2、3或4，其中相邻的两个r3与其所连接的碳原子一起形成取代或未取代的芳环，尤其是苯环，并且r4和剩余的r3独立地选自氢或卤素；或者，
[0123]
n为2、3或4，m为选自0到4的整数，诸如为0、1、2、3或4，其中相邻的两个r4与其所连接的碳原子一起形成取代或未取代的芳环，尤其是苯环，并且r3和剩余的r4独立地选自氢或卤素。
[0124]
在一些实施方式中，r1、r2与其所连接的碳原子一起形成4-8元的芳基稠环、或芳基稠环酮；在一些实施方式中，m为2、3或4，相邻的两个r3与其所连接的含氮杂环一起形成芳基稠合杂环；在一些实施方式中，n为2、3或4，相邻的两个r4与其所连接的含氮杂环一起形成芳基稠合杂环。
[0125]
进一步地，本发明还提供式ii所示化合物：
[0126][0127]
其中：
[0128]
p和q独立地选自0到3的整数、且p和q不同时为0，并且当p或q为0时，相应的碳原子以及其所连接的r基团均不存在；
[0129]
r、s和t独立地选自0到2的整数；
[0130]
r5和r6独立地选自h、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基；或者，r5、r6以及它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的稠环或芳基稠合杂环，尤其是苯环；
[0131]
每个r7和每个r
10
相同或不同，独立地选自h、羰基、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基，尤其选自h或羰基；以及
[0132]
r8、r9独立地选自h、羰基、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基，以及与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的芳基，尤其是苯基。
[0133]
进一步地，本发明还提供式iii所示化合物：
[0134][0135]
其中，p和q独立地选自0到3的整数、且p和q不同时为0；
[0136]
r5选自h、c1到c6的烃基、c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基；
[0137]
每个r7和每个r
10
相同或不同，独立地选自h、羰基、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基，尤其选自h和羰基。对于该表述以及本文其他相应表述中的“羰基”，是指r7或r
10
与其相连的碳原子一起形成羰基；
[0138]
r8、r9独立地选自h、羰基、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基，或者与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的芳基，尤其
是苯基。
[0139]
进一步地，本发明还提供式iv所示化合物：
[0140][0141]
其中，x选自h、卤素、氨基、羟基或c1到c5的烃基；
[0142]
r选自1到2的整数；
[0143]
p和q独立地选自0到3的整数、且p和q不同时为0；
[0144]
每个r7和每个r
10
相同或不同，独立地选自h、羰基、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基，尤其选自h和羰基；以及，
[0145]
r8、r9独立地选自h、羰基、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基，或者与它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的芳基，尤其是苯基。
[0146]
进一步地，本发明还提供式v所示化合物：
[0147][0148]
其中，r和s独立地选自0到2的整数，且r和s不同时为0；
[0149]
p和q独立地选自0到3的整数、且p和q不同时为0；
[0150]
r5和r6独立地选自h、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基；或者，r5、r6以及它们所连接的碳原子一起形成取代或未取代的稠环或芳基稠合杂环，尤其是苯环；
[0151]
每个r7和每个r
10
相同或不同，独立地选自h、羰基、c1到c6的烃基、取代或未取代的c4到c7的环烃基、取代或未取代的芳基、芳基烷基，尤其选自h和羰基；以及
[0152]
x选自h、卤素、氨基、羟基或c1到c5的烃基。
[0153]
进一步地，本发明还提供式vi所示化合物：
[0154][0155]
其中，r和s独立地选自0到2的整数，且r和s不同时为0；并且，
[0156]r11
和r
12
独立地选自氢、取代或未取代的芳基或杂芳基、取代或未取代的4-8元环的环烃基或杂环烃基；或者，
[0157]r11
、r
12
与其所连接的碳原子一起形成取代或未取代的4-8元杂环。
[0158]
在一些实施方式中，提供了表1的化合物及其药学上可接受的盐或酯或立体异构体。
[0159]
表1：示例性化合物
[0160]
[0161]
[0162]
[0163][0164]
本发明还提供了一种药物组合物，该药物组合物包括：本文所限定的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及药学上可接受的载体。在一些实施方式中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括式i至式vi所表示的化合物中的至少一种或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体，以及药学上可接受的载体。在一些实施方式中，提供了一种药物组合物，该药物组合物包括式i至式vi所表示的化合物中的至少一种或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体。在一些实施方式中，提供了包括表1中所示的化合物或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体，以及药学上可接受的载体的药物组合物。
[0165]
在一些实施方式中，药学上可接受的载体包括乳膏、乳剂、凝胶、脂质体或纳米颗粒。在一些实施方式中，组合物适用于口服施用或注射施用。在一些实施方式中，组合物为硬壳明胶胶囊、软壳明胶胶囊、扁囊剂、丸剂、片剂、锭剂、粉剂、颗粒剂、弹丸剂或糖衣丸。在一些实施方式中，组合物为溶液、水性液体悬浮液、非水性液体悬浮液、水包油液体乳液、油包水液体乳液、酏剂或糖浆的形式。在一些实施方式中，组合物具有肠溶包衣。在一些实施方式中，组合物配制用于控制释放。
[0166]
进一步地，本发明的药物组合物，还包括至少一种另外的治疗剂。具体地，至少一种另外的治疗剂可以是化学治疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂、抗感染剂
或免疫关卡抑制剂。
[0167]
在一些实施方式中，本发明进一步提供了本文所述的cd73抑制剂化合物和组合物与一种或多种另外的药剂的组合的用途。该一种或多种另外的药剂可具有一些cd73-调节活性和/或它们可通过不同的作用机制起作用。在一些实施方式中，这样的试剂包含辐射(例如局部放射疗法或全身放射疗法)和/或非药理学性质的其他治疗形式。当使用组合疗法时，cd73抑制剂和一种另外的药剂可以是单一组合物或多种组合物的形式，并且治疗方式可以同时、依次或通过一些其他方案来施用。举例来说，在一些实施方式中，提供了在辐射阶段之后进行化学治疗阶段的实施方式。联合疗法可以具有叠加效应或协同效应。
[0168]
在一些实施方式中，本发明提供了本文所述的cd73抑制剂化合物或组合物与骨髓移植、外周血干细胞移植或其他类型的移植治疗的组合的用途。
[0169]
在具体的实施方式中，本发明提供了本文所述的cd73功能抑制剂与免疫检查点抑制剂的组合的用途。据表明，阻断免疫检查点(其导致抗原特异性t细胞应答的扩增)在人类癌症治疗中是有前景的方法。免疫检查点(配体和受体)的非限制性实例包括pd1(程序性细胞死亡蛋白1)、pdl1(pd1配体)、btla(b和t淋巴细胞衰减剂)、ctla4(细胞毒性t淋巴细胞相关抗原4)、tim3(t细胞膜蛋白3)、lag3(淋巴细胞激活基因3)、a2ar(腺苷a2a受体a2ar)和杀伤剂抑制受体，这些免疫检查点中的一些在各种类型的肿瘤细胞中选择性上调，是阻断的候选者。
[0170]
在其它实施方式中，本发明提供了治疗受试者的癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种cd73抑制剂化合物或其组合物和至少一种化疗剂，所述化疗剂包括但不限于：烷基化剂，(例如氮芥，如苯丁酸氮芥、环磷酰胺、异氟酰胺、二氯甲基二乙胺、美法仑和尿嘧啶氮芥；氮丙啶类，如噻替哌；甲磺酸酯类，如白消安；核苷类似物，如吉西他滨；亚硝基脲，如卡莫司汀、洛莫司汀和链脲佐菌素；拓扑异构酶1抑制剂，如伊立替康；铂络合物，如顺铂和卡铂；生物还原烷化剂，如丝裂霉素、丙卡巴肼、达卡巴嗪和六甲蜜胺)；dna链断裂剂(例如博来霉素)；拓扑异构酶ii抑制剂(如安吖啶、更生霉素、柔红霉素、伊达比星、米托蒽醌、柔比星、依托泊苷和替尼泊苷)；dna小沟结合剂(例如，plicamydin)；抗代谢物(例如叶酸拮抗剂，如甲氨蝶呤和三甲曲沙；嘧啶拮抗剂，如氟尿嘧啶、氟脱氧尿苷、cb3717、阿扎胞苷、阿糖胞苷和氟尿苷；嘌呤拮抗剂，如巯嘌呤、6-硫代鸟嘌呤、氟达拉滨、喷司他丁；天冬酰胺酶；以及核糖核苷酸还原酶抑制剂，如羟基脲)；微管蛋白相互作用剂(例如长春新碱、雌莫司汀、长春碱、多西他赛、埃坡霉素衍生物和紫杉醇)；激素类(例如雌激素；结合雌激素；乙炔雌二醇；己烯雌酚；氯地孕酮；地孕烯；孕激素，如己酸羟基孕酮、甲羟孕酮和甲地孕酮；以及雄激素，如睾酮、丙酸睾酮、氟甲睾酮和甲睾酮)；肾上腺皮质类固醇(例如泼尼松；地塞米松；甲基强的松龙和泼尼松龙)；促黄体激素释放剂或促性腺激素释放激素拮抗剂(例如醋酸亮丙瑞林和醋酸戈舍瑞林)；以及抗激素抗原(例如他莫昔芬，抗雄激素药如氟他胺；和肾上腺素药如米托坦和氨鲁米特)。本发明还提供了cd73抑制剂与本领域已知的其他药剂(例如三氧化二砷)以及将来可能开发的其他化疗剂结合的用途。
[0171]
在用于治疗癌症的方法的一些实施方式中，治疗有效量的cd73抑制剂与至少一种化学治疗剂组合施用所观察的癌症存活率高于单独施用任一种药剂所观察到的癌症存活率。在涉及治疗癌症的方法的其他实施方式中，治疗有效量的cd73抑制剂与至少一种化学治疗剂的组合施用所观察到肿瘤尺寸的减小或肿瘤生长的减慢优于单独施用任一种药剂
所观察到的肿瘤尺寸的减小或肿瘤生长减慢。
[0172]
在另一实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者中的癌症的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的至少一种cd73抑制剂化合物或组合物，以及至少一种信号转导抑制剂(sti)。在一具体实施方式中，所述至少一种sti选自bcr/abl激酶抑制剂、表皮生长因子(egf)受体抑制剂、her-2/neu受体抑制剂和法尼基转移酶抑制剂(ftis)所组成的组。
[0173]
在其它实施方式中，本发明提供了使受试者中对肿瘤细胞的排斥增强的方法，包括联合施用cd73抑制剂化合物或组合物与至少一种化学治疗剂和/或放射疗法，其中所得到的肿瘤细胞的排斥优于通过单独施用cd73抑制剂、化学治疗剂或放射疗法所得到的排斥。
[0174]
在另一实施方式中，本发明提供了用于在受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种cd73抑制剂和至少一种不同于cd73抑制剂的免疫调节剂。应该理解，如本发明所用，“cd73抑制剂”是指本发明提供的化合物，例如，式i-ix中任一个的化合物、表1的化合物或其药学上可接受的盐或酯，以及涉及其药物组合物。
[0175]
在一些实施方式中，本发明提供了用于在受试者(例如，人类)中治疗或预防感染性病症(例如病毒感染)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种cd73抑制剂和治疗有效量的抗感染剂(例如一种或多种抗微生物剂)。
[0176]
在另外的实施方式中，感染性疾病的治疗通过疫苗和施用治疗有效量的本发明提供的cd73抑制剂的联合施用来实现。在一些实施方式中，疫苗是抗病毒疫苗，包括例如抗hiv疫苗。在其它实施方式中，疫苗对抗结核或疟疾是有效的。在又一实施方式中，疫苗是肿瘤疫苗(例如对黑素瘤有效的疫苗)；肿瘤疫苗可以包含遗传修饰的肿瘤细胞或遗传修饰的细胞系，包括遗传修饰的肿瘤细胞或已被转染以表达粒细胞-巨噬细胞刺激因子(gm-csf)的遗传修饰的细胞系。在具体实施方式中，疫苗包含一种或多种免疫原性肽和/或树突细胞。
[0177]
在另一方面，本发明还提供了一种化合物在治疗或预防与cd73相关的疾病、失调或病症的药物中的用途，化合物包括上述任一化合物或组合物，其中包括将有效量的本发明所述的化合物和/或药物组合物施用至该受试者。
[0178]
在具体实施方式中，本发明所述的化合物起到抑制cd73免疫抑制活性和/或抗炎活性的作用，并且当需要这种抑制时用作治疗剂或预防性治疗。除非另有说明，否则在本文描述本发明化合物的用途时，应当理解的是，这些化合物可为组合物(即，药物组合物)的形式。如本文所使用的，术语“cd73抑制剂”、“cd73阻断剂”、“腺苷的胞外-5'-核苷酸酶抑制剂”、“nt5e抑制剂”、“5nt抑制剂”和所有其他相关领域的可接受的术语可互换使用来表示在体外测试、体内模型和/或表示cd73抑制和潜在治疗或预防疗效的其他测试中能够直接或间接抑制cd73受体的化合物。该术语也指在人类受试者中呈现出至少一些治疗或预防益处的化合物。
[0179]
尽管本发明的化合物被认为通过抑制cd73来发挥作用，但是本发明的实施并不需要精确理解化合物的作用机理。例如，化合物也可具有至少部分通过调节(例如抑制)嘌呤能信号传导途径的其他组分(例如cd39)而产生作用。嘌呤能信号传导系统由转运蛋白，酶，以及(主要)用于atp和其细胞外分解产物腺苷的合成、释放、作用和细胞外失活的受体组
成。因为cd73的抑制减少了腺苷的产生，所以cd73抑制剂可用于治疗由腺苷介导的疾病或失调，并且其对腺苷受体(包括a1、a2a、a2b和a3)发挥作用。
[0180]
在本发明中，所描述的嘌呤能信号传导过程包含以下组分。嘌呤能受体(p1、p2x和p2y)是第一种组分，为介导作为对atp或腺苷释放的应答的各种生理功能(例如肠道平滑肌的松弛)的膜受体；一般而言，所有细胞都具有通过调节胞吐作用将核苷酸释放到细胞外环境中的能力。第二组分为核苷转运蛋白(nts)，其是跨越细胞膜转运核苷底物(例如腺苷)的膜转运蛋白；腺苷的细胞外浓度可以由nts调节，可能是以反馈环的形式连接受体信号传导与转运蛋白功能。如前所述，胞外核苷酸酶(cd73和cd39)水解释放到细胞外环境中的核苷酸还包含另外的组分。
[0181]
进一步地，与cd73相关的疾病、失调或病症为癌症。
[0182]
在一些实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者(例如人)的癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种本发明所述的cd73抑制剂化合物或组合物。在此类方法的一些实施方式中，以有效逆转、减缓或阻止cd73介导的免疫抑制进展的量向受试者施用至少一种cd73抑制剂化合物或组合物。在一些实施方式中，通过抗原呈递细胞(apc)介导cd73介导的免疫抑制。
[0183]
可以使用本发明所述的化合物和组合物治疗或预防的癌症或肿瘤的类型并没有特别的限制。可以使用本发明所述的化合物和组合物治疗或预防的癌症和肿瘤的实例包括但不限于前列腺、结肠直肠、胰腺、宫颈、胃、子宫内膜、脑、肝、膀胱、卵巢、睾丸、头、颈、皮肤(包括黑色素瘤和基底癌)、间皮膜、白细胞(包括淋巴瘤和白血病)、食道、乳房、肌肉、结缔组织、肺(包括小细胞肺癌和非小细胞肺癌)、肾上腺、甲状腺、肾或骨的癌症，胶质细胞瘤，间皮瘤，肾细胞癌，胃癌，肉瘤，绒毛膜癌，皮肤基底细胞癌和睾丸精原细胞瘤。在本发明的一些实施方式中，癌症是黑素瘤，结肠癌，胰腺癌，乳腺癌，前列腺癌，肺癌，白血病，脑瘤，淋巴瘤，肉瘤，卵巢癌或卡波西肉瘤。
[0184]
在一些实施方式中，本发明提供了治疗接受骨髓移植或外周血干细胞移植的受试者的方法，包括施用足够治疗有效量的cd73抑制剂化合物或组合物以增加对肿瘤抗原的迟发型超敏反应、延迟移植后恶性肿瘤复发的时间、增加移植后不复发存活率和/或增加移植后长期存活率。
[0185]
在某些实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者(例如人类)中的感染性病症(例如病毒感染)的方法，包括向所述受试者施用治疗有效量的本发明所述的至少一种cd73抑制剂化合物或组合物。在一些实施方式中，感染性病症是病毒感染(例如慢性病毒感染)、细菌感染、真菌感染或寄生虫感染。在某些实施方式中，病毒感染是人类免疫缺陷病毒或巨细胞病毒。
[0186]
在其它实施方式中，本发明提供了用至少一种本发明所提供的cd73抑制剂化合物或组合物来治疗和/或预防免疫相关的疾病、失调和病症，具有炎性成分的疾病，以及与上述相关的失调的方法。
[0187]
通过抑制cd73活性可全部或部分治疗或预防的其它疾病、失调和病症，也是本发明提供的cd73抑制剂化合物和组合物的候选适应症。
[0188]
在一些实施方式中，与cd73相关的疾病、失调或病症选自类风湿性关节炎、肾衰竭、狼疮、哮喘、牛皮癣、结肠炎、胰腺炎、过敏症、纤维化、贫血纤维肌痛、阿尔茨海默氏病、
充血性心力衰竭、中风、主动脉瓣狭窄、动脉硬化、骨质疏松症、帕金森病、感染、克罗恩氏病、溃疡性结肠炎、过敏性接触性皮炎、湿疹、系统性硬化症和多发性硬化症。
[0189]
在另一方面，本技术还提供一种试剂盒，该试剂盒包括上述任一所述的化合物或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体，以及至少一种另外的治疗剂。在一些实施方式中，至少一种另外的治疗剂为化学治疗剂、免疫和/或炎症调节剂、抗高胆固醇血症剂、抗感染剂或免疫关卡抑制剂。
[0190]
本技术提供的化合物或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体或其组合物，至少具有以下优点中的一种：优异的生物活性、优良的药代动力学特性，其中，优良的药代动力学特性可以表现出较高的血浆药物暴露量和/或较长的体内清除半衰期。本发明公开的化合物或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体或其组合物，对cd73酶活性具有很强的抑制作用，可广泛应用于制备治疗至少部分由cd73介导的癌症或肿瘤、免疫相关疾病及紊乱、代谢性疾病的药物，在涉及通过施用本发明提供的cd73抑制剂和至少一种另外的治疗剂治疗感染的某些实施方式中，单独施用cd73抑制剂和另外的治疗剂任一种所观察到的相同感染症状相比，在施用两者之后观察到的感染症状有所改善。
附图说明
[0191]
为了更好地理解本发明并更清楚地展示出如何实现本发明，现通过示例的方式并参考附图，并阐述了根据本发明的实施方式的特征，其中：
[0192]
图1为化合物1的cd73抑制率曲线；
[0193]
图2为化合物a的cd73抑制率曲线。
具体实施方式
[0194]
被诊断患有癌症以及死于癌症的案例持续增加。传统治疗方法包括化学疗法和放射疗法；这些传统治疗方法一方面通常使受试者难以忍受，另一方面癌(例如肿瘤)会进化以规避这种治疗，从而使得这些治疗方法逐渐失效。最近的实验证据表明cd73抑制剂可能代表着用于癌症(例如乳腺癌)的重要的新型治疗方式。
[0195]
数据还表明cd73功能抑制剂具有抑制cd73的抗炎活性和/或cd73的免疫抑制活性的作用，因此cd73抑制剂可用于治疗例如免疫抑制性疾病(例如，hiv和aids)。抑制cd73对于患有神经性或神经性精神疾病、或抑郁症等疾病受试者也可能是重要治疗策略。
[0196]
本发明尤其提供了具有cd73抑制活性的小分子化合物及其组合物，以及使用该化合物和组合物治疗和预防本文所述的疾病、失调和病症的方法。本发明提供的化合物可用作cd73的抑制剂，因此可用于治疗其中cd73活性起作用的疾病、失调和病症中。另外，本发明提供的化合物可用作腺苷受体(例如a2a受体)的抑制剂。因此，本发明提供的化合物可用于治疗与一种或多种腺苷受体的活性相关的疾病、失调和病症。
[0197]
在一个实施方式中，本发明提供了治疗患有癌症或由cd73介导的失调的受试者(例如人类)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明所提供的cd73抑制剂，例如本发明所提供的化合物或其药学可接受的组合物。
[0198]
应该理解的是，药物组合物包含本发明所公开的化合物(或其药学上可接受的盐或酯)和药学上可接受的载体、添加剂或运载体。在某些实施方式中，组合物中化合物的量
使得其能有效地作为生物样品(例如体外测定法，体内模型等)或受试者中的cd73抑制剂。在某些实施方式中，组合物被配制用于施用于需要这种组合物的受试者。在一些实施方式中，组合物是可注射的制剂。在其它实施方式中，组合物被配制为用于口服施用至受试者。
[0199]
本发明还提供了治疗患有癌症或腺苷受体(例如a2ar)介导的失调的受试者(例如人)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的本发明所提供的cd73抑制剂，例如本发明提供的化合物或其药学上可接受的组合物的步骤。在某些实施方式中，组合物中化合物的量使得其有效地用作生物样品(例如体外测定法，体内模型等)或受试者中腺苷受体(例如a2ar)的抑制剂。在某些实施方式中，组合物被配制为用于施用至需要这种组合物的受试者。在一些实施方式中，组合物是可注射的制剂。在其它实施方式中，组合物被配制为用于口服施至受试者。
[0200]
在又一实施方式中，本发明提供了用于治疗或预防受试者中癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种cd73抑制剂和至少一种信号转导抑制剂(sti)。在一具体实施方式中，所述至少一种sti选自由bcr/abl激酶抑制剂、表皮生长因子(egf)受体抑制剂、her-2/neu受体抑制剂和法尼基转移酶抑制剂(ftis)所组成的组。本发明还提供使受试者中对肿瘤细胞的排斥增强的方法，包括联合施用cd73抑制剂与至少一种化学治疗剂和/或放射疗法，其中所得到的肿瘤细胞的排斥优于通过单独施用cd73抑制剂、化学治疗剂或放射疗法所得到的排斥。在又一实施方式中，本发明提供了用于在受试者中治疗癌症的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种cd73抑制剂和至少一种不同于cd73抑制剂的免疫调节剂。
[0201]
在其它实施方式中，本发明提供了用于在受试者(例如人类)中治疗或预防感染性病症(例如病毒感染)的方法，包括向受试者施用治疗有效量的至少一种cd73抑制剂和治疗有效量的抗感染剂(例如一种或多种抗微生物剂)。
[0202]
在另外的实施方式中，感染性疾病的治疗通过疫苗和施用治疗有效量的本文提供的cd73抑制剂的联合施用来实现。在一些实施方式中，疫苗是抗病毒疫苗，包括例如抗hiv疫苗。在其它实施方式中，疫苗对抗结核或疟疾是有效的。在又一实施方式中，疫苗是肿瘤疫苗(例如对黑素瘤有效的疫苗)；肿瘤疫苗可以包含遗传修饰的肿瘤细胞或遗传修饰的细胞系，包括遗传修饰的肿瘤细胞或已被转染以表达粒细胞-巨噬细胞刺激因子(gm-csf)的遗传修饰的细胞系。在具体实施方式中，疫苗包含一种或多种免疫原性肽和/或树突细胞。
[0203]
在涉及通过施用cd73抑制剂和至少一种另外的治疗剂治疗感染的某些实施方式中，单独施用cd73抑制剂和另外的治疗剂任一种所观察到的相同感染症状相比，在施用两者之后观察到的感染症状有所改善。在一些实施方式中，观察到的感染症状可以是病毒载量减少、cd4 t细胞计数增加、机会性感染减少、存活时间增加、慢性感染根除，或它们的组合。
[0204]
定义
[0205]
为了对本发明的说明书中所使用的术语提供清楚且一致的理解，在下文中提供一些定义。此外，除了特殊说明，本发明所用的全部技术和科学术语具有同本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的相同的含义。
[0206]
当在权利要求和/或说明书中与术语“包括”结合使用时，词语“一”的使用可以表示“一个”，但它也与“一个或多个”，“至少一个”和“一个或多于一个”的含义已知。类似地，
词语“另一个”可以表示至少第二个或者很多个。
[0207]
如在本说明书和权利要求中所使用的词语“包括”(以及包括的任何形式，诸如“包括”和“包含”)，“具有”(以及任何形式的具有，“具有”、“包含”和“含有”)是包括性的和开放式的，并且不排除另外的未列出的要素或处理步骤。
[0208]
术语“约”或“大约”用于表示该值包括在确定该值中所用的仪器和方法带来的误差。
[0209]
本发明所用的术语“衍生物”应理解为是结构上类似，在一些细微结构上不同的另一种化合物。
[0210]
本说明书涉及了本领域技术人员所使用的许多化学术语和缩写。然而，为了清楚和一致性，提供了所选术语的定义。
[0211]
本发明所用术语“环烃基”或“环烃基残基”或“碳环”可以是饱和的或在环内含有一个或多个双键的基团。特别地，它们可以是饱和的或在环体系内含有一个双键。在不饱和环烃基残基中，双键可存在于任何合适的位置。饱和的“环烃基”或“环烃基残基”，可以是“环烷基”或“环烷基残基”。单环烷基残基包括例如环丙基、环丁基、环戊基、环戊烯基、环己基、环己烯基、环庚基、环庚烯基、环辛基、环壬基、环癸基、环十一烷基、环十二烷基或环十四烷基，其也可取代有c
1-4
烷基。取代的环烷基残基的实例是4-甲基环己基和2,3-二甲基环戊基。双环体系的母体结构的实例是降冰片烷、双环[2.2.1]庚烷、双环[2.2.2]辛烷和双环[3.2.1]辛烷。
[0212]
本发明所用术语“杂环烃基”和等同表述是指在单环、螺环(共享一个原子)或稠合(共享至少一个键)碳环体系中包含饱和或部分不饱和碳环的基团，其具有3个至30个碳原子的基团，包括1至6个杂原子(例如n、o、s、p)或者含杂原子(例如nh、nrx(rx是烷基、酰基、芳基、杂芳基或环烷基)，po2、so、so2等)的基团。杂环烷基可以与c连接或与杂原子连接的(例如通过氮原子)。杂环烷基的实例包括但不限于吡咯烷基、四氢呋喃基、四氢二噻吩基、四氢吡喃基、四氢噻喃基、哌啶基、吗啉基、硫代吗啉基、噻噁烷基、哌嗪基、氮杂环丁烷基、氧杂环丁烷基、硫杂环丁烷基、高哌啶基、氧杂环戊烷基、硫杂环戊烷基、氧氮杂卓基、二氮杂卓基、硫氮杂基、1,2,3,6-四氢吡啶基、2-吡咯啉基、3-吡咯啉基、二氢吲哚基、2h-吡喃基、4h-吡喃基、二氧六环基、1,3-二氧戊环基、吡唑啉基、二噻烷基、二硫杂环戊烷基、二氢吡喃基、二氢噻吩基、二氢呋喃基、吡唑烷基、咪唑啉基、咪唑烷基、3-氮杂双环[3,1,0]己基、3-氮杂双环[4,1,0]庚基、3h-吲哚基、喹嗪基和糖等。术语杂环烷基包括未取代的杂环烷基和取代的杂环烷基。术语“c
3-cn杂环烷基”和“c
3-n杂环烷基”，其中n是4至30的整数，可互换使用来表示在环结构中具有3至所示“n”个原子的杂环烷基，包括至少一个如上所定义的杂基团或原子。除非另有说明，否则本发明使用的“低杂环烷基”指在其环状结构中具有至少3个且等于或小于8个碳原子。
[0213]
本发明所用术语“芳基”和“芳基环”是指在共轭单环或多环体系(稠和或非稠和的)中具有“4n 2”个(π)电子，并具有6至30个环原子的芳族基团，其中n是1至7的整数。多环系统包括至少一个芳环。芳基可以直接连接或通过c
1-c6烷基(也称为芳基烷基或芳烷基)连接。芳基的实例包括但不限于苯基、苄基、苯乙基、1-苯基乙基、甲苯基、萘基、联苯基、三联苯基、茚基、苯并环辛烯基、苯并环庚烯基、薁基、苊基、芴基、菲基、蒽基等。术语芳基包括未取代的芳基和取代的芳基。术语“c
6-cn芳基”或“c
6-n
芳基”(其中n是6至30的整数)可互换使
用来表示在环结构中具有6至所示“n”个碳原子的芳基，包括至少一个如上所定义的杂环基团或原子。
[0214]
本发明所用术语“杂芳基”和“杂芳基环”是指在共轭单环或多环体系(稠和或非稠和的)中具有“4n 2”个(π)电子的芳族基团，其中n是1至7的整数，并包括一个至六个杂原子(例如n、o、s、p)或者包括杂原子(例如nh、nrx(rx是烷基、酰基、芳基、杂芳基或环烷基)、po2、so、so2等)的基团。多环系统包括至少一个杂芳环。杂芳基可以直接连接或通过c
1-c6烷基(也称为杂芳基烷基或杂芳烷基)连接。杂芳基可以与碳连接的或者与杂原子连接的(例如，通过氮原子)。杂芳基的实例包括但不限于吡啶基、咪唑基、嘧啶基、吡唑基、三唑基、四唑基、呋喃基、噻吩基；异恶唑基、噻唑基、恶唑基、异噻唑基、吡咯烷基、喹啉基、异喹啉基、吲哚基、异吲哚基、色烯基、异色烯基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、噌啉基、吲唑基、吲嗪基、酞嗪基、哒嗪基、吡嗪基、三嗪基、异吲哚基、喋啶基、呋喃基、苯并呋喃基、苯并噻唑基、苯并噻吩基、苯并噻唑基、苯并恶唑基、喹唑啉基、喹啉基、喹啉酮基、异喹啉酮基、喹喔啉基、萘啶基、呋喃并吡啶基、咔唑基、菲啶基、吖啶基、苝基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基、二苯并呋喃基等。术语杂芳基包括未取代的杂芳基和取代的杂芳基。术语“c
5-cn杂芳基”和“c
5-n
杂芳基”，其中n是6至30的整数，可互换使用来表示在环结构中具有从5至所示“n”个原子的杂芳基，包括至少一个如上所定义的杂环基团或原子。
[0215]
本发明所用术语“杂环”或“杂环的”包括杂环烷基和杂芳基。杂环的实例包括但不限于吖啶基、吖辛因基、苯并咪唑基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并噻吩基、苯并恶唑基、苯并噻唑基、苯并三唑基、苯并四唑基、苯并异恶唑基、苯并异噻唑基、4αh-咔唑基、咔啉基、苯并二氢吡喃基、色烯基、噌啉基、十氢喹啉基、2h，6h-1,5,2-二噻嗪基、二氢呋喃并[2,3-b]四氢呋喃、呋喃基、呋咱基、咪唑烷基、咪唑啉基、咪唑基、1h-吲唑基、二氢吲哚基、3h-吲哚基、异喹啉基、异噻唑基、异恶唑基、亚甲二氧基苯基、吗啉基、萘啶基、八氢异喹啉基、恶二唑基、1,2,3-恶二唑基、1,2,4-恶二唑基、1,2,5-恶二唑基、1,3,4-恶二唑基、恶唑烷基、恶唑基、恶唑烷基、嘧啶基、菲啶基、菲咯啉基、吩嗪基、吩噻嗪基、吩恶嗪基、酞嗪基、哌嗪基、哌啶基、哌啶酮基、4-哌啶酮基、胡椒基、蝶啶基、嘌呤基、吡喃基、吡嗪基、吡唑烷基、吡唑啉基、吡唑基、哒嗪基、吡啶并恶唑、吡啶并咪唑、吡啶并噻唑、吡啶基、吡啶基、吡咯基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、4h-喹嗪基、喹喔啉基、奎宁环基、四氢呋喃基、四氢异喹啉基、四氢喹啉基、四唑基、6h-1,2,5-噻二嗪基、1,2,3-噻二唑基、1,2,4-噻二唑基、1,2,5-噻二唑基、1,3,4-噻二唑基、噻蒽基、噻唑基、噻吩基、噻吩并噻唑基、噻吩并恶唑基、噻吩并咪唑基、噻吩基、三嗪基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,5-三唑基、3,4-三唑基、呫吨基等。术语杂环包括未取代的杂环基和取代的杂环基。
[0216]
术语“稠环”或“稠合环”是指含有稠合环的多环体系。通常，稠环体系包含2或3个环，和/或多达18个环原子。如上所述，环烷基，芳基和杂环基可以形成稠环体系。因此，稠环体系可以是芳族的，部分芳族的或非芳族的并且可以含有杂原子。根据该定义，螺环系统不是稠合多环的，但是本发明的稠合多环系统本身可以具有通过该体系的单个环原子连接到其上的螺环。稠环体系的实例包括但不限于萘基(例如2-萘基)、茚基、菲基、蒽基、芘基、苯并咪唑、苯并噻唑等。本文所述“与其所连接的碳原子一起形成4-8元的碳环或杂环，包括取代或未取代的单环碳环、单环杂环、芳基稠环、或芳基稠环酮”中所限定的“4-8元的碳环或杂环”在指代芳基稠环、或芳基稠环酮时，是指与芳基稠合的碳环或杂环含有4至8个原子，
不包括除共享原子以外的稠合芳基部分的其它原子。例如，为芳基稠合的5元碳环。
[0217]
术语“螺环”或“螺合的”是指呈现两个或更多个环(环体系)的扭曲结构的有机化合物，其中2或3个环通过一个共同原子连接在一起。螺环化合物可以是完全碳环(全碳)，例如螺[5.5]十一烷或杂环(具有一个或多个非碳原子)，包括但不限于碳环螺化合物，杂环螺化合物和多螺环化合物。
[0218]
应当理解的是本发明所用术语“取代”或“被取代”包括隐含的条件，即这种取代随着取代原子化合价和取代基的变化，取代产生稳定的化合物(例如化合物不能自发进行重排、环化、消除等过程)。如本发明所用术语“取代的”包括有机化合物所有允许的取代基。在广义上，允许的取代基包括的无环和环状，支链化和非支链支化，碳环和杂环，芳香族和非芳香族为取代基有机化合物。取代基可以是一个或多个。术语“取代的”是指当上述基团与在一个或多个位置被取代时，取代基包括酰基、氨基(包括简单氨基、单烷基氨基和二烷基氨基、单芳基和二芳基氨基，和烷基芳基氨基)、酰基氨基(氨基甲酰基和脲基)、烷基羰基氧基、芳基羰基氧基、烷氧基羰基氧基、烷氧基羰基、羧基、羧基、氨基羰基、单和二烷基氨基羰基、氰基、叠氮基、卤素、羟基、硝基、三氟甲基、硫基、烷硫基、芳硫基、烷硫基羰基、硫代羧酸酯、低烷基、低链烯基、低炔基、环烷基、杂环烷基、芳基、杂芳基、低烷氧基、芳氧基、芳氧基羰氧基、苄氧基、苄基、亚磺酰基、烷基亚磺酰基、磺酰基、硫酸盐、磺酸盐、磺酰胺、磷酸盐、膦酸盐、亚氨基、甲酰基等。如果允许，任何上述取代基可以进一步被取代，例如被烷基、芳基或其它基团取代。
[0219]
本发明所用术语“溶剂化物”是指化合物与一种或多种溶剂分子(无论是有机的还是无机的)的物理缔合。该物理缔合包括氢键。在某些情况下，溶剂化物能够被分离，例如当一个或多个溶剂分子并入晶体的晶格中时。“溶剂合物”包括溶液相和可被分离的溶剂化物。溶剂化物包括但不限于水合物、乙醇化物、甲醇化物、半乙醇化物等。
[0220]
化合物的“药学上可接受的盐”是指药学上可接受的化合物的盐。理想的化合物的盐(碱性、酸性或带电官能团)可以保留或改善如本发明所定义的母体化合物的生物活性和性质，并且不是生物学上不需要的。药学上可接受的盐可以是berge等人在"pharmaceutical salts",j.pharm.sci.66,1-19(1977)所提到的。包括但不限于：
[0221]
(1)在碱性或带正电荷的官能团上加入酸形成的盐，无机酸包括盐酸、氢溴酸、氢碘酸、硫酸、氨基磺酸、硝酸、磷酸、碳酸盐等。有机酸包括乙酸、丙酸、乳酸、草酸、乙醇酸、新戊酸、叔丁基乙酸、β-羟基丁酸、戊酸、己酸、环戊烷丙酸、丙酮酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、3-(4-羟基苯甲酰基)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲磺酸、乙磺酸、1,2-乙二磺酸、2-羟基乙磺酸、环己基氨基磺酸、苯磺酸、磺胺酸、4-氯苯磺酸、2-萘磺酸、4-甲苯磺酸、樟脑磺酸、3-苯基丙酸、月桂基磺酸、月桂基硫酸、油酸、棕榈酸、硬脂酸、月桂酸、扑酸(扑酸)、扑酸、泛酸、乳糖酸、藻酸、半乳糖二酸、半乳糖醛酸、葡萄糖酸、葡庚糖酸、谷氨酸、萘甲酸、羟基萘甲酸、水杨酸、抗坏血酸、硬脂酸、粘康酸等。
[0222]
(2)当母体化合物中存在酸性质子或者其被金属离子取代时，可以加入碱得到盐。所述金属离子包括碱性金属离子(例如锂、钠、钾)，碱土金属离子(镁、钙、钡)或其它金属离子如铝、锌、铁等。有机碱包括但不限于n,n'-二苄基乙二胺、乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、氨基丁三醇、n-甲基葡萄糖胺、哌嗪、氯普鲁卡因、普鲁卡因、胆碱、赖氨酸等。
[0223]
药学上可接受的盐可以由含有碱性或酸性片段的母体化合物通过常规化学方法合成。通常，这种盐通过化合物(游离酸或碱)与等化学计量的碱或酸在水中或有机溶剂中或在两者的混合物中反应来制备。盐可以在药剂的最终分离或纯化过程中原位制备，或者将游离酸或碱形式的已纯化的本发明化合物单独的与所期望的相应碱或酸反应并分离由此形成的盐而制备。术语“药学上可接受的盐”还包括含有共价键合至阴离子基团的阳离子基团的两性离子化合物，它们被称作“内盐”。本发明的化合物包括的所有酸，盐，碱和其它离子和非离子形式。例如，如果本发明中化合物为酸，该化合物盐的形式也包含在内。同样，如果本发明中化合物为盐，该化合物酸和/或碱的形式也包含在内。
[0224]
本发明提供的化合物可以在构成此类化合物的一个或多个原子处含有非天然比例的原子同位素。同位素的非天然比例可以定义为从自然界中发现的量到由所讨论的原子的100％构成的量。例如，化合物可以并入放射性同位素，例如氚(3h)，碘-125(
125
i)或碳-14(
14
c)或非放射性同位素如氘(2h)或碳-13(
13
c)。这种同位素变化可以为本技术中其它地方描述的那些提供额外的应用。例如，本发明化合物的同位素变体可以找到额外的用途，包括但不限于作为诊断和/或成像试剂，或作为细胞毒性/放射性毒性治疗剂。另外，同位素变体可以具有改变的药代动力学和药效学特征，其可以有助于增强治疗期间的安全性，耐受性或疗效。本发明提供的化合物的所有同位素变体，无论是否是放射性的，均涵盖在本发明中。
[0225]
同位素富集是通过改变其给定元素的同位素的相对丰度，使一种特定同位素富集(即增加)，并且相应的另一种同位素减少或耗尽的过程。如本发明所用术语“同位素富集的”化合物或衍生物是指化合物中一种或多种特定同位素被增加(即一种或多种特定的同位素元素被富集或增加)。通常，在一个同位素富集的化合物或衍生物中，化合物特定位置的特定同位素元素被富集或增加。然而应当理解，化合物可以有两种或多种同位素元素被富集或增加，包括同一元素的不同同位素以及不同元素的各自同位素。此外，同位素富集的化合物可以是同位素富集的混合形式，即含有多种特定同位素或元素或两者兼有。本发明所用“同位素富集的”化合物或衍生物具有高于该天然丰度的同位素水平。同位素富集的水平取决于特定的同位素本身的天然丰度。在一些实施方式中，化合物或化合物中元素的同位素富集水平可以为约2至约100摩尔百分比(％)，例如约2％、约5％、约17％、约30％、约51％、约83％、约90％、约95％、约96％、约97％、约98％、以及大于约98％、约99％或为100％。
[0226]
本发明所用术语“天然丰度元素”或“自然丰度原子”分别是指其在自然界中最丰富的原子质量的元素或原子。例如，氢的天然丰度元素为1h，氮的天然丰度元素为
14
n，氧的天然丰度元素为
16
o，碳的天然丰度元素为
12
c等。“非同位素富集”化合物是其中化合物中的所有原子或元素都是天然丰度的同位素的化合物，即所有原子或元素的原子质量是在自然界中最丰富。
[0227]
术语“患者”和“受试者”在本文中可互换使用来表示人类或非人类动物(例如，哺乳动物)。
[0228]
当应用于例如受试者、细胞、组织、器官或生物流体时，术语“施用”、“施用者”等指使例如cd73抑制剂、包括该cd73抑制剂的药物组合物或诊断剂与受试者、细胞、组织、器官或生物流体相接触。在细胞的情况下，施用包括使试剂与细胞接触(例如体外或离体)，以及
试剂与流体接触，其中流体与细胞接触。
[0229]
术语“治疗”等是指在已经诊断、观察到了疾病、失调或病症或者其症状之后，开始进行行动(例如施用cd73抑制剂或包含其的药物组合物)，以便暂时或永久地消除、减轻、抑制、减缓或改善折磨受试者的疾病、失调或病症的至少一种潜在原因，或者折磨受试者的疾病、失调、病症有关的症状。因此，治疗包括抑制(例如阻止疾病、失调或病症或与其相关的临床症状的发展或进一步发展)活动性疾病。
[0230]
如本文所用的术语“需要治疗”是指由医生或其他护理人员做出的受试者需要或将从治疗中受益的判断。这种判断是基于医生或护理人员专业领域中的各种因素作出的。
[0231]
术语“预防”等是指以某种方式(例如在疾病、失调、病症或其症状发作之前)开始进行行动(例如施用cd73抑制剂或包含其的药物组合物)，从而暂时或永久地预防、抑制、压制或降低受试者患有疾病、失调或病症等的风险(如通过例如缺乏临床症状来确定)或在易患特定疾病、病症或病症的受试者的情况下延迟其发作。在某些情况下，该术语还指减缓疾病、失调或病症的进展或抑制其发展成有害的或其他不希望的状态。
[0232]
如本文所用的术语“需要预防”是指由医生或其他护理人员作出的受试者需要或将从预防护理中受益的判断。这种判断是基于医生或护理人员专业领域中的各种因素而作出的。
[0233]
术语“治疗有效量”和“有效量”在本文中可互换使用，是指单独或作为药物组合物的一部分的药剂在施用至受试者时，以单剂量或作为一系列剂量中的一部分的方式，以能够对施用于疾病、失调或病症的任何症状、方面或特征具有任何可检测的积极作用的量施用至受试者。通过测量相关的生理效应可以确定治疗有效量，并且可以根据受试者病症的给药方案和诊断分析等来调整治疗有效量。举例来说，测量给药后特定时间的cd73抑制剂(或例如其代谢物)的血清水平可以指示是否已经使用了治疗有效量。在一些实施方式中，术语“治疗有效量”和“有效量”是指在以单剂量或多剂量向受试者施用后，治疗剂，例如化合物在受试者中提供所需的治疗、诊断或预后效应的量或剂量。主治医生或诊断医生通过已知技术并通过观察在类似情况下获得的结果可容易地确定有效量。在确定施用的化合物的有效量或剂量时，考虑许多因素，包括但不限于：受试者的大小、年龄和一般健康状况；涉及的具体疾病；待治疗的疾病或病症的涉及程度或严重程度；受试者个体的回应；施用的特定化合物；施用模式；所施用制剂的生物利用度特征；选择剂量方案；使用伴随药物；和其他相关考虑。
[0234]
术语“基本上纯的”在本文中用于表示组分占组合物总含量大于约50％，并且典型地大于总含量的约60％。更典型地，“基本上纯的”是指组合物中，目标组分占全部组合物的至少75％，至少85％，至少90％或更多。在一些情况下，感兴趣的组分将占组合物总含量的大于约90％，或大于约95％。
[0235]
如本文所用，术语“cd73相关的疾病、失调或病症”和“由cd73介导的疾病、失调或病症”可互换使用来表示用可受益于cd73抑制剂治疗的任何疾病、失调或病症。通常，cd73相关或介导的疾病、失调和病症是cd73活性在其中起生物学、机制或病理学作用的那些疾病、失调和病症。这样的疾病、失调和病症也可能与一种或多种腺苷受体的活性有关。cd73相关的疾病、失调和病症的非限制性实例包括肿瘤相关的失调(癌症、肿瘤等)，免疫相关的失调，炎症成分病症，微生物相关病症，cns相关病症和神经病症，和其它疾病(例如但不限
于心血管疾病，胃肠疾病，代谢疾病，肝脏疾病，肺疾病，眼科疾病和肾脏疾病)。
[0236]
例如，cd73抑制剂可用于预防或治疗增殖性病症，癌症或肿瘤；增加或增强免疫应答；改善免疫接种，包括提高疫苗疗效；以及增加炎症。本发明公开的cd73抑制剂可用于治疗与免疫缺陷相关的免疫缺陷疾病，免疫抑制药物治疗，急性和/或慢性感染以及衰老。cd73抑制剂也可用于刺激患有医源性诱导的免疫抑制的患者的免疫系统，包括那些接受过骨髓移植，化疗或放疗的患者。在其它实施方式中，cd73抑制剂可用于治疗或预防任何病毒、细菌、真菌、寄生虫或其他感染性疾病、失调或病症，包括但不限于hiv和aids。
[0237]
本文提供的药物组合物可以配制为与预期的方法或给药途径相兼容；示例性的施用途径在本文中阐述。此外，药物组合物可以与本文所述的其他治疗活性剂或化合物组合使用，以治疗或预防本文所讨论的cd73相关的疾病、失调和病症。
[0238]
含有活性成分(例如cd73抑制剂)的药物组合物可以是适于口服使用的形式，例如片剂、胶囊、锭剂、糖锭、水性或油性混悬剂、可分散的粉剂或颗粒剂、乳剂、硬质或软质胶囊，或糖浆、溶液、微珠或酏剂。用于口服使用的药物组合物可以根据本领域已知用于制造药物组合物的任何方法来制备，并且这样的组合物可以含有一种或多种试剂，例如甜味剂、调味剂、着色剂和防腐剂以提供药学上可接受的制剂。片剂、胶囊等通常含有与适用于制造片剂的无毒的药学上可接受的载体或赋形剂混合的活性成分。这些载体或赋形剂可以是例如稀释剂，如碳酸钙、碳酸钠、乳糖、磷酸钙或磷酸钠；造粒剂和崩解剂，例如玉米淀粉或海藻酸；粘合剂，例如淀粉，明胶或阿拉伯胶以及润滑剂，例如硬脂酸镁、硬脂酸或滑石粉。
[0239]
适用于口服施用的片剂，胶囊等可以未包衣或使用已知技术包衣以延迟在胃肠道中的崩解和吸收并由此提供持续作用而进行包衣的。例如，可以使用延时材料，例如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯。它们也可以用本领域已知的技术包衣以形成用于控释的渗透治疗片剂。其他试剂包括生物可降解的或生物相容的颗粒或聚合物质如聚酯，聚胺酸，水凝胶，聚乙烯吡咯烷酮，聚酐，聚乙醇酸，乙烯醋酸乙烯酯，甲基纤维素，羧甲基纤维素，鱼精蛋白硫酸盐或丙交酯/乙交酯共聚物，聚丙交酯/乙交酯共聚物或乙烯醋酸乙烯酯共聚物以控制所施用的组合物的递送。例如，口服制剂可以包埋在胶体药物递送系统或通过凝聚技术或通过界面聚合制备的微胶囊中，分别通过分别使用羟甲基纤维素或明胶微胶囊或聚(甲基丙烯酸甲酯)微胶囊。胶体分散系统包括大分子复合物，纳米胶囊，微球，微珠和基于脂质的系统，包括水包油乳液，胶束，混合胶束和脂质体。制备上述制剂的方法对于本领域技术人员来说是显而易见的。
[0240]
用于口服使用的制剂也可以以硬质明胶胶囊形式存在，其中活性成分与惰性固体稀释剂(例如碳酸钙，磷酸钙，高岭土或微晶纤维素)混合；或者以软质明胶胶囊形式存在，其中活性成分与水或油性介质(例如花生油、液体石蜡或橄榄油)混合。水性悬浮液含有与适于其制造的赋形剂混合的活性材料。这种赋形剂可以是悬浮剂，例如羧甲基纤维素钠，甲基纤维素，羟丙基甲基纤维素，海藻酸钠，聚乙烯吡咯烷酮，黄蓍胶和阿拉伯树胶；分散或润湿剂，例如天然存在的磷脂(例如卵磷脂)，或烯化氧与脂肪酸的缩合产物(例如聚氧乙烯硬脂酸酯)，或环氧乙烷与长链脂肪醇的缩合产物(例如，例如十七乙烯氧基鲸蜡醇)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏酯的缩合产物(例如聚氧乙烯山梨糖醇单油酸酯)，或环氧乙烷与衍生自脂肪酸和己糖醇酐的偏酯的缩合产物聚乙烯脱水山梨糖醇单油酸酯)。水性悬浮液还可含有一种或多种防腐剂。
[0241]
油性悬浮液可通过将活性成分悬浮于植物油(例如花生油、橄榄油、麻油或椰子油)或矿物油(例如液体石蜡)中来配制。油性悬浮液可含有增稠剂，例如蜂蜡，硬石蜡或鲸蜡醇。可加入如上所述的那些，诸如甜味剂，也可加入调味剂以提供可口的口服制剂。
[0242]
适用于通过加入水来制备水性悬浮液的可分散粉末和颗粒提供了与分散剂或润湿剂，悬浮剂和一种或多种防腐剂混合的活性成分。合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂在本领域中是已知的。
[0243]
本发明的药物组合物也可为水包油乳液的形式。油性相可为植物油(例如，橄榄油或花生油)或矿物油(例如液体石蜡)，或者它们的混合物。合适的乳化剂可以是天然存在的树胶，例如阿拉伯树胶和黄蓍胶；天然存在的磷脂，例如大豆，卵磷脂和衍生自脂肪酸的酯或偏酯；己糖醇酐类，例如山梨糖醇酐单油酸酯；偏酯与环氧乙烷的缩合产物，例如聚氧乙烯失水山梨糖醇单油酸酯。
[0244]
药物组合物通常包括治疗有效量的本发明提供的cd73抑制剂化合物和一种或多种药学和生理学上可接受的配制剂。合适的药学上可接受的或生理学上可接受的稀释剂、载体或赋形剂包括但不限于抗氧化剂(例如抗坏血酸和二硫化钠)、防腐剂(例如苯甲醇，对羟基苯甲酸甲酯，对羟基苯甲酸乙或正丙酯)，乳化剂、悬浮剂、分散剂、溶剂、填料、填充剂、清洁剂、缓冲剂、载剂、稀释剂和/或佐剂。例如，合适的载剂可以是生理盐水溶液或柠檬酸盐缓冲盐水，可能补充有用于肠胃外给药的药物组合物中常见的其它物质。中性缓冲盐水或与血清白蛋白混合的盐水是进一步的示例性载剂。本领域技术人员将容易地知晓可用于本文考虑的药物组合物和剂型中的各种缓冲剂。典型的缓冲剂包括但不限于，药学上可接受的弱酸、弱碱或其混合物。举例来说，缓冲组分可以是水溶性物质，如磷酸、酒石酸、乳酸、琥珀酸、柠檬酸、乙酸、抗坏血酸、天冬氨酸、谷氨酸及其盐。可接受的缓冲剂包括例如tris缓冲液、n-(2-羟基乙基)哌嗪-n'-(2-乙磺酸)(hepes)、2-(n-吗啉)乙磺酸(mes)、2-(n-吗啉)乙磺酸钠盐(mes)，3-(n-吗啉)丙磺酸(mops)和ntris[羟基甲基]甲基-3-氨基丙烷磺酸(taps)。在配制药物组合物后，可将其以溶液、悬浮液、凝胶、乳液、固体、脱水或冻干粉的形式储存在无菌小瓶中。这种制剂可以以即用形式，使用前需要重构的冻干形式，使用前需要稀释的液体形式或其他可接受的形式储存。
[0245]
在一些实施方式中，药物组合物容纳在一次性使用的容器(例如，一次性使用的小瓶、安瓿、注射器或自动注射器)，而在其它实施方式中，容纳在多次使用容器(例如，多次使用的小瓶)中。
[0246]
制剂还可包括载体以保护组合物免于从身体快速降解或消失，诸如控释制剂，包括脂质体、水凝胶和微囊化递送系统。例如，可以使用延时材料，例如单独的甘油单硬脂酸酯或甘油硬脂酸酯，或与蜡组合使用。任何药物递送装置都可用于递送cd73抑制剂，包括植入物(例如可植入泵)和导管系统，缓慢注射泵和装置，所有这些都是本领域技术人员所熟知的。
[0247]
药物组合物也可以是无菌注射水性或油性悬浮液的形式。该悬浮液可以根据已知技术使用本文提到的那些合适的分散剂或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂还可以是在无毒肠胃外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如在1,3-丁二醇中的溶液。可以使用的可接受的稀释剂、溶剂和分散介质包括水、林格氏溶液、等渗氯化钠溶液、cremophor eltm(basf，parsippany，nj)或磷酸盐缓冲盐水(pbs)、乙醇多、元醇(例如甘油、
丙二醇和液体聚乙二醇)及其合适的混合物。另外，无菌的固定油通常用作溶剂或悬浮介质。为此目的，可以使用任何温和的固定油，包括合成的甘油一酯或甘油二酯。而且，脂肪酸(如油酸)可用于制备注射剂。可以通过包括延迟吸收的试剂(例如，单硬脂酸铝或明胶)来实现特定的可注射制剂的延长吸收。
[0248]
本发明提供的cd73抑制剂化合物和组合物可以以本领域已知的任何适当方式施用于受试者。合适的给药途径包括但不限于口服；肠胃外，例如肌内、静脉内、皮下(例如注射或植入)、腹腔内、脑池内、关节内、脑内(脑实质内和脑室内；鼻腔；阴道；舌下；眼内；直肠；局部(例如透皮)；口腔和吸入。一般通过皮下或肌肉内给药的积存注射法也可用于在限定的时间段内释放本文公开的cd73抑制剂。在某些实施方式中，将cd73抑制剂化合物和组合物口服施用至有需要的受试者。
[0249]
本发明提供的cd73抑制剂化合物和组合物可以这样的量施用至受试者：该量取决于例如施用目标(例如，期望的分辨度)；施用该制剂的受试者的年龄、体重、性别、健康和身体状况；施用途径；以及疾病、失调、病症或其症状的情况。给药方案还要考虑与所施用的药剂相关的任何不良作用的存在、性质和程度。有效剂量和剂量方案可以容易由例如安全性和剂量递增试验、体内研究(例如动物模型)和本领域技术人员已知的其他方法来确定。通常，剂量参数决定剂量小于对受试者可能具有不可逆毒性的量(最大耐受剂量，mtd)并且不小于对受试者产生可测量效果所需的量。考虑到给药途径和其他因素，这些量例如通过与adme相关的药代动力学和药效学参数来确定。
[0250]
在一些实施方式中，cd73抑制剂可以以受试者体重的0.01mg/kg至约50mg/kg，或约1mg/kg至约25mg/kg的剂量水平每天一次，或一天多次来施用，以获得所需的治疗效果。对于口服剂的使用，组合物可以以含有1.0毫克至1000毫克活性成，特别是含有1毫克、3毫克、5毫克、10毫克、15毫克、20毫克、25毫克、50毫克、75毫克、100毫克、150毫克、200毫克、250毫克、300毫克、400毫克、500毫克、600毫克、750毫克、800毫克、900毫克或1000毫克活性成分的片剂或胶囊等形式来提供。
[0251]
在一些实施方式中，所需cd73抑制剂的剂量包含在“单位剂型”中。短语“单位剂型”是指物理上不连续的单位，每个单位含有预定量的单独的cd73抑制剂，或与一种或多种另外的药剂组合，足以产生所需的效果。应该理解的是，单位剂型的参数将取决于具体的药剂和待实现的效果。
[0252]
本发明还提供了包含cd73抑制剂化合物或组合物的试剂盒。试剂盒通常为容纳各种组分的物理结构的形式，并且可用于例如实施本文提供的方法。例如，试剂盒可以包括本发明公开的一种或多种cd73抑制剂(例如提供在无菌容器中)，其可为适合施用至受试者的药物组合物的形式。cd73抑制剂可以以即用型(例如片剂或胶囊)形式或以需要例如在施用前重构或稀释(例如粉末)的形式提供。当cd73抑制剂为需要使用者被重构或稀释的形式时，该试剂盒还可包括与cd73抑制剂一起包装或者分别包装的稀释剂(例如无菌水)、缓冲液、药学上可接受的赋形剂等。当采用组合疗法时，试剂盒可独立地含有几种治疗剂，或者它们可已经在试剂盒中组合。试剂盒的每个组分可以被封装在单独的容器内，并且所有的各种容器可以在单个包装内。本发明的试剂盒可被设计用于适当地保持容纳在其中的组分所需的条件(例如，冷藏或冷冻)。
[0253]
试剂盒还可以包含标签或包装插页，包含其中组分的识别信息和使用说明(例如
剂量参数，活性成分的临床药理学，包括作用机制、药代动力学和药效学、不良作用、禁忌症等)。标签或插页可以包含制造商信息，如批号和到期日期。标签或包装插页可以例如整合到容纳组分的物理结构中、独立地包含在物理结构内，或者附着到试剂盒的组件(例如，安瓿、管或小瓶)。
[0254]
实施例
[0255]
通过参考以下实施例将更容易理解本发明，所述实施例用于说明本发明，而不应被解释为以任何方式限制本发明的范围。
[0256]
除非另有定义或上下文另有明确规定，本文使用的所有技术和科学术语具有与本发明所属领域的普通技术人员通常理解的相同的含义。应当理解，与本文所述类似或等同的任何方法和材料可用于本发明的实践或测试。
[0257]
本文中所提供的化合物可通过上述常规方法来制备，并且相应化合物的nmr和ms数据如下实施例中所示。
[0258]
制备化合物1
[0259][0260]
步骤a：反应瓶中加入茚烷-1-羧酸(5g，30.83mmol，1eq.)、浓硫酸(3.02g，30.83mmol，1.64ml，1eq.)和甲醇(100ml)。搅拌条件下，60℃反应20小时。tlc(薄层层析)检测反应直到原料消耗完毕。浓缩除去大部分溶剂，加入水(40ml)，乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层浓缩后经硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-95：5)纯化分离，得产物1-甲茚甲酸甲酯(4.7g，收率86.5％)。
[0261]
步骤b：反应瓶中加入1-甲茚甲酸甲酯(4.7g，26.67mmol，1eq.)和dmso(47ml)。氮气环境，0℃条件下，加入碳酸钾(11.06g，80.02mmol，3eq.)和甲醛溶液(7.37g，80.02mmol，37％含量，3eq.)。室温搅拌反应19小时，加入水(50ml)淬灭反应。加入乙酸乙酯(50ml)萃洗分层。水相用2.5n盐酸调节ph至3，后加入乙酸乙酯(50ml)萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩得产物1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(3.3g，收率64.4％)。
[0262]
步骤c：反应瓶中加入1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(4.9g，25.49mmol，1eq.)、苯甲胺(2.73g，25.49mmol，1eq.)、dmf(47ml)、edci(7.33g，38.24mmol，1.5eq.)、hobt(5.17g，38.24mmol，1.5eq.)和dipea(4.94g，38.24mmol，6.66ml，1.5eq.)。室温搅拌18小时，tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(20ml)和乙酸乙酯(100ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗三次(70ml*3)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物n-苄基-1-(羟甲基)茚烷-1-甲酰胺(4.3g，收率59.9％)。
d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(70mg，收率80.2％)。
[0269]
步骤j：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(70mg，144.64μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(4ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(72.26mg，289.29μmol，2.0eq.溶于1ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应6小时。水(3ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物1)(41mg，收率44.5％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 2.47(dt,j＝31.3,12.1hz,4h),2.96(t,j＝7.1hz,2h),4.24(s,1h),4.28(dd,j＝11.2,6.5hz,1h),4.34(d,j＝3.6hz,1h),4.42(t,j＝4.8hz,1h),4.64(t,j＝5.0hz,1h),6.00(d,j＝5.0hz,1h),7.16-7.31(m,3h),7.48(d,j＝7.3hz,1h),8.38(s,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 31.23,39.74,65.95,71.42,75.67,84.73,89.71,119.06,123.26,125.49,128.29,128.80,141.30,144.69,147.40,151.90,155.69；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.89,19.83；m/z(esi

):602.1(m h).
[0270]
制备化合物2
[0271][0272]
步骤a：反应瓶中加入4-氟吲哚-1-酮(2g，13.32mmol，1eq.)、乙醇(20ml)和四氢呋喃(20ml)。冰水浴条件下，将叔丁醇钾(1m，26.64ml，2.0eq.)缓慢滴加入反应体系。滴加完毕后，将对甲基苯磺酰甲基异腈溶液缓慢滴加(3.90g，19.98mmol，1.5eq.)溶于20ml四氢呋喃乙醇混合溶剂，v/v＝1:1)入反应体系。室温搅拌反应16小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入浓盐水(100ml)，乙酸乙酯(100ml)，萃洗分层，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-83：17)得产物4-氟茚-1-碳腈(910mg，收率42.39％)。
[0273]
步骤b：反应瓶中加入4-氟茚-1-碳腈(910mg，5.65mmol，1eq.)、水(15ml)和氢氧化钠(677.52mg，16.94mmol，3.0eq.)。100℃搅拌反应5小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。反应体系回复至室温，加入水(10ml)，乙酸乙酯萃洗(35ml*2)，去除有机相，水相调节ph至2(6n aq.hcl)。乙酸乙酯萃取(35ml*2)，有机层干燥浓缩后得产物4-氟茚烷-1-羧酸(905mg，收率88.96％)。
[0274]
步骤c：反应瓶中加入4-氟茚烷-1-羧酸(1g，5.55mmol，1eq.)和甲醇(20ml)。滴加一滴dmf作催化剂。将氯化亚砜(3.30g，27.75mmol，2.02ml，5eq.)缓慢滴加入反应体系，室温搅拌反应3小时。浓缩除去大部分溶剂，加入水(50ml)，乙酸乙酯(100ml)，有机层碳酸氢钠水溶液洗两次(60ml*2)，浓盐水洗一次(60ml)，无水硫酸钠干燥，过滤浓缩得产物4-氟茚
烷-1-羧酸甲酯(1.02g，收率94.63％)。
[0275]
步骤d：反应瓶中加入6-氟茚烷-1-羧酸甲酯(1.02g，5.25mmol，1eq.)和dmso(20ml)。氮气环境，0℃条件下，加入碳酸钾(2.18g，15.76mmol，3eq.)和甲醛溶液(941.54mg，10.50mmol，38％纯度，2eq.)。室温搅拌反应19小时，加入水(100ml)淬灭反应。加入乙酸乙酯(80ml*2)萃洗分层。水相用6n盐酸调节ph至2，后加入乙酸乙酯(80ml*2)萃洗分层。有机层饱和食盐水洗3次(70ml*3)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩得产物4-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(1.02g，收率92.39％)。
[0276]
步骤e：反应瓶中加入4-氟-1-(羟甲基)茚烷-1-羧酸(1.02g，4.85mmol，1eq.)、苯甲胺(519.96mg，4.85mmol，1eq.)、dmf(10ml)、edci(1.40g，7.28mmol，1.5eq.)、hobt(2.29g，16.91mmol，1.5eq.)和dipea(627.14mg，4.85mmol，845.20μl，1eq.)。室温搅拌5小时，tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗六次(70ml*6)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，得产物n-苄基-4-氟-1-(羟甲基)吲哚烷-1-甲酰胺(1.25g，收率86.06％)。
[0277]
步骤f：反应瓶中加入n-苄基-4-氟-1-(羟甲基)吲哚烷-1-甲酰胺(500mg，1.67mmol，1eq.)和四氢呋喃(15ml)。氮气环境，0℃条件下，加入三苯基膦(657.17mg，2.51mmol，1.5eq.)，后滴加dead(436.35mg，2.51mmol，394.53μl，1.5eq.)。室温条件下反应16小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(20ml)和乙酸乙酯(40ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-67：33)，得产物1-苄基-4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-2-酮(380mg,收率80.87％)。
[0278]
步骤g：在0℃条件下，反应瓶中加入三氯化铝(360.22mg，2.70mmol，2eq.)和四氢呋喃(10ml)。后加入氢化铝锂(153.78mg，4.05mmol，3eq.)，在0℃条件下搅拌30分钟。将1-苄基-4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-2-酮(380mg，1.35mmol，1eq.)溶于8ml四氢呋喃)滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系用水淬灭(1ml)，后滴加15％氢氧化钠水溶液(2.5ml)，乙酸乙酯(20ml)。过滤除去固体，母液浓缩得产物1-苄基-4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷](280mg，收率77.54％)。
[0279]
步骤h：反应瓶中加入1-苄基-4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷](280mg，1.05mmol，1eq.)、甲醇(15ml)、甲酸铵(99.07mg，1.57mmol，1.5eq.)和氢氧化钯(64.64mg，20％碳吸附量，含50％水)。氢气环境下，60℃搅拌反应过夜。过滤，滤饼用甲醇洗(20ml)。母液浓缩得粗品产物4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷](148mg，收率79.74％)。
[0280]
步骤i：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(340mg，760.24μmol，1eq.)、4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷](148.20mg，836.27μmol，1.1eq.)、1,4-二氧六环(10ml)和dipea(442.14mg，3.42mmol，595.88μl，4.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应3小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(290mg，收率64.88％)。
[0281]
步骤j：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(290mg，493.21μ
mol，1eq.)、甲醇(5ml)和氨甲醇(7m，1.76ml，25eq.)。室温条件下搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(227mg，收率99.65％)。
[0282]
步骤k：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(227mg，491.48μmol，1eq.)、丙酮(15ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.02g，9.83mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(97.31mg，491.48μmol，1eq.)。室温搅拌反1小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚二酮]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(170mg，收率68.91％)。
[0283]
步骤l：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-茚二酮]-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(170mg，338.69μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(2ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三乙酯溶液(74.65mg，298.84μmol，2.5eq.溶于2ml磷酸三乙酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应6小时。水(3ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,1'-吲哚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物2)(40.2mg，收率19.15％)1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.52(dt,j＝42.1,14.0hz,4h),3.00(t,j＝7.0hz,2h),4.21
–
4.50(m,4h),4.65(s,1h),6.01(d,j＝5.0hz,1h),6.96(t,j＝8.4hz,1h),7.26
–
7.38(m,2h),8.40(s,1h).m/z(esi ):620.3(m h).
[0284]
制备化合物3
[0285][0286]
以5-氟吲哚-1-酮为原料，实验步骤参照化合物2。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.47
–
2.60(m,4h),3.00(t,j＝6.8hz,2h),4.25
–
4.43(m,4h),4.43
–
4.52(m,2h),4.68(m,3h),6.04(d,j＝4.8hz,1h),7.00(d,j＝9.0hz,2h),7.53(s,1h),8.45(s,1h)；m/z(esi ):620.0(m h).
[0287]
制备化合物4
[0288][0289]
以6-氟吲哚-1-酮为原料，实验步骤参照化合物2。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm2.41-2.57(m,4h),2.93(t,j＝7.0hz,2h),4.21-4.39(m,3h),4.42(t,j＝4.7hz,1h),4.64(t,j＝4.9hz,1h),6.00(d,j＝4.9hz,1h),6.95(t,j＝8.6hz,1h),7.23(t,j＝9.1hz,2h),8.39(s,1h)；m/z(esi ):620.1(m h).
[0290]
制备化合物5
[0291][0292]
以7-氟吲哚-1-酮为原料，实验步骤参照化合物2。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm2.53(dt,j＝41.8,14.0hz,4h),3.02(t,j＝7.2hz,2h),4.22-4.38(m,3h),4.43(d,j＝4.4hz,2h),4.65(s,2h),4.76(s,1h),4.97(s,1h),6.00(d,j＝4.6hz,1h),6.92(t,j＝9.3hz,1h),7.06(d,j＝7.4hz,1h),7.24(dd,j＝12.9,7.7hz,1h),8.39(s,1h)；m/z(esi ):620.1(m h).
[0293]
制备化合物6
[0294][0295]
步骤a：反应瓶中加入四氢萘-1-羧酸(0.5g，2.84mmol，1eq.)、浓硫酸(278.30mg，2.84mmol，151.25μl，1eq.)和甲醇(10ml)。搅拌条件下，65℃反应20小时。tlc检测反应直到
原料消耗完毕。浓缩除去大部分溶剂，加入水(40ml)，乙酸乙酯(40ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后得产物四氢萘-1-羧酸甲酯(470mg，收率87.1％)。
[0296]
步骤b：反应瓶中加入四氢萘-1-羧酸甲酯(470mg，2.47mmol，1eq.)和四氢呋喃(6ml)。氮气保护，-78℃下，滴加lda(2m，1.48ml，1.2eq.)，滴加完毕，搅拌20分钟。将溴乙腈(592.69mg，4.94mmol，2eq.)滴加入反应体系。滴加完毕，回复至室温搅拌反应4小时。稀盐酸(1m，3ml)淬灭反应后，加入乙酸乙酯(30ml)，有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)得产物1-(氰甲基)四氢萘-1-羧酸甲酯(490mg，收率86.5％)。
[0297]
步骤c：反应瓶中加入1-(氰甲基)四氢萘-1-羧酸甲酯(200mg，872.32μmol，1eq.)、乙醇(30ml)和二氯化钴(226.52mg，1.74mmol，2eq.)。冰水浴氮气保护下，分批加入硼氢化钠，直至全部加入(330.00mg，8.72mmol，10eq.)。回复至室温搅拌反应过夜。冰水浴下，稀盐酸(1m，30ml)淬灭反应，水相乙酸乙酯萃取2次(50ml*2)，有机层饱和食盐水洗1次(100ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-90：10)得产物螺环[吡咯烷-4,1'-四氢萘]-2-酮(50mg，收率28.5％)。
[0298]
步骤d：反应瓶中加入螺环[吡咯烷-4,1'-四氢萘]-2-酮(400mg，1.99mmol，1eq.)和四氢呋喃(30ml)。将氢化铝锂(150.85mg，3.97mmol，2.0eq.)加入反应体系，70℃搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。冰水浴下，缓慢滴加水(1ml)淬灭反应，加入乙酸乙酯(20ml)，过滤除去固体，母液浓缩后经硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-80：20)得产物螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘](230mg，收率61.8％)。
[0299]
步骤e：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘](230.32mg，1.23mmol，1.1eq.)、1,4-二氧六环(20ml)和dipea(361.23mg，2.8mmol，486.83μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(600mg，收率89.7％)。
[0300]
步骤f：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(600mg，1.00mmol，1eq.)、甲醇(8ml)和氨甲醇(7m，4.30ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，收率95.1％)。
[0301]
步骤g：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，953.52μmol，1eq.)、丙酮(25ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.49g，14.30mmol，15eq.)和一水对甲苯磺酸(188.80mg，953.52μmol，1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次
(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢吡啶]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(400mg，收率81.9％)。
[0302]
步骤h：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢吡啶]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(400mg，781.25μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(6ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(390.29mg，1.56mmol，2.0eq.溶于3ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应4小时。水(4ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应60分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝95：5-70：30)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[吡咯烷-3,1'-四氢吡啶]-1-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物6)(301mg，收率58.4％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 1.87(ddd,j＝34.9,18.4,7.5hz,4h),2.11(d,j＝47.6hz,1h),2.32-2.60(m,3h),2.82(d,j＝5.5hz,2h),3.86(dd,j＝60.2,34.8hz,2h),4.11-4.46(m,6h),4.60(d,j＝19.6hz,1h),6.00(s,1h),7.03-7.19(m,3h),7.30(s,1h),8.37(d,j＝25.3hz,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 21.34,26.47,27.52,28.57,31.19,35.75,39.69,41.72,44.72,46.89,48.04,62.29,63.22,65.91,71.32,75.76,84.65,89.81,118.81,127.37,130.35,138.74,140.07,141.21,152.10,154.03,155.58；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.82,19.71；m/z(esi

):630.18(m h).
[0303]
制备化合物7
[0304][0305]
步骤a：反应瓶中加入吲哚-2-酮(2g，15.02mmol，1eq.)和四氢呋喃(30ml)。氮气保护，-78℃条件下滴加lihmds(1m，33.05ml，2.2eq.)。滴加完毕，回复至-50℃搅拌30分钟后，再降低温度至-78℃。将1,5-二溴戊烷溶液(3.45g，15.02mmol，2.05ml，1eq.溶于15ml四氢呋喃)滴加入反应体系。回复至室温，搅拌反应3小时后，回流反应6小时。最后室温反应搅拌过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(40ml)，饱和氯化铵(40ml)和乙酸乙酯(60ml)，萃洗分层。有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)得产物螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(1.3g，收率43.0％)。
[0306]
步骤b：反应瓶中加入螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(500mg，2.48mmol，1eq.)和四氢呋喃(30ml)。将氢化铝锂(188.56mg，4.97mmol，2.0eq.)加入反应体系，70℃搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。冰水浴下，缓慢滴加水(0.3ml)淬灭反应，加入乙
酸乙酯(20ml)，过滤除去固体，母液浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-80：20)得产物螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉](401mg，收率86.2％)。
[0307]
步骤c：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(450mg，1.01mmol，1eq.)、螺环[环己烷-1,3'-吲哚啉](207.29mg，1.11mmol，1.1eq.)、1,4-二氧六环(25ml)和dipea(325.10mg，2.52mmol，438.15μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2h-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，收率49.7％)。
[0308]
步骤d：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2h-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，499.95μmol，1eq.)、甲醇(5ml)和氨甲醇(7m，2.14μl，30eq.)。室温条件下搅拌反应5小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，同时大量白色固体形成。浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，固体难溶于有机层且悬浮于有机层。分出有机层，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2h-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(236mg，99.6％)。
[0309]
步骤e：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2h-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(236mg，497.94μmol，1eq.)、丙酮(20ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.04g，9.96mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(98.59mg，497.94μmol，1.0eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2h-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(254mg，收率99.2％)。
[0310]
步骤f：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[3a,7a-二氢-2h-吲哚-3,1'-环己烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(298.82mg，583.64μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(4ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(291.57mg，1.17mmol，2.0eq.溶于3ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应6小时。水(4ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应40分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[1,3'-吲哚]-1'-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物7)(301mg，收率80.7％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 1.31-1.81(m,10h),2.52(t,j＝20.9hz,2h),4.27(s,1h),4.30-4.42(m,2h),4.45(t,j＝4.8hz,1h),4.53-4.61(m,2h),4.66(t,j＝4.9hz,1h),6.05(d,j＝4.7hz,1h),7.04(t,j＝7.3hz,1h),7.12-7.26(m,2h),8.41-8.49(m,2h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 24.12,26.53,27.51,38.39,45.84,62.14,66.16,71.48,75.72,84.56,89.72,118.98,120.30,123.56,128.51,140.84,142.88,143.18,152.54,153.35,154.56；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm16.61,19.95；m/z(esi

):630.27(m h).
[0311]
制备化合物8
[0312][0313]
步骤a：反应瓶中加入茚烷-1-羧酸(2g，12.33mmol，1eq.)、浓硫酸(1.21g，12.33mmol，0.66ml，1eq.)和甲醇(40ml)。搅拌条件下，60℃反应20小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。浓缩除去大部分溶剂，加入水(40ml)，乙酸乙酯(40ml)，萃洗分层。有机层浓缩后经硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-95：5)纯化分离，得产物1-甲茚甲酸甲酯(2.1g，收率96.6％)。
[0314]
步骤b：反应瓶中加入1-甲茚甲酸甲酯(2.1g，11.92mmol，1eq.)和四氢呋喃(25ml)。氮气保护，-78℃下，滴加lda(2m，7.15ml，1.2eq.)，滴加完毕，搅拌20分钟。将溴乙腈溶液(2.86g，23.84mmol，2eq.溶于1ml四氢呋喃)滴加入反应体系。滴加完毕，回复至室温搅拌反应4小时。稀盐酸(1m，30ml)淬灭反应后，加入乙酸乙酯(60ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)得产物1-(氰甲基)吲哚烷-1-羧酸甲酯(2.4g，收率93.5％)。
[0315]
步骤c：反应瓶中加入1-(氰甲基)吲哚烷-1-羧酸甲酯(2.4g，11.15mmol，1eq.)、乙醇(25ml)和二氯化钴(2.90g，22.30mmol，2eq.)。冰水浴氮气保护下，分批加入硼氢化钠，直至全部加入(4.22g，111.50mmol，10eq.)。回复至室温搅拌反应过夜。冰水浴下，稀盐酸(1m，150ml)淬灭反应，水相乙酸乙酯萃取2次(200ml*2)，有机层饱和食盐水洗1次(100ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-95：5)得产物螺环[吲哚烷-1,3'-吡咯烷]-2'-酮(1.05g，收率50.3％)。
[0316]
步骤d：反应瓶中加入螺环[吲哚烷-1,3'-吡咯烷]-2'-酮(1g，5.34mmol，1eq.)和四氢呋喃(40ml)。将氢化铝锂(405.37mg，10.68mmol，2.0eq.)加入反应体系，70℃搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。冰水浴下，缓慢滴加水(1ml)淬灭反应，后滴加15％氢氧化钠水溶液(2ml)，水(1ml)，加入乙酸乙酯(20ml)，过滤除去固体，母液浓缩后得产物螺环[吲哚烷-1,3'-吡咯烷](800mg，收率86.5％)。
[0317]
步骤e：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、螺环[吲哚烷-1,3'-吡咯烷](232.44mg，1.34mmol，1.2eq.)、1,4-二氧六环(25ml)和dipea(361.23mg，2.8mmol，486.83μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应2小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物
用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，收率76.6％)。
[0318]
步骤f：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，856.14μmol，1eq.)、甲醇(6ml)和氨甲醇(7m，3.67ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应4小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(390mg，收率99.5％)。
[0319]
步骤g：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(390mg，851.70μmol，1eq.)、丙酮(20ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.33g，12.78mmol，15eq.)和一水对甲苯磺酸(146.66mg，851.70μmol，1.0eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(410mg，收率96.7％)。
[0320]
步骤h：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(410mg，823.34μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(5ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(411.32mg，1.65mmol，2.0eq.溶于4ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。水(6ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应60分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[1,3'-吡咯烷]-1'-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物8)(301mg，收率58.4％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm1.96-2.35(m,4h),2.44(dd,j＝37.0,20.5hz,2h),2.94(d,j＝6.7hz,2h),3.64-4.19(m,3h),4.21-4.45(m,5h),4.56(d,j＝20.9hz,1h),5.96(s,1h),7.12-7.29(m,4h),8.38(d,j＝33.4hz,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 26.44,27.50,28.55,31.11,37.22,38.81,39.17,53.92,56.03,59.67,60.67,65.91,71.32,75.73,84.61,89.81,118.82,123.32,125.72,127.84,128.50,140.10,144.97,147.27,152.06,154.06,155.63；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.96,19.61；m/z(esi

):616.32(m h).
[0321]
制备化合物9
[0322][0323]
步骤a：3-氰基苯胺-1-羧酸叔丁酯(3.0g，16.46mmol，1eq.)溶于30ml的thf中，氮气保护下冷却至-78℃。向反应体系缓慢滴加lihmds(1m，20.58ml，1.25eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，在此温度下继续搅拌20分钟。然后把1-(溴甲基)-2-碘苯(5.13g，17.29mmol，1.05eq.)溶解在4ml的thf中，把此溶液缓慢滴加到反应体系当中，同时控制温度在-78℃至-60℃范围内，滴加完毕控温反应3小时。tlc检测反应完毕，将反应液倒入100ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，加入乙酸乙酯40ml，分出有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-85：15)得到3-氰基-3-(2-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.44g，收率98.22％)。
[0324]
步骤b：3-氰基-3-(2-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(6.44g，16.17mmol，1eq.)溶于60ml的thf中，氮气保护下冷却至-78℃。向反应体系缓慢滴加n-buli(2.5m，12.94ml，2eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，在此温度下继续搅拌2小时。tlc检测反应完毕，将反应液倒入100ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，加入乙酸乙酯60ml，分出有机相，有机相用80ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-80：20)得到1'-氧代-1'，3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(3.4g，收率76.92％)。
[0325]
步骤c：1'-氧代-1',3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(1.0g，3.66mmol，1eq.)溶于甲醇与醋酸体积比为1：2的15ml溶剂中，加入100mg的钯碳，氢气置换常温搅拌过夜反应。tlc检测原料大部分消耗，反应混合物用硅藻土过滤，滤液用1m naoh调至ph到9左右，然后旋去大部分溶剂，加入30ml水，用乙酸乙酯萃取两次(15ml*2)，合并有机相，有机相用40ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(360mg，收率37.94％)。
[0326]
步骤d：1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(360mg，1.39mmol，1eq.)溶于hcl-ea(5ml，4mol/l)当中，常温搅拌3小时。tlc检测反应完毕，反应混合物直接浓缩用于下一步。
[0327]
步骤e：1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]盐酸盐(523.74mg，1.17mmol，1eq.)和[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(523.74mg，1.17mmol，1eq.)溶于25ml的二氧六环中，加入dipea(529.73mg，4.10mmol，
713.92μl，3.5eq.)，混合物100℃下搅拌过夜。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)得到[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮芥-3,2'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(620mg，收率92.88％)。
[0328]
步骤f：[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮芥-3,2'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(620mg，1.09mmol，1eq.)溶于6ml的甲醇中，加入nh
3-meoh(7m，4.66ml，30eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干得到(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[氮芥-3,2'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(459mg，收率95.07％)。
[0329]
步骤g：(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[氮芥-3,2'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(459mg，1.03mmol，1eq.)溶于30ml的丙酮中，加入p-tsoh(178.06mg，1.03mmol，1eq.)，2,2-二甲基丙烷(2.15g，20.68mmol，20eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去大部分溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相先用50ml的饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次，再用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0
–
60：40)得到[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[氮芥-3,2'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(350mg，收率69.94％)。
[0330]
步骤h：[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[氮芥-3,2'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(348.55mg，720.22μmol，1eq.)溶于4ml的磷酸三甲酯中，冰浴下缓慢滴加亚甲基双氯化磷(359.80mg，1.44mmol，2eq.)的磷酸三甲酯(4ml)溶液，混合物冰浴下搅拌5小时。lc-ms监测原料消耗完，向反应体系中缓慢滴加7ml水，滴毕混合物40℃下搅拌40分钟，然后室温搅拌过夜。反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)得到[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[氮芥-3,2'-吲哚烷]-1-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物9)(260mg，收率69.94％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.48(t,j＝20.9hz,2h),3.26(s,4h),4.24(s,2h),4.26-4.38(m,3h),4.42(t,j＝4.7hz,1h),4.55(s,1h),4.63(t,j＝4.9hz,1h),6.00(d,j＝4.8hz,1h),7.15(dd,j＝5.1,3.2hz,2h),7.20-7.25(m,2h),8.39(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 16.85,19.68；
13
c nmr(125mhz,meod)δppm 26.17,43.38,44.10,61.81,63.68,64.53,70.02,74.35,83.39,88.33,116.93,124.21,126.49,139.71,141.29,150.27,154.05,154.37；m/z(esi ):602.31(m h).
[0331]
制备化合物10
[0332][0333]
步骤a：将nbs(5.66g，31.78mmol，1.5eq.)添加到4-氟-2-碘-1-甲基苯(5g，21.18mmol，1eq.)在四氯化碳(50ml)的混合物中。回流搅拌混合物5小时。溶剂通过浓缩去除，粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-99：1)得到1-(溴甲基)-4-氟-2-碘代苯(2.55g，收率38.22％)。
[0334]
步骤b：3-氰基偶氮烷-1-羧酸叔丁酯(1.34g，7.35mmol，1eq.)溶于30ml的thf中，氮气保护下冷却至-78℃。向反应体系缓慢滴加lihmds(1m，9.19ml，1.25eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，在此温度下继续搅拌20分钟。然后把1-(溴甲基)-4-氟-2-碘苯(2.55g，8.09mmol，1.1eq.)溶解在4ml的thf中，把此溶液缓慢滴加到反应体系当中，同时控制温度在-78℃至-60℃范围内，滴加完毕控温反应3小时。tlc检测反应完毕，将反应液倒入100ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，加入乙酸乙酯40ml，分出有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)得到3-氰基-3-[(4-氟-2-碘代苯基)甲基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.41g，收率78.74％)。
[0335]
步骤c：3-氰基-3-[(4-氟-2-碘代苯基)甲基]氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(2.41g，5.79mmol，1eq.)溶于30ml的thf中，氮气保护下冷却至-78℃。向反应体系缓慢滴加n-buli(2.5m，4.63ml，2eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，在此温度下继续搅拌2小时。tlc检测反应完毕，将反应液倒入100ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，加入乙酸乙酯60ml，分出有机相，有机相用80ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)得到6'-氟-1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(1.21g，收率71.74％)。
[0336]
步骤d：将6'-氟-1'-氧代螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(1.21g，4.15mmol，1eq.)溶于甲醇(20ml)，冷却至0℃，将硼氢化钠(392.82mg，10.38mmol，2.5eq.)在0℃下分批次添加到反应液中，搅拌2小时。浓缩去除溶剂，用乙酸乙酯和水萃取分液，有机层用盐水洗涤，并浓缩有机层得到6'-氟-1'-羟基螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(1.21g，收率99.31％)。
[0337]
步骤e：向dcm(10ml)中的6'-氟-1'-羟基螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-羧酸叔丁酯(305mg，1.04mmol，1eq.)的混合物中添加三氟化硼乙醚(4ml)和三乙基硅烷(1.21g，10.40mmol，10eq.)，然后在40℃下搅拌16h。然后用水(20ml)和饱和氯化铵溶液(20ml)淬灭。向混合物中添加15％naoh，以调节ph＝10。用dcm(60ml*2)萃取，用盐水(100ml)洗涤。有
机相用硫酸钠干燥，过滤，蒸发，得到5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷](100mg，收率37.99％，70％纯度)。
[0338]
步骤f：5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷](99.86mg，563.47μmol，1eq.)和[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(252mg，1eq.)溶于25ml的二氧六环中，加入dipea(182.06mg，1.41mmol，245.36μl，2.5eq.)，混合物100℃下搅拌3小时。浓缩除去溶剂，粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-58：42)得到[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(200mg，收率24.15％，纯度40％)。
[0339]
步骤g：[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(200mg，收率24.15％，纯度40％，1eq.)溶于6ml的甲醇中，加入nh
3-meoh(7m，485.92μl，25eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去溶剂，粗品通过柱层析纯化(二氯甲烷：甲醇＝100：0-93：7)得到(2r,3r,4r,4s,4s,5r)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(60mg，129.91μmol，收率95.48％)。
[0340]
步骤h：((2r,3r,4r,4s,4s,5r)-2-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(60mg，129.91μmol，1eq.)溶于10ml的丙酮中，加入p-tsoh(22.37mg，129.91μmol，1eq.)，2,2-二甲基丙烷(270.59mg，2.60，2.60mmol，20eq.)，混合物室温搅拌1小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去大部分溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相先用50ml的饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次，再用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0～60：40)得到[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6]-(5
’‑
氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(60mg，119.54μmol，收率92.02％)。
[0341]
步骤i：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6]-(5
’‑
氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(60mg，119.54μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(2ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三乙酯溶液(74.65mg，298.84μmol，2.5eq.溶于2ml磷酸三乙酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应6小时。水(3ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚烷]-1-基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物10)(7.1mg，收率9.58％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.47(t,j＝20.8hz,2h),3.25(d,j＝19.8hz,4h),4.19
–
4.37(m,5h),4.42(d,j＝8.2hz,1h),4.49(d,j＝58.8hz,2h),4.64(s,1h),6.00(d,j＝4.8hz,1h),6.88(t,j＝8.7hz,1h),6.97(d,j＝8.2hz,1h),7.14
–
7.27(m,1h),8.40(s,1h)；m/z(esi ):620.3(m h).
[0342]
制备化合物11
[0343][0344]
步骤a：反应瓶中加入1-氟-3-碘-2-甲苯(5.0g，21.18mmol，1eq.)和四氯化碳(80ml)。再加入n-溴代丁二酰亚胺(5.66g，31.78mmol，1.5eq.)、过氧化二苯甲酰(256.57mg，1.06mmol，0.05eq.)。在氮气保护下，反应体系回流5小时。tlc检测反应原料大部分消耗完毕。溶液浓缩后，残留物用二氯甲烷萃取(50ml*2)，有机层饱和食盐水洗1次(100ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-99：1)得产物2-(溴甲基)-1-氟-3-碘苯(1.97g，收率29.53％)。
[0345]
步骤b：反应瓶中加入3-氰基苯胺-1-羧酸叔丁酯(1.1g，6.05mmol，1eq.)和四氢呋喃(10ml)。氮气保护下冷却至-78℃，向反应体系缓慢滴加lihmds(1m，7.56ml，1.25eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，在此温度下继续搅拌20分钟。然后把2-(溴甲基)-1-氟-3-碘苯(2.0g，6.35mmol，1.05eq.)溶解在10ml的thf中，把此溶液缓慢滴加到反应体系当中，同时控制温度在-78℃至-60℃范围内，滴加完毕控温反应3小时。tlc检测反应原料消耗完毕，将反应液倒入100ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，加入乙酸乙酯40ml，分出有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-80：20)得到3-氰基-3-(2-氟-6-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.92g，收率76.27％)。
[0346]
步骤c：反应瓶中加入3-氰基-3-(2-氟-6-碘苯基)氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(1.92g，4.61mmol，1eq.)溶于30ml的thf中，氮气保护下冷却至-78℃。向反应体系缓慢滴加n-buli(2.5m，3.69ml，2eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，在此温度下继续搅拌2小时。tlc检测反应原料消耗完毕，将反应液倒入100ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，加入乙酸乙酯60ml，分出有机相，有机相用80ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-80：20)得到4'-氟-1'-氧-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(430mg，收率32％)。
[0347]
步骤d：反应瓶中加入4'-氟-1'-氧-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(430mg，1.48mmol，1eq.)和甲醇(10ml)。冰浴条件下，加入硼氢化钠(167.52mg，4.43mmol，3.0eq.)。室温搅拌反应2小时，tlc检测反应原料消耗完毕，溶液浓缩后，残留物用乙酸乙酯(30ml*2)萃洗分层，有机层饱和食盐水洗(60ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩得产物4'-氟-1'-羟基-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(410mg，收率94.69％)。
[0348]
步骤e：反应瓶中加入4'-氟-1'-羟基-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(410mg，1.40mmol，1eq.)和醋酸(10ml)，氮气保护下滴加三氟化硼乙醚(2ml)、三乙基
硅烷(1.30g，11.18mmol，1.79ml，8eq.)。60℃下搅拌过夜，lc-ms检测反应原料消耗完毕，反应液冷却后，用15％氢氧化钠溶液调溶液的ph大约到9，然后乙酸乙酯(30ml*3)萃洗分层，有机层饱和食盐水洗一次(80ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后得到粗品产物4'-氟-1'，3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚](245mg，收率98.91％)。
[0349]
步骤f：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(151.42mg，338.57μmol，1eq.)、4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚](72mg，406.28μmol，1.2eq.)、1,4-二氧六环(10ml)和dipea(109.39mg，846.42μmol，147.43μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应16小时。lc-ms检测反应原料消耗完毕，反应液经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(100mg，收率50.23％)。
[0350]
步骤g：反应瓶中加入(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(100mg，170.17μmol，1eq.)、甲醇(2ml)和氨甲醇(7m，728.88μl，30eq.)。室温条件下搅拌反应2小时。lc-ms检测反应原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(78mg，收率99.30％)。
[0351]
步骤h：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(78mg，168.88μmol，1eq.)、丙酮(10ml)、2,2-二甲氧基丙烷(351.76mg，3.38mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(32.12mg，168.88μmol，1eq.)。室温搅拌反应16小时。tlc检测反应原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(57mg，收率67.24％)。
[0352]
步骤i：反应瓶中加入((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(57mg，274.94μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(1ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三乙酯溶液(70.91mg，283.90μmol，2.5eq.溶于1ml磷酸三乙酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。lc-ms检测反应原料消耗完毕，水(1.5ml)慢慢滴加入反应体系，25℃搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(4'-氟-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰)甲基)膦酸(化合物11)(10mg，收率14.25％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.53(t,j＝20.6hz,2h),3.35(s,4h),4.25
–
4.41(m,5h),4.45(s,1h),4.60(s,2h),4.67(s,1h),6.04(d,j＝4.0hz,1h),6.91(t,j＝8.5hz,1h),7.09(d,j＝7.1hz,1h),7.22(d,j＝5.4hz,1h),8.47(s,1h)；m/z(esi ):620.1(m h).
[0353]
制备化合物12
[0354][0355]
步骤a：反应瓶中加入四氢萘-1-羧酸(2g，11.35mmol，1eq.)、浓硫酸(1.11g，11.35mmol，605.00μl，1eq.)和甲醇(20ml)。搅拌条件下，65℃反应20小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。浓缩除去大部分溶剂，加入水(40ml)，乙酸乙酯(40ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后得产物四氢萘-1-羧酸甲酯(2.1g，收率97.2％)。
[0356]
步骤b：反应瓶中加入四氢萘-1-羧酸甲酯(2.1g，11.04mmol，1eq.)和dmso(25ml)。氮气环境，0℃条件下，加入碳酸钾(5.03g，36.43mmol，3.3eq.)和甲醛溶液(3.05g，33.12mmol，37％含量，3eq.)。室温搅拌反应19小时，加入水(75ml)淬灭反应。加入乙酸乙酯(50ml)萃洗分层。水相用3n盐酸调节ph至3，后加入乙酸乙酯(50ml*3)萃取。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩得产物1-(羟甲基)四氢萘-1-羧酸(1.5g，收率65.9％)。
[0357]
步骤c：反应瓶中加入1-(羟甲基)四氢萘-1-羧酸(1.5g，7.27mmol，1eq.)、苯甲胺(779.34mg，1eq.)、dmf(15ml)、edci(2.09g，10.91mmol，1.5eq.)、hobt(1.47g，10.91mmol，1.5eq.)和dipea(1.41g，10.91mmol，1.90ml，1.5eq.)。室温搅拌18小时，tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(20ml)和乙酸乙酯(60ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗三次(70ml*3)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)，得产物n-苄基-1-(羟甲基)四氢萘-1-甲酰胺(1.3g，收率60.5％)。
[0358]
步骤d：反应瓶中加入n-苄基-1-(羟甲基)四氢萘-1-甲酰胺(1.3g，4.40mmol，1eq.)和四氢呋喃(20ml)。氮气环境，0℃条件下，加入三苯基膦(1.73g，6.60mmol，1.5eq.)，后滴加dead(1.15g，6.60mmol，1.04ml，1.5eq.)。室温条件下反应2小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(20ml)和乙酸乙酯(100ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-67：33)，得产物1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-2-酮(1g，收率81.9％)。
[0359]
步骤e：在0℃条件下，反应瓶中加入三氯化铝(961.50mg，7.21mmol，2.0eq.)和四氢呋喃(15ml)。后加入氢化铝锂(410.48mg，10.82mmol，3.0eq.)，在0℃条件下搅拌30分钟。将1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-2-酮(1g，3.61mmol，1eq.溶于4ml四氢呋喃)滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系用水淬灭(1ml)，后滴加15％氢氧化钠水溶液
(4ml)，乙酸乙酯(20ml)。过滤除去固体，母液浓缩得产物1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](800mg，收率84.2％)。
[0360]
步骤f：反应瓶中加入1-苄基螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](800mg，3.04mmol，1eq.)、甲醇(30ml)、甲酸铵(287.32mg，4.56mmol，1.5eq.)和氢氧化钯(100mg，20％碳吸附量，含50％水)。氢气环境下，60℃搅拌反应过夜。过滤，滤饼用甲醇洗(20ml)。母液浓缩得粗品产物螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](500mg，95.0％)。
[0361]
步骤g：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘](251.81mg，1.45mmol，1.3eq.)、1,4-二氧六环(20ml)和dipea(577.96mg，4.47mmol，778.93μl，4eq.)。搅拌条件下，100℃反应3小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，收率76.5％)。
[0362]
步骤h：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，856.14μmol，1eq.)、甲醇(4ml)和氨甲醇(7m，3.67ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应3小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(390mg，收率99.4％)。
[0363]
步骤i：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(391mg，853.88μmol，1eq.)、丙酮(30ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.78g，17.08mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(147.04mg，853.88μmol，1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(350mg，收率82.3％)。
[0364]
步骤j：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(350mg，702.85μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(4ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(351.12mg，1.41mmol，2.0eq.溶于3ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。水(5ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[氮杂环丁烷-3,1'-四氢萘]-1-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物12)(253mg，收率57.4％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 2.04(s,2h),2.38(s,2h),2.67(t,j＝20.9hz,2h),3.02(t,j＝6.1hz,2h),4.45(s,1h),4.47-4.52(m,1h),4.55(dd,j＝10.4,7.0hz,1h),4.62(t,j＝4.8hz,1h),4.84(t,j＝
基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(580mg，收率77.87％)。
[0371]
步骤e:向(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(580mg，1.27mmol，1eq.)在丙酮(20ml)中的混合物中添加2,2-二甲氧基丙烷(1.98g，19.00mmol，15eq.)和对甲苯磺酸(218.11mg，1.27mmol，1eq.)。将混合物在室温下搅拌2小时。浓缩去除溶剂，用etoac(50ml)稀释残留物，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用盐水洗涤，浓缩有机层，并通经硅胶柱纯化分离层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)洗脱，得到[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(540mg，收率85,61％)。
[0372]
步骤f:将[(3ar,4r,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(540mg，1.08mmol，1eq.)在磷酸三甲酯(3ml)中的溶液冷却至0℃。将双(二氯磷酰)甲烷(812.60mg，3.25mmol，3.0eq.)溶于磷酸三甲酯(3ml)并加入到混合物中。将混合物在0℃下搅拌5h。然后向反应混合物中加入水(4ml)。将混合物在室温下搅拌过夜。反应混合物通过c-18反相硅胶(乙腈：水＝100：0-75：25)纯化，得到产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[1,3'-吲哚]-1'-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物13)(149.9mg，收率21.99％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 1.90(dd,j＝17.7,12.4hz,8h),2.52(t,j＝20.9hz,2h),4.28(s,1h),4.36(dtd,j＝15.0,11.2,4.7hz,2h),4.46(t,j＝4.8hz,1h),4.55(s,2h),4.66(t,j＝4.9hz,1h),6.06(d,j＝4.7hz,1h),7.07(t,j＝7.4hz,1h),7.18-7.27(m,2h),8.40-8.53(m,2h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 16.81,19.86；
13
c nmr(125mhz,meod)δppm 24.48,26.15,27.21,40.47,51.52,64.71,64.80,70.10,74.33,83.26,88.31,117.29,119.01,121.96,123.89,126.97,139.49,140.10,142.36,151.13,152.00,153.21；m/z(esi ):616.3(m h).
[0373]
制备化合物14
[0374][0375]
步骤a：反应瓶中加入4-氟吲哚-2-酮(1g，6.62mmol，1eq.)和四氢呋喃(20ml)。氮气保护，-78℃条件下滴加lihmds(1m，14.56ml，2.2eq.)。滴加完毕，回复至-50℃搅拌30分钟后，再降低温度至-78℃。将1,4-二溴丁烷溶液(1.43g，6.62mmol，1eq.溶于10ml四氢呋喃)滴加入反应体系。回复至室温，搅拌反应3小时后，回流反应3小时。最后室温反应搅拌过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(40ml)，饱和氯化铵(30ml)和乙酸乙酯(60ml)，
萃洗分层。有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-55：45)得产物4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(750mg，收率55.2％)。
[0376]
步骤b：反应瓶中加入4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(500mg，2.44mmol，1eq.)和四氢呋喃(15ml)。将氢化铝锂(369.83mg，9.75mmol，4.0eq.)加入反应体系，70℃搅拌反应2小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。冰水浴下，缓慢滴加水(0.3ml)，15％氢氧化钠水溶液(0.6ml)，水(0.3ml)淬灭反应，加入乙酸乙酯(40ml)，过滤除去固体，母液浓缩后得产物4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](440mg，收率94.4％)。
[0377]
步骤c：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(800mg，1.79mmol，1eq.)、4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](410.52mg，2.15mmol，1.2eq.)、1,4-二氧六环(20ml)和dipea(693.56mg，5.37mmol，934.71μl，3.0eq.)。搅拌条件下，100℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(900mg，收率83.4％)。
[0378]
步骤d：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(900mg，1.49mmol，1eq.)、甲醇(6ml)和氨甲醇(7m，6.41ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应过夜。大量固体形成，tlc检测反应直到原料消耗完毕。过滤得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(700mg，98.4％)。
[0379]
步骤e：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(700mg，1.47mmol，1eq.)、丙酮(20ml)、2,2-二甲氧基丙烷(2.30g，22.06mmol，2.71ml，15eq.)和一水对甲苯磺酸(253.29mg，1.47mmol，1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(30ml)，浓盐水洗一次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(600mg，收率79.1％)。
[0380]
步骤f：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(300mg，581.44μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(3ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三乙酯溶液(290.47mg，1.16mmol，2.0eq.溶于2ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应6小时。水(4ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应40分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(4'-氟螺环[1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(195mg，收率52.9％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 1.84(d,j＝20.7hz,6h),2.08(d,j＝31.3hz,2h),2.49(t,j＝20.3hz,2h),4.30(s,3h),4.46(d,j＝10.2hz,3h),4.65(s,1h),6.04(d,j＝4.6hz,1h),6.73(t,j＝9.0hz,1h),7.15(d,j＝5.9hz,1h),8.19(d,j＝8.1hz,1h),8.46(s,1h)；
13
c nmr
(125mhz,cd3od)δppm 25.99,27.50,40.04,51.81,65.57,67.04,71.73,75.77,88.96,112.08,114.79,120.06,130.02,140.94,145.47,152.11,152.26,153.25,154.30；
31
p nmr(203mhz,dmso-d6)δppm 14.72,18.24；m/z(esi

):634.2(m h).
[0381]
制备化合物15
[0382][0383]
步骤a:向反应瓶中依次加入5-氟吲哚-2-酮(500.00mg，3.31mmol，1eq.)和thf(30ml)。在氮气保护下，将反应体系冷却至-78℃，然后向该反应体系中逐滴添加lihmds(1m，7.28ml，2.2eq.)。将反应混合物于-50℃下搅拌0.5小时。将反应体系冷却至-78℃，并将1,4-二溴丁烷(714.29mg，3.31mmol，1eq.)溶于thf(15ml)中逐滴添加至反应体系。将混合物在室温下搅拌2小时，然后在回流下搅拌2小时后在室温下将混合物搅拌16小时。向反应体系中加入饱和氯化铵溶液淬灭，然后再加入水(80ml)和乙酸乙酯(80ml)萃洗分层，分出有机相。然后对有机相进行浓缩，所得残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)进行分离纯化，得到5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(350mg，收率51.55％)
[0384]
步骤b:向5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(350.00mg，1.71mmol，1eq.)在thf(30ml)的溶液中添加lialh4(161.80mg，4.26mmol，2.5eq.)。将混合物在70℃下搅拌两小时。混合物用水(1ml)淬灭，并向混合物中添加乙酸乙酯(40ml)。通过过滤去除固体并浓缩有机层，所得残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-78：22)进行分离纯化，得到白色固体的产物5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚](210mg，收率64.39％)。
[0385]
步骤c:向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(447mg，999.49μmol，1eq.)在1,4-二氧六环(25ml)中的溶液中添加5'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚啉](210.26mg，1.10mmol，1.1eq.)和dipea(322.94mg，2.50mmol，435.22μl，2.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌四小时。浓缩混合物并通经硅胶柱纯化分离层析纯化，(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-58：42)洗脱，得到[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(490mg，收率81.44％)。
[0386]
步骤d:向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(5'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(490.00mg，813.94μmol，1eq.)在甲醇(15ml)中的溶液中添加氨甲醇(7m，2.91ml，25eq.)。将混合物在室温下搅拌4小时。通
thf)慢慢滴加入反应体系，滴加完毕后恢复到室温搅拌1小时，然后回流过夜。次日tlc检测原料已大部分反应完毕，饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取2次(40ml*2)，合并有机相。有机层用饱和食盐水洗1次(60ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)得到产物6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-2'-酮(282mg，收率41.54％)。
[0392]
步骤b：反应瓶中加入alcl3(493.79mg，3.70mmol，2eq.)和无水thf(10ml)。冰浴下加入lialh4(210.80mg，5.55mmol，3eq.)，0℃下搅拌30分钟。然后滴加6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-2'-酮溶液(380mg，1.85mmol，1.0eq.溶于4ml thf)，加入完毕，室温搅拌过夜。tlc检测原料反应完毕，反应体系加10ml thf稀释，冰浴冷却，用15％naoh(aq.)缓慢淬灭，调溶液的ph到10左右。然后无水硫酸镁干燥过滤，滤液浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到产物6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](250mg，收率70.60％)。
[0393]
步骤c:反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(487.19mg，1.09mmol，1eq.)、6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](250mg，1.31mmol，1.2eq.)、1,4-二氧六环(15ml)和dipea(351.97mg，2.72mmol，474.36μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应5小时。tlc检测大部分原料未转化，然后100℃下搅拌过夜。次日tlc检测大约30％原料残留，然后再升温到120℃反应3小时。tlc检测大约10％原料残留，反应液冷却，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(520mg，收率79.29％)。
[0394]
步骤d：反应瓶中加入(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(520mg，863.77μmol，1eq.)、甲醇(5ml)和氨甲醇(7m，3.70ml，30eq.)。室温条件下搅拌过夜。lc-ms监测反应原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(410mg，收率99.74％)。
[0395]
步骤e：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(6'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(410mg，861.53μmol，1eq.)、丙酮(20ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.79g，17.23mmol，2.12ml，20eq.)和一水对甲苯磺酸(148.35mg，861.53μmol，1.0eq.)。室温搅拌反应2h。lc-ms检测原料消耗完毕，冰浴下用低温浓缩除去部分丙酮，加入水(50ml)，乙酸乙酯(50ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(50ml)，浓盐水洗一次(50ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(6'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(410mg，收率92.24％)。
[0396]
步骤f：反应瓶中加入((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(6'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(380mg，736.49μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(3ml)。在冰浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸
三甲酯溶液(367.93mg，1.47mmol，2.0eq.溶于3ml磷酸三乙酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应4小时。lcms监测还有很少量原料剩余，水(3ml)慢慢滴加入反应体系，先在40℃下搅拌40分钟，然后室温搅拌反应过夜。次日lc-ms监测反应完毕，反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得到产物(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(6'-氟螺环戊烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(255mg，收率54.24％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 1.91(s,8h),2.57(s,2h),4.31(s,1h),4.34
–
4.46(m,2h),4.49(s,1h),4.57(s,2h),4.69(s,1h),6.08(d,j＝4.6hz,1h),6.77(dd,j＝11.7,5.2hz,1h),7.20(dd,j＝8.0,5.7hz,1h),8.20(s,1h),8.46(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 16.85,20.04；
13
c nmr(126mhz,meod)δppm 24.31,25.03,26.09,27.15,40.61,50.88,64.73,65.35,70.07,74.34,83.17,88.33,104.93,109.85,118.96,122.60,135.54,139.88,143.43,150.89,152.06,153.00,161.09,162.99；m/z(esi

):634.3(m h).
[0397]
制备化合物17
[0398][0399]
步骤a：反应瓶中加入7-氟吲哚-2-酮(600mg，3.97mmol，1eq.)和四氢呋喃(25ml)。氮气保护，-78℃条件下滴加lihmds(1m，8.73ml，2.2eq.)。滴加完毕，回复至-50℃搅拌30分钟后，再降低温度至-78℃。将1,4-二溴丁烷溶液(857.16mg，3.97mmol，1eq.溶于5ml四氢呋喃)滴加入反应体系。回复至室温，搅拌反应3小时后，回流反应3小时。最后室温反应搅拌过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。加入水(40ml)，饱和氯化铵(30ml)和乙酸乙酯(60ml)，萃洗分层。有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)得产物7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(590mg，收率72.42％)。
[0400]
步骤b：反应瓶中加入7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-2'-酮(590mg，2.87mmol，1eq.)和四氢呋喃(20ml)。将氢化铝锂(436.40mg，11.50mmol，4.0eq.)加入反应体系，70℃搅拌反应2小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕。冰水浴下，缓慢滴加水(0.3ml)，15％氢氧化钠水溶液(0.6ml)，水(0.3ml)淬灭反应，加入乙酸乙酯(40ml)，过滤除去固体，母液浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)得产物7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](300mg，收率54.6％)。
[0401]
步骤c：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(350mg，782.60μmol，1eq.)、7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉](149.67mg，782.60μmol，1eq.)、nmp(20ml)和dipea(202.29mg，1.57mmol，272.62μl，
2.0eq.)。搅拌条件下，140℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，反应体系加入乙酸乙酯(30ml)，浓盐水洗(30ml*3)，有机层浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(100mg，收率21.2％)。
[0402]
步骤d：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(350mg，581.39μmol，1eq.)、甲醇(3ml)和氨甲醇(7m,2.49ml,30eq.)。室温条件下搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，分出有机层，无水硫酸钠干燥后，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(250mg，90.4％)。
[0403]
步骤e：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(270mg，567.35μmol，1eq.)、丙酮(10ml)、2,2-二甲氧基丙烷(886.31mg，8.51mmol，1.05ml，15eq.)和一水对甲苯磺酸(97.70mg，567.35μmol，1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(290mg，收率99.1％)。
[0404]
步骤f：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(7'-氟螺环[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(290mg，562.06μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(3ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三乙酯溶液(280.79mg，1.12mmol，2.0eq.溶于2ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应6小时。水(4ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应40分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(7'-氟螺环[1,3'-吲哚啉]-1'-基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(198mg，收率55.7％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 1.81(dd,j＝36.0,29.1hz,8h),2.51(t,j＝20.9hz,2h),4.27(s,1h),4.32(d,j＝6.6hz,1h),4.37(s,1h),4.45(d,j＝9.7hz,3h),4.68(t,j＝5.0hz,1h),6.07(d,j＝4.8hz,1h),7.01(t,j＝9.2hz,1h),7.09(d,j＝6.9hz,1h),7.15(dd,j＝7.8,4.2hz,1h),8.51(s,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 25.94,27.47,39.77,55.20,65.92,68.14,71.50,75.63,84.72,89.77,116.28,118.88,121.40,127.55,130.21,141.98,146.35,152.28,153.71,154.31,154.75；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.73,20.18；m/z(esi

):634.1(m h).
[0405]
制备化合物18
[0406][0407]
步骤a：向反应瓶中依次加入吲哚-2-酮(1.33g，9.99mmol，1.0eq.)和thf(20ml)。在氮气保护下，将反应体系冷却至-78℃，然后向该反应体系中逐滴添加lihmds(1m，21.98ml，2.2eq.)。将反应混合物于-50℃下搅拌0.5小时。将反应体系冷却至-78℃，并将1-溴-2-(2-溴乙氧基)乙烷(2.32g，9.99mmol，1eq.)溶于thf(15ml)中逐滴添加至反应体系。将混合物在室温下搅拌2小时，然后在回流下搅拌2小时后在室温下将混合物搅拌过夜。向反应体系中加入饱和氯化铵溶液淬灭，然后再加入水(80ml)和乙酸乙酯(80ml)萃洗分层，分出有机相。然后对有机相进行浓缩，所得残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)进行分离纯化，得到螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-2-酮(420mg，收率20.69％)
[0408]
步骤b:向螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-2-酮(410mg，2.02mmol，1eq)的thf(15ml)溶液中添加lialh4(153.12mg，4.03mmol，2.0eq.)。将混合物在70℃下搅拌过夜。混合物用水(1ml)淬灭，并向混合物中添加etoac(20ml)。通过过滤去除固体并浓缩有机层，所得残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-80：20)进行分离纯化，得到产物螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃](310mg，收率81.20％)
[0409]
步骤c:向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(666mg，1.49mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(15ml)中的溶液中添加螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃](310.01mg，1.1eq.)和dipea(481.15mg，3.72mmol，2.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌过夜。浓缩混合物并通经硅胶柱纯化分离层析纯化，(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-10：90)洗脱，得到[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(550mg，收率61.55％)。
[0410]
步骤d:向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺[环戊烷-1,3'-吲哚啉]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(950mg，1.63mmol，1eq.)在甲醇(15ml)中的溶液中添加氨甲醇(7m，5.81ml，25eq.)。将混合物在室温下搅拌4小时。通过过滤获得固体，用甲醇(15ml)洗涤滤饼，得到产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(310mg，收率71.36％)。
[0411]
步骤e:向(2r,3r,3r,4s,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(310mg，654.13μmol，1eq.)在丙酮(10ml)中的混合物中添加2,2-二甲氧基丙烷(1.02g，9.81mmol，15eq.)和对甲苯磺酸(112.64mg，654.13μmol，1eq.)。将混合物在室温下搅拌2小时。浓缩去除溶剂，用etoac(50ml)稀释残留物，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用盐水洗涤，浓缩有机层，并通经硅胶柱纯化分离层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-5：95)洗脱，得到[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[吲
哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(252mg，收率74.95％)。
[0412]
步骤f:将[(3ar,4r,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[吲哚啉-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(252mg，490.30μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(3ml)中的溶液冷却至约0℃。将双(二氯磷酰)甲烷(306.17mg，1.23mmol，2.5eq.)溶于磷酸三甲酯(3ml)并加入到混合物中。将混合物在室温下搅拌5小时。然后向反应混合物中加入水(4ml)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过c-18反相硅胶(乙腈：水＝100：0-75：25)纯化反应混合物，得到所需产物[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[吲哚-3,4'-四氢吡喃]-1-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基磷酰基]甲基膦酸(化合物18)(39.0mg，收率12.43％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 1.61(d,j＝13.5hz,2h),2.04(t,j＝13.1hz,2h),2.53(t,j＝21.0hz,2h),3.73(dd,j＝16.3,8.0hz,2h),3.98(d,j＝10.5hz,2h),4.29(s,1h),4.31-4.43(m,2h),4.46(t,j＝4.6hz,1h),4.66-4.75(m,3h),6.06(d,j＝4.6hz,1h),7.10(t,j＝7.4hz,1h),7.24(t,j＝7.7hz,1h),7.29(d,j＝7.4hz,1h),8.45-8.54(m,2h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 16.77,20.00；
13
c nmr(125mhz,meod)δppm 26.14,37.03,42.16,60.27,64.65,70.13,74.32,83.28,88.33,117.70,118.98,122.34,123.83,127.62,139.74,142.05,151.14,152.05,153.17；m/z(esi ):632.3(m h).
[0413]
制备化合物19
[0414][0415]
步骤a：1'-氧代-1'，3'-二氢螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1-羧酸叔丁酯(350mg，1.28mmol，1eq.)溶于hcl-ea(5ml，4mol/l)，常温搅拌3小时。tlc检测反应完毕，反应混合物直接浓缩用于下一步。
[0416]
步骤b：螺环[氮杂环丁烷-3,2'-茚]-1'(3'h)-一盐酸盐(268mg，1.28mmol，1.4eq.)和[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(408.31mg，912.99μmol，1eq.)溶于20ml的二氧六环中，加入dipea(412.98mg，3.20mmol，556.58μl，3.5eq.)，混合物100℃下搅拌过夜。lc-ms监测反应完毕，浓缩除去溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)得到(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(1'-氧-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(440mg，收率82.53％)。
[0417]
步骤c：(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(1'-氧-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(337mg，577.08μmol，1eq.)溶于5ml的甲醇中，加入nh
3-meoh(7m，2.47ml，30eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并
有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干得到1-(2-氯-9-((2r,3r,4s,5r)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-9h-嘌呤-6-基)螺环[氮芥-3,2'-茚]-1'(3'h)-酮(264mg，收率99.91％)。
[0418]
步骤d：1-(2-氯-9-((2r,3r,4s,5r)-3,4-二羟基-5-(羟甲基)四氢呋喃-2-基)-9h-嘌呤-6-基)螺环[氮芥-3,2'-茚]-1'(3'h)-酮(300mg，655.21μmol，1eq.)溶于30ml的丙酮中，加入p-tsoh(112.83mg，655.21μmol，1eq.)，2,2-二甲基丙烷(1.36g，13.10mmol，1.61ml，20eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去大部分溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(40ml*2)，合并有机相，有机相先用50ml的饱和碳酸氢钠溶液洗涤，再用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)得到1-(2-氯-9-((3ar,4r,6r,6ar)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧醇-4-基)-9h-嘌呤-6-基)螺环[氮芥-3,2'-茚]-1'(3'h)-酮(270mg，收率82.76％)。
[0419]
步骤e：1-(2-氯-9-((3ar,4r,6r,6ar)-6-(羟甲基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧醇-4-基)-9h-嘌呤-6-基)螺环[氮芥-3,2'-茚]-1'(3'h)-酮(270mg，542.25μmol，1eq.)溶于4ml的磷酸三甲酯中，冰浴下缓慢滴加亚甲基双氯化磷(270.89mg，1.08mmol，2eq.)的磷酸三甲酯(4ml)溶液，加毕混合物冰浴下搅拌5小时。lc-ms监测原料有大部分剩余，向反应体系中补加亚甲基双氯化磷(135.4mg，0.54mmol，1eq.)的磷酸三甲酯(2ml)溶液，混合物室温搅拌过夜。次日lc-ms监测原料大约有50％剩余。冰浴下向反应体系中缓慢滴加7ml水，滴毕混合物40℃下搅拌40分钟，然后室温搅拌过夜。次日lc-ms监测中间体已基本消耗完毕，且有产物生成。反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)得到(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(1'-氧-1',3'-二氢螺环[氮芥-3,2'-茚]-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰)甲基)膦酸(化合物19)(60.6mg，收率22.38％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.52(t,j＝20.9hz,2h),3.68(s,2h),4.25-4.43(m,4h),4.47(t,j＝4.7hz,2h),4.74(d,j＝68.8hz,3h),6.04(d,j＝4.7hz,1h),7.49(t,j＝7.5hz,1h),7.61(d,j＝7.7hz,1h),7.74(t,j＝7.5hz,1h),7.80(d,j＝7.6hz,1h),8.44(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 16.84,19.73；
13
c nmr(125mhz,meod)δppm 15.90,26.14,38.96,46.25,56.11,58.97,60.87,64.58,70.07,74.31,83.31,88.34,117.89,123.72,126.42,127.67,134.91,135.65,140.10,150.63,152.95,154.15,206.67；m/z(esi ):616.3(m h).
[0420]
制备化合物20
[0421]
[0422]
步骤a：吲哚-2-酮(1g，7.51mmol，1eq.)溶于8ml的无水thf中，氮气保护下冷却至-78℃。向反应体系缓慢滴加lihmds(1m，在thf中，16.52ml，2.2eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，升温到-50℃搅拌30分钟。反应体系再冷却到-78℃，滴加1,3-二溴丙烷的thf(8ml)溶液，反应体系先升温到室温搅拌1小时，然后回流3小时。tlc检测反应完毕，将反应液倒入60ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相用60ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-85：15)得到螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-2'-酮(345mg，收率26.52％)。
[0423]
步骤b：螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-2'-酮(345mg，1.99mmol，1eq.)溶于20ml的无水thf中，加入lialh4(151.18mg，3.98mmol，2eq.)，混合物70℃下搅拌4小时。tlc检测反应完毕，冰浴下反应体系用15％naoh的水溶液缓慢淬灭，调到ph大约在10左右，然后加入20ml的乙酸乙酯搅拌。加入适量mgso4干燥搅拌20分钟。硅藻土过滤，滤液浓缩得到粗品产物螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉](317mg，收率99％)。
[0424]
步骤c：螺环[环丁烷-1,3'-吲哚啉](317mg，1.99mmol，1.5eq.)和[(2r,3r,4r,5r)3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(593.58mg，1.33mmol，1eq.)溶于25ml的二氧六环中，加入dipea(428.83mg，3.32mmol，577.94μl，2.5eq.)，混合物100℃下反应4小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(40ml*2)，合并有机相，有机相用60ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-65：35)得到(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(586mg，收率77.46％)。
[0425]
步骤d：(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(586mg，1.03mmol，1eq.)溶于5ml的甲醇中，加入nh
3-meoh(7m，4.41ml，30eq.)，混合物室温搅拌过夜。次日lc-ms监测反应还有少量中间体剩余，浓缩除去溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干得到(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，收率98.61％)。
[0426]
步骤e：(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，1.01mmol，1eq.)溶于30ml的丙酮中，冰浴下加入p-tsoh(174.57mg，1.01mmol，1eq.)，2,2-二甲基丙烷(2.11g，20.28mmol，2.49ml，20eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去大部分溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相先用的饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次(50ml*2)，再用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)得到((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(370mg，收率75.42％)。
[0427]
步骤f：((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(370mg，764.55μmol，
1eq.)溶于4ml的磷酸三甲酯中，冰浴下缓慢滴加亚甲基双氯化磷(381.95mg，1.53mmol，2eq.)的磷酸三甲酯(4ml)溶液，混合物冰浴下搅拌5小时。lc-ms监测原料大约50％剩余，向反应体系中补加亚甲基双氯化磷(191mg，0.765mmol，1eq.)的磷酸三甲酯(2ml)溶液，升至室温搅拌2小时。lc-ms监测原料已消耗完毕，向反应体系中缓慢滴加7ml水，40℃下搅拌40分钟，然后室温搅拌过夜。反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)得到(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(螺环[环丁烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物20)(106mg，176.12μmol，收率23.04％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.10-2.22(m,2h),2.38(dd,j＝15.8,9.9hz,2h),2.48(d,j＝8.5hz,2h),2.56(t,j＝20.9hz,2h),4.32(s,1h),4.34-4.39(m,1h),4.40-4.46(m,1h),4.49(t,j＝4.8hz,1h),4.70(t,j＝4.8hz,1h),4.84(s,2h),6.08(d,j＝4.6hz,1h),7.14(t,j＝7.4hz,1h),7.23(t,j＝7.8hz,1h),7.54(d,j＝7.4hz,1h),8.46(d,j＝8.2hz,1h),8.48(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 16.80,19.93；
13
c nmr(125mhz,meod)δ15.43,26.15,35.69,46.27,64.66,70.07,74.33,83.21,88.34,117.15,118.93,122.13,124.01,127.29,139.54,139.80,141.79,150.91,151.93,153.18；m/z(esi ):602.2(m h).
[0428]
制备化合物21
[0429][0430]
步骤a:将4-氰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(2.0g，9.51mmol，1eq.)在thf(30ml)中的溶液冷却至约-78℃，缓慢滴加lihmds(1m，11.89ml，1.25eq.)并搅拌20分钟。然后将1-(溴甲基)-2-碘代苯(3.11g，10.46mmol，1.1eq.)溶于thf(5ml)中缓慢滴加到混合物中。将混合物在-78℃下搅拌3小时。反应体系用饱和氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯和水萃取分液。有机层用盐水冲洗，浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-83：17)进行分离纯化，得到4-氰基-4-[(2-碘苯基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.7g，收率91.25％)。
[0431]
步骤b:将4-氰基-4-[(2-碘苯基)甲基]哌啶-1-羧酸叔丁酯(3.7g，8.68mmol，1eq.)在thf(30ml)中的溶液冷却至约-78℃，缓慢滴加正丁基锂(2.5m，6.94ml，2eq.)，并在此温度下搅拌2小时。反应体系用饱和氯化铵溶液淬灭，并用乙酸乙酯和水萃取分液。有机层用盐水冲洗，浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)进行分离纯化，得到1-氧代吡咯[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.55g，收率59.25％)。
[0432]
步骤c:将1-氧代吡咯[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.55g，5.14mmol，1eq.)溶于甲醇(20ml)，冷却至0℃，将硼氢化钠(486.40mg，12.86mmol，2.5eq.)在0℃下分批次添加到反应液中，搅拌2小时。浓缩去除溶剂，用乙酸乙酯和水萃取分液，有机层用盐水洗涤，并
浓缩有机层得到1-羟基螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(1.54g，收率98.69％)。
[0433]
步骤d:将1-羟基螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(950mg，3.13mmol，1eq.)溶于ch3oh：ch3cooh＝1：4(40ml)中的溶液中，将pd/c(200mg)添加到溶液中，在氢气条件下搅拌混合物，并在室温下搅拌过夜。将反应体系过滤，用甲醇洗涤。滤液浓缩以除去大部分溶剂。然后用饱和碳酸氢钠溶液中和混合物，并用dcm(80ml*2)萃取。有机层用盐水冲洗，浓缩。残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)进行分离纯化，得到螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(190mg，收率21.11％)。
[0434]
步骤e:将螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-羧酸叔丁酯(330mg，1.15mmol，1eq.)溶解于盐酸二氧六环(5ml)中。混合物在室温下搅拌3h。将混合物浓缩并用于下一步。
[0435]
步骤f:向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(466.8mg，1.04mmol，1eq.)在1,4-二氧六环(10ml)中的溶液中添加1,3-二氢螺环[茚-2,4'-哌啶]盐酸盐(257mg，1.15mmol，1.10eq.)和dipea(472.14mg，3.65mmol，636.30μl，3.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌4h。浓缩混合物，残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-55：45)进行分离纯化，得到[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(590mg，收率94.52％)。
[0436]
步骤g:向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(590mg，986.55μmol，1eq.)在甲醇(8ml)中的的溶液中添加氨甲醇(7m，3.52ml，25eq.)。将混合物在室温下搅拌4小时。通过浓缩去除溶剂，用乙酸乙酯和水萃取分液，有机层用盐水洗涤。浓缩有机层得到产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，收率96.65％)。
[0437]
步骤h:向(2r,3r,3r,4s,4s,5r)-2-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(450mg，953.52μmol，1eq.)在丙酮(30ml)中的溶液中添加2,2-二甲氧基丙烷(1.49g，14.30mmol，15eq.)和对甲苯磺酸(164.20mg，953.52μmol，1eq.)。将混合物在室温下搅拌1小时。通过浓缩去除溶剂，用乙酸乙酯(50ml)稀释残余物，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用盐水洗涤，浓缩有机层，残留物用硅胶柱(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)进行分离纯化，得到[(3ar,4r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(380mg，收率77.84％)。
[0438]
步骤i:将[(3ar,4r,4r,6r,6r,6ar)-4-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基-3a,4,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(380mg，742.19μmol，1eq.)在在磷酸三甲酯(4ml)中的溶液冷却至约0℃。将双(二氯磷酰)甲烷(556.16mg，2.23mmol，3eq.)溶于磷酸三甲酯(4ml)并加入到混合物中。将混合物在室温下搅拌5小时。然后向反应混合物中加入水(4ml)。将混合物在室温下搅拌过夜。通过c-18反相硅胶(乙腈：水＝100：0-75：25)纯化反应混合物，得到所需产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-螺环[茚-2,4'-哌啶]-1'-基嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(化合物21)(66.7mg，收率14.01％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 1.72(d,j＝5.0hz,4h),2.50(t,j＝20.9hz,2h),2.89(s,4h),4.23-4.45(m,5h),4.60(t,j＝4.9hz,1h),6.00(d,j＝4.8hz,1h),7.05-7.13(m,2h),7.14-7.22(m,2h),8.29(s,1h)；
31
p nmr
(203mhz,meod)δppm 16.87,20.09；
13
c nmr(126mhz,meod)δppm 26.11,36.57,42.21,44.08,64.73,70.07,74.28,83.17,88.14,118.20,124.42,126.01,137.83,141.79,151.67,153.65；m/z(esi ):630.3(m h).
[0439]
制备化合物22
[0440][0441]
步骤a：吲哚-2-酮(3g，22.53mmol，1eq.)溶于50ml的无水thf中，氮气保护下冷却至-78℃。向反应体系缓慢滴加lihmds(1m在thf中，49.57ml，2.2eq.)，保持内温在-78℃至-60℃范围内，滴毕，升温到-50℃搅拌30分钟。反应体系再冷却到-78℃，滴加1,6-二溴己烷的thf(20ml)溶液，反应体系先升温到室温搅拌1小时，然后回流5小时，再室温搅拌过夜。tlc检测反应完毕，将反应液倒入100ml的饱和氯化铵溶液当中淬灭，用乙酸乙酯萃取两次(50ml*2)，合并有机相，有机相用100ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-80：20)得到粗品产物螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-2'-酮(880mg，收率18.14％)。
[0442]
步骤b：螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-2'-酮粗品(1.06g，4.92mmol，1eq.)溶于20ml的无水thf中，加入lialh4(373.30mg，9.85mmol，2eq.)，混合物70℃下搅拌4小时。tlc检测反应完毕，冰浴下反应体系用15％naoh的水溶液缓慢淬灭,调到ph大约在10左右，然后加入20ml的乙酸乙酯搅拌。加入适量mgso4干燥搅拌20分钟。硅藻土过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到产物螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉](210mg，收率21.19％)。
[0443]
步骤c：螺环[环庚烷-1,3'-吲哚啉](210mg，1.04mmol，1.2eq.)和[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(388.78mg，869.32mmol，1eq.)溶于25ml的二氧六环中，加入dipea(280.88mg，2.17mmol，378.54μl，2.5eq.)，混合物100℃下搅拌4小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去溶剂，残留物加入60ml水，用乙酸乙酯萃取两次(40ml*2)，合并有机相，有机相用60ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)得到(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(310mg，收率58.26％)。
[0444]
步骤d：((2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(310mg，506.48mmol，1eq.)溶于3ml的甲醇中，加入nh
3-meoh(7m，2.17ml，30eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，浓缩除去溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相用
50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干得到(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(246mg，收率99.95％)。
[0445]
步骤e：((2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(246mg，506.21μmol，1eq.)溶于20ml的丙酮中，冰浴下加入p-tsoh(87.17mg，506.21μmol，1eq.)，2,2-二甲基丙烷(1.05g，10.12mmol，1.24ml，20eq.)，混合物室温搅拌3小时。lc-ms监测反应完毕，先浓缩除去大部分溶剂，残留物加入50ml水，用乙酸乙酯萃取两次(30ml*2)，合并有机相，有机相先用的饱和碳酸氢钠溶液洗涤两次(50ml*2)，再用50ml的饱和食盐水洗涤，无水硫酸钠干燥，过滤，滤液浓缩干。粗品通过柱层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)得到((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(213mg，收率79.99％)。
[0446]
步骤f：((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(213mg，404.92μmol，1eq.)溶于3ml的磷酸三甲酯中，冰浴下缓慢滴加亚甲基双氯化磷(303.43mg，1.21mmol，3eq.)的磷酸三甲酯(3ml)溶液，混合物冰浴下搅拌2.5小时。lc-ms监测大部分原料剩余，反应体系升至室温搅拌2小时。lc-ms监测大约65％原料剩余，冰浴下补加亚甲基双氯化磷(101mg，0.403mmol，1eq.)的磷酸三甲酯(1ml)溶液，反应体系升至室温搅拌过夜。次日lc-ms监测少量原料剩余，冰浴下向反应体系中缓慢滴加5ml水，然后室温搅拌过夜。次日lc-ms监测中间体已消耗完毕，反应体系通过c-18反相柱(水：乙腈＝100：0-70：30)纯化得到(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(螺环[环庚烷-1,3'-吲哚]-1'-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物22)(76.6mg，收率29.00％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 1.73-1.96(m,12h),2.56(t,j＝20.9hz,2h),4.30-4.39(m,2h),4.41(s,1h),4.50(t,j＝4.6hz,1h),4.53-4.60(m,2h),4.70(t,j＝4.7hz,1h),6.10(d,j＝4.8hz,1h),7.10(t,j＝7.4hz,1h),7.23(t,j＝7.8hz,1h),7.33(d,j＝7.4hz,1h),8.45(d,j＝8.1hz,1h),8.49(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 16.84,19.95；
13
c nmr(125mhz,meod)δppm 15.90,23.47,25.10,26.16,27.21,29.19,40.18,56.14,62.76,64.68,70.11,74.36,83.27,88.21,117.44,122.19,124.02,126.92,139.53,141.39,143.27,27.21,151.31,152.09,153.25；m/z(esi ):644.3(m h).
[0447]
制备化合物23
[0448][0449]
步骤a：反应瓶中加入环己烷腈(5.0g，45.80mmol，1eq.)和四氢呋喃(50ml)。氮气保护，-78℃下，滴加lda(1m，50.38ml，1.1eq.)，滴加完毕，恢复到室温，搅拌1h。
[0450]
反应体系再次冷却到-78℃，将(2-溴乙基)苯溶液(10.17g，54.96mmol，1.2eq.溶于20ml四氢呋喃)滴加入反应体系。滴加完毕，恢复到室温搅拌过夜。tlc检测反应完毕，
[0451]
饱和氯化铵溶液(100ml)淬灭反应，后用乙酸乙酯萃取2次(60ml*2)，合并有机相。有机层用饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-95：5)得产物1-苯乙基环己烷-1-碳腈(4.0g，收率40.94％)。
[0452]
步骤b：反应瓶中加入1-苯乙基环己烷-1-碳腈(4.0g，18.75mmol，1eq.)和四氢呋喃(80ml)。冰浴冷却，缓慢加入lialh4(2.13g，56.25ml，3eq.)，加入完毕，70℃下搅拌过夜。tlc检测反应完毕，反应体系冰浴冷却，用15％naoh(aq.)缓慢淬灭，调溶液的ph到9左右。然后无水硫酸镁干燥过滤，滤液浓缩得到粗品产物(1-苯乙基环己基)甲胺(4.0g，收率98.15％)。
[0453]
步骤c：反应瓶中加入(1-苯乙基环己基)甲胺(2.0g，9.20mmol，1eq.)和无水二氯甲烷(30ml)。冰浴下加入et3n(1.12g，11.04mmol，1.53ml，1.2eq.)和对甲苯磺酰氯(1.93g，10.12mmol，1.92ml，1.1eq.)，加入完毕，室温搅拌过夜。tlc检测反应完毕，反应体系用二氯甲烷萃取2次(30ml*2)，合并有机相。有机层用饱和食盐水洗1次(60ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到产物4-甲基-n-((1-苯乙基环己基)甲基)苯磺酰胺(2.4g，收率70.20％)。
[0454]
步骤d：反应瓶中加入4-甲基-n-((1-苯乙基环己基)甲基)苯磺酰胺(2.2g，5.92mmol，1eq.)，间氯过氧苯甲酸(1.53g，8.88mmol，1.5eq.)，碘(225.44mg，888.21μmol，0.15eq.)和乙腈与叔丁醇体积比为1:1的溶液(40ml)。n2置换，35℃下搅拌过夜。tlc检测原料反应过半，硫代硫酸钠淬灭反应，再用饱和碳酸氢钠溶液调至溶液ph为8左右，然后乙酸乙酯萃取2次(30ml*2)，合并有机相。有机层用饱和食盐水洗1次(60ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-85：15)得到产物3-苯基-2-对甲苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(0.90g，收率41.13％)。
[0455]
步骤e：反应瓶中加入3-苯基-2-对甲苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(1.0g，2.71mmol，1eq.)，hbr/hoac(153ml，33％wt在hoac中)，40℃下搅拌过夜。tlc检测大部分原料反应完，油泵旋去hbr/hoac，冰浴下用15％naoh(aq)调至溶液ph为9左右，然后乙酸乙酯萃取2次(20ml*2)，合并有机相。有机层用饱和食盐水洗1次(40ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-90：10)得到产物3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(0.25g，收率42.90％)。
[0456]
步骤f：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(370.88mg，829.28μmol，1eq.)、3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷(250mg，1.16mmol，1.4eq.)、1,4-二氧六环(15ml)和dipea(375.12mg，2.90mmol，505.55μl，3.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应4小时。tlc检测原料反应完毕，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(440mg，收率84.74％)。
[0457]
步骤g：反应瓶中加入(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(440mg，702.76μmol，
1eq.)、甲醇(5ml)和氨甲醇(7m，3.01ml，20eq.)。室温条件下搅拌反应3小时。lcms监测反应原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(350mg，收率99.61％)。
[0458]
步骤h：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(350mg，700.02μmol，1eq.)、丙酮(20ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.46g，14.00mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(120.54mg，700.02μmol，1.0eq.)。室温搅拌反应2h。tlc检测原料消耗完毕，冰浴下用低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(30ml)，浓盐水洗一次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(343mg，收率90.73％)。
[0459]
步骤i：反应瓶中加入((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(343mg，635.12μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(4ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(317.29mg，1.27mmol，2.0eq.溶于4ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。lc-ms监测还有一半原料剩余，向反应体系补加双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(158.65mg，0.635mmol，1.0eq.溶于2ml磷酸三甲酯)，室温搅拌过夜。次日lc-ms监测还有很少的原料剩余，冰浴冷却，水(7ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。次日lc-ms监测反应完毕，反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得到产物(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(3-苯基-2-氮杂螺环[4.5]癸烷-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(88.0mg，收率21.01％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 1.47-1.83(m,12h),2.54(t,j＝21.1hz,2h),4.36(dd,j＝55.5,27.1hz,5h),4.63(s,1h),4.75(d,j＝10.8hz,1h),5.37(s,1h),6.02(s,1h),7.24(d,j＝41.5hz,5h),8.49(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 17.09,20.02；
13
c nmr(126mhz,meod)δppm 22.54,23.49,25.03,25.87,26.10,27.15,33.91,35.90,42.78,61.74,64.62,69.99,74.28,83.20,88.30,118.13,125.81,126.25,127.98,138.87,143.63,151.07,153.11,153.67；m/z(esi

):658.3(m h).
[0460]
制备化合物26
[0461]
[0462]
步骤a：反应瓶中加入异色烷-1,3-二酮(1.0g，6.17mmol，1eq.)、甲苯(30ml)和苯甲胺(793.03mg，7.40mmol，1.2eq.)，反应体系110℃下搅拌20h。tlc检测反应完毕，直接浓缩，粗品经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)得产物2-苄基异喹啉-1,3(2h,4h)-二酮(0.9g，收率58.07％)。
[0463]
步骤b：反应瓶中加入2-苄基异喹啉-1,3(2h，4h)-二酮(780mg，3.10mmol，1eq.)和四氢呋喃(8ml)。氮气保护，-78℃下，滴加lihmds(1m，6.83ml，2.2eq.)，滴加完毕，升温到-50℃下反应30min。反应体系再次冷却到-78℃，将1,5-二溴戊烷溶液(713.76mg，3.10mmol，1.0eq.溶于8ml thf)慢慢滴加入反应体系，滴加完毕后恢复到室温搅拌1小时，然后回流过夜。次日tlc检测原料已大部分反应完毕，饱和氯化铵溶液淬灭，用乙酸乙酯萃取2次(40ml*2)，合并有机相。有机层用饱和食盐水洗1次(60ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到产物2'-苄基-1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-1',3'(2'h)-二酮(160mg，收率16.14％)。
[0464]
步骤c：反应瓶中加入alcl3(350.68mg，2.63mmol，4eq.)和无水thf(10ml)。冰浴下加入lialh4(149.71mg，3.94mmol，6eq.)，0℃下搅拌30分钟。然后滴加2'-苄基-1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-1',3'(2'h)-二酮溶液(210mg，657.49μmol，1.0eq.溶于2ml thf)，加入完毕，室温搅拌6小时。tlc检测原料反应完毕，反应体系加10ml thf稀释，冰浴冷却，用15％naoh(aq.)缓慢淬灭，调溶液的ph到10左右。然后无水硫酸镁干燥过滤，滤液浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到产物2'-苄基-2',3'-二氢-1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉](190mg，收率99.16％)。
[0465]
步骤d：反应瓶中加入2'-苄基-2',3'-二氢-1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉](190mg，651.96μmol，1eq.)和甲醇5ml，再加入hcoonh4(61.67mg，977.94μmol，1.5eq.)，pd(oh)2(20mg)。h2置换，60℃下搅拌过夜。tlc检测原料反应完毕，反应体系冷却过滤，滤液浓缩得到粗品产物2',3'-二氢-1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉](120mg，收率91.43％)。
[0466]
步骤e：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(205.07mg，458.54μmol，1eq.)、2',3'-二氢-1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉](120mg，596.11μmol，1.3eq.)、1,4-二氧六环(15ml)和dipea(148.16mg，1.15mmol，199.67μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应2小时。tlc检测原料反应完毕，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-2'(3'h)-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(280mg，收率99.76％)。
[0467]
步骤f：反应瓶中加入(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-2'(3'h)-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(280mg，457.46μmol，1eq.)、甲醇(3ml)和氨甲醇(7m，1.96ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应2小时。lc-ms监测反应原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物((2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-2'(3'h)-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(220mg，收率98.96％)。
[0468]
步骤g：反应瓶中加入((2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-2'(3'h)-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(220mg，452.71μmol，
1eq.)、丙酮(15ml)、2,2-二甲氧基丙烷(942.97mg，9.05mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(77.96mg，452.71μmol，1.0eq.)。室温搅拌反应2h。tlc检测原料消耗完毕，冰浴下用低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(30ml)，浓盐水洗一次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-2'(3'h)-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(200mg，收率83.99％)。
[0469]
步骤h：反应瓶中加入((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-2'(3'h)-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(200mg，380.21μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(2ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(189.94mg，760.42μmol，2.0eq.溶于2ml磷酸三乙酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。lc-ms监测还有大约5％原料剩余，水(3ml)慢慢滴加入反应体系，先在40℃下搅拌40分钟，然后室温搅拌反应过夜。次日lc-ms监测反应完毕，反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得到产物(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(1'h-螺环[环己烷-1,4'-异喹啉]-2'(3'h)-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰)甲基)膦酸(82.0mg，收率33.21％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 1.38(s,1h),1.63(s,4h),1.82(dd,j＝31.4,17.4hz,5h),2.54(t,j＝20.2hz,2h),4.21
–
4.43(m,4h),4.46(s,1h),4.66(s,1h),4.79(s,2h),5.64(s,1h),6.05(s,1h),7.17
–
7.27(m,3h),7.48(d,j＝7.5hz,1h),8.38(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 17.04,19.68；
13
c nmr(126mhz,meod)δppm 21.91,25.01,25.69,26.05,34.91,35.30,38.67,64.73,70.15,74.27,83.20,88.08,125.78,126.56,132.30,138.23,143.85,151.78,153.64；m/z(esi

):644.20(m h).
[0470]
制备化合物29
[0471][0472]
步骤a：向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，2.24mmol，1.0eq.)和2-苯基哌啶(432.65mg，2.68mmol，1.2eq.)在1,4-二氧六环(15ml)的溶液中添加dipea(722.45mg，5.59mmol，2.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌过夜。浓缩混合物并通经硅胶柱纯化分离层析纯化，(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)洗脱，得到[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(2-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，收率78.19％)。
二氧六环(10ml)的溶液中添加dipea(722.45mg，5.59mmol，2.5eq.)。将混合物在100℃下搅拌过夜。浓缩混合物并通经硅胶柱纯化分离层析纯化，(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)洗脱[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，收率78.19％)。
[0480]
步骤b：向[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，1.75mmol，1.0eq.)在甲醇(5ml)中的溶液添加氨甲醇(7m，5ml，20.02eq.)。将混合物在室温下搅拌16小时。通过tlc进行反应监测，完全转化后，浓缩混合物并通经硅胶柱纯化分离层析纯化，(二氯甲烷：甲醇＝100：0-95：5)洗脱，得到所需产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(600mg，收率76.97％)。
[0481]
步骤c：将(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(600mg，1.35mmol，1.0eq.)和一水对甲苯磺酸(307.12mg，1.61mmol，1.2eq.)在丙酮(10ml)中的混合物添加2,2-二甲氧基丙烷(1.40g，13.46mmol，10eq.)。将混合物在室温下搅拌16小时。浓缩去除溶剂，用乙酸乙酯(50ml)稀释残留物，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，然后用盐水洗涤，浓缩有机层，并通经硅胶柱纯化分离层析纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)洗脱，以提供[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a，4，6，6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(550mg，收率84.11％)。
[0482]
步骤d：将[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a，4，6，6a-四氢呋喃并[3,4-d][1,3]二氧代-6-基]甲醇(200mg，411.55μmol，1eq.)在磷酸三甲酯(2ml)中的溶液冷却至0℃，将双(二氯磷酰)甲烷(205.60mg，823.11μmol，2.1eq.)溶于磷酸三甲酯(1ml)并加入到混合物中。将混合物在室温下搅拌5小时。通过lc-ms进行反应监测。混合物用水(5ml)淬灭。反应混合物通过c-18反相硅胶(乙腈：水＝100：0-75：25)纯化，得到所需产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(3-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基-四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(100mg，收率40.24％)。
[0483]1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 1.70-1.72(m,1h),1.89-1.91(m,2h),2.04-2.06(m,1h),2.45-2.54(m,2h),2.77-2.79(m,1h),4.24-4.41(m,4h),4.59-4.61(m,1h),6.00-6.02(m,1h),7.21-7.31(m,5h),8.27(s,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 25.01,25.46,26.05,27.11,31.58,42.90,64.76,70.07,75.25,83.06,88.12,118.30,126.33,126.83,128.19,137.84,143.19,151.72,153.55,153.70；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.70,20.04；m/z(esi-):602.0(m-h).
[0484]
制备化合物31
[0485][0486]
步骤a：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)
四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1g，2.24mmol，1eq.)、4-苯基哌啶(432.65mg，2.68mmol，1.2eq.)、1,4-二氧六环(15ml)和dipea(722.45mg，5.59mmol，973.66μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1.1g，收率86.0％)。
[0487]
步骤b：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(1.1g，1.81mmol，1.1eq.)、甲醇(7ml)和氨甲醇(7m，54.30mmol，8.24ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(50ml)和乙酸乙酯(80ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(50ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(810mg，收率94.4％)。
[0488]
步骤c：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(810mg，1.82mmol，1eq.)、丙酮(10ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.89g，18.17mmol，10eq.)和一水对甲苯磺酸(380.06mg，2.0mmol，1.1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(50ml)，乙酸乙酯(50ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(40ml)，浓盐水洗一次(40ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(710mg，收率80.4％)。
[0489]
步骤d：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(300mg，617.33μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(3ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(308.40mg，1.23mmol，2.0eq.溶于2ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应6小时。水(5ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(4-苯基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(189mg，收率50.1％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 1.74(q,j＝12.1hz,2h),1.96(d,j＝12.0hz,2h),2.49(t,j＝21.0hz,2h),2.91(t,j＝12.1hz,1h),3.18(s,2h),4.24(d,j＝3.3hz,1h),4.27-4.39(m,2h),4.42(t,j＝4.9hz,1h),4.60(t,j＝5.0hz,1h),6.00(d,j＝4.8hz,1h),7.16(t,j＝7.1hz,1h),7.24(dt,j＝8.1,7.3hz,4h),8.29(s,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 26.40,27.46,28.52,34.55,43.85,66.06,71.37,75.67,84.44,89.63,119.20,127.35,127.78,129.51,139.26,146.78,152.93,154.78,155.16；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.68,20.03；m/z(esi

):604.0(m h).
[0490]
制备化合物32
[0491][0492]
步骤a：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、4-环己基哌啶盐酸盐(250.57mg，1.23mmol，1.1eq.)、1,4-二氧六环(20ml)和dipea(505.72mg，3.91mmol，681.56μl，3.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(580mg，收率89.7％)。
[0493]
步骤b：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(580mg，1.00mmol，1eq.)、甲醇(8ml)和氨甲醇(7m，4.3ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(50ml)和乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(50ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(420mg，收率92.6％)。
[0494]
步骤c：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(420mg，923.31μmol，1eq.)、丙酮(25ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.45g，13.94mmol，15eq.)和一水对甲苯磺酸(184.00mg，929.31μmol，1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-95：5)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(401mg，收率87.7％)。
[0495]
步骤d：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(400mg，812.99μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(6ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(406.15mg，1.63mmol，2.0eq.溶于3ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。水(5ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(4-环己基-1-哌啶基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(243mg，收率48.6％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 0.98(dd,j＝21.9,11.8hz,2h),1.07-1.34(m,6h),1.42(s,1h),1.65(d,j＝11.6hz,1h),1.74(d,j＝10.7hz,4h),1.81(s,2h),2.50(t,j＝21.0hz,2h),4.23(d,j＝3.4hz,1h),4.27-4.38(m,2h),4.41(s,1h),4.58(s,1h),5.98(d,j＝4.8hz,1h),8.28(s,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 26.45,27.50,27.68,27.77,28.56,30.71,31.19,43.01,43.92,66.06,71.41,75.68,84.46,89.59,
119.27,139.14,152.92,154.71,155.15；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.78,19.91；m/z(esi

):610.39(m ).
[0496]
制备化合物33
[0497][0498]
步骤a：反应瓶中加入2,2-二苯乙腈(500mg，2.59mmol，1eq.)和四氢呋喃(5ml)。氮气保护，-78℃下，滴加lda(2m，1.55ml，1.2eq.)，滴加完毕，搅拌20分钟。将2-溴乙酸乙酯溶液(518.52mg，3.10mmol，1.2eq.溶于2ml四氢呋喃)滴加入反应体系。滴加完毕，回复至室温搅拌反应5小时。稀盐酸(1m，10ml)淬灭反应后，加入乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-75：25)得产物3-氰基-3,3-二苯基丙酸乙酯(640mg，收率88.5％)。
[0499]
步骤b：反应瓶中加入3-氰基-3,3-二苯基丙酸乙酯(640mg，2.29mmol，1eq.)、乙醇(32ml)和二氯化钴(594.97mg，4.58mmol，2eq.)。冰水浴氮气保护下，分批加入硼氢化钠，直至全部加入(866.75mg，22.91mmol，10eq.)。回复至室温搅拌反应过夜。冰水浴下，稀盐酸(1m，10ml)淬灭反应，水相乙酸乙酯萃取2次(25ml*2)，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-95：5)得产物4,4-二苯基吡咯烷酮(360mg，收率66.2％)。
[0500]
步骤c：反应瓶中加入4,4-二苯基吡咯烷酮(320mg，1.35mmol，1eq.)和四氢呋喃(8ml)。将氢化铝锂(102.35mg，2.70mmol，2.0eq.)加入反应体系，70℃搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕。冰水浴下，缓慢滴加水(1ml)淬灭反应，后滴加15％氢氧化钠水溶液(2ml)，水(1ml)，加入乙酸乙酯(20ml)，过滤除去固体，母液浓缩后经硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-85：15)得产物3,3-二苯基吡咯烷(200mg，收率66.4％)。
[0501]
步骤d：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(380mg，849.68μmol，1eq.)、3,3-二苯基吡咯烷(208.72mg，934.65μmol，1.1eq.)、1,4-二氧六环(10ml)和dipea(274.53mg，2.12mmol，369.99μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应5小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，收率74.4％)。
[0502]
步骤e：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，632.41μmol，1eq.)、甲醇(3ml)和氨甲醇(7m，2.71ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应5小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(30ml)和乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(315mg，收率98.1％)。
[0503]
步骤f：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(315mg，620.12μmol，1eq.)、丙酮(15ml)、2,2-二甲氧基丙烷(968.75mg，9.30mmol，15eq.)和一水对甲苯磺酸(122.78mg，620.12μmol，1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(20ml)，乙酸乙酯(20ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(20ml)，浓盐水洗一次(20ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(320mg，收率94.2％)。
[0504]
步骤g：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(320mg，583.91μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(6ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(291.70mg，1.17mmol，2.0eq.溶于3ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。水(6ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应60分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基吡咯烷-1-基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(235mg，收率59.9％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm2.50(td,j＝20.9,13.1hz,2h),2.69(t,j＝6.8hz,1h),2.77(d,j＝6.8hz,1h),3.63(d,j＝7.1hz,1h),4.00(d,j＝6.1hz,1h),4.19-4.47(m,5h),4.56-4.65(m,1h),4.79(q,j＝12.2hz,1h),6.00(dd,j＝8.4,4.7hz,1h),7.14(s,2h),7.20-7.35(m,8h),8.40(d,j＝39.7hz,1h)；13c nmr(125mhz,cd3od)δppm 26.46,27.52,28.57,36.54,38.44,47.49,53.71,55.80,58.02,59.05,66.01,71.41,75.74,84.61,89.72,119.03,119.24,127.63,127.83,129.59,140.34,146.49,152.27,153.87,154.00,155.50,155.58；31p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.89,19.78；m/z(esi ):666.25(m h).
[0505]
制备化合物34
[0506][0507]
步骤a：反应瓶中加入溴苯(6g，38.21mmol，4.02ml，1eq.)和四氢呋喃(20ml)。氮气保护，-78℃下，滴加正丁基锂(2.5m，15.29ml，1eq.)，滴加完毕，搅拌10分钟。将3-氧代氮杂丁烷-1-羧酸叔丁酯溶液(3.27g，19.11mmol，0.5eq.溶于15ml四氢呋喃)滴加入反应体系。滴加完毕，回复至室温搅拌反应过夜。0℃条件下，水(25ml)淬灭反应后，加入乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)得产物3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.9g，收率40.9％)。
[0508]
步骤b：反应瓶中加入甲苯(739.16mg，8.02mmol，853.53μl，2.0eq.)，三氯化铝(1.60g，12.03mmol，3.0eq.)。冰水浴冷却至0℃下，将3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯溶液(1g，4.01mmol，1eq.溶于731.82μl甲苯)滴加入反应体系。滴加完毕，0℃条件下搅拌反应2小时，后加冰水(25ml)淬灭反应并搅拌0.5小时。先加入饱和碳酸氢钠溶液，后加入氨水，调节ph至11。加入乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后，残留物加入微量乙酸乙酯。将草酸溶液(361.12mg，4.01mmol，1eq.溶于1.5ml乙酸乙酯)慢慢滴加残留物体系，大量固体形成，过滤得产物3-苯基-3-(对甲苯基)草酸氮杂环丁烷(1.05g，收率83.5％)。
[0509]
步骤c：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、3-苯基-3-(对甲苯基)草酸氮杂环丁烷(385.35mg，1.23mmol，1.1eq.)、1,4-二氧六环(20ml)和dipea(577.96mg，4.47mmol，778.93μl，4eq.)。搅拌条件下，100℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，收率56.6％)。
[0510]
步骤d：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(401mg，632.41μmol，1eq.)、甲醇(5ml)和氨甲醇(7m，2.71ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应4小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(70ml)和乙酸乙酯(100ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(320mg，收率99.6％)。
[0511]
步骤e：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(320mg，629.96μmol，1eq.)、丙酮(25ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.31g，12.60mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(108.48mg，629.96μmol，1eq.)。室温搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(30ml)，浓盐水洗一次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(345mg，收率99.9％)。
[0512]
步骤f：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(345mg，629.53μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(4ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(314.49mg，1.26mmol，2.0eq.溶于4ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。水(5ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应40分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-[3-苯基-3-(对甲苯基)氮杂环丁烷-1-基]嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(259mg，收率60.0％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 2.23(s,3h),2.55(t,j＝20.8hz,2h),4.23(s,1h),4.26-4.38(m,2h),4.41(t,j＝4.6hz,1h),4.61(t,j＝4.6hz,1h),4.81(s,2h),5.14(s,2h),5.97(d,j＝4.5hz,1h),7.06(d,j＝7.9hz,2h),7.14(dd,j＝18.7,7.2hz,3h),7.19-7.31(m,4h),8.50(s,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 21.04,26.50,27.55,28.60,65.09,65.92,66.99,71.29,75.75,84.71,89.87,118.13,127.37,127.45,127.70,129.67,130.26,137.54,141.28,144.11,147.29,151.67,155.08,155.75；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 17.11,19.54；m/z(esi

):666.45(m h).
[0513]
制备化合物35
[0514][0515]
步骤a：反应瓶中加入溴苯(6g，38.21mmol，4.02ml，1eq.)和四氢呋喃(20ml)。氮气保护，-78℃下，滴加正丁基锂(2.5m，15.29ml，1eq.)，滴加完毕，搅拌10分钟。将3-氧代氮杂丁烷-1-羧酸叔丁酯溶液(3.27g，19.11mmol，0.5eq.溶于15ml四氢呋喃)滴加入反应体系。
滴加完毕，回复至室温搅拌反应过夜。0℃条件下，水(25ml)淬灭反应后，加入乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-70：30)得产物3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯(3.9g，收率40.9％)。
[0516]
步骤b：反应瓶中加入苯(313.32mg，4.01mmol，358.49μl，2.0eq.)，三氯化铝(802.27mg，6.02mmol，3.0eq.)。冰水浴冷却至0℃下，将3-羟基-3-苯基-氮杂环丁烷-1-羧酸叔丁酯溶液(500mg，2.01mmol，1eq.溶于6ml甲苯)滴加入反应体系。滴加完毕，0℃条件下搅拌反应2小时，后加冰水(25ml)淬灭反应并搅拌0.5小时。先加入饱和碳酸氢钠溶液，后加入氨水，调节ph至11。加入乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层。有机层饱和食盐水洗1次(70ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后，残留物加入微量乙酸乙酯。将草酸溶液(180.56mg，2.01mmol，1eq.溶于8ml乙酸乙酯)慢慢滴加残留物体系，大量固体形成，过滤得产物草酸3,3-二苯氮杂环丁胺(500mg，收率83.3％)。
[0517]
步骤c：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(500mg，1.12mmol，1eq.)、草酸3,3-二苯氮杂环丁胺(401.57mg，1.34mmol，1.2eq.)、1,4-二氧六环(25ml)和dipea(577.96mg，4.47mmol，778.93μl，4.0eq.)。搅拌条件下，100℃反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，收率43.3％)。
[0518]
步骤d：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(300mg，483.83μmol，1eq.)、甲醇(4ml)和氨甲醇(7m，2.07ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应3小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(30ml)和乙酸乙酯(50ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂丁-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(230mg，收率96.2％)。
[0519]
步骤e：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂丁-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(230mg，465.64μmol，1eq.))、丙酮(25ml)、2,2-二甲氧基丙烷(727.43mg，6.98mmol，15eq.)和一水对甲苯磺酸(80.18mg，465.64μmol，1eq.)。室温搅拌反应2小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(30ml)，浓盐水洗一次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(220mg，收率88.5％)
[0520]
步骤f：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-6-基]甲醇(220mg，411.98μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(4ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(205.81mg，823.96μmol，2.0eq.溶于2ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0
℃条件下搅拌反应4小时。水(5ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应30分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得产物[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(3,3-二苯基氮杂环丁烷-1-基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(150.4mg，收率54.9％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 2.50(t,j＝20.9hz,2h),4.24(s,1h),4.30(d,j＝6.1hz,1h),4.33-4.38(m,1h),4.42(t,j＝3.9hz,1h),4.62(t,j＝4.1hz,1h),4.89(s,2h),5.22(s,2h),5.89-6.03(m,1h),7.23(dt,j＝8.1,4.0hz,2h),7.34(dd,j＝8.7,5.3hz,8h),8.41(s,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 26.47,27.53,28.58,65.97,71.39,75.66,84.63,89.78,119.17,127.47,127.84,129.77,141.49,147.26,152.00,155.54,155.60；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.79,19.80；m/z(esi

):652.3(m h).
[0521]
制备化合物36
[0522][0523]
步骤a：封管中依次加入3,4-二苯基呋喃-2,5-二酮(4.5g，17.98mmol，1eq.)，苄胺(3.85g，35.96mmol，2eq.)，苯酚(3.38g，35.96mmol，2eq.)，dipea(18.95g，143.86mmol，25.06ml，8eq.)和4a分子筛(500mg)。反应液100℃下搅拌6h。tlc检测原料反应完毕，反应液冷却，用2n hcl溶液调反应液的ph到5左右，然后乙酸乙酯萃取2次(60ml*2)，合并有机相。有机层用饱和食盐水洗1次(100ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到纯品产物1-苄基-3,4-二苯基-1h-吡咯-2,5-二酮(2.7g)和粗品产物4.0g。粗品用(石油醚：乙酸乙酯＝50:1，40ml)溶液打浆16小时，次日有固体析出，过滤，滤饼合并得产物1-苄基-3,4-二苯基-1h-吡咯-2,5-二酮(5.85g，收率95.86％)。
[0524]
步骤b：反应瓶中加入1-苄基-3,4-二苯基-1h-吡咯-2,5-二酮(3.15g，9.28mmol，1eq.)和甲醇(60ml)，再加入二氧化铂(300mg)，h2置换，室温搅拌过夜。tlc检测反应完毕，反应体系过滤，滤液浓缩直接得到产物1-苄基-3,4-二苯基吡咯烷-2,5-二酮(3.0g，收率94.68％)。
[0525]
步骤c：反应瓶中加入alcl3(781.13mg，5.86mmol，4eq.)和无水thf(15ml)。冰浴下加入lialh4(333.48mg，8.79mmol，6eq.)，0℃下搅拌30分钟。然后滴加1-苄基-3,4-二苯基吡咯烷-2,5-二酮溶液(500mg，1.46mmol，1.0eq.溶于5ml thf)，加入完毕，室温搅拌过夜。tlc检测原料反应完毕，反应体系加10ml thf稀释，冰浴冷却，用15％naoh(aq)缓慢淬灭，调溶液的ph到10左右。然后无水硫酸镁干燥过滤，滤液浓缩后得到490mg粗品产物1-苄基-3,4-二苯基吡咯烷直接用于下一步。
[0526]
步骤d：反应瓶中加入1-苄基-3,4-二苯基吡咯烷(490mg，1.56mmol，1eq.)和甲醇
15ml，再加入hcoonh4(147.87mg，2.34mmol，1.5eq.)，pd(oh)2(44mg)。h2置换，60℃下搅拌过夜。tlc检测原料反应完毕，反应体系冷却过滤，滤液浓缩得到350mg粗品产物3,4-二苯基吡咯烷直接用于下一步。
[0527]
步骤e：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(400.54mg，895.61μmol，1eq.)、3,4-二苯基吡咯烷(350mg，1.57mmol，1.75eq.)、1,4-二氧六环(20ml)和dipea(405.12mg，3.13mmol，545.98μl，3.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应4小时。lcms检测原料反应完毕，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(490mg，收率86.29％)。
[0528]
步骤f：反应瓶中加入(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(490mg，772.78μmol，1eq.)、甲醇(6ml)和氨甲醇(7m，3.31ml，30eq.)。室温条件下搅拌过夜。lc-ms监测反应原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(20ml)和乙酸乙酯(30ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(364mg，收率92.73％)。
[0529]
步骤h：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(364mg，716.58μmol，1eq.)、丙酮(30ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.49g，14.33mmol，20eq.)和一水对甲苯磺酸(123.40mg，716.58μmol，1.0eq.)。室温搅拌反应2h。tlc检测原料消耗完毕，冰浴下用低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(30ml)，浓盐水洗一次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(280mg，收率71.30％)。
[0530]
步骤i：反应瓶中加入((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二氧基-4-基)甲醇(280mg，635.12μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(4ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(255.24mg，1.02mmol，2.0eq.溶于4ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。lc-ms监测还有大半原料剩余，向反应体系补加双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(127.62mg，0.51mmol，1.0eq.溶于2ml磷酸三甲酯)，0℃条件下继续搅拌反应3小时。lc-ms监测还有很少的原料剩余，冰浴冷却，水(7ml)慢慢滴加入反应体系，室温搅拌反应过夜。次日lc-ms监测反应完毕，反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得到产物(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(3,4-二苯基吡咯烷-1-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基)甲氧基(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(75.0mg，收率22.10％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.49(t,j＝20.9hz,2h),3.77(m,3h),4.15(s,1h),4.23
–
4.38(m,4h),4.45(s,2h),4.65(s,1h),6.05(s,1h),7.22(m,2h),7.26
–
7.37(m,8h),8.40(s,1h)；
31
p nmr(203mhz,meod)δppm 14.57,18.66；
13
c nmr(126mhz,meod)δppm 27.99,48.88,50.88,
55.32,56.96,65.01,70.68,74.09,83.76,119.08,127.38,127.45,128.26,129.01,139.55,139.64,139.71,151.71,153.02,153.53；m/z(esi

):666.34(m h).
[0531]
制备化合物38
[0532][0533]
步骤a：反应瓶中加入3-苯基-1h-吲哚(200mg，1.03mmol，1eq.)、三氟乙酸(2ml)和三乙基硅烷(240.69mg，2.07mmol，330.62μl，2.0eq.)。50℃下，搅拌反应过夜。冰水浴条件下加入碳酸氢钠溶液调节ph至9。加入乙酸乙酯(25ml)萃取，有机层无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-80：20)得产物3-苯基吲哚啉(110mg，收率54.4％)。
[0534]
步骤b：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(229.04mg，512.14μmol，1eq.)、3-苯基吲哚啉(100mg，512.14μmol，1eq.)、1,4-二氧六环(15ml)和dipea(165.47mg，1.28mmol，223.01μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应4小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基吲哚-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(150mg，收率48.3％)。
[0535]
步骤c：反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-[2-氯-6-(3-苯基吲哚-1-基)嘌呤-9-基]四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(150mg，247.51μmol，1eq.)、甲醇(3ml)和氨甲醇(7m，1.06ml，30eq.)。室温条件下搅拌反应过夜。tlc检测反应直到原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(40ml)和乙酸乙酯(40ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(40ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物((2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3-苯基吲哚-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(105mg，收率88.4％)。
[0536]
步骤d：反应瓶中加入((2r,3r,4s,5r)-2-[2-氯-6-(3-苯基吲哚-1-基)嘌呤-9-基]-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(105mg，218.79μmol，1eq.)、丙酮(15ml)、2,2-二甲氧基丙烷(227.86mg，2.19mmol，10eq.)和一水对甲苯磺酸(37.68mg，218.79μmol，1eq.)。室温搅拌反应2小时。tlc检测反应直到原料消耗完毕，低温浓缩除去部分丙酮，加入水(30ml)，乙酸乙酯(30ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(30ml)，浓盐水洗一次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-60：40)，得产物[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3-苯基吲哚-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(100mg，收率87.9％)。
[0537]
步骤e：反应瓶中加入[(3ar,4r,6r,6ar)-4-[2-氯-6-(3-苯基吲哚-1-基)嘌呤-9-基]-2,2-二甲基-3a,4,6,6a-四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-6-基]甲醇(130mg，250.01μmol，1eq.)和磷酸三甲酯(3ml)。在冰水浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(124.90mg，500.02μmol，2.0eq.溶于3ml磷酸三甲酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。水(3ml)慢慢滴加入反应体系，升温至40℃搅拌反应40分钟，回复至室温搅拌反应过夜。反应体系直接注射入反相c-18硅胶柱分离纯化(水：乙腈＝100：0-75：25)，冻干得
产物[(2r,3s,4r,5r)-5-[2-氯-6-(3-苯基吲哚-1-基)嘌呤-9-基]-3,4-二羟基四氢呋喃-2-基]甲氧基羟基磷酰基]甲基膦酸(89mg，收率54.1％)。1h nmr(500mhz,cd3od)δppm 2.27-2.59(m,2h),4.25(s,1h),4.30(dd,j＝21.5,15.0hz,2h),4.43(dt,j＝9.6,4.7hz,1h),4.56-4.70(m,3h),5.15(t,j＝10.7hz,1h),6.03(d,j＝4.6hz,1h),6.98(dt,j＝13.7,7.1hz,2h),7.13-7.34(m,6h),8.36(s,1h),8.56(d,j＝8.2hz,1h)；
13
c nmr(125mhz,cd3od)δppm 26.41,27.47,28.53,47.79,60.91,66.02,71.41,75.73,84.58,89.65,118.82,120.37,125.16,126.19,128.17,128.81,129.90,137.19,140.94,144.32,144.70,144.77,152.34,153.36,154.54；
31
p nmr(203mhz,cd3od)δppm 16.79,19.87；m/z(esi

):638.3(m h).
[0538]
制备化合物39
[0539][0540]
步骤a：反应瓶中加入异吲哚-1,3-二酮(1g，6.80mmol，1eq.)和二氯甲烷(30ml)。氮气保护，0℃下，滴加phmgbr(1m，20.39ml，3eq.)，滴加完毕，0℃下反应4小时。tlc检测原料反应完毕，加水(30ml)淬灭，析出的固体过滤，滤液静置分层，有机层用饱和食盐水洗1次(30ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后经硅胶柱纯化分离(二氯甲烷：甲醇＝100：0-95：5)得到产物3-羟基-3-苯基异吲哚-1-酮(1.3g，收率84.92％)。
[0541]
步骤b：反应瓶中加入3-羟基-3-苯基异吲哚-1-酮(980mg，4.35mmol，1eq.)和二氯甲烷(15ml)。氮气保护，-40℃下，滴加三氟化硼乙醚溶液(3ml)和三乙基硅烷(1.52g，13.05mmol，2.08ml，3eq.)，滴加完毕，室温搅拌反应16小时。tlc检测原料反应完毕，加水(20ml)、饱和氯化铵溶液(20ml)淬灭，再加入dcm(30ml)。析出的固体过滤，固体通过核磁检测是很干净的产物。滤液静置分层，有机层用饱和食盐水洗1次(50ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，有机层浓缩后合并固体得到产物3-苯基异吲哚-1-酮(900mg，收率98.86％)。
[0542]
步骤c：反应瓶中加入3-苯基异吲哚-1-酮(700mg，3.35mmol，1eq.)和无水thf(10ml)。向反应体系加入bh
3-thf(1m，30.11ml，9eq.)，70℃下搅拌16小时。tlc检测原料反应完毕，反应体系冷却，加入甲醇(3ml)淬灭，浓缩后经硅胶柱纯化分离(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-90：10)得到产物1-青霉异喹啉(185mg，收率28.32％)。
[0543]
步骤d:反应瓶中加入[(2r,3r,4r,5r)-3,4-二乙酰氧基-5-(2,6-二氯嘌呤-9-基)四氢呋喃-2-基]乙酸甲酯(353.11mg，789.55μmol，1eq.)、1-青霉异喹啉(185mg，947.46μ
mol，1.2eq.)、1,4-二氧六环(15ml)和dipea(255.10mg，1.97mmol，343.80μl，2.5eq.)。搅拌条件下，100℃反应16小时。tlc检测原料消耗完毕，反应液冷却，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚-2-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(360mg，收率75.24％)。
[0544]
步骤e：反应瓶中加入(2r,3r,4r,5r)-2-(乙酰氧基甲基)-5-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚-2-基)-9h-嘌呤-9-基)四氢呋喃-3,4-二乙酸酯(420mg，693.04μmol，1eq.)、甲醇(4ml)和氨甲醇(7m，2.97ml，30eq.)。室温条件下搅拌过夜。lc-ms监测反应原料消耗完毕，浓缩除去大部分甲醇，加入水(40ml)和乙酸乙酯(40ml)，萃洗分层，有机层饱和食盐水洗1次(40ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，浓缩得产物(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(332mg，收率99.82％)。
[0545]
步骤f：反应瓶中加入(2r,3r,4s,5r)-2-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-5-(羟甲基)四氢呋喃-3,4-二醇(332mg，691.79μmol，1eq.)、丙酮(20ml)、2,2-二甲氧基丙烷(1.44g，13.84mmol，1.70ml，20eq.)和一水对甲苯磺酸(131.58mg，691.79μmol，1.0eq.)。室温搅拌反应2小时。lc-ms检测原料消耗完毕，冰浴下用低温浓缩除去部分丙酮，加入水(40ml)，乙酸乙酯(40ml)萃洗分层，有机层碳酸氢钠水溶液洗一次(50ml)，浓盐水洗一次(50ml)，分出有机层，无水硫酸钠干燥过滤，经浓缩后，残留物用硅胶柱分离纯化(石油醚：乙酸乙酯＝100：0-50：50)，得产物((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(197mg，收率54.77％)。
[0546]
步骤g：反应瓶中加入((3ar,4r,6r,6ar)-6-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-2,2-二甲基四氢呋喃[3,4-d][1,3]二恶英-4-基)甲醇(197mg，378.86μmol，1eq.)和磷酸三乙酯(2ml)。在冰浴条件下，将双(二氯磷酰)甲烷磷酸三甲酯溶液(208.19mg，833.50μmol，2.2eq.溶于2ml磷酸三乙酯)慢慢滴加入反应体系。0℃条件下搅拌反应5小时。lc-ms监测还有很少量原料剩余，水(3ml)慢慢滴加入反应体系，先在40℃下搅拌40分钟，然后室温搅拌反应过夜。次日lc-ms监测反应完毕，反应体系通过c-18反相柱纯化(水：乙腈＝100：0-70：30)，冻干得到产(((((2r,3s,4r,5r)-5-(2-氯-6-(1-苯基异吲哚-2-基)-9h-嘌呤-9-基)-3,4-二羟四氢呋喃-2-基)甲氧基)(羟基)磷酰基)甲基)膦酸(化合物39)(14mg，收率11.51％)。1h nmr(500mhz,meod)δppm 2.55(t,j＝20.6hz,2h),4.20
–
4.51(m,4h),7.37
–
7.12(m,8h),4.62(t,j＝30.4hz,1h),5.27(d,j＝16.8hz,1h),5.63(t,j＝16.7hz,1h),6.00(d,j＝23.5hz,1h),6.50(s,1h),7.12
–
7.37(m,8h),8.32(dd,j＝138.5,15.4hz,1h)；m/z(esi

):638.0(m h).
[0547]
对比例：
[0548]
化合物a
[0549][0550]
ab680，合成步骤参照wo2019173682。
[0551]
化合物b
[0552][0553]
合成步骤参照cn110885352。
[0554]
生物学测定
[0555]
1.化合物对cd 73蛋白的酶活性抑制实验
[0556]
化合物溶液：用dmso溶解化合物，配制化合物浓度为10mm的储存液备用。设置10个浓度点，以10mm为起始浓度，用dmso进行5倍梯度稀释，得到相应所需浓度。
[0557]
检测缓冲液(1x)：20mm tris，25mm nacl，1mm mgcl2，ph 7.5，0.005％tween-20(现配现用)。
[0558]
先向每个孔中注入0.25μl化合物溶液或dmso(空白对照)。在检测缓冲液中稀释重组人5'-核苷酸酶(hcd73)至1nm，将25μl该浓度的hcd73溶液分别加入孔板的相应孔中，混匀后盖上封板膜，在1000rpm下离心30秒后，室温孵育15分钟。在assay buffer中将底物amp稀释至60μm，将25μl的amp加入所有反应孔中，混匀后盖上封板膜，将孔板于离心机中以1000rmp离心30秒，然后在37℃下孵育20分钟。
[0559]
在spark酶标仪上读取波长635nm处的吸光度信号。将含有cd73酶、底物amp和dmso(无化合物)的反应孔用作阳性对照，将含有底物amp和dmso但不含cd73酶的反应孔用作阴性对照。参见picolorlocktm gold phosphate detection system(abcam)检测试剂盒及说明书。通过使用graphpad prism中的程序绘制化合物浓度的对数与抑制百分比来计算ic50值。化合物1的cd73抑制率曲线见图1，化合物a的cd73抑制率曲线见图2。部分化合物的生物活性数据详见表2。
[0560]
表2化合物ic
50
值
[0561]
名称ic
50
(nm)化合物a2.02化合物b1.08化合物10.47化合物71.80化合物80.75
化合物90.73化合物120.40化合物131.50化合物201.29化合物211.42化合物331.76化合物351.38化合物361.86化合物381.92
[0562]
2.化合物对t细胞活性的影响检测
[0563]
用无菌pbs稀释cd3抗体至1ug/ml，将96孔组织培养板涂上50μl稀释抗体cd3，以1000rpm离心1min，封板，4℃孵育过夜，进行抗体交联。第2天用100μl无菌pbs清洗板2次，在96孔板上用生长介质(x-vivo 15 1％pen/strep 1％谷氨酰胺)重新悬浮cd4 t或者cd8 t细胞，调整细胞密度至0.5*106细胞/ml，100μl/孔接种。用生长介质将cd28抗体稀释为8倍工作浓度(8μg/ml)，在细胞板上加入25μl cd28抗体，最终浓度1μg/ml。在5％co2培养箱中孵育60分钟，将25μl化合物(8x，用生长介质稀释)加入细胞板，在5％co2培养箱中孵育60分钟。将25μl amp和25μl ehna(8倍，用生长介质稀释)加入细胞板。在5％co2培养箱中孵育72小时。1000rpm离心5min，每孔吸取150μl细胞培养液至96孔板，elisa检测ifn-γ表达。去除剩余上清，加入100μl新鲜生长培养基(x-vivo 15 1％pen/strep 1％谷氨酰胺)，每孔加入50μl celltiter-glo溶液，在摇床上室温孵育10分钟。将100μl溶液转入96孔白板，用酶标仪读出celltiter-glo数据。部分化合物的生物活性数据详见表3。
[0564]
表3化合物ec
50
值
[0565][0566]
ctg:celltiter-glo的简写，基于atp生物发光检测活细胞活性。
[0567]
ifn-γ:γ干扰素,在抗原特异性免疫过程中，由cd4 th1和cd8细胞毒性t细胞分泌，通过ifn-γ的分泌情况来反映t细胞的活性。
[0568]
本发明公开的化合物其药学上可接受的盐或酯或立体异构体或其组合物，具有优异的生物活性性能，部分化合物的ic
50
值相对化合物a甚至降低了75％左右，对cd73酶活性具有很强的抑制作用。
[0569]
3.化合物的药代动力学评价
[0570]
在将化合物单次静脉注射(1mg/kg)施用至禁食的icr雄性小鼠后，在施用后的0.08h、0.25h、0.5h、1h、2h、4h、6h、8h和24h时收集血液样品。通过离心(8000rpm)来分离血浆，并且将其冷冻(-80℃)直至用于分析。通过hplc-ms/ms来确定小鼠血浆中化合物的浓度。将血浆分配至含内标和甲醇或乙腈的适当的管中。使管剧烈震荡3分钟，以实现脱蛋白，
随后以8000rmp离心5分钟。将上清液转移至自动采样瓶中，并且注射入色谱分析系统中。利用winmonlin 6.3软件来计算药代动力学参数，如auc
0-t
，c0，t
max
，t
1/2
，mrt，cl和vd。部分化合物的药代参数详见表3。
[0571]
表4化合物在小鼠体内的药代参数
[0572][0573]
auc(0-t)：药时曲线下面积(0-t)，血药浓度曲线对时间轴所包围的面积。
[0574]
auc(0-∞)：药时曲线下面积(0-∞)，血药浓度曲线对时间轴所包围的面积。
[0575]
t
1/2
：体内清除半衰期，半衰期数值越大，表示药物消除或分布过程越慢。
[0576]
cl：清除率，单位时间内从体内清除的药物表观分布容积数。
[0577]
c0：零时血药浓度。
[0578]
本技术提供的化合物或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体或其组合物，至少具有以下优点中的一种：优异的生物活性、较高的血浆药物暴露量和/或较长的体内清除半衰期。本发明公开的化合物或其药学上可接受的盐或酯或立体异构体或其组合物，对cd73酶活性具有很强的抑制作用，可广泛应用于制备治疗至少部分由cd73介导的癌症或肿瘤、免疫相关疾病及紊乱、代谢性疾病的药物。
[0579]
尽管参照本发明的实施例详细描述了本发明，但提供这些实施例是为了说明而不是限制本发明。根据本发明原理能够得到的其它实施例均属于本发明权利要求所界定的范畴。