一种利用残次果制备反刍发酵饲料的方法及应用与流程

1.本发明涉及饲料技术领域，具体涉及一种利用残次果制备反刍发酵饲料的方法及应用。
技术背景
2.残次果，是指在上市前或销售中淘汰下来的水果，通常指落地果、品质或者品相不是特别好的水果。这些水果虽然不能进入人的餐桌，但是具有较高的营养价值，如果能开发用作饲料，可以大大减少水果浪费。比如苹果，2021年我国苹果总产量是4500万吨，但这是进入人类餐桌的苹果产量，残次果产量约等于或略大于进入人类餐桌的苹果产量，如果把这部分残次果利用好，则可以减缓我们畜牧业的饲料压力。水果中含有大量的碳水化合物、维生素、矿物质、生物活性成分和膳食纤维，可以用作反刍动物的饲料，但是在残次果的收集、存储、运输中，会出现霉烂变质的情况，另外有些残次果本身也是因为有病害才导致的落果，这些因素对反刍动物有一定的毒害作用，因此要把残次果成功的应用于反刍动物饲料，就需要研发残次果安全化处理的工艺。比如残次果含有大量的酸性物质（苹果酸）、酚类、果胶和糖类等物质，如果直接大量饲喂很容易引起瘤胃酸度过大，造成瘤胃酸中毒。


技术实现要素：

3.为了解决以上问题，本发明提出一种利用残次果制备反刍发酵饲料的方法及应用。
4.本发明提出的利用残次果制备反刍发酵饲料的方法，所述制备方法包括以下步骤：步骤一、收集残次果，破碎挤压后固液分离：将残次果用清水冲泡干净后，自然条件下晾干，采用破碎机破碎后，再采用螺杆挤压脱水机挤压成果渣用作所述反刍发酵饲料的原料；挤压过程中收集果汁；步骤二、发酵用菌种的制备：选用4种菌种，分别是酿酒酵母、产朊假丝酵母、白地霉、黑曲霉；其中酿酒酵母、产朊假丝酵母采用液体发酵法制备为酿酒酵母-产朊假丝酵母混合培养液；黑曲霉、白地霉采用固体发酵工艺分别制备为黑曲霉固体培养物和白地霉固体培养物；步骤三、将重量百分比为50-60%的果渣、15-25%的小麦麸、5-15%的大豆胚芽粉、0-10%的棕榈粕、0.1-0.5%的轻质碳酸钙、0.1-1.0%的硫酸铵、2-8%的谷氨酸渣、0.5-3%的黑曲霉固体培养物、0.5-3%的白地霉固体培养物、0.5-3%的酿酒酵母-产朊假丝酵母混合培养液，在搅拌机中充分混合，混合后的物料通过打包机装入单向阀呼吸袋中，转入培养间，在25-28℃下发酵3-5天，即可获得利用残次果制备的反刍发酵饲料。
5.进一步，所述酿酒酵母-产朊假丝酵母混合培养液的制备方法为：（1）制备酿酒酵母或产朊假丝酵母菌种斜面：蛋白胨 5 g/l、酵母浸粉2 g/l、葡萄糖20 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容
至1l，121℃灭菌30 min，制备菌种斜面，使用接种环从甘油管蘸取酿酒酵母或产朊假丝酵母菌种，分别接种于斜面，28-30℃，培养3-5天后，待用；（2）制备酿酒酵母或产朊假丝酵母种子培养液：蛋白胨 5g/l、酵母浸粉2 g/l、苹果汁40 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l，ph调整至6.4
±
0.2，蒸馏水定容至1l，121℃灭菌30 min，接种上述酿酒酵母或产朊假丝酵母菌种，置于恒温振荡培养箱中，于30℃，200rpm培养20-24h后，备用；（3）制备酿酒酵母-产朊假丝酵母混合培养液：称取高温豆饼粉50g/l、步骤一所述的果汁40 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，硫酸铵0.5g/l，ph调整至6.4
±
0.2，蒸馏水定容至1l，121℃灭菌30 min，冷却至室温后，在无菌条件下，每升液体培养基接种10ml酿酒酵母种子培养液和10ml产朊假丝酵母种子培养液，置于恒温振荡摇瓶中振荡培养，培养温度28-30℃，振荡转速200rpm，培养时间24h即可。
6.进一步，所述黑曲霉固体培养物的制备方法为：（1）制备黑曲霉菌种斜面：蛋白胨 5 g/l、酵母浸粉2 g/l、葡萄糖20 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容至1l，121℃，灭菌30 min，制备菌种斜面，使用接种环从甘油管蘸取黑曲霉菌株，接种于斜面，28-30℃，培养3-5天后，待用；（2）制备黑曲霉培养液：蛋白胨 5g/l、酵母浸粉2 g/l、葡萄糖20 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，蒸馏水定容至1l，121℃，灭菌30 min，冷却至室温，在无菌条件下接种上述黑曲霉菌种斜面上的黑曲霉菌落，每升液体培养基接种5-10个黑曲霉菌落，在恒温振荡摇床中28-30℃，200rpm振荡培养3-5天，待用；（3）制备黑曲霉固体培养物：将小麦麸、玉米面、豆粕按照80%、15%、5%的比例进行混合，制备成混合物料，混合物料与步骤一所述的果汁按照3-4:1的比例进行混合，混合均匀后，在115-121℃条件下，灭菌30min后，接种上述黑曲霉培养液，其中，黑曲霉培养液的接种量为5%，基于湿物料的重量进行计算；将接种了黑曲霉的物料置于培养池中，培养5-7天后，采用在50-60℃的方式，进行干燥，干燥后的黑曲霉固体培养物，在4-6个月内使用。
7.进一步，所述白地霉固体培养物的制备方法为：（1）制备白地霉菌种斜面：蛋白胨 20 g/l、酵母浸粉10 g/l、葡萄糖20 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容至1l，121℃，灭菌30 min，制备菌种斜面，使用接种环从甘油管蘸取白地霉菌株，接种于斜面，28-30℃，培养2-3天后，待用；（2）制备白地霉培养液：蛋白胨 20 g/l、酵母浸粉10 g/l、葡萄糖20 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容至1l，121℃，灭菌30 min，冷却至室温，在无菌条件下接种上述白地霉菌种斜面上的白地霉菌落，每升液体培养基接种3-5个白地霉菌落，在恒温振荡摇床中28-30℃，200rpm振荡培养2-3天，待用；（3）白地霉固体培养物的制备：将小麦麸、玉米面、豆粕、按照80%、15%、5%的比例进行混合，再加入基于物料重量的0.5%-1.0%的硫酸铵，制备成混合物料，混合物料与步骤一所述的果汁按照3-4:1的比例进行混合，混合均匀后，在115-121℃条件下，灭菌30min后，接种上述白地霉培养液，其中，白地霉培养液的接种量为5%，基于湿物料的重量进行计算；将接种了白地霉培养液的物料置于培养池中，培养3-5天后，采用50-60℃低温烘干的方式，进行干燥，干燥后的白地霉固体培养物，在2-3个月内使用。
8.进一步，所述步骤三中的物料比例为：55%的果渣、20%的小麦麸、10%的大豆胚芽粉、5%的棕榈粕、0.2%的轻质碳酸钙、0.8%的硫酸铵、5%的谷氨酸渣、1%的黑曲霉固体培养物、1%的白地霉固体培养物、2%的酿酒酵母-产朊假丝酵母混合培养液。
9.进一步，所述步骤三的发酵时间为4天。
10.本发明提出的利用残次果制备的反刍发酵饲料在反刍动物饲养中的应用。
11.本发明的有益效果如下：（1）残次果发酵的优势，在于果渣经过发酵后，能够明显降低果渣中的抗营养因子和农药残留，同时提高了酸性和中性洗涤纤维的消化率，提高了蛋白质、氨基酸、维生素、核苷酸及未知生长因子等活性物质。同时能够较好把控原料，能够采用清洗方式，较为有效的去除残次果表皮的杂菌杂质和霉，然后通过发酵，去除残次果内部病害、病菌及霉菌的影响。本专利采用固液分离，将残次果进行压榨，分离果渣与果汁，能够有效降低果渣中的水分，防止果渣在存放过程中，由于水分过高产生霉变，或者果渣中水分析出污染库房场地。本发明将果渣中的水分通过螺杆挤压挤出，能够有效降低果渣中的水分，也间接降低了果渣中的糖分，因为糖分会随着水分流失一部分，微生物能够有效利用的糖分约为果渣糖含量的20%-40%，因此未经挤压水分的果渣直接发酵，糖分并不能够彻底被利用起来，因此，会造成营养物质的流失和浪费，本发明经过挤压后即能增加微生物对糖分的利用率，挤压出来的果汁又含有糖分，可以作为益生菌培养的碳源使用，降低生产原料成本。
12.（2）本发明的发酵菌种采用两种霉菌及两种酵母菌的复配，能够有效利用果渣中残留糖分，分解原料的大分子物质，提高原料的消化利用率，霉菌及酵母菌在增殖的过程，能够将单向阀呼吸袋中的氧气消耗殆尽，让其它微生物无法生长，即时呼吸阀存在漏气现象时，也不会造成杂菌滋生，因此能提升产品的氧稳定性，提升产品的货架期。
13.（3）目前，发酵苹果渣多采用池式发酵或槽式发酵，发酵过程中温度不易控制，发酵染菌风险较大。本专利采用单向阀呼吸袋发酵，在恒温培养基进行发酵，能够有效控制整个发酵过程中的温度，采用该模式也能有效降低发酵基质染霉风险。
14.（4）本发明对残次果进行挤压破碎，使果汁与果肉分离，果汁作为培养发酵菌种的碳源被高效利用，果肉作为固态发酵基质原料，采用混合菌株发酵，制备高附加值的生物发酵饲料产品。本发明中所述的残次果不限于苹果，也可以是梨、猕猴桃等，本发明的方法高效地利用了残次果中的果肉与果汁，最大限度的减少浪费。
15.（5）本发明制备的发酵饲料对产量奶的提高效果显著好于现有技术的发酵饲料，并且对缓解奶牛酸中毒有一定的改善作用，对酸中毒亚健康的奶牛能降低脂多糖含量、提高产奶量，本发酵饲料ph较高,在商业应用上较为容易推广。
具体实施方式
16.以下结合实施例对本发明作进一步说明。
17.实施例1
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一种利用残次果制备反刍发酵饲料的制备方法1、收集残次果（落地苹果），挤压，固液分离。
18.将落地苹果用清水冲泡干净后，自然条件下晾干，采用破碎机破碎后，再采用螺杆挤压脱水机挤压，挤压过程中收集果汁。果渣用于固态发酵的原料基质，果汁用于培养发酵菌株。
19.2、黑曲霉菌种制备(固态发酵制种)（1）黑曲霉斜面菌种的制备黑曲霉斜面菌种制备：蛋白胨 5 g/l、酵母浸粉2 g/l、葡萄糖20 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容至1l，121℃，灭菌30 min，制备菌种斜面，使用接种环从甘油管蘸取黑曲霉菌株，接种于斜面，28-30℃，培养3-5天后，待用。
20.（2）黑曲霉培养液制备黑曲霉培养液制备方法：蛋白胨 5g/l、酵母浸粉2 g/l、葡萄糖20 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，蒸馏水定容至1l，121℃，灭菌30 min。冷却至室温，在无菌条件下接种，每升液体培养基接种5-10个黑曲霉菌落，，在恒温振荡摇床中28-30℃，200rpm振荡培养3-5天，待用。
21.（3）黑曲霉固体培养物的制备将小麦麸、玉米面、豆粕按照80%、15%、5%的比例进行混合，制备成混合物料，混合物料与挤压苹果汁按照3-4:1的比例进行混合，混合均匀后，在115-121℃条件下，灭菌30min后，接种黑曲霉培养液。其中，黑曲霉培养液的接种量为5%，基于湿物料的重量进行计算。将接种黑曲霉的物料置于培养池中，培养5-7天后，采用低温烘干的方式（进风温度＜60℃），进行干燥，干燥后的培养物，可使用4-6个月。
22.3、白地霉菌种制备 (固态发酵制种)（1）白地霉培养液的制备白地霉斜面菌种制备：蛋白胨 20 g/l、酵母浸粉10 g/l、葡萄糖20 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容至1l，121℃，灭菌30 min，制备菌种斜面，使用接种环从甘油管蘸取白地霉菌株，接种于斜面，28-30℃，培养2-3天后，待用。
23.（2）白地霉培养液的制备蛋白胨 20 g/l、酵母浸粉10 g/l、葡萄糖20 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容至1l，121℃，灭菌30 min。冷却至室温，在无菌条件下接种，每升液体培养基接种3-5个白地霉菌落，在恒温振荡摇床中28-30℃，200rpm振荡培养2-3天，待用。
24.（3）白地霉固体培养物的制备将小麦麸、玉米面、豆粕、按照80%、15%、5%的比例进行混合，再加入基于物料重量的0.5%-1.0%的硫酸铵，制备成混合物料，混合物料与挤压苹果汁按照3-4:1的比例进行混合，混合均匀后，在115-121℃条件下，灭菌30min后，接种白地霉培养液。其中，白地霉培养液的接种量为5%，基于湿物料的重量进行计算。将接种白地霉的物料置于培养池中，培养3-5天后，采用低温烘干的方式（进风温度＜60℃），进行干燥，干燥后的培养物，可使用2-3个月。
25.4、酿酒酵母、产朊假丝酵母菌种制备(液态发酵制种)因酿酒酵母与产朊假丝酵母同属于酵母菌属，所以采用混合发酵的方式制备生产菌种。
26.（1）酿酒酵母或产朊假丝酵母斜面菌种的制备酿酒酵母或产朊假丝酵母斜面菌种制备：蛋白胨 5 g/l、酵母浸粉2 g/l、葡萄糖20 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，琼脂20 g/l，水定容至
1l，121℃，灭菌30 min，制备菌种斜面，使用接种环从甘油管蘸取黑曲霉菌株，接种于斜面，28-30℃，培养3-5天后，待用。
27.（2）酿酒酵母或产朊假丝酵母种子培养液制备酿酒酵母或产朊假丝酵母种子培养液制备方法：蛋白胨 5g/l、酵母浸粉2 g/l、苹果汁40 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，ph调整至6.4
±
0.2，蒸馏水定容至1l，121℃，灭菌30 min，接种上述酿酒酵母或产朊假丝酵母菌种，置于恒温振荡培养箱中，于30℃，200rpm培养20-24h后，备用；（3）酿酒酵母-产朊假丝酵母混合培养液制备称取高温豆饼粉50g/l、苹果汁40 g/l 、硫酸镁0.5 g/l、磷酸氢二钾 1 g/l ，硫酸铵0.5g/l，ph调整至6.4
±
0.2，蒸馏水定容至1l，121℃，灭菌30 min。冷却至室温后，在无菌条件下，每升液体培养基接种10ml酿酒酵母种子培养液，和10ml产朊假丝酵母培养液，置于恒温振荡摇瓶中振荡培养，培养温度28-30℃，振荡转速200rpm，培养时间24h即可，完成培养后，待用。
28.5、果渣固态发酵饲料的制备将果渣55%、小麦麸20%、大豆胚芽粉10%、棕榈粕5%、轻质碳酸钙0.2%、硫酸铵0.8%、谷氨酸渣5%，1%黑曲霉培养物、1%白地霉培养物、2%酿酒酵母/产朊假丝酵母混合培养液，在搅拌机中充分混合，混合后的物料通过打包机装入单向阀呼吸袋中，转入培养基在25-28℃下发酵3-5天，即获得发酵饲料产品。
29.制备好发酵饲料产品，气味醇香浓郁、松散柔软流散性好，无不良气味，无结块；物料水分在50%-51%，粗蛋白为11%-14%。
30.实施例2
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制备常见菌株发酵制备反刍发酵饲料采用实施例1挤压获得的苹果渣作为固体发酵培养基原料，以植物乳杆菌、酵母菌、地衣芽孢杆菌作为发酵菌株制备苹果渣反刍发酵饲料，此方法所用的菌株也是果渣发酵的常用菌株。具体方法如下：将苹果渣、棕榈粕、小麦麸、玉米胚芽粉、轻质碳酸钙、谷氨酸渣按照一定比例进行混合，具体比例为苹果渣55%、小麦麸20%、大豆胚芽粉10%、棕榈粕5%、轻质碳酸钙0.2%、硫酸铵0.8%、谷氨酸渣5%。将混合菌液与上述固体发酵基质按照20:1000的比例在混合机中充分混匀，其中，每毫升混合菌液中含有植物乳杆菌1
×
107cfu/ml，酵母菌1
×
108cfu/ml，枯草芽孢杆菌1
×
106cfu/ml。混匀时间约1-2min，混合后的物料通过打包机装入单向阀呼吸袋中，转入培养基在25-28℃下发酵3-5天，即获得现有技术发酵苹果渣获得的反刍发酵饲料产品。
31.实施例3
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制备未经挤压但利用本发明菌株制备的反刍发酵饲料将残次果（落地苹果）用清水冲泡干净后，自然条件下晾干，采用破碎机破碎后，按照实施例1的工艺，接种发酵菌株并按照其发酵工艺进行反刍发酵饲料的制备。
32.实施例4
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反刍发酵饲料的检测将实施例1-3制备的发酵饲料进行检测分析，对比不同制备方法对发酵饲料品质的影响。其中，各营养成分的检测方法如下：水分的检测按照gb/t 6435-2014进行；ph的检测按照gb 5009 . 237-2016进行；
粗蛋白含量的检测按照gb/t 6432-2018进行；酸溶蛋白含量的检测按照gb/t 22492-2008进行；总酸含量的检测按照gb/t 12456-2008进行；乳酸菌含量的检测按照gb/t 4789 . 35-2016进行；酵母菌含量的检测按照gb/t 4789 . 15-2016进行；芽孢杆菌含量的检测按照gb/t 26428-2010进行；霉菌含量的检测按照gb/t 13092-2006进行。
[0033]33.从表1的检测分析可知，发酵饲料生产工艺对相同原料的产酸有明显的影响。其中，针对发酵底料都经过挤压去除果汁步骤的实施例1和2来说，实施例2中的发酵饲料酸度高，而实施例1中的发酵饲料酸度较低，分析主要原因在于发酵菌株存在较大不同，实施例1中所用的复合菌株，不含有乳酸菌属，发酵过程中不会导致ph迅速降低；霉菌类及酵母菌类能够利用果渣中的糖分，生产较多的菌体蛋白，提升发酵料中的粗蛋白的比例；而实施例2发酵所用菌株种含有乳酸菌，乳酸菌能够充分利用果渣中的糖分代谢产生大量的乳酸，导致发酵果渣产品ph降低，总酸含量高的现象。针对实施例1和实施例3来说，两个实施例都采用相同菌株发酵，但实施例3的发酵底料没有经过挤压去除果汁的步骤，实施例3中的发酵饲料酸度高，而实施例1中的发酵饲料酸度较低，主要原因在于发酵工艺存在较大差异，实施例1中发酵果渣产品的制备过程中将果渣中的水分挤压，而残次果在挤压过程中，糖分会随着水分流失一部分，因此挤压去除果汁的工艺降低了果渣中的水分及糖分，减缓了发酵菌株的代谢，避免了发酵过程中产生大量的有机酸，影响发酵饲料的品质。实施例3采用未挤压处理的工艺，发酵物料水分明显提高了6.12%，ph也明显降低至3.92,总酸提升至7.21,
说明水分较高会影响酵母菌的繁殖代谢，另外果渣中的野生型乳酸菌在高糖高水分的条件下，也会代谢产生大量的有机酸，导致发酵物料中的ph显著降低；另外，高水分的条件也不利于微生物的增殖，导致发酵饲料中的菌体蛋白含量低，粗蛋白明显低于实施例1中的粗蛋白含量。因此，通过对比实施例1和实施例3可知，在相同的发酵菌株及发酵工艺条件下，果渣是否采用脱水处理，对发酵饲料的品质影响比较明显。因此，常规的果渣类发酵饲料ph在3.5-4.0之间，酸度过大，体况良好的牛可以少量添加，若牛只存在酸中毒时，不宜添加。而本发明的果渣类发酵饲料ph在5.3以上，酸度较低，更适合用于反刍动物饲料中。
[0034]
实施例5 实施例1-3的反刍发酵饲料在tmr日粮中的混合均匀度研究实施例1-3的反刍发酵饲料按照下表比例与奶牛场原料在tmr日粮搅拌机中混合，通过筛分法分析苹果渣在tmr日粮的混合均匀度。
[0035]035]035]
采用筛分法，分析每层筛上物中苹果渣的比例，发现b组和c组日粮每次筛上物中苹果渣的含量与a组无明显差异，说明采用本发明的技术方案发酵果渣制备的反刍发酵饲料能够采用tmr日粮搅拌机进行混合，操作简单，节约人力。而d组tmr日粮每次筛上物中的苹果渣较多，且发酵饲料表面沾有较多的粉末，可能是精补料中的豆粕或预混料之类，这种现象会让奶牛形成采食偏好，进一步影响奶牛营养平衡，易使奶牛体况不良或者产奶量降低，影响生产效益。
[0036]
e组tmr日粮每次筛上物中含有结块物料最多，这种现象会造成同d组tmr日粮相似的结果，最终导致奶牛体况不良或者产奶量降低，影响生产效益。
[0037]
上表说明采用实施例2和实施例3的发酵工艺获得的发酵饲料酸度高且水分含量高，影响tmr的搅拌效果，对大规模奶牛场来说，由于营养摄入已经精确到口，因此不建议直接使用未经脱水的果渣发酵饲料或者经脱水但酸度较大的发酵饲料以tmr日粮的形式对奶牛进行饲喂，避免造成不良影响。
[0038]
实施例6
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残次果发酵饲料在奶牛养殖上的应用评价（1）选用河南某生态奶牛养殖场300头试验奶牛，采用单因素试验设计，根据产奶量、胎次、泌乳天数相近的原则，将健康度良好的奶牛，随机分成4组，每组75头奶牛。分别饲喂实施例5中a、b、c、d四种tmr日粮，试验为期40 d。采用散放式饲养模式，每日早、中、晚饲喂3次tmr日粮，自由采食，保证每天饲喂剩料量在3%~5%，日挤奶3次，自由饮水。
[0039]
（2）产奶量及乳成分：试验始末用利拉伐流量计测定产奶量，试验结束后对试验牛群产奶量数据进行统计分析，用ul40bc乳成分快速检测仪测定牛奶营养成分。利用excel2016软件对原始数据进行整理，利用spss16.0的重复测量模块对产奶量及乳成分指标进方差分析。
[0040]
从表3的试验结果分析可知，与试验前相比，c组和d组的产奶量显著增加（p《0.05），而对照组和试验b组奶量显著降低(p《0.05),c组产奶量提高了3.98%，d组产奶量提高了1.59%，同时，试验结束时，与对照组相比，c组和d组的产奶量显著增加（p《0.05），c组产奶量提高了8.90%，d组产奶量提高了7.89%,从产奶数据来看，添加6%本发明的反刍发酵饲料在tmr日粮中，能够提升产奶量，延长产奶高峰期。
[0041]
注: 同行肩标小写字母不同表示差异显著(p《0.05) ，未标注字母或字母相同表示差异不显著( p》0.05) ，同列肩标大写字母不同表示差异显著（p《0.05）, 未标注字母或字母相同表示差异不显著( p》0.05) 。
[0042]
从表4来看，试验前后，乳脂、乳糖、总固体、体细胞、乳蛋白无显著差异（p》0.05）,
试验结束时，与对照组相比，乳脂、乳糖、总固体、体细胞、乳蛋白也无显著差异（p》0.05），因此，本发明的发酵方法和现有技术发酵方法制得的发酵饲料与对照组相比饲养奶牛时对奶品质无明显影响。
[0043][0043]
注: 同行肩标小写字母不同表示差异显著(p《0.05)，未标注字母或字母相同表示差异不显著( p》0.05)因此，采用残次果制备的发酵饲料是可以用在奶牛tmr日粮中的，并且6%的添加量对产奶量的促进效果好于3%，同时，采用挤压去除果汁后的果渣并经本发明的菌株组合发酵制备的发酵饲料（c组）对产量奶的提高效果显著好于同样的果渣经常规发酵菌制备的发酵饲料（d组）。
[0044]
实施例7
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利用残次果制备的反刍发酵饲料对亚健康奶牛养殖上的应用评价目前，奶农为提高奶牛产奶量会在日粮中添加较多的精补料，导致牛只存在酸中
毒现象。发酵饲料具有调整瘤胃菌群平衡，改善肠道健康的效果。果渣发酵饲料因ph值比较低，很少有人验证其在这种情况下的效果。因本发明发酵饲料的ph值相对常规果渣发酵饲料的ph值较高，因此考虑选取存在酸中毒的亚健康牛只进行饲喂试验，验证效果。
[0045]
（1）选用河南某生态奶牛养殖场30头试验奶牛，牛只存在瘤胃酸中毒现象，采用单因素试验设计，根据产奶量、胎次、泌乳天数相近的原则，随机分成3组，每组10头奶牛。分别饲喂实施例4中a、c、d三种tmr日粮，试验为期30 d。采用散放式饲养模式，每日早、中、晚饲喂3次tmr日粮，自由采食，保证每天饲喂剩料量在3%~5%，日挤奶3次，自由饮水。
[0046]
（2）产奶量及乳成分：试验始末用利拉伐流量计测定产奶量，试验结束后对试验牛群产奶量数据进行统计分析，用ul40bc乳成分快速检测仪测定牛奶营养成分。利用excel2016软件对原始数据进行整理，利用spss16.0的重复测量模块对产奶量及乳成分指标进方差分析。
[0047]
（3）血清生化指标：于预饲开始当日，正试期结束当天，晨饲前颈静脉采血20ml/头，于3500r/min离心，取上层血清，-20℃冷冻保藏。使用elisa试剂盒和科研试剂盒检测血清中的乳酸、脂多糖含量，所用试剂盒购自南京某生物有限公司。
[0048]
从表5可知，虽然酸中毒奶牛产奶性能较低，但不同工艺制备的反刍发酵饲料对奶牛产奶量和乳成分无显著影响（p》0.05），但是在试验结束时，与对照组相比，c组的产奶量提高了3.38%，差异不显著（p》0.05）,在试验前后，对照组产奶量下降了1.28%，差异不显著（p》0.05），而试验组c产奶量提高了1.7%，差异不显著（p》0.05），说明c组对奶牛产奶性能有一定的改善作用。与对照组相比，c组产奶量提高3.38%，而d组产奶量提高0.28%，说明c组对酸中毒的奶牛的产奶性能有很好的改善作用。
[0049][0049]
脂多糖是酸中毒的衡量指标，本试验选择的弱酸中毒的奶牛进行试验，正常牛只脂多糖含量在200-300 ng/l之间，酸中毒情况含量会升高，急性酸中毒的奶牛，脂多糖含量高达2000 ng/l左右。从表6可知，对酸中毒的奶牛来说，不同工艺制备的反刍发酵饲料对血清中乳酸无显著影响（p》0.05），但不同工艺制备的反刍发酵饲料对血清中脂多糖含量有显著影响（p《0.05）,试验结束时，与对照组相比，试验c组的脂多糖含量下降39.96%，差异显著（p《0.05），说明c组对缓解奶牛酸中毒有一定的改善作用。d组发酵料的ph为3.89，瘤胃酸中毒的情况下，瘤胃液ph＜5.5，在此情况下，一般养殖场不会采用这种低ph的生物发酵饲料，而c组生物发酵饲料（本工艺制备的生物发酵饲料）ph较高（ph 5.37）,增加养殖场使用本发明的发酵饲料的可能性，且在现场使用效果亦显示其能够显著改善酸中毒奶牛的体况，降低脂多糖含量、提高产奶量，也证明了本专利落地果制备发酵饲料制备方法工艺优于常规果渣发酵饲料的制备方法工艺。
[0050]
对于本领域技术人员而言，显然本发明不限于上述示范性实施例的细节，而且在不背离本发明的精神或基本特征的情况下，能够以其他的具体形式实现本发明。因此，无论从哪一点来看，均应将实施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本发明的范围由所附权利要求而不是上述说明限定，因此旨在将落在权利要求的等同要件的含义和范围内的所有变化囊括在本发明内。
[0051]
此外，应当理解，虽然本说明书按照实施方式加以描述，但并非每个实施方式仅包含一个独立的技术方案，说明书的这种叙述方式仅仅是为清楚起见，本领域技术人员应当将说明书作为一个整体，各实施例中的技术方案也可以经适当组合，形成本领域技术人员可以理解的其他实施方式。