一种双连续相提取液及其制备方法和应用于乳香的提取方法与流程

1.本技术涉及药物提取及其制剂领域，更具体地说，它涉及一种双连续相提取液及其制备方法和应用于乳香的提取方法。


背景技术：

乳香，为橄榄科乳香属植物卡氏乳香树(boswellia carterii birdw.)及同属植物鲍乳香树(boswellia bhaw-dajiana birdw.)树皮渗出的树脂，是一种具有广泛开发前景的植物药。研究发现乳香提取物具有活血、止痛、消肿、生肌、抗炎、抗肿瘤、抗氧化、降血糖等药理作用，因此如何高效提取乳香也成为了现阶段主要的研究课题。
3.公知的，乳香的主要有效成分包括五环三萜类、四环三萜类、大环二萜类、多聚糖、二糖、单糖、烯类、酯类、醇类及烷酮醛酸类等，成分复杂多样，且同时包含脂溶性成分和水溶性成分，因此提取方法普遍较为繁琐，且效率无法保障。
4.相关技术中的提取方法为水煎法：将待提取乳香，切碎或粉碎成粗粉，置适宜煎器中，加水浸没乳香，浸泡适宜时间后，加热至煮沸，保持微沸一定时间，分离煎出液，药渣依法煎出数次，至煎液味淡为止，合并各次煎出液，浓缩，即可制得乳香提取物。
5.李平华等曾分别采用水蒸气蒸馏、超声和索氏提取的方法，结果表明，水蒸气蒸馏所得挥发油中乙酸辛酯含量均较高于其他方法，为2.92％，郑玉丽等采用乙醇提取、乙酸乙酯萃取，同时结合酸溶碱沉的方法提取乳香中总三萜有机酸含量为7％左右，而乳香多糖的提取及应用鲜少有报道。
6.上述提取方法的提取效率较低，且提取物中的成分主要为水溶性成分、少量脂溶性及挥发油类，物料中非水溶性成分的损失较大，且易有杂质产生，不利于产品的提纯。
7.因此，也有部分企业使用水蒸气蒸馏-乙醇连续提取法提取，该法虽能能有效提取乳香内的有效成分，但提取步骤过于繁琐，且能耗较高，大大增加了企业的生产成本，不利于实际生产。
8.综上，迫切需要提供一种能高效便捷提取乳香的提取方法。


技术实现要素：

9.为保障提取效率的同时，简化提取工艺，本技术提供一种双连续相提取液及其制备方法和应用于乳香的提取方法。
10.第一方面，本技术提供一种双连续相提取液，采用如下的技术方案：一种双连续相提取液，其特征在于，由a相、b相和c相组成，所述的a相由如下重量份数的组分组成：去离子水 20-25份；多元醇 32-45份；枯草菌脂肽钠 1-5份；所述的b相由如下重量份数的组分组成：
聚甘油类 12-25份；烷烃类 2-10份；酯类油脂 2-10份；所述的c相由如下重量份数的组分组成：植物油脂1-5份。
11.通过采用上述技术方案，由上述水溶性组分、油脂和表面活性剂制成的双连续相提取液，其在提取乳香时，具有较高的提取率，且有效成分不易造成损耗，所得的乳香提取物中含有3.52％的乙酸辛酯、28.63％的三萜类总有机酸、16.28％的总多糖含量。
12.分析其原因可能是，双连续相提取液中同时包含水溶性组分和油脂，两者在表面活性剂的作用下，可形成稳定的微乳体系，该微乳体系易与乳香中的组分相似相溶，并能将水溶性成分包裹在微乳的内核，有效的减少其损耗和活性丧失的现象，继而保障了双连续相提取液的提取率；其中枯草菌脂肽钠的掺入，除作为阴离子乳化剂促进微乳的乳化效果外，还能够促进对挥发油基脂溶性成分的提取，且与多元醇和油脂复配后，可有效调节双连续相提取液的亲水亲油平衡值，其hlb值为3-10。
13.优选的，所述多元醇为1,3-丁二醇、双丙甘醇、1,2-丙二醇、1,2-戊二醇、己二醇、甘油、双甘油和聚乙二醇中的一种或多种。
14.通过采用上述技术方案，上述组分的多元醇除能有效降低聚甘油类乳化剂的亲水性外，还可与枯草菌脂肽钠复配，调节双连续相提取液的hlb值，从而形成稳定的双连续相提取液。
15.优选的，所述聚甘油类为聚甘油-2硬脂酸酯、聚甘油-2异硬脂酸酯、聚甘油-4硬脂酸酯、聚甘油-4五硬脂酸酯、聚甘油-5三油酸酯、聚甘油-6月桂酸酯、聚甘油-6硬脂酸酯、聚甘油-6三硬脂酸酯、聚甘油-7二油酸酯、聚甘油-10月桂酸酯、聚甘油-10异硬脂酸酯、聚甘油-10二异硬脂酸酯、聚甘油-10二油酸酯、聚甘油-10三硬脂酸酯、聚甘油-10三油酸酯、聚甘油-10五硬脂酸酯、、聚甘油-10二癸酸酯的一种或多种。
16.通过采用上述技术方案，上述组分的聚甘油类除能作为乳化剂，有效促进双连续相微乳体系成型的同时，还能与枯草菌脂肽钠和多元醇复配，达到较为适宜的hlb值，从而形成稳定的双连续相提取液。
17.优选的，所述烷烃类为角鲨烷、氢化聚异丁烯、氢化聚癸烯、c
12-19
烷烃类、月氢化c
6-14
链烯烃聚合物类、异十二烷中的一种或多种。
18.通过采用上述技术方案，上述选择的烷烃类能形成稳定的双连续相溶液，这是因为油脂对水的亲和性、油脂对表面活性剂定向排列的影响会影响双连续相的制备，在乳化过程中具有不同分子量的油脂表现不同，使用具有较低分子量和粘度的油脂可以容易得到精细的纳米乳化粒径，也易形成双连续相(如烷烃类和精油)。
19.优选的，所述酯类油脂为辛酸/癸酸甘油三酯、棕榈酸乙基己酯、肉豆蔻酸异丙酯、碳酸二辛酯、桂酸异戊酯、丁二醇二辛酸酯/二癸酸酯、甘油三(乙基己酸)酯、鲸蜡醇乙基己酸酯、二c
12-13
醇苹果酸酯、二异硬脂醇苹果酸酯、季戊四醇四(乙基己酸)酯、季戊四醇四异硬脂酸酯、c
12-15
苯甲酸酯中的一种或多种。
20.通过采用上述技术方案，上述选择一些具有中链甘油三酯类油脂形成的纳米乳液
具有较低的曲率半径，形成的纳米乳液粒径小，不同酯类曲率半径遵循中链甘油三酸酯类小于长链甘油三酸酯类，该规律同样适用于双连续相的形成。
21.优选的，所述植物油脂为霍霍巴籽油、乳木果油、甜杏仁油、蓖麻油、葡萄籽油、太阳花籽油、白池花籽油、亚麻籽油中的一种或多种。
22.通过采用上述技术方案，上述组分的植物油脂均能有效与酯类油脂和和聚甘油类复配，有利于双连续相的形成，其中白池花籽油含有高效的天然氧化剂，是自然界已知的最稳定的植物油，且不含共轭双键，不易发生反应，白池花籽油含18％的二十二碳二烯酸c
22:2
和dha的结构非常接近，为后续乳香提取液的应用提供优良肤感。
23.第二方面，本技术提供一种双连续相提取液的制备方法，采用如下的技术方案：一种双连续相提取液的制备方法，包括如下步骤：a1、先分别将a相升温至80-85℃，并以300-500r/min搅拌15-30min；b相升温至80-85℃，并以300-500r/min搅拌5-10min；a2、再将b相与a相混合，并以1000-1200r/min搅拌2-5min，得ab混合相；a3、最后再将ab混合相降温至50-60℃，加入c相，以300-500r/min搅拌5-10min，过滤弃去滤渣，即可制得双连续相提取液。
24.通过采用上述技术方案，上述制备步骤较为简易，且各项条件易于控制，所得的双连续相提取液其性能稳定均一，均能有效的形成微乳体系，尤其应用于乳香提取时，具有较高的提取率，因而具有广阔的应用前景。
25.第三方面，本技术提供一种双连续相提取液的应用于乳香的提取方法，采用如下的技术方案：一种乳香提取物的提取方法，应用上述任一双连续相提取液，包括如下步骤：将乳香按料液比1:(10-20)加入至双连续相提取液中，以50-85℃提取0.5-3h,即可得乳香提取物。
26.通过采用上述技术方案，上述所得的双连续相提取液，其在应用于乳香提取时，除步骤较为简易、能耗较低外，还具有较高的提取率，所得的乳香提取物中含有3-4％乙酸辛酯、20-30％的三萜类总有机酸、15-20％的总多糖。
27.综上所述，本技术具有以下有益效果：1、本技术的双连续相提取液通过对聚甘油乳化剂、多元醇、烷烃类油脂及酯类油酯的选择复配，制备出了稳定的双连续提取液，其在提取乳香时，具有较高的提取率，且有效成分不易造成损耗，所得的乳香提取物中含有3.52％的乙酸辛酯、28.63％的三萜类总有机酸、16.28％的总多糖含量；2、本技术双连续相提取液的制备方法，通过一步法提取步骤，直接得到具有三类有效产物的乳香提取液，且无需后处理步骤的进行；3、本技术所得的双连续相提取液，其在应用于乳香提取时，通过聚甘油乳化剂与枯草菌脂肽钠的协同效应，同时选择性搭配多元醇及油脂，显著提升了提取效率的同时，保障了乳香有效成分的提取。
附图说明
28.图1是本技术应用例1中所得乳香提取物的挥发油中乙酸辛酯气相色谱图；
图2是本技术应用例1所得乳香提取物中总三萜有机酸的紫外图谱；图3是本技术应用例1所得乳香提取物的中总多糖的紫外图谱。
具体实施方式
29.以下结合实施例和附图1-3对本技术作进一步详细说明：本技术的各实施例及检测中所用的原料和设备，除下述特殊说明之外，其他均为市售：本技术所用的乳香为埃塞俄比亚乳香，本技术以此为研究对象，其中挥发油主要成分为乙酸辛酯以气相色谱测试含量为5.6％、三萜类总有机酸以紫外分光光度计测试含量为47.8％，总多糖含量用紫外分光光度计测试含量为26.5％；聚合物：聚甘油类表面活性剂如：聚甘油-5三油酸酯及聚甘油-10二异硬脂酸酯，采购自日本太阳化学；检测设备uv-2201型紫外-可见分光光度计，采购自日本岛津公司；检测设备agilent 6890n fid检测器气相色谱分析仪，采购自美国安捷伦公司。实施例
30.实施例1-6一种双连续相提取液，各组分及其相应的重量份数如表1所示，并通过如下步骤制备获得：a1、先分别将a相升温至80-85℃，并以400r/min搅拌20min；b相升温至80-85℃，并以400r/min搅拌5min；其中，a相中多元醇为1,3-丁二醇；b相中聚甘油类为聚甘油-5三油酸酯和聚甘油-10二异硬脂酸酯按重量比4:1组成；烷烃类为c
12-19
烷烃；酯类油脂为甘油三(乙基己酸)酯；a2、再将b相与a相混合，并以1300r/min搅拌3min，得ab混合相；a3、最后再将ab混合相降温至50-60℃，加入c相，以400r/min搅拌5min，即可制得双连续相提取液；其中c相中植物油脂为白池花籽油。
31.表1 实施例1-6中各组分及其重量(kg)
对比例1一种双连续相提取液，除不包含枯草菌脂肽钠组分，其他均与实施例1相同。
32.实施例7一种双连续相提取液，除a相中的多元醇为甘油外，其他均与实施例1相同。
33.实施例8一种双连续相提取液，除a相中的多元醇为1,3-丁二醇与双丙甘醇按重量比1:1组成外，其他均与实施例1相同。
34.实施例9一种双连续相提取液，除a相中的聚甘油类为聚甘油-5三油酸酯外，其他均与实施例1相同。
35.实施例10一种双连续相提取液，除a相的聚甘油类为聚甘油-10二异硬脂酸酯外，其他均与实施例1相同。
36.实施例11一种双连续相提取液，除a相中的烷烃类为角鲨烷外，其他均与实施例1相同。
37.实施例12一种双连续相提取液，除a相中的烷烃类为c
12-19
烷烃与异十二烷按重量比1:3组成外，其他均与实施例1相同。
38.实施例13一种双连续相提取液，除a相中的酯类油脂为棕榈酸乙基己酯外，其他均与实施例1相同。
39.实施例14一种双连续相提取液，除a相中的酯类油脂为甘油三(乙基己酸)酯与肉豆蔻酸异
丙酯按重量比1:2组成外，其他均与实施例1相同。
40.实施例15一种双连续相提取液，除a相中的植物油脂为太阳花籽油外，其他均与实施例1相同。
41.实施例16一种双连续相提取液，除a相中的植物油脂为白池花籽油与太阳花籽油按重量比1:0.5组成外，其他均与实施例1相同。
42.检测试验使用agilent 689on气相色谱分析仪分析双连续相乳香提取液中乙酸辛酯的含量，测试使用hp-5石英毛细管色谱柱(30m
×
0.32mm
×
0.25μm)，按照程序升温；初始温度80℃，保持3min，以每分钟10℃的速度升温至200℃，保持5min；进样口温度250℃，检测器温度220℃；氮气流速4ml/min；进样量1μl。
43.使用uv-2201型紫外-可见分光光度计测试双连续相乳香提取液中的总三萜有机酸和总多糖含量，其中总三萜有机酸采用香草醛-高氯酸显色法测试，在548nm处测试吸光度；总多糖采用苯酚-硫酸法测定，在490nm处测定吸光度。
44.应用例应用例1一种乳香提取物，应用如实施例1所述双连续相提取液，其提取方法包括如下步骤：将1000g乳香按料液比1:10加入至双连续相提取液中，以50℃提取2h,即可得含有35.2g乙酸辛酯、456.3g三萜类有机酸及162.6g多糖的乳香提取物。
45.应用例2-8一种乳香提取物，与应用例1的不同之处在于，所用双连续相提取液的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
46.表：应用例2-8中双连续相提取液使用情况对照表组别双连续相提取液应用例2由实施例2制得应用例3由实施例3制得应用例4由实施例4制得应用例5由实施例5制得应用例6由实施例6制得应用例7由对比例1制得应用例8由对比例2制得抽取上述应用例1-8中制得的乳香提取物，按上述测量步骤和测量标准测试其各组分含量，单位(g/1000g乳香)，测试结果取平均值记入下表。
47.从上表中可以看出，应用例1-6中所得的乳香提取物，其乙酸辛酯含量为8.1-35.2(g/1000g乳香)；三萜类总有机酸的含量为156.3-286.3(g/1000g乳香)；总多糖的含量为130.1-162.6(g/1000g乳香)；可见由上述水溶性组分、油脂和表面活性剂制成的双连续相提取液，其在提取乳香时，均具有较高的提取率，且乳香中的有效成分不易在提取过程中发生损耗。
48.从表中还可以看出，应用例7中所得的乳香提取物，其组分含量分别为乙酸辛酯6.51(g/1000g乳香)、总三萜有机酸264.2(g/1000g乳香)及总多糖含量110.5(g/1000g乳香)，相比应用例1各组分分别下降了81.5％、40.1％、32.4％；可见枯草菌脂肽钠的掺入，除能促进微乳的乳化效果外，还能够促进对挥发油基脂溶性成分的提取，且与多元醇和油脂复配后，可有效调节双连续相提取液的亲水亲油平衡值，其hlb值为3-10。
49.综上，由上述组分和含量制得的双连续相提取液，能显著提升乳香的提取效率，分析其原因可能是上述双连续相提取液是由水溶性组分、油脂和表面活性剂制成的，水油两在表面活性剂的作用下可形成稳定均一的双连续相，该连续相与乳香中的组分相似相溶，并能将水溶性成分包裹在微乳的内核，有效的减少其损耗和活性丧失的现象，继而保障了双连续相提取液的提取率。
50.应用例9-10一种乳香提取物，与应用例1的不同之处在于，所用双连续相提取液的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
51.表：应用例9-10中双连续相提取液使用情况对照表组别双连续相提取液应用例9由实施例7制得应用例10由实施例8制得
抽取上述应用例9-10中制得的乳香提取物，按上述测量步骤和测量标准测试其各组分含量，测试结果取平均值记入下表。
52.从上表中可以看出，应用例1、9-10中所得的乳香提取物，其乙酸辛酯含量为15.3-35.2(g/1000g乳香)；三萜类总有机酸的含量为200.1-286.3(g/1000g乳香)；总多糖的含量为150.5-162.6(g/1000g乳香)；可见由上述组分的多元醇制得的双连续相提取液均对乳香中各有效成分进行提取，其中应用例1为优选应用例。
53.从上表中还可以看出，应用例9中各组分含量相比应用例1均有不同程度下降，其乙酸辛酯含量仅为15.3(g/1000g乳香)，相比于应用例1下降了56.5％；其三萜类总有机酸含量仅为200.1(g/1000g乳香)，相比于应用例1下降了30.1％；其多糖类含量仅为150.5(g/1000g乳香)，相比于应用例1下降了7％；应用例10中各组分含量则与应用例1变化不大。
54.综上，可见由上述单独的1,3-丁二醇或者1,3-丁二醇与双丙甘醇复配制得的双连续相提取液，能显著提升乳香的提取效率，分析其原因可能是1,3-丁二醇或者是双丙甘醇的添加增加了油脂与表面活性剂相的溶解度以及水溶液和表面活性剂之间的互溶性，其中甘油则具有相反的趋势，从而影响到脂溶性成分的提取。
55.应用例11-12一种乳香提取物，与应用例1的不同之处在于，所用双连续相提取液的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
56.表：应用例11-12中双连续相提取液使用情况对照表组别双连续相提取液应用例11由实施例9制得应用例12由实施例10制得抽取上述应用例11-12中制得的乳香提取物，按上述测量步骤和测量标准测试其各组分含量，测试结果取平均值记入下表。
57.从上表中可以看出，应用例1、11-12中所得的乳香提取物，其乙酸辛酯含量为25.5-35.2(g/1000g乳香)；三萜类总有机酸的含量为180.1-286.3(g/1000g乳香)；总多糖的含量为150.6-162.6(g/1000g乳香)；可见由上述组分的聚甘油类制得的双连续相提取液均对乳香中各有效成分进行提取，其中应用例1为优选应用例。
58.综上，可见由上述实施例1制得的双连续相提取液，能显著提升乳香的提取效率，分析其原因可能是表面活性剂的选择对于双连续相微乳液的制备影响较大、疏水基的结构影响了表面活性剂在油水界面上的排列倾向、进而影响双连续相的形成、实验发现聚甘油-5三油酸酯和聚甘油-10二异硬脂酸酯复配可以形成较稳定的双连续相，这与其适中的hlb值、适合疏水基有关，合适的表面活性剂hlb值搭配有助于乳香中有效成分的提取。
59.应用例13-14一种乳香提取物，与应用例1的不同之处在于，所用双连续相提取液的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
60.表：应用例13-14中双连续相提取液使用情况对照表14中双连续相提取液使用情况对照表抽取上述应用例13-14中制得的乳香提取物，按上述测量步骤和测量标准测试其各组分含量，测试结果取平均值记入下表。
61.从上表中可以看出，应用例1、13-14中所得的乳香提取物，其乙酸辛酯含量为
20.2-35.2(g/1000g乳香)；三萜类总有机酸的含量为198.2-286.3(g/1000g乳香)；总多糖的含量为140.2-162.6(g/1000g乳香)；可见由上述组分的烷烃类制得的双连续相提取液均对乳香中各有效成分进行提取，其中应用例1为优选应用例。
62.综上，由上述烷烃类油脂制得的双连续相提取液，能显著提升乳香中脂溶性成分的提取效率，分析其原因可能是具有较低分子量和较低粘的烷烃类油脂更容易得到精细化的纳米乳液粒径，因此易形成双连续相从而促进了脂溶性成分的提取率，参见应用例13-14及其相应数据。
63.应用例15-16一种乳香提取物，与应用例1的不同之处在于，所用双连续相提取液的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
64.表：应用例15-16中双连续相提取液使用情况对照表组别双连续相提取液应用例15由实施例13制得应用例16由实施例14制得抽取上述应用例15-16中制得的乳香提取物，按上述测量步骤和测量标准测试其各组分含量，测试结果取平均值记入下表。
65.从上表中可以看出，应用例1、15-16中所得的乳香提取物，其乙酸辛酯含量为28.6-35.2(g/1000g乳香)；三萜类总有机酸的含量为246.5-286.3(g/1000g乳香)；总多糖的含量为130.6-162.6(g/1000g乳香)；可见由上述组分的酯类制得的双连续相提取液均对乳香中各有效成分进行提取，其中应用例1为优选应用例。
66.综上，上述酯类成分的选择均会影响到双连续相提取液中各有效物质的含量，其中中链甘油三酯类油脂的选择有助于双连续相的形成，继而提高乳香中各有效成分的提取，保障了双连续相提取液的提取率。
67.应用例17-18一种乳香提取物，与应用例1的不同之处在于，所用双连续相提取液的使用情况不同，具体对应关系下表所示。
68.表：应用例17-18中双连续相提取液使用情况对照表组别双连续相提取液应用例17由实施例15制得应用例18由实施例16制得
抽取上述应用例17-18中制得的乳香提取物，按上述测量步骤和测量标准测试其各组分含量，经检测，其各组分的含量与应用例1相持平，可见上述植物油脂的选择，对双连续相液的提取率无明显影响，但有利于双连续相液的形成和提升双连续相液的稳定性。
69.本具体实施例仅仅是对本技术的解释，其并不是对本技术的限制，本领域技术人员在阅读完本说明书后可以根据需要对本实施例做出没有创造性贡献的修改，但只要在本技术的权利要求范围内都受到专利法的保护。