一种抗猪瘟病毒的天然复合生物制剂及其制备方法与应用与流程

技术特征：
1.一种抗猪瘟病毒的天然复合生物制剂，其特征在于，包括以下重量份的原料：大蒜素8-10份，白菜提取物5-10份，大蒜抗菌肽0.5-1份，蒲公英5-8份，金银花10-15份，鱼腥草3-5份，黄芪8-10份，姜黄1-2份，桂皮3-5份，灵芝3-5份，绿豆肽10-15份，甘草5-10份，香菇多糖3-5份。2.一种如权利要求1所述抗猪瘟病毒的天然复合生物制剂的制备方法，其特征在于，包括：s100、制备大蒜素、白菜提取物、大蒜抗菌肽、绿豆肽以及香菇多糖；s200、将蒲公英，金银花，鱼腥草，黄芪，姜黄，桂皮，灵芝，甘草磨碎过50目筛，按照权利要求1中的组分用量称取各组分，再将各种原料混合4-6min，得到混合料；s300、将混合料送入造粒机内造粒，以获得粗成品，且造粒机内的蒸汽压力为0.5-0.8mpa，造粒温度为70-80℃，造粒机的模孔直径为1.5-3mm；s400、对所述粗成品进行8目过筛，最终获得所述抗猪瘟病毒的天然复合生物制剂。3.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述大蒜素的制备方法包括：s1、将大蒜、洋葱去皮、洗净，并粉碎成粒径为80-100目，得原料浆液；s2、在所述原料浆液中刚加入其重量3-5倍的、质量分数为10％的白砂糖溶液，以及接种所述原料浆液重量3-5％的啤酒酵母，置于25
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2℃的环境下恒温发酵48h，以得到发酵液；s3、将发酵液的ph值调节至8.0-8.5，按所述发酵液重量的3-4％加入胰蛋白酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至55-60℃，保温30-35min后得到第一酶解液；待第一酶解液降至20-22℃后，再调整其ph值至3.5-4.5，按第一酶解液重量的2-3％加入果胶酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至42-45℃，保温25-30min后得到第二酶解液；待第二酶解液降至20-22℃后，再调整其ph值至4.5-5.0，按第二酶解液重量的1-2％加入纤维素酶，充分搅拌，且搅拌的同时升温至50-55℃，保温20-35min后得到第三酶解液；s4、在所述第三酶解液中加入其重量5-6倍的无水乙醇进行超声提取，且超声功率为100kw，超声提取温度为20-25℃，超声提取时间为20-30min；s5、对完成超声提取的第三酶解液进行抽滤，分别得到滤液和滤渣，使用旋转蒸发仪对滤液进行干燥，以得到大蒜素成品。4.如权利要求3所述的制备方法，其特征在于，所述步骤s1中，在粉碎前还包括：将去皮、洗净后的洋葱和大蒜浸入前处理液中浸泡12-24h；所述前处理液由质量分数3-5％的柠檬酸溶液和质量分数1-2％的乙酸溶液组成，且按体积比计，质量分数3-5％的柠檬酸溶液：质量分数1-2％的乙酸溶液＝(1-3)：1。5.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述大蒜抗菌肽的制备方法包括：s1、将大蒜去皮、洗净，于80-100℃环境下干燥8-12h，在粉碎过20目筛，得大蒜粉；s2、在所述大蒜粉中刚加入其重量3-5倍的、质量分数为10％的白砂糖溶液，以及接种所述原料浆液重量2-3％的啤酒酵母，置于25
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2℃的环境下恒温发酵48h，以得到发酵液；s3、将所述发酵液于5000-8000rpm条件下离心10-15min，收集上清液，上清液用0.1mol/l hcl和0.1mol/lnaoh调节ph值至4-5，以沉淀蛋白；再于5000-8000rpm条件下离心15-20min收集沉淀，将收集的沉淀用蒸馏水洗2-3遍后将ph调节为7，让沉淀的粗蛋白复溶，以得到大蒜抗菌肽粗品溶液；
s4、将所述大蒜抗菌肽粗品溶液加入半透膜中；再置于缓冲液中，于20-25℃下搅拌渗滤至缓冲液ph＝2.5-3.5；然后将含有大蒜抗菌肽粗品溶液的半透膜转移至纯化水中，于20-25℃下搅拌渗滤至半透膜内溶液ph＝3.0-4.0，以得到大蒜抗菌肽一次溶液；s5、将所述大蒜抗菌肽一次溶液通过进行反相高效液相色谱分离，以获得大蒜抗菌肽二次溶液；所述反相高效液相色谱分离包括：将样品上样至反相c4硅胶柱上，并依次利用含有三氟乙酸的双蒸水和含有三氟乙酸的乙腈对c4硅胶柱进行洗脱处理，获得洗脱样品，其中，含有三氟乙酸的双蒸水中三氟乙酸的质量分数为0.2-0.3％，含有三氟乙酸的乙腈中三氟乙酸的质量分数为0.2-0.3％，乙腈质量分数为80-85％；洗脱处理时间为40-45min；以及s6、所述大蒜抗菌肽二次溶液通过醋酸铵和醋酸离子交换转盐，以获得大蒜抗菌肽精提液，对大蒜抗菌肽精提液进行减压浓缩、干燥后得到所述大蒜抗菌肽成品。6.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述白菜提取物的制备方法包括：s1、取新鲜白菜，加入白菜重量2-3倍的去离子水，并在25℃下浸泡3-5h，取出再用去离子水冲洗2-3遍；再将冲洗后的白菜打碎磨浆，得到白菜浆液；s2、在所述白菜浆液中加入其重量2-3％的果胶酶，于30-40℃下处理12-24h，其中每30min搅拌一次，处理完成后保温30-35min后得到第一酶解液；待第一酶解液降至20-22℃后，再调整其ph值至3.5-4.5，按第一酶解液重量的2-3％加入果胶酶，于30-40℃下处理8-10h，其中每30min搅拌一次，处理完成后保温2-3h，以得到第二酶解液；s3、在所述第二酶解液中按照第二酶解液重量的3-5％加入活性干酵母以及按照第二酶解液重量的0.001-0.002％加入亚硒酸钠，发酵48-72h，获得初次发酵液；s4、在所述初次发酵液中按照初次发酵液重量的1-2％加入冰醋酸以及按照初次发酵液重量的0.001-0.0015％加入亚硒酸钠，发酵36-48h，获得二次发酵液；s5、将所述二次发酵依次经过分离孔径为50-100nm的陶瓷膜、截留分子量为2000-5000da的超滤膜以及截留分子量为300-500da的纳滤膜，最后得到白菜粗提物；s6、按照白菜粗提物体积的1/10加入0.4m醋酸钡,搅拌均匀静置30min以沉降提取液中的部分蛋白质和悬浮杂质，然后4000r/min离心10min后,收集上清液,即得到含有吲哚-3-甲醇的白菜提取物。7.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述香菇多糖的制备方法包括：s1、香菇剪碎，于70℃烘箱中干燥至恒重，用超微粉碎机粉碎，过60目筛网，以获得香菇粉；所述超微粉碎条件为进料量300g，转速4000r/min，超微粉碎时间10min，粉碎两次；s2、取香菇粉，加入香菇粉质量的20倍去离子水，调节温度至60℃后进行微波处理，随后将香菇水溶液加入亚临界水反应釜进行亚临界水提取，提取完成后，4000r/min离心20min，上清液经旋转蒸发浓缩至1/3体积，以获得香菇多糖提取液；所述微波处理条件为：微波功率650w，微波6min；所述亚临界水提取条件为：提取压力5mpa，提取温度130℃，提取时间15min；s3、在所述香菇多糖提取液中加入3倍体积的95％乙醇，200r/min搅拌30min后于4℃醇沉12h，随后减压抽滤取固形物，50℃烘干，即为香菇粗多糖；s4、按质量比1:2加入去离子水对香菇粗多糖进行复融，将复融后的溶液置于-40℃冰箱4h后，取出于室温下融化，4000r/min低温离心10min，沉淀用去离子水洗涤后再次离心，
重复3次弃去沉淀，合并上清液并将上清液反复冻融重复此步骤直至无沉淀产生，以获得初步脱蛋白的粗多糖溶液；s5、在所述粗多糖溶液中按照体积比1∶1加入5％的三氯乙酸，涡旋震荡后于4℃过夜，8000r/min离心15min，上清液重复操作此步骤直至无沉淀产生，合并上清液，浓缩后冻干既得香菇多糖成品。8.如权利要求2所述的制备方法，其特征在于，所述绿豆肽的制备方法包括：s1、将绿豆用水浸泡过夜，去皮，40℃烘干后粉碎，过80目筛，以获得颗粒均匀的脱皮绿豆粉；s2、向脱皮绿豆粉中加入其10倍重量的去离子水，用2mol/l的naoh调节ph至8.0，同时调节温度至50℃后进行微波处理，对微波处理完成后的脱皮绿豆粉悬浮液进行减压抽滤，滤液用2mol/ml hcl调节ph至4.5，6000r/min离心15min，沉淀即为绿豆蛋白；所述微波处理条件为：微波功率400w，微波时间15min；s3、在所述绿豆蛋白中加入其7倍重量的去离子水，调节ph至7.0，随后放入耐高压绝缘袋并置于处理腔进行高压脉冲电场处理，处理完毕后调节温度至55℃，加入3.5-4.5％绿豆蛋白重量的蛋白酶进行酶解，酶解后迅速将酶解液置于沸水中加热10min灭酶；随后再次调节酶解液ph至4.5以沉淀未反应的蛋白，3000r/min离心15min，上清液即为绿豆肽粗品溶液；所述高压脉冲电场处理条件为：场强16kv/cm，脉冲数18；所述蛋白酶为复合蛋白酶，酶解3.5h；s4、将所述绿豆肽粗品溶液以1ml/min的流速流过大孔吸附树脂，透过液冷冻干燥即为绿豆肽成品。9.如权利要求1所述的抗猪瘟病毒的天然复合生物制剂在制备饲料添加剂中的应用。10.如权利要求1所述的抗猪瘟病毒的天然复合生物制剂在制备兽药中的应用。

技术总结
本发明公开了一种抗猪瘟病毒的天然复合生物制剂及其制备方法与应用，其包括原料：大蒜素8-10份，白菜提取物5-10份，大蒜抗菌肽0.5-1份，蒲公英5-8份，金银花10-15份，鱼腥草3-5份，黄芪8-10份，姜黄1-2份，桂皮3-5份，灵芝3-5份，绿豆肽10-15份，甘草5-10份，香菇多糖3-5份。本发明通过各种天然植物组分进行科学配比，可用于兽药或饲料的制备，可以显著提高猪只的个体免疫能力以及体内的抗病毒抗体水平，使其能够辅助治愈或预防感染非洲猪瘟病毒。使其能够辅助治愈或预防感染非洲猪瘟病毒。


技术研发人员：李玉保 何静仁 吴东 叶树芯 江思佳 张瑞 帅晓艳
受保护的技术使用者：运鸿集团股份有限公司
技术研发日：2022.02.21
技术公布日：2022/5/17